全 文 ：2.6　样品含量测定 按上述样品处理方法处理样品 , 于紫外分光
光度计下测定。结果见表 2。
表 2　天麻样品中 SO2 含量测定结果
样品编号 C/μg· g-1 样品编号 C/μg· g-1
1 未检出 12 313.23
2 未检出 13 371.24
3 11.50 14 未检出
4 未检出 15 未检出
5 13.69 16 60.82
6 未检出 17 未检出
7 未检出 18 55.36
8 未检出 19 564.28
9 61.75 20 176.02
10 未检出 21 2081.35
11 未检出 22 153.82
- - 23 109.47
3　讨论
上述所有样品的测定结果显示 ,在 1-11号样品中 , SO
2
含量
最高为 61.7(μg/g), 而且大多样品为未检出。据了解天麻的生
产地 , 周围没有工产 ,也没有其它能带来污染的环境 ,在天麻的整
个生长过程中 ,没有二氧化硫污染源 , 在市售的 12个样品中 , 有
3个为未检出 , 在检出的样品中含量最高者为 2 081.35μg/g。据
了解在天麻的产地加工过程中 ,常采用硫磺熏蒸作为处理程序之
一。建议天麻生产地改进天麻的初加工方法 , 并建议有关部门对
市售天麻进行二氧化硫含量监控。
天麻用自然干燥法进行干燥 , 色泽为黄色或土黄色 , 而经硫
熏后 , 变为白色 , 有害而无利。
在实验条件下 ,未发现天麻中有干扰测定结果的其它物质。
参考文献:
[ 1 ] 　葛玉华.天麻的产地加工 [ J].浙江中西医结合杂志 , 2001, (11):5.
收稿日期:2005-05-18;　修订日期:2006-02-21
作者简介:王小荣 (1974-),女(汉族),山西人 ,现在读上海交通大学药学
院硕士研究生 ,主要从事中药新药研究工作.
＊通讯作者简介:贾　伟(1965-),男(汉族),江苏人 , 现任上海交通大学
药学院教授 ,博士学位 ,主要从事中药新药与代谢组学研究工作.
当归油对痛经小鼠子宫组织中一氧化氮和钙离子的影响
王小荣 , 邱明丰 , 谢国祥 , 张汉杰 , 贾　伟＊
(上海交通大学药学院 ,上海　200030)
摘要:目的 探讨当归油治疗原发性痛经的作用机理。 方法 通过测定痛经模型小鼠子宫重量 、子宫组织中一氧化氮和
钙离子水平 , 研究当归油对子宫的作用。结果 与阴性组比较 , 当归油能够减少催产素所致痛经小鼠的扭体次数(P<
0.01), 对痛经模型小鼠子宫重量无明显影响(P>0.05);给药组小鼠子宫组织中一氧化氮的含量显著升高(P<0.05);
而钙离子含量显著降低(P<0 01)。结论 当归油对催产素所致痛经小鼠扭体有显著抑制作用 , 并可升高子宫组织中一
氧化氮水平 , 同时降低钙离子水平。这些作用可能是当归油治疗原发性痛经的部分机制。
关键词:　当归油;　痛经;　一氧化氮;　钙离子
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)05-0723-02
EffectofEssentialOilfromAngelicaSinensisonLevelofNitricOxideandCalciumIonin
UterineTissueofMice
WANGXiao-rong, QIUMing-feng, XIEGuo-xiang, ZHANGHan-jie, JIAWei＊
(SchoolofPharmacy, ShanghaiJiaotongUniversity, Shanghai200030 , China)
Abstract:ObjectiveToassessthepotentialmechanismoftheessentialoilfromAngelicaSinensisDielstreatingprimarydysmen-
orrheal.MethodsOxytocinandestrogenwereemployedtoconstructanimalmodelofdysmenorrhea.Efectonalleviatingpainwas
measured.Theweightofuterus, thelevelofnitricoxideandcalciumioninuterinetissueofmiceweredetermined.ResultsAd-
ministrationofdiferentdosesoftheessentialoilobviouslyreducedthetwistingreactionofmiceinducedbyoxytocincomparedby
negativecontrol(P<0.01).Theessentialoilcouldincreasenitricoxideconcentrationandreducecalciumionconcentrationinu-
terinetissueofmice(P<0.01), buthadnosignificantefectontheweightofmice suterus(P>0.05).ConclusionTheessen-
tialoilfromAngelicaSinensisDielshascertainpharmacologicalefectsonprimarydysmenorrhea.Itcanincreasenitricoxidecon-
centrationandreducecalciumionconcentrationinuterinetissueofmice.Altheeffectsmayplayimportantrolesintreatingpri-
marydysmenorrhea.
