全 文 ：MS液体培养基中，即可建立毛状根离体培养体系。
以子叶形态学下半部为外植体诱导出的毛状根
干重显著高于以子叶形态学上半部为外植体诱导出
的毛状根干重。毛状根培养的目的不只是追求高的
诱导率，更要追求毛状根的产量，所以决明子叶形态
学的下半部更适合做外植体。同时，可以看出决明
子和虎杖的毛状根培养一样不需要进行预培养，浸
染时间不宜过长，李亚璞等〔6〕介绍过毛状根除菌的
方法有抗生素除菌法和温度除菌法，或将二者联合
使用，本实验中温度除菌法对毛状根的诱导率没有
显著影响。同时发现不同的抗生素诱导出的毛状根
形态差别也很大，添加了头孢霉素的培养基中毛状
根比较纤细，而添加了羧苄青霉素的培养基中毛状
根较粗壮，同时也大大的提高了毛状根的产量。
关于决明的毛状根培养虽然已经有所报道，但
整个培养体系仍不完善，本实验从上述 9 个方面进
行了补充，使决明的毛状根培养中，外植体的感染率
更高，毛状根产量更高，为以后利用毛状根生产决明
中的有用次生代谢产物提供了更好的方法。同时诱
导决明毛状根的产生，能进一步完善农杆菌转化的
技术，为今后建立高效的遗传转化体系，生产出更多
药用植物的次生代谢产物提供有力的参考。
参 考 文 献
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灰毡毛忍冬扦插繁殖过程中内源激素含量变化
张 雪1，李隆云1* ，杨 宪2
(1. 重庆市中药研究院 /重庆市中药良种选育与评价工程技术研究中心，重庆 400065;2. 重庆大学生物工
程学院，重庆 400030)
摘要 目的:分析灰毡毛忍冬扦插繁殖过程中内源激素含量的变化，探讨灰毡毛忍冬扦插繁殖生根机理。方
法:采用高效液相色谱法测定吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)3 种内源激素的含量。结果:插条叶片
及基部皮层的 IAA变化均是先下降后上升再下降最后趋缓的过程;插条叶片的 ABA 含量呈先上升后趋于平衡的
趋势，基部皮层的 ABA含量呈先上升后下降再上升最后下降趋缓的过程;插条叶片及基部皮层的 IAA /ABA 变化
呈先下降后上升再下降最后趋缓的过程;插条叶片 GA3 含量在插后 4 d有一定的下降，之后变化平缓，基部皮层含
量波动比较大。结论:内源激素含量对灰毡毛忍冬扦插生根起着重要的调控作用。
关键词 灰毡毛忍冬;扦插;内源激素
中图分类号:R282. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0521-05
收稿日期:2011-09-08
基金项目:科技部支撑计划项目 (编号:2006BAI06A12-14) ;重庆市科技攻关计划项目(编号:CSTC，2009AA5009) ;重庆市科技攻关计划项
目(编号:CSTC，2008AB5031) ;重庆市科技攻关计划项目(编号:CSTC，2009AA5052)
作者简介:张雪(1981-) ，女，硕士研究生，助理研究员，主要从事中药材栽培技术和品种选育研究;Tel:13752836711，E-mail:yzyc09@
163. com。
* 通讯作者:李隆云，Tel:023-89029118，E-mail:lilongyun8@ 163. com。
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-
Mazz. )是忍冬科忍冬属植物，为金银花药材的地方
习用品种。目前，灰毡毛忍冬的种苗生产主要依靠
扦插繁殖〔1，2〕。植物生根是一个十分复杂的生理生
化过程，许多因子在这个过程中起调控作用。内源
植物激素动力学变化是诱导不定根发生的主导因
子〔3〕。有研究表明:插穗生根在很大程度上与插条
内吲哚乙酸、脱落酸、赤霉素 3 种内源激素的含量有
关，但灰毡毛忍冬的扦插繁殖插条叶片及基部 3 种内
源激素的变化还未见国内外文献报道。本实验研究
·125·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.04.004
了灰毡毛忍冬的扦插繁殖过程中 3 种内源激素含量
的变化规律，旨在探讨灰毡毛忍冬的扦插生根机理。
1 材料与方法
1. 1 材料 灰毡毛忍冬插条采自重庆市秀山土家
苗族自治县灰毡毛忍冬实验基地。由重庆市中药研
究院李隆云研究员鉴定为忍冬科忍冬属植物灰毡毛
忍冬(Lonicera macranthoides Hand. -Mazz. )。
赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)和脱落酸
(ABA) ，标准品均为 AR，质量分数均≥99. 5%，购
于 Sigma公司。
1. 2 试验地概况 试验地设在重庆市中药研究院
标本园内，土壤类型为沙壤土;位于东经 106°3、北
纬 29°31，海拔 499 m，年平均气温18 ℃左右，年降
水量 969. 5 ～ 1293. 8 mm，年均日照数 1259. 5 h，日
照总时数 1000 ～ 1200 h，冬暖夏热，雨量充沛，温润
多阴，雨热同季。
1. 3 试验方法
1. 3. 1 插条处理:扦插时间为 2007 年 12 月 1 日。
插条生长年限为 2 年或 2 年以上枝条，采集后 3 d
内扦插，插条剪取长度为 20 ～ 30 cm，每个插条至少
含有 2 个节，保留 2 片 1 /2 叶，切口为 45°斜切面。
扦插前先将剪好的插条齐整捆好，下切口朝下，放在
300 mg /L的 ABT6 溶液浸泡 60 min，设清水作对照，
晾干 10 min 后进行扦插。每个处理 60 根，重复 4
次，扦插前先用 1000 倍的多菌灵溶液进行消毒处
理。
1. 3. 2 扦插方法:扦插时先用细竹棍在消毒后的
基质上插一个 5 ～ 6 cm 深的小洞，然后将插条插入
基质，扦插按 10 cm × 5 cm 株行距进行，适当压紧，
淋透清水，并用 800 倍的 75%的甲基托布津溶液进
行喷洒消毒。稍干松土以防板结，根据扦插棚里的
湿度来调整喷水时间，保证大棚内空气湿度在 60 %
～70 %，当棚内气温超过28 ℃时，打开拱棚两端通
风降温。在扦插苗生长过程中，定期灌溉、除草、松
土，保持土壤良好的通透性，以利生根。
1. 3. 3 采样方法:取插条的叶片和距插条基部 2
cm范围内的茎段用于测定吲哚乙酸、脱落酸、赤霉
素含量。扦插当日取样 1 次，扦插后根据其生长情
况每隔 4 d取样 1 次，共取样 9 次。
1. 4 测定方法
1. 4. 1 仪器及色谱条件:岛津 LC-2010AHT型高效
液相色谱仪(包括自动进样器，四元梯度泵，在线脱
气机，PAD 紫外检测器，Labsolution 化学工作站)。
色谱条件:Water C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ;流动相:甲醇∶乙腈∶水 = 18∶ 18∶ 64(V /V /V) ，
用磷酸调 pH 值 3. 8;流速:1. 0 mL /min;进样量:10
μL;检测波长:254 nm。
1. 4. 2 对照品的制备:分别精密称取 IAA、ABA、
GA3 对照品适量，加冷甲醇稀释制成约 0. 5 μg /mL、
5 μg /mL和 1. 5 μg /mL的对照液(见图 1A)。
1. 4. 3 样品的制备:样品采集后，立即用清水冲净
沙土，再用蒸馏水反复冲洗，干净纱布擦干。分别精
密称取约 1. 0 g 样品，放入研钵中剪成细末，加入
80%冷甲醇溶液，研细，将残渣和研磨液一并转入烧
杯中，加冰甲醇至 30 mL，用玻璃纸将烧杯口封住后
将其放入超声波清洗机中，冰浴条件下超声提取
1h，上清液滤过。滤渣再加入 30 mL 80%的冷甲醇
溶液，4 ℃过夜，取上清液滤纸过滤。合并两次滤
液，用 80%的冷甲醇溶液定容至 100 mL，再用 0. 45
μm滤膜滤过，即得(见图 1 B)。
图 1 混合标准品(A)和样品(B)HPLC图谱
1. 5 数据分析 实验数据应用 DPS 8. 5 软件进行
方差分析以及相关分析。
2 结果与分析
2. 1 生根过程的形态结构观察 通过对生根过程
的解剖结构的观察发现，灰毡毛忍冬的不定根属于
诱导根原始体型，从生根部位来看，属于混合生根
型，即皮部生根及愈伤组织生根同时存在。结合形
态观察分析认为，不定根的形成大致可以划分为 3
·225· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
个阶段:第一阶段，0 ～ 6 d，大部分插条产生愈伤组
织，此阶段称为愈伤组织形成期，又称诱导期;第二
阶段，6 ～ 14 d，愈伤组织继续生长，并且开始有少量
不定根从皮部及愈伤组织伸出，此阶段称为不定根
形成期;第三阶段，14 ～ 32 d，不定根伸长生长，地上
部位抽出新叶，此阶段成为不定根伸长期〔4〕。
2. 2 吲哚乙酸(IAA)含量的变化 插条基部和母
叶 IAA 变化趋势比较相似，均是先下降然后上升，
