全 文 ：滤液 2 ml,加三硝基苯酚试液两滴 ,即生成黄色沉淀。
2.5.3　含量测定
北豆根总碱的含量测定方法①对照品溶液的配制:精密称取北豆
根碱对照品(60℃干燥至恒重)10.0mg置 50ml容量瓶中加无水
甲醇溶解 , 最后用无水甲醇定容至 50 ml,作为对照品溶液。 ②测
定方法:精密称取北豆根提取物 2.0mg置 10 ml容量瓶中 , 加无
水甲醇溶解 , 振摇 ,溶解后过滤洗涤容器及滤器 3次 , 合并滤液及
洗液 , 用无水甲醇定容。精密吸取 0.5 ml置 10 ml容量瓶中 ,加
入 0.1%溴甲酚绿溶液 0.2ml, 用无水甲醇定容 , 于 620 nm测定
吸收度 ,随行试剂空白 , 标准溶液对照。根据吸收度计算北豆根
总碱含量。北豆根总碱的含量应不低于 85%。
表 3　实验结果
A B C D
Ⅰ j 191.05 279.92 308.12 260.86Ⅱj 327.52 343.04 305.66 327.76Ⅲj 425.23 320.84 330.02 355.18Ⅰ j2 36 500.1 78 355.2 94 937.9 6 8047.9Ⅱj2 107 269.4 117 676.4 93 428.1 107 426.6Ⅲj2 180 820.6 102 938.3 108 913.2 126 152.8Rj=Ⅰ j2+ 324 590.1 298 969.9 297 279.2 301 627.4Ⅱ j2+Ⅲj2Sj=Rj/6-CT 4761.8 341.7 59.9 784.7G=943.8 CT=G2=49486.6
S总 1=1/2∑Yi2-CT=5798.1 f总 1=9-1=8S总 =∑∑(Yik)2-CT=5843.0 f总=17SE2=S总 -S总 1=44.91 fE2=9(m-1)=9(2-1)=9
表 4　方差分析表
Sj f Sj/f F
A 4 761.8 2 2 380.9 477.1 ＊＊B 341.7 2 170.9 34.2 ＊＊
C 59.9 2 30 6 ＊
D 784.7 2 392.3 78.6 ＊＊
E 44.9 9 5
　　F1-0.05(2, 9)=4.26, F1-0.01(2, 9)=8.02
北豆根碱的测定方法:①色谱条件:色谱柱为 Discovery-C18
(5 μm, 4.6×250 mm);流动相为乙腈∶水∶磷酸 =16∶ 84∶
0.15(V∶V∶V);流速 0.5 ml· min-1;波长 208 nm;柱温为室
温;进样量 20 μl;理论塔板数 2 300。 ②对照品溶液的配制:精密
称取北豆根碱对照品(60℃干燥至恒重)5.0 mg置 25 ml容量瓶
中 , 用流动相溶解并定容 , 作为对照品溶液。分别精密吸取对照
品溶液 2.0 ml置 10 ml容量瓶中 ,用流动相稀释至刻度备用。 ③
测定法:精密称取北豆根提取物 2.0 mg置 10 ml容量瓶中 ,加无
水甲醇溶解 , 振摇 , 溶解后过滤 , 洗涤容器及滤器 3次 , 合并滤液
及洗液 , 用无水甲醇定容。精密吸取 2.0 ml置 10 ml容量瓶中 ,
挥干甲醇 , 加入流动相适量 , 振摇使溶解后用流动相定容。按色
谱条件测定样品与对照品的峰面积。按外标法以峰面积计算北
豆根碱含量。总碱中北豆根碱含量应不低于 45.0%。
2.5.4　水分的测定 取供试品 2 g平铺于干燥至恒重的扁形称量
瓶中 ,精密称定。打开瓶盖在 100℃干燥 5 h, 将瓶盖盖好 ,置于干
燥器中 ,冷却 30min, 精密称定重量。再用 100℃干燥 1h,冷却 , 称
重。至连续两次称重的差异不超过 5mg为止。根据减失的重量 ,
计算供试品中含水量(%)。供试品中含水量不超过 5%。
3　讨论
北豆根的提取工艺大致分为两种 , 一种是酸提取碱沉淀 , 另
一种是醇提取。本实验结合应用两种方法 ,经过乙醇的精致 , 使
提取物中北豆根总碱含量提高到 85%以上 , 大大高于现有报道
的 50% [ 4] 。
参考文献:
[ 1 ] 　周　钰 ,曲　凡.北豆根中成分分离及含量测定方法的研究 [ J].甘
肃中医 , 2003, 16(12)∶8.
