全 文 ：收稿日期:2009-06-10
作者简介:高婷(1983-),女(汉族), 黑龙江双鸭山人 ,硕士研究生 , E-mailgaoting8304@163.com;孙启时(1945-), 男
(汉族), 吉林松源人 ,教授 ,主要从事中药资源开发和利用的研究 , Tel.024-23986468, E-mailsunqishi@sina.com。
文章编号:1006-2858(2010)05-0373-04
HPLC法测定 14个地区山楂中羽扇豆醇的含量
高　婷1 , 曹　阳 2 , 贾凌云1 , 丁　宏 1 , 孙启时1
(1.沈阳药科大学 中药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.沈阳惠生药业有限公司 , 辽宁 沈阳 110001)
摘要:目的 建立测定山楂中羽扇豆醇含量的方法。方法 采用 HPLC法。色谱柱为 DiamonsilC18柱
(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为甲醇-水(体积比 60∶40), 流速为 1.0 mL·min-1 , 检测波长为
205nm, 柱温为 25 ℃,进样量为 10 μL。结果 羽扇豆醇质量浓度在 0.432 ～ 4.32 mg·L-1内与峰面
积呈良好的线性关系 , r=0.999 8(n=5), 平均回收率为 95.5%(RSD=3.2%, n=9)。 结论 该方
法简便 , 准确 ,重现性好 , 可用于山楂药材的质量评价。
关键词:山楂;羽扇豆醇;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　山楂为蔷薇科植物山里红(Crataeguspinnat-
ifidaBge.var.majorN.E.Br.)或山楂(Crataegus
pinnatifidaBge.)的干燥成熟果实 [ 1] ,习称 “北山
楂 ”[ 2] 。北山楂分布于我国北方各地 ,尤以山东 、
辽宁产者为道地[ 3] 。山楂具有消食健胃和行气
散瘀的功效 ,临床上用于消食化滞 、活血化瘀。近
年来 ,更广泛用于治疗心血管疾病和具有抗菌消
炎的作用 ,引起国内外学者的广泛重视。山楂主
要成分为黄酮类和三萜类化合物。作者首次从山
楂种内分离得到三萜类化合物羽扇豆醇 ,药理研
究显示 ,羽扇豆醇具有多种生物学活性 ,尤其具有
强心 、降血压 、降血脂 、增加冠脉流量等对心血管
系统多方面的药理作用 [ 4] 。此外 ,还具有增强免
疫力 、抗肿瘤等多方面的药理作用。作者采用
RP-HPLC法测定不同产地山楂中羽扇豆醇(结构
式见图 1)的含量 ,从而为评价山楂药材的质量控
制提供依据 。
Fig.1　Structureoflupeol
1　仪器与材料
HITACHI高效液相色谱仪 、 L-7100泵 、 L-
7420紫外检测器(日本日立公司), FL9500色谱
工作站(浙江温岭福立分析仪器有限公司), 202-1
电热恒温干燥器(上海阳光实验仪器有限公司),
ES-J电子分析天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限
公司), RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂), DL-360A超声波清洗器(上海之信仪器有限
公司)。
羽扇豆醇对照品(自制 ,纯度质量分数大于
98.0%),甲醇(色谱纯 , 山东禹王实业有限公司
化工分公司),水(纯净水 ,杭州娃哈哈集团有限
公司)。
所用药材购自全国各地 ,并经沈阳药科大学
中药学院孙启时教授鉴定为蔷薇科植物山里红
(CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.)或
山楂(CrataeguspinnatifidaBge.)的干燥成熟果
实 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件的选择及系统适用性试验
色谱柱:采用 DiamonsilC18柱(200mm×4.6
mm, 5 μm);流动相:甲醇-水(体积比 60∶40);流
速:1.0 mL·min-1;检测波长:205 nm;柱温:25
℃;进样量:10 μL。
在上述色谱条件下分析 ,理论塔板数按羽扇
豆醇计算不低于 6 000,样品中羽扇豆醇峰与相邻
峰分离度大于 1.5, 拖尾因子在 0.95 ～ 1.05之
间 。色谱图见图 2。
第 27卷 第 5期
2 0 1 0 年 5 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.27 　No.5
May.2010 p.373
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2010.05.006
1— Lupeol
Fig.2　HPLCchromatogramsofchemicalreferencesubstances(A), sample(B)
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照储备溶液
精密称取羽扇豆醇对照品适量 ,置 100mL量
瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制得质量
浓度为 0.216 g·L-1的对照储备溶液 。
2.2.2　供试溶液
取药材粉末约 1.0 g,精密称定 ,置具塞锥形
瓶中 ,精密加入氯仿 40 mL,超声处理 45 min,放
冷 ,过滤 ,回收溶剂至干 ,残渣加甲醇溶解并移至
10 mL量瓶中 ,稀释至刻度 ,摇匀 ,过 0.45 μm微
孔滤膜 ,取续滤液即得供试溶液 。
2.3　方法学考察
2.3.1　线性关系考察
精密吸取羽扇豆醇对照储备溶液 0.2、0.5、
1.0、1.5、2.0 mL,分别置于 100 mL量瓶中 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得系列标准溶液 。分别取系
列标准溶液按 “ 2.1”条色谱条件分析 ,以溶液质
量浓度(ρ, mg·L-1)为横坐标 ,以峰面积(A)为纵
坐标进行线性回归计算 ,得回归方程为 A=1.0×
10
6ρ+2.0×106 , r=0.999 8(n=5)。结果表明羽
扇豆醇质量浓度在 0.432 ～ 4.32 mg·L-1内与峰
面积呈良好的线性关系。
2.3.2　精密度试验
精密吸取对照品溶液 ,按 “2.1”条色谱条件
连续进样 5次分析 ,计算羽扇豆醇峰面积的 RSD
为 1.8%,表明仪器精密度良好 。
2.3.3　重复性试验
取同一批(辽宁抚顺)山楂样品 ,按 “2.2.2”