再下降最后趋缓的过程。从图 2 可知，扦插之日至
第 4 d均有一定程度的降低，这可能是扦插初期插
条本身受到的切伤导致，之后开始上升。在扦插后
第 16 d时 IAA含量达到峰值，出现峰值的时间伴随
着不定根的发生，这可能是在插条内积累高浓度的
IAA，以促进不定根的萌发生长。随着插条生根的
进程而逐渐下降，在根生成后又缓慢上升。而对照
表现的则是在初期缓慢上升后一直下降，直至 28 d
趋于平缓。这可能是因为外源激素的处理解除插条
中某些基因的抑制，提高了 mRNA 的合成，从而促
进多种酶的合成，诱导根原始体的发端。由图 2 还
可见，叶内 IAA 含量较插条基部高，而且相差很大。
结果表明，IAA在不定根的形成过程中起着重要的
促进作用。
图 2 插条基部及母叶 IAA含量变化
2. 3 脱落酸(ABA)含量的变化 生根过程中插条
母叶中 ABA 含量的变化见图 3。从扦插之日起，处
理的 ABA含量一直缓慢上升，扦插 20 d 后，ABA含
量保持稳定水平，而对照插条母叶 ABA含量也从扦
插起开始上升，插后 20 d 达最大值，而后降低。整
个生根过程中，经外源激素处理的插条母叶 ABA含
量一直高于对照。表明插条经外源激素处理后，叶
片中 ABA含量有上升的现象。
生根过程中插条中 ABA 含量的变化亦见图 3。
处理和对照插条的变化趋势基本一致，呈明显的双
峰曲线。在扦插前期，插条内 ABA 含量一直上升，
可能是离体切割刺激 ABA 的合成。ABA 含量在 4
～ 12 d都呈下降趋势，且处理插条的 ABA含量低于
对照，低的 ABA含量对愈伤组织的形成和不定根的
生成有利。扦插 12 d 后，插条的 ABA 含量又呈现
上升的趋势，这正是根原基形成分化阶段，至不定根
形成后 ABA含量又开始缓慢下降。其动态变化与
IAA是此消彼长的关系。由图 3 还可见，叶内 ABA
含量较插条基部高，而且相差很大。
图 3 插条基部及母叶 ABA含量变化
2. 4 IAA /ABA比值的变化 多数情况下植物生
长发育的某个过程受到多种激素的调节。因此，植
物生长发育的任何阶段都不可能是某一种激素单独
作用，而是由多种激素相互作用的结果。IAA 在一
定的浓度范围内能促进根细胞和器官的伸长，但是
浓度再进一步增高会产生抑制作用;ABA 对不定根
的形成具有抑制作用。在 IAA 含量较高而 ABA 含
量较低的情况下，有利于不定根的诱导，反之则抑制
根原基的形成〔5〕。
从图 4 可以看出，处理与对照插条的 IAA /ABA
均在根原基形成和不定根出现的时期增大，因此认
为高的 IAA /ABA比值对愈伤组织和不定根的形成
有利。而且可以看出，插条处理的 IAA /ABA 比值
始终高于对照，其差异达到 α = 0. 01 水平。说明外
源激素的处理明显提高了插条的 IAA /ABA 比值，
进而促进生根，提高生根率。但是在插条母叶中变
化不明显，处理与对照的差异也不显著。
图 4 插条基部及母叶 IAA/ABA比值变化
·325·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
2. 5 赤霉素(GA3)含量的变化 图 5 体现了 GA3
含量在母叶中的变化，由图 5 可以看出，处理插条母
叶 GA3 含量在插后 4 d有一定的下降，之后 GA3 含
量始终保持原来的水平，但对照插条在插后 4 d 略
有降低之后明显升高。由此可知，叶中 GA3 含量与
插条生根的相关性不大。
图 5 插条及母叶 GA3 含量的变化
由图 5 还可以看出:在整个扦插过程中，插条基
部皮层的 GA3 含量波动比较大。在扦插初期，有一
个短暂的下降过程，到扦插 12 d 后，即愈伤组织形
成和根原基分化时期持续增长。在开始生根后又开
始下降，大量生根时降至最低值，以后又出现上升趋
势。这正印证了 GA3 对生根有抑制作用这一观点。
而对照插穗内 GA3 含量变化较小。
2. 6 内源激素含量的变化与生根的相关性分析
相关性分析表明(见表 1) ，生根率与插条基部的
内源激素含量有密切关系。生根率与基部的 IAA、
GA3 含量及 IAA /ABA 比值呈正相关，相关度较高，
分别达到 0. 86、0. 937、0. 887;与 ABA 含量呈负相
关，相关系数为 － 0. 778。而母叶中的内源激素含量
与生根率的相关性相对较小，生根率与母叶的 IAA
含量呈正相关，与 IAA /ABA 比值呈弱正相关;而与
GA3 和 ABA含量呈弱负相关。以上分析表明:较高