[ 2 ] 　潘锡平 ,胡崇家 ,曾繁典.咸宁产蝙蝠葛生物碱成分的分离与鉴定
[ J] .中药材 , 1998, 21(9)∶ 456.
[ 3 ] 　王　栋 , 刘　岩 ,李红波.正交实验法优选北豆根总生物碱的提取
工艺 [ J] .哈尔滨商业大学学报 , 2005, 21(11)∶19.
[ 4 ] 　陈　锋.北豆根总生物碱提取工艺的正交实验设计 [ J] .中国现代
应用药学杂志 , 2006, 23(9)∶ 894.
收稿日期:2010-02-01;　修订日期:2010-08-11
基金项目:暨南大学本科生科技创新工程项目(No.CX09112)
作者简介:彭单伊(1987-),女(汉族),重庆人 ,现为暨南大学医学院临床
医学专业四年级学生 ,主要从事临床医学学习.
＊通讯作者简介:陈丽新(1955-), 女(汉族),广东湛江人 , 现任暨南大学
医学院教授 ,博士学位 ,主要从事药理学研究工作.
＊通讯作者简介:王立伟(1959-), 男(汉族),广东湛江人 , 现任暨南大学
医学院教授 ,博士学位 ,主要从事生理学研究工作.
新鲜芦荟抗局部化学接触性皮肤炎症的作用
彭单伊 1 ,刘珠慧1 ,程　晖 1 ,黄少丹 2 ,陈丽新1＊ ,王立伟 1＊
(1.暨南大学医学院 ,广东 广州　510632;　2.广东省广州市妇女儿童医疗中心 ,广东 广州　510630)
摘要:目的 比较新鲜芦荟 、糖皮质激素和万花油对抗局部化学接触性炎症的作用 , 探讨芦荟对局部化学接触性炎症的疗
效。方法 二甲苯浸润家兔皮肤 ,建立局部化学接触性皮炎模型。在炎症部位分别给予新鲜芦荟切片或涂抹丁酸氢化可
的松乳膏 、万花油 ,观察它们的抗炎作用。结果 丁酸氢化可的松乳膏 、万花油和新鲜芦荟均有抗局部化学接触性皮肤炎
症作用 , 显效率从高到低分别为氢化可的松乳膏 =新鲜芦荟 >万花油。与氢化可的松 、万花油相比 ,新鲜芦荟作用的潜
伏期较长 , 但从抗炎作用开始出现到完全显效所需的时间则较短 , 与氢化可的松相比 , 无显著性差异。结论 新鲜芦荟可
以经皮肤缓慢吸收 , 具有类似于氢化可的松的抗局部化学刺激性炎症作用。
关键词:芦荟;　糖皮质激素;　万花油;　二甲苯;　皮肤炎症
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.01.094
中图分类号:R758.22　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)01-0189-02
　　芦荟是一种多年生百合科芦荟属肉质的草本植物 ,其作为一
种常见的室内观赏植物 , 在民间广为种植 , 容易获得。 日常生活
中 , 我们会经常发生各种皮肤损伤和炎症反应 ,如烧伤 , 烫伤 , 化
学物质接触性炎症等 ,芦荟富含多种生物活性物质 ,具有调节免
疫 、抗辐射 、抗溃疡 、降血脂 、降血糖 、抗氧化等广泛药理作用 。外
敷有良好的抑菌抗炎作用 ,可预防放射性损伤引起的皮炎 [ 1] , 但
芦荟对于化学物质引起的皮肤炎症的影响 , 目前仍缺乏实验研
究 , 明确芦荟对皮肤炎症的疗效有重要的意义。本实验通过建立
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家兔化学接触性皮肤炎症模型 ,观察和比较经典的抗炎药糖皮质