条方法制备供试溶液 5份 ,按 “ 2.1”条色谱条件
进样分析 ,计算羽扇豆醇含量的 RSD为 1.9%,表
明方法重复性良好。
2.3.4　稳定性试验
取山楂供试溶液 ,室温放置 ,分别于 0、2、4、
8、10、12 h按 “2.1”条色谱条件分析 ,计算羽扇豆
醇色谱峰面积的 RSD为 2.3%,表明供试溶液室
温放置 12h内稳定 。
2.3.5　回收率试验
取已知含量的同一批(辽宁抚顺)山楂样品
约 0.5g,共 9份 ,精密称定。每组按低 、中 、高质
量浓度分别精密加入羽扇豆醇对照品 ,每一质量
浓度 3份 ,按 “ 2.2.2”条方法制备供试溶液 ,按
“ 2.1”条色谱条件进样分析 ,计算低 、中 、高质量
浓度羽扇豆醇的回收率 ,结果见表 1。
Table1　Recoveriesoflupeol(n=9)
morigin/ μg madded/ μg mfound/ μg Recovery/% Averagerecovery/% RSD/%
20.58 17.28 36.88 94.3
20.58 17.28 36.93 94.7
20.58 17.28 38.01 100.9
20.58 21.60 41.89 98.7
20.58 21.60 41.72 97.9 95.5 3.2
20.58 21.60 41.19 95.4
20.58 32.40 50.97 93.8
20.58 32.40 50.62 92.7
20.58 32.40 49.97 90.7
374 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷　
2.4　供试品含量测定
分别取山楂样品约 1.0 g, 精密称定 , 按
“ 2.2.2”条方法制备供试溶液 ,按 “ 2.1”条色谱条
件分析 ,采用外标法计算 14个地区山楂中羽扇豆
醇的含量 ,结果见表 2。
Table2　Content(c)oflupeolindifferentsources(n=3)
Source c/(μg·g-1) caverage/(μg·g-1) RSD/%
Qinghaixining 9.11
9.13 9.14 0.29
9.16
Tianjin 6.52
6.55 6.54 0.27
6.54
Liaoningfushun 20.54
20.58 20.57 0.14
20.59
Jilinsiping 11.66
11.70 11.68 0.15
11.67
Gansubaiyin 17.78
17.76 17.76 0.12
17.75
Shanxixian 17.29
17.32 17.30 0.11
17.28
Heilongjianghaerbin 12.07
12.11 12.10 0.19
12.12
Liaoningqingyuan 24.30
24.35 24.32 0.10
24.32
Liaoningjinzhou 23.10
23.15 23.13 0.05
23.12
Heilongjiangyouyi 24.76
24.79 24.77 0.08
24.77
Henanzhengzhou 19.33
19.28 19.32 0.17
19.27
Heilongjiangheihe 15.28
15.32 15.31 0.15
15.31
Ningxiayinchuan 6.12
6.15 6.12 0.41
6.10
Liaoningchaoyang 16.04
16.02 16.05 0.20
16.08
375第 5期 高　婷等:HPLC法测定 14个地区山楂中羽扇豆醇的含量
3　讨论与结论
a.流动相的选择 。分别考察了乙腈-水和甲
醇 -水系统为流动相 ,从峰形 、分离度 、对称因子 、
保留时间等因素综合考虑 ,确定流动相为甲醇-水
(体积比 60∶40)。
b.提取方法的选择 。以羽扇豆醇的含量作
为指标 ,分别考察了索氏提取法 、回流法和超声法
的提取效率 。结果表明 ,三种方法的提取率无明
显差别 ,考虑到超声提取法操作简便 ,故采用超声
法 。又考察了提取溶剂和提取时间对提取率的影
响 ,最后选择最佳提取方法为氯仿超声提取
45min。
参考文献:
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北京:化学工业出版社 , 2005:22.
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[ J] .医药信息 , 2000, 17 (6):29-30.
DeterminationoflupeolinFructusCrataegifrom14
differentareasbyHPLC
GAOTing1 , CAOYang2 , JIALing-yun1 , DINGHong1 , SUNQi-shi1
(1.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedic, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016,
China;2.ShenyangHuishengPharmaceuticalCo., Ltd., Shenyang110001, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationoflupeolinFructusCrataegi.
MethodsChromatographywasconductedonaDiamonsilC18 column(200mm×4.6mm, 5μm).Themo-
bilephasewasmethanol-water(V∶V=60∶40)withaflowrateof1.0 mL·min-1 andthedetectionwave-
lengthwassetat205nm, columntemperatureat25℃.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherange
of0.432-4.32 mg·L-1(r=0.999 8).Theaveragerecoverywas95.5% andRSDwas3.2% (n=9).
ConclusionsThemethodissimple, accurate, reproducible, andcanbeusedtoevaluatethequalityofFructus
Crataegi.
Keywords:FructusCrataegi;lupeol;HPLC
376 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 27卷