全 文 ：中国免疫学杂志 1 9 9 3年 n 月第 9 卷第 6期 38 1
漏芦脱皮幽酮对小鼠腹腔巨噬细胞的影响
顾立刚 龚树生① (北京中医学院微生物学教研室 ,北京 10 0 0 29)
「
漏芦 (R h a卯 n t icu 巾 u n inour m ( L · ) I尤 · )属菊
科多年草本植物 . 从扮芦根中提取的植源性蜕皮田
用是一种常见的蜕皮激素 . 它具有较强的生物活性 ,
如改善细胞膜脂流动性飞保护细胞腆结构完整性和
减轻动脉粥样硬化的作用 〔 ,〕 ,增强小鼠 T 细胞的功
能田 . 但 目前有关诵芦蜕皮幽创 ( CE )对巨曦细胞活
化成度及产生白细胞介素 1( IL 一1) 等国内外尚未见
报道 . 因此 ,我们应用 E C 对小鼠腹腔巨噬细胞的功
能进行了研究。
材料与方法
B A L B c/ 小鼠 , 雌性 , 8 ~ 12 周龄 (中国中医研
究院动物室供应 ) ,中药扮芦蜕皮幽用是从中药祁州
扮芦根中提取的结晶纯品 C幻 , .件 dT R (北京原子能
研究所生产 , 活性 2 . 1 x 10 . ic / m ol ) . 小鼠腹腔巨咙
细胞制备和巨曦细胞功能溯定按文献〔4〕方法进行 。
结果与讨论
1
.
2 x l 。 , / 0 . l m l巨噬细胞培养于 96 孔平底培
养板内 ,经贴璧除去非粘附细胞后 ,加入含有不同浓
农 1 . E C 对小叹血睦巨吸细施吞饮中性红的形响
aT b
.
1
.
E f f . 改 o r E C o . M中 p血a 侣钾 y t l c 肚 u tOr l r目 ·
度 cE 的 R PM 卜 1 6 4企 l,0 % FCS 的完全培养荃 , 37 ℃
5 % CO
: 培养 24 小时后 ,用 。 . 04 肠中性红生理盐溶
液染色和溶解细胞后 ,在醉标比色仪波长 5 0n m 处
测定光密度 (O D 值 ) ,每一组胶 3 个复孔 . 与此同
时 ,我们也观察了 EC 与 L SP 的协同作用 .结果见表
1
。
表 1 结果提 示 , 当 E C 浓 度’在 2 . 5 “ 20 傀 /m l
时 ,能显著增强小鼠腹腔巨嘴细胞吞饮中性红的功
能 . 当 CE S料g /m l时与 L sP 协同作用巨曦细胞时 ,其
吞饮中性红的能力较 E C 单独使用提高 32 % ,较
L sP 单独使用提高 36 % .
2
.
E C 对小鼠腹腔巨咙细胞产生 IL 一 1 的作用 :
当不同浓度的 cE 与 L PS 1 0阳 / m l协同作用巨咙细
胞单层 6 小时后 , 除去药液 ,加入 R PM 卜16 40 一 10 纬
F CS 完全培养液继续培养 48 小时后 ,收获上清液 ,
用 L 9 29 小鼠纤维母细胞株侧定 比一 1 . 每一组 3 个
复孔 ,结果见表 2 。
r o u , (鸿 Zm l)
十+co 毗 or l
E C 2
.
5
5
0
.
0 7 8士 0 0 0 3
0
.
0 9 2士 0 . 0 0 8 “
0
.
0 9 4士 0 . 0 0 2…
0
.
1 0 6士 0 . 0 0 6…
0
.
0 9 6士 0 . 0 0 7 ` “
0 、 0 8 3士 0 . 0 0 7
十 .
+
0
.
0 9 1士 0 . 0 0 7△
0
.
10 8士 0 . 0 0 7 .
0
.
12 4士 0 . 0 0 7… △△
0
.
1 26士 0 . 0 0 6 “ . △
0
.
10 8士 0 . 0 0 1二
0
.
10 1士 0 . 0 0 4
00
,几
24
N ot e
: - - 一 P < 0
.
0 1
, - 一 P < 0
.
0 2
, 一
P < 0
.
0 5 ( rear
r ed ” /co n t olr )△△ P < 0 . 0 1 , △ P < 0 . 0 5 ( cE + L PS , . n o L P S )
较 2 . cE 对 c胎 刺激小皿旗腔巨噬细胞产生 几一 l 的影响
介卜. 2 . E f f ec t of EC 妞 几一 I P r od u c t i姐 of . u r加 e 件 r彻 . . 目 M中 t o L SP
g or l, , (雌 / m l ) 几
一
l a e t i训 t y 书一 dT R so e o r闪 ar t i佣 ( c卿 ,又士 DS )
1
1
16 l
:
3 2 l
:
6 4
co n t or l
EC 2
.
5
i
0
Z 0
7 14 9士 1 7 6
7 8? 3士 2 9 1
7 7 16士 6 6 5
7 4 66士 4 8 9
7 1 62士 18 2
6 2 96士 3 1 7
7 7 9 8士 2 9 9
6 8令7 士 6 0 2
64 59士 5 9 8
6 3 4 1士 3 0 5
6 2 7 4士 2 9 9
8 9 4 5士 1 8 6 . “
8 0 6 9士 2 0 6 .
7 6 9 9士 4 3 6
6 3 4 8士 3 2 1
65 5士 14 9
1 0 14 7士 5 15 “ .
8 3 8 2士 2 44 二
8 5 9 9士 8 49 .