激素 , 万花油和新鲜芦荟对化学接触性炎症的治疗作用 , 为利用
取材方便的芦荟治疗化学性炎症提供参考和依据。
1　材料
1.1　动物 实验动物选用新西兰纯种成年大白兔 14只 , 体质量
2.5 ～ 3.0 kg, 雌雄各半 , 由暨南大学实验动物中心提供 。
1.2　材料与试剂 二甲苯 , 沈阳市新化试剂厂生产 , 批号
20060106。丁酸氢化可的松乳膏 , 纯度 0.1%, 每支装 10g, 天津
药业集团有限公司生产 ,批号 08100242, 所含成分有 0.1%丁酸
氢化可的松 , 主要辅料为甘油 、丙二醇 、凡士林 、十八醇 、液状石
蜡 、枸橼酸 、枸橼酸钠等。跌打万花油 , 广州敬修堂药业股份有限
公司生产 , 生产批号 S06045, 主要成分有野菊花 、乌药 、水翁花 、
徐长卿 、大蒜 、马齿苋 、葱 、金银花叶 、黑老虎 、威灵仙 、木棉皮等。
新鲜中华芦荟 , 由暨南大学医学院药理学系提供。
2　方法
2.1　分组 实验采用同体对照方法 ,共设立 4组 , 分别为氢化可
的松组 、万花油组 、新鲜芦荟组 、模型对照组。
2.2　化学接触性皮肤炎症模型制作 实验用家兔建造急性化学
接触性皮肤炎症模型 , 兔子仰位固定 ,腹部剪毛并用脱毛膏去毛 ,
在腹部皮肤表面标记 5处直径 2.5cm的圆形区域 ,各区域均以 3
层无菌纱布覆盖 , 将二甲苯滴加于纱布上 , 并持续添加二甲苯保
持纱布湿润 , 观察皮肤炎症反应 , 一般持续涂抹二甲苯 100 min
后 , 即可造模成功。
2.3　给药方法 在同一家兔的 4处炎症部位分别涂抹丁酸氢化
可的松乳膏 、万花油 、新鲜芦荟(将芦荟去皮后覆盖于实验区域)
或不作任何处理。 选取新鲜芦荟 ,清洗干净 , 剪去芦荟叶两边小
刺 , 剥开外皮 ,将芦荟切成剪成直径为 2.5 cm圆形薄片 , 现切现
用。观察家兔各给药区域与对照区域皮炎的状态。
2.4　皮炎分度及疗效判定 皮炎判断标准按照国际接触性皮炎
研究组(ICDRG)推荐的分级标准 , -阴性反应 , ±可疑反应(仅
有轻度红斑), “ +”弱阳性反应(红斑 、浸润 、可有少量丘疹), “ +
+”强阳性反应(红斑 、浸润 、丘疹 、水疱), “ +++”极强反应(红
斑 、浸润 、丘疹 、出现水疱大疱)。
疗效判定:炎症由 “ ++”转为 “-”, 定为痊愈;炎症由 “ ++”
转为 “ ±”, 定为显效;炎症由 “ ++”转为 “ +” ,定为有效;炎症在
用药后保持 “ ++”度或恶化至 “ +++”,定为无效;炎症由中度
恶化至重度 , 定为无效。
2.5　统计学处理 实验数据以 x±s表示 , 用 SPSS软件(13.0
版)统计软件分析处理。采用秩和检验进行显著性检验 , 以 P<
0.05为差异有统计学意义。
3　结果
3.1　局部化学接触性皮炎 在用二甲苯浸润家兔腹部局部皮肤
约 2 h后 , 14只家兔有 12只发生皮炎。造模成功家兔的局部皮
肤出现Ⅱ度或 III度的炎症反应。表现为出现红斑 、浸润 、丘疹 、
水疱 、大水疱等。取 12只造模成功家兔继续给药实验。
3.2　氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟的抗皮炎作用 如表 1所