的 IAA含量及 IAA /ABA 比值，有利于插条生根，而
高的 ABA含量对生根不利。
表 1 扦插生根率与插条基部及母叶的内源激素含量的相关性分析
生根率 Y
母叶
IAAX1 ABAX2 IAA /ABAX3 GA3X4
插条基部
IAAX5 ABAX6 IAA /ABAX7 GA3X8
Y 1
X1 0. 802 1
X2 － 0. 388 － 0. 862 1
X3 0. 352 － 0. 277 0. 726 1
X4 － 0. 499 － 0. 918 0. 992 0. 635 1
X5 0. 860 0. 384 0. 138 0. 781 0. 014 1
X6 － 0. 778 － 0. 999* 0. 881 0. 314 0. 933 － 0. 347 1
X7 0. 937 0. 542 － 0. 041 0. 657 － 0. 165 0. 984 － 0. 509 1
X8 0. 887 0. 987 － 0. 769 － 0. 119 － 0. 843 0. 527 － 0. 980 0. 670 1
注:* 表示 5%的水平差异显著
3 讨论
3. 1 本试验结果表明:插条基部和母叶 IAA 变化
均是先下降然后上升，再下降最后趋缓的过程。
ABA的含量变化是，扦插初期，处理插条母叶的
ABA含量一直缓慢上升，扦插 20 d 后，ABA 含量保
持稳定水平。插条基部 ABA 含量呈明显的双峰曲
线，其动态变化与 IAA 含量变化是此消彼长的关
系。尽管 IAA 和 ABA 含量变化趋势各有不同，但
IAA /ABA比值确是在根原基形成和不定根出现的
时期逐渐增大的，因此可以认为二者的相对含量对
插条生根影响最大，二者含量水平达到一定的平衡
对生根有利。这与前人的研究是一致的，内源激素
间的平衡是影响植物生长发育的重要因素〔6〕。叶
中 GA3 含量与插条生根的相关性不大，而插条基部
皮层的 GA3 含量与灰毡毛忍冬插条的生根是呈正
相关的。可能是 GA3 含量的提高，加强了淀粉、蛋
白质的水解，促进不定根的生成，最终提高了外源激
素处理的生根率。这与黄焱的观点是不同的〔7〕。
3. 2 本试验通过对灰毡毛忍冬扦插生根过程中内
源激素含量动态变化的研究，初步探究了各内源激
素对灰毡毛忍冬扦插生根的作用。但各内源激素间
如何相互作用，从而影响插条的生根，还需作进一步
探究。
3. 3 本文研究了内源激素水平与生根的关系，其
测定内源激素的插条材料是经 ABT6 生根粉处理过
的，但对于外源激素对灰毡毛忍冬扦插生根过程中
·425· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
内源激素变化的影响未作进一步研究。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-11-16
基金项目:国家自然科学基金项目(30860377) ;江西省自然科学基金项目(2009GZY0118) ;江西省卫生厅科技计划(20092052)
* 通讯作者:赵海梅，Tel:0791-86588615，E-mail:haimei79@ 163. com。
·动物药研究·
全蝎蜈蚣对 CIA大鼠外周血
CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg 细胞的调节
刘端勇1，赵海梅1* ，黄小英2，左志琴1，王艳辉3，程绍民4
(1. 江西中医学院科技学院，江西 南昌 330025;2. 江西中医学院科研处，江西 南昌 330004;3. 南昌大学
抚州医学分院，江西 抚州 334000;4. 江西中医学院基础医学院，江西 南昌 330004)
摘要 目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎(Collagen-Induced Arthritis，CIA)大鼠外周血 CD4 + CD25 +
FoxP3 + Treg 细胞的调节作用。方法:Wistar大鼠 60 只，随机分成 6 组，分别为正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高
(0. 4 g /kg)、中(0. 2 g /kg)、低剂量(0. 1 g /kg)组和Ⅱ型胶原蛋白(60 μg /kg)治疗组(CⅡ组) ，二型胶原蛋白诱导大