Keywords:EssentialOilfromAngelicaSinensisDiels;　Dysmenorhea;　NitricOxide;　Calciumion
　　当归为伞形科植物当归 [ AngelicaSinensis(Oliv)Diels]的根 ,
具补血活血 、调经止痛 、润肠便通之功效 [ 1] 。当归的化学成分可
分为挥发油和水溶性物质两部分 , 挥发油中主要成分为藁本内
酯 [ 2] 。动物实验表明 , 当归油具有抗炎镇痛的药理作用 , 能够显
著抑制动物离体或在体子宫平滑肌收缩 , 对醋酸所致扭体 、痛经
模型扭体均有显著抑制作用 [ 3 ～ 5] 。当归油用于治疗痛经的机理
尚未完全明确。本实验拟通过观察给药组动物子宫重量以及子
宫组织中一氧化氮(nitricoxide, NO)和钙离子水平的变化 ,评价
当归油对子宫的影响。 NO与女性生理 、性激素调节 、妊娠生理
及维持正常妊娠与分娩均有着很密切的关系 [ 6] 。子宫平滑肌收
缩需要钙离子的参与。通过测定痛经模型动物子宫组织中一氧
化氮和钙离子含量 , 对探讨药物治疗痛经的作用机理具有重要
意义。
1　实验材料
1.1　受试药物 当归油中主要成分藁本内酯对热不稳定 ,传统水
蒸气蒸馏得到的当归油中 , 藁本内酯含量很低 , 因此 , 采用 CO
2
超临界萃取工艺制得当归油 ,以 25 MPa, 40℃, 4 h对当归进行萃
取 , 6MPa, 25℃进行解析。将萃取物以面积归一化法进行测定 ,
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2006VOL.17NO.5 时珍国医国药 2006年第 17卷第 5期
测得藁本内酯含量大于 50%。实验时以 2%吐温-80乳化 , 配成
不同浓度的溶液。
1.2　药品及试剂 月月舒痛经宝颗粒(河南宛西制药有限公司
产品 , 批号 040304);冰醋酸(上海化学试剂有限公司产品 , 批号
0408103);己烯雌酚片(上海信谊康捷药业 , 批号 041102);生理
盐水(0.9%氯化钠 ,安徽丰原药业 ,批号 20041026-61);催产素注
射液(上海禾丰制药有限公司 , 批号 4A03101);一氧化氮测定试
剂盒和钙离子测定试剂盒(南京建成生物工程研究所 , 批号
20050303)。实验所用试剂均为分析纯。
1.3　实验动物 昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 22g(购自上海斯莱克实
验动物有限公司 , 许可证号 SCXK(沪)2003-0003)。
1.4　实验仪器 TGL-16C型高速离心机(上海安亭科学仪器公
司);JRJ-300-I型组织匀浆机(上海华连科技有限公司);UV-
2102PCS型分光光度计(Unico), AL204型电子天平(MetlerTole-
do)。
2　方法与结果
2.1　小鼠痛经模型的建立 取体重 20 ～ 22 g昆明种雌性小鼠 ,
以雌激素和催产素联合制造原发性痛经模型 [ 7] 。具体方法为:
以 2 mg· kg-1给小鼠 i.g.己烯雌酚混悬液 , 连续 14 d,使小鼠子
宫同步化。在第 14天 , i.p.催产素 30 u· kg-1 , 制造小鼠原发性
痛经动物模型 , 用以评价当归油对痛经小鼠扭体反应的抑制作用
及对痛经小鼠子宫的影响。
2.2　当归油对痛经小鼠扭体的影响 取昆明种雌性小鼠 50只 ,
体重 20 ～ 22 g, 按体重分层 , 随机分为阴性对照组 、阳性对照组 、