示 , 氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟对化学接触性炎症均有良好
的治疗作用 , 3组药物及对照组间的差别有统计学意义(P<
0.01)。氢化可的松和新鲜芦荟的显效率高达 75%,表明新鲜芦
荟对化学刺激性炎症的疗效可与氢化可的松相媲美 ,而万花油的
作用稍逊。
3.3　氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟抗炎作用的时效关系 虽然
氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟都有抗炎作用 , 但其特点各有不
同。氢化可的松起效最快 , 在(20.7 ±5.3)min时 , 皮炎即开始
出现好转 , 水疱变小 , 渗出减少 , 出血点减少 , 红斑不再扩大 ,
(57.1±6.6)min时 , 氢化可的松几乎完全对抗二甲苯诱导的炎
症 , 水疱消失 ,皮肤颜色恢复正常 ,基本没有渗出。
万花油起效较氢化可的松稍慢 , 约从(32.8±4.6)min开始
起效 , (103.3±12.9)min药效达到最佳 , 水泡消失 , 出血点消
退 , 皮肤颜色恢复正常 , 很少渗出。
表 1　3种药物对化学接触性皮炎的治疗作用
组别 痊愈 显效例 率(%)
有效
例 率(%)
无效
例 率(%)
氢化可的松 0 9 75.0 3 25.0 0 -
万花油 0 8 66.7 4 33.3 0 -
新鲜芦荟 0 9 75.0 3 25.0 0 -
模型对照 0 0 - 0 - 12 100
　　n=12
新鲜芦荟起效慢 ,潜伏期长 , 但疗效好 ,一旦起效 ,就会迅速
达到显效。约(110±8.3)min水疱开始消退 , 渗出减少 , 出血点
迅速减少 ,红斑很快变淡。与氢化可的松组和万花油组相比 , 芦
荟作用潜伏期显著延长 ,差别有统计学意义(P<0.01)。 (145.4
±13.1)min时芦荟作用达到很好的效果 , 水疱消失 , 皮肤颜色
恢复正常 ,渗出消失。
虽然在 3个处理组中 ,新鲜芦荟起效的潜伏期最长 , 但进一
步的时效分析表明 ,新鲜芦荟从抗炎作用开始出现到完全显效所
需的时间较短。氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟组从开始显效到
完全显效所需的时间分别为(36.4±5.5), (70.5 ±12.8), (35.4
±13.5)min,新鲜芦荟组与氢化可的松组没有显著性差异 (P>
0.05), 与万花油组有显著性差异(P<0.01)。见图 1。
与氢化可的松组 ,万花油组比较 , ＊P<0.01;n=12
图 1　3种药物作用潜伏时以及显效时比较
4　讨论
糖皮质激素是临床经典抗炎药物 , 具有很强的抑制炎性渗
出 、白细胞浸润和炎症介质释放等作用 [ 2] 。早期应用糖皮质激
素可减少炎性渗出 ,减轻愈合过程中纤维组织过度增生及粘连 ,
防止后遗症的发生。临床已将其用于治疗结核性脑膜炎 、心包
炎 、损伤性关节炎 、虹膜炎 、角膜炎以及烧伤后瘢痕等。
跌打万花油为棕红色的澄清油状液体 , 由苏木 、桃仁 、红花 、