鼠关节炎，并采用流式细胞术检测大鼠外周血 CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg 细胞及酶联免疫吸附试验检测血清中 IL-2
表达水平。结果:与模型组比较，全蝎蜈蚣高、低剂量组大鼠外周血 CD4 + CD25 + T细胞及 CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg
细胞水平显著升高，且中、低剂量组血清 IL-2 水平显著下降。结论:全蝎蜈蚣治疗关节炎大鼠可能是通过上调外周
CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞表达水平以恢复或重建免疫耐受而实现的。
关键词 全蝎;蜈蚣;类风湿性关节炎;调节性 T细胞
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0525-04
Regulation Effect of Scorpio and Scolopendra on CD4 +CD25 + FoxP3 +Treg Cell
in Peripheral Blood from Rats with Collagen-Induced Arthritis (CIA)
LIU Duan-yong 1，ZHAO Hai-mei1，HUANG Xiao-ying 2，ZUO Zhi-qin 1，WANG Yan-hui 3，CHENG Shao-min 4
(1. Technology College，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine Science，Nanchang 330025，China;2. Scientific Research
Department，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China;3. Fuzhou Medical College of Nanchang U-
niversity，Fuzhou 334000，China;4. College of Basic Medicine，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，
China)
Abstract Objective:To study the regulation effect of Scorpio and Scolopendra on CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg Cell in peripheral
blood from rats with collagen-induced arthritis. Methods:Sixty female Wistar rats were randomly divided into 6 groups，normal control
group，model control group，low-dose，middle-dose and high-dose Scorpio and Scolopendra group，and the type Ⅱcollagen group. Rats
arthritis was induced by collagen. The number of CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg cell in peripheral blood was tested by flow cytometry，and
the level of IL-2 in serum was detected by enzyme linked immunosorbent assay. Results:Compared with the model groups，the levels of
CD4 + CD25 + Treg cell and CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg cell were increased obviously in the high and low dose of Scorpio and Scolopendra
·525·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月