7 1 5 0士 5 3 6
N ot e
: 。。 m脚 r司 w i t卜 e on tolr : - 一 P < 0 . 0 1 , 份 P < 0 . 0 2
①北京中医学院 中药学教研室
38 2中国免疫学杂志 1 9 93年 1月第 9卷第 6期
表 2结果提示 , CE 在 2 . 5~ 1 0” g /m l 时与 L P S
协同能显著地增强巨咙细胞产生 IL 一 1 . 但这种协同
作用的机制尚不清楚 。 CE 对不同状态下的巨曦细
胞发挥何种调节作用 ,这是值得深入研究的课题 .
参考文献
〔 1〕卢咏才 , 等 . 中药汤 芦抗动脉粥样硬化的实验研究 . 中
华医攀杂志 , 1 98 5 , 6 5 ( 1 2 ) : 75 0
〔 2 )曲树生 ,等 . 白何首乌总礴脂及汤芦蜕皮由阴对小饭细
胞免度的影晌 . 中华老年医学杂志 , 19 8 3 , 2( 4) : 19 3
〔3 〕龚树生 , 等 . 妇芦中蜕皮田砚的分离与鉴定 . 北京中医
学院学报 , 19 8 1 , 2 : 4 9
〔幻顾立刚 , 等 . 薄盆灵芝对小限腹腔 巨曦细胞的作用 . 上
海免疫学杂志 , 19 , o , 10 ( 2 ) : 20 5
〔1 9 9 3 年 6 月收稿 8 月修回〕
(编辑 许四平 )
酶联葡萄球菌 A 蛋白试验检测人
抗巨噬细胞抗体及其临床应用
薛志忠 周永明 方永华 李晓红 黄振翘 (上海中医学院附属岳阳医院 ,上海 2 0 0 0 3 1) !
巨嘴细胞 ( M今)在机体免疫反应中起加工 ,提呈
扰原给 T 、 B 淋巴细胞 ,辅佐其免疫应答的作用 ,但
抗 M中抗体可引起 M巾提呈机能异常 ,进而影响细
胞免痊和体液免疫功能引起自身免疫性疾病 〔 , ` ,因
此检侧抗 M中抗体对研究 M巾及其在自身免疫性疾
病中的作用具有重要愈义 . 本文运用人抗 M中抗体
可与小鼠欢腔 M今结合。 〕 ,建立了一种测定抗 M今
抗体的醉联免疫法 . 现介绍如下 :
材料与方法
`按 常规法取昆 明种小 鼠腹腔 M中, 用 P H 7 . 2
0
.
o 1M P璐 洗 3 次 ,配成 4 x 一。 , /m l悬液 ,包被反应
板 1。。川/孔 , 37 ℃ 3 小时 , 4℃过夜 弃去 , 洗 3 次甩
干 ,加 l : 5 稀释人血 清 10 如l/ 孔 , 37 ℃ 1 小时 , 洗 3
次 ,加 HR P一 S P A (上海生物制品研究所产 ) 1 0 。川 /孔
1 小时 ,洗 3 次 ,加底物 (邻苯二胶 、 0 . I M 柠像酸 、
H : 0 : ) 1 0 0川/孔 , 20 分钟后 加 ZM H :阳 . 终止反应 ,
于醉标仪 4 9 2n m 测各孔 O D 值 . 同时测得正常人混
合血清 ,计算 :
得 O D 值均在 10 %以下 , 而用 P BS 取代阳性标本
仅见极浅的本底颜色 ,说明 M中对 H R P一 sP A 非特
异性吸收 O D 值很低 , 而 O D 值增高是特异性抗体
存在所致 。
三 、 方法重复性 : 4 份阳性血清和 l 份正常人血
清分别重复检测 5 次 ,重复性好 , 变异系数分别为
4
.
3 8 %
、
4
.
3 1%
、
3
`
0 5写 、 3 . 1 0% 、 4 . 7 6% .
四 、 与葡萄球菌花环法 〔` ,比较 :本法和花环法分
别对 60 例患者进行测定 ,本法乳E 1 4 / 2。例 , IT P g/
20 例、 类风关 1 1 /2 0 例阳性 ,总阳性率 56 . 7 % , 花环
法 SL E 1 3 / 2 0 例 、 IT P 7 / 2 0 例 、类风关 9 / 2 0 例阳性 ,
蓦阳性率 48 、 3% , 两法相 比无 显著性 差异 (P >
0
.
0 5 )
五 、 正常参考值 : 40 例正常人 ,男性 20 例 、 女性
2 0 例 .参考范围 9 4+ Z x z s . s (又+ Zs D )大于 1 25纬
即为阳性 .
本法结果可靠 ,与花环法比 ,快速 、影响因家较
少 ,特异性强 . 灵敏度高 ,稼定性好 ,半定 t ,便于治
疗前后对照 ,便于临床推广应用 .
比值 值 x 1 0 0 % 参考文献
结果与讨论
一 、实玻条件 :经方阵滴定法选择 , M小抗原 4 x
10
,
/ lm 细胞悬液 ,血清 l : 5 稀释 、醉标工作浓度 1 :
40 为最佳实脸条件 .
二 、 特异性试验 : 4 份阳性血清经 M巾吸收后侧
自〕叶天垦 . 等 . 国外医学免疫学分册 , 1 9 90 , 2 : 6
〔z〕王天然 ,等 . 上海免疫学杂志 , 19 9 0 , 1 0 ( 4 ) : 2 2 4
〔3〕白川文彦 . 医学刃志心再 , 19 8 7 , 1 4 2 : 1 6 6
〔4 〕李多孚 , 等 . 上海免痊学杂志 , l , 9 0 , 10 ( 2 ) ` 2 2 0
〔1 9 9 3 年 4 月收稿 6 月修回〕
(编辑 许四平 )