田七 、骨碎补等 86味中药材制成 , 具有止血止痛 、活血化瘀 、消肿
止血 、抗菌消炎 、收敛生肌的功效 ,主治跌打损伤 、扭伤 ,轻度水火
烫伤等 [ 3] 。临床研究表明 , 万花油可在患处形成油性保护膜 , 改
善Ⅰ 、Ⅱ度烧伤皮肤的灼痛 、潮红 、肿胀等症状。万花油经过长时
间的应用 ,其抗炎作用已得到了充分肯定。
本实验观察了氢化可的松 、万花油和新鲜芦荟对二甲苯造成
的化学接触性皮炎的作用 , 结果显示它们对急性化学接触性皮
炎都有很好的治疗作用 , 氢化可的松和新鲜芦荟的显效率高达
75%, 表明新鲜芦荟的疗效可与氢化可的松相媲美 , 从而为芦荟
抗皮炎作用提供了实验依据。实验结果还显示 ,氢化可的松 、万
花油组作用潜伏期短 ,而新鲜芦荟作用潜伏期长 , 起效慢 , 与氢
化可的松 、万花油相比 , 有显著性差异(P<0.01)。但芦荟一旦
起效 , 则迅速达到显效。新鲜芦荟的这些特点有别于氢化可的松
等经典抗炎药物 ,提示新鲜芦荟含有强效抗皮炎物质 , 但这些物
质可能经皮肤渗透速度较慢 ,所以导致芦荟抗炎潜伏期较长 , 而
一旦芦荟中的抗炎物透过皮肤表层后则发挥强大的抗炎作用。
芦荟为百合科植物 ,经现代药理研究证实 , 芦荟叶汁含有琥
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珀酸 、苹果酸 、乳酸 、柠檬酸 、油酸 、亚油酸 ,还含有大量大黄素苷 、
乌辛 、米洛酊 、植物凝血素 、缓激肽酶等化学成分。其中大黄素苷
有直接抗炎 、抑菌及杀菌作用。缓激肽酶能降解体内缓激肽在血
管紧张素参与下发挥抗炎作用 。乌辛和米洛酊能覆盖溃疡面 ,保
护黏膜。阿劳埃酊渗透力强 , 同时异柠檬酸能促进血液循环 ,扩
张毛细血管 , 恢复血管弹性 , 有很好的镇痛作用。植物凝血素促
进细胞 , 尤其是淋巴细胞分裂 ,糖蛋白可刺激表皮增生 ,从而促进
创伤愈合。此外 , 芦荟中的多糖有调节免疫功能的作用 , 能抑制
细菌 、病毒繁殖 ,预防创伤后感染。芦荟凝胶当中的蒽醌复合物 ,
有消炎 、消肿 、止痛 、止痒及抑制细菌生长的效用 [ 4] 。新鲜芦荟
成分复杂 ,究竟何种物质起着最主要的抗皮肤炎症作用 , 有待进
一步研究。
参考文献:
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学 , 2007, 31(10):787.
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[ 4 ] 　李　利 ,王　莉 ,李　咏 ,等.芦荟胶对皮肤激光术后局部炎症反应
的影响 [ J] .临床皮肤科杂志 , 2003, 32(12):739.
制剂与炮制
收稿日期:2010-02-25;　修订日期:2010-08-20
基金项目:北京市新医药学科群重点支持项目(No.xk100270569);
国家科技支撑计划课题(No.2007BAI48B10)
作者简介:王钢力(1969-),女(汉族),北京人 ,现任中国药品生物制品检
定所研究员 ,博士学位 ,主要从事中药活性成分及质量控制的研究工作.
＊通讯作者简介:杜树山(1970-), 男(汉族),辽宁朝阳人 , 现任北京师范
大学副教授 ,博士学位 ,主要从事中药及民族药物质基础研究工作.
正交实验法优选慢结片的提取工艺
王钢力 1 ,张　铮1 ,曹　杰 2 ,张海鸣2 ,杜树山 2＊
(1.中国药品生物制品检定所 ,北京　100050;
2.北京师范大学资源学院中药资源保护与利用北京市重点实验室 ,北京　100875)
摘要:目的 优选慢结片的最佳提取工艺。方法 以干膏率 、盐酸小檗碱提取量为评价指标 ,选择加乙醇浓度 、溶剂量 、提
取时间 、提取次数为考察因素 , 利用 L9(34)正交实验确定慢结片的提取工艺。结果 最佳提取工艺为 70%乙醇提取 3次 ,
10倍量提取 2h、8倍量提取 1h、8倍量提取 1h。结论 优选出的提取工艺简单 、可行 , 适应药厂生产需要 ,可作为该制剂合
理开发的依据。
关键词:慢结片;　提取工艺;　正交实验
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.01.095
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2011)01-0191-02
OptimizationofExtractionProcessofManjieTabletsbyOrthogonalDesign
WANGGang-li1 ,ZHANGZheng1 , CAOJie2 ,ZHANGHai-ming2 ,DUShu-shan2＊
(1.NationalInstitutefortheControlofPharmaceutical＆BiologicalProducts, Beijing, 100050, China;2.Col-
legeofResourcesScience＆Technology, ProtectionandUtilizationofTraditionalChineseMedicineofBeijingAr-
eaMajorLaboratory, BeijingNormalUniversity, Beijing100875, China)
Abstract:ObjectiveTomaketheoptimumprocessconditionsofextractionforManjietablets.MethodsApplyingoptimumex-
tractionofManjietabletscoptidiswithberberinehydrochlorideanddry-pasteasmarkerwasinvestigatedbyorthogonaldesign.
ResultsTheoptimalprocessconditionswereasfolows:theconcentrationofethanol70%, reflux-extractionfor2hrswith10
timesvolume, 1hrwith8times, 1hrwith8 times.ConclusionThismethodissimpleandappliedrightlyinmassproductionandit
canprovidethereferencesforManjietabletsforitsfurtherinvestigation.
Keywords:ManjieTablets;Extractionprocess;Orthogonaldesign
　　慢性结肠炎是常见疑难病症之一 , 临床以反复腹泻 、黏液便
和里急后重或大便秘结为主要表现 , 具有反复发作 、经久难愈的
特点 , 属于中医的久泻久痢或便秘等范畴。中医对本病多以清热
祛湿 、健脾祛湿 、温肾健脾或兼祛湿 、涩肠等法治疗。慢结片为临
床经验方 , 由黄连 、益智仁 、白术 、炮姜 、胡芦巴等 5味药材组成 ,
具有清热解毒 、缓急止痛 、止泻止痢等功效 ,适用于大肠湿热 ,赤
白下痢 , 里急后重 , 肠炎 、痢疾见上述症状者。本制剂药物经提
取 , 服后吸收快 ,且操作简便 , 制剂稳定性良好 , 成品体积减少 ,服
用方便。根据处方中药材的主要有效成分的性质 、处方的功能主
治 、临床用药经验 、预实验结果 、工厂生产实际和参考有关文
献 [ 1 ～ 3] ,本研究采用正交实验设计对方中黄连等药材的提取工艺
进行了考察 ,以君药黄连中盐酸小檗碱的含量和出膏率为指标 ,
优选提取工艺。
1　仪器与试药
1.1　仪器 Waters1525高效液相色谱仪(Waters2487紫外可见检
测器);Milennium32色谱工作站;METTERToledoAG135 1/10万
电子分析天平(瑞士 METTER公司);KQ-250DB数控型超声波
清洗器(昆山市超声仪器公司);电热恒温水浴锅(北京市长风仪
器仪表公司);98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器
有限公司);101A-3E型电热鼓风干燥箱(上海实验仪器厂有限
公司)。
1.2　试药与试剂 盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定
所 , 批号为:0713-9906);所用药材购于同仁堂药店 , 经鉴定 [ 4]黄
连为毛茛科植物黄连 CotischinensisFranch.的干燥根茎 , 益智仁
为姜科植物益智 AlpiniaoxyphylaMlq.的干燥成熟果实 , 炮姜为
姜科植物姜 ZingiberofficinaleRosc.的干燥根茎的炮制加工品 , 白
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