当归油各剂量组共 5组 , 每组 10只 , 按 2.1方法制造原发性痛经
模型。从第 10天起 ,每日上午 i.g.己烯雌酚 , 下午 ig各剂量当
归油 , 阳性对照组给予月月舒痛经宝颗粒 , 空白对照组给予生理
盐水溶液 0.02ml· g-1 ,连续 4 d。于末次给药后 1h, i.p.催产
素 30u· kg-1 ,记录注射后 30 min内小鼠扭体次数及扭体反应抑
制率。结果见表 1。
表 1　当归油对痛经模型小鼠扭体的抑制作用( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1· d-1 30 min内扭体次数 扭体抑制率(%)
阴性 - 25.11±5.47 -
阳性 8 000 8.88±2.08＊＊ 64.63
当归 　720 7.88±2.59＊＊ 68.62
油 　480 10.63±3.41＊＊ 57.67　240 14.43±5.32＊＊ 42.53
　　与阴性组比较 , ＊＊P<0.01 ;n=10
对实验结果进行组间 t检验。结果表明 , 当归油各剂量组对
痛经模型小鼠扭体有显著的抑制作用 ,各剂量组与阴性组比较 P
<0.05,具有统计学极显著差异。
2.3　当归油对痛经模型小鼠子宫的影响 取昆明种雌性小鼠 50
只 , 体重 20 ～ 22 g,按体重分层 , 随机分为阴性对照组 、阳性对照
组 、当归油各剂量组共 5组 , 每组 10只 , 按 2.1方法制造原发性
痛经模型。 从第 10天起 , 每日上午 i.g.己烯雌酚 , 下午 i.g.各
剂量当归油 , 阳性对照组给予月月舒痛经宝颗粒 , 空白对照组给
予生理氯化钠溶液 0.02 ml· g-1 , 连续 4 d。于末次给药后 1 h,
将小鼠颈椎断头处死 ,迅速剖腹 , 取出子宫 ,按试剂盒要求 , 以冰
冻的生理盐水洗净拭干称重 ,制成 10%的子宫组织匀浆 , 以 3 000
r/min低温离心 15 min, 取上清液冷藏保存待测。 NO含量测定
采用硝酸还原酶法 , 钙离子测定采用甲基百里香酚蓝比色法。均
按试剂盒说明书的实验步骤严格操作。实验结果见表 2。
对实验结果进行组间 t检验 , 结果表明 , 当归油对子宫重量
的影响与阴性组比较有差异 , 但无统计学显著意义。当归油高剂
量组 、中剂量组能够升高痛经模型小鼠子宫组织中 NO水平 , 与
阴性组比较具有统计学非常显著差异(P<0.01)。给药组小鼠
子宫组织中钙离子水平有所降低 ,与阴性组比较具有统计学非常
显著差异(P<0.01)。
表 2　当归油对痛经模型小鼠子宫的影响( x±s)
组别
剂量
C/mg· kg-1
· d-1
对子宫的影响#
子宫重量比
C/mg· g-1
NO
C/mmol· gprot-1
钙离子
C/mmol· gprot-1
阳性 8 000 5.18±0.98 11.28±1.38＊＊ 0.24±0.08＊＊
阴性 - 4.34±1.28 5.72±2.06 0.54±0.09
当归 　720 5.69±2.16 10.26±3.79＊ 0.15±0.05＊＊
油 　480 5.21±1.56 8.82±2.20＊ 0.29±0.05＊＊
　240 4.93±0.76 6.10±1.01 0.37±0.09＊＊
　　与阴性组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
3　讨论
NO是一种具有多种生物功能的气体分子。 Yalampali等 [ 8]
通过实验证实 ,子宫中存在左旋精氨酸-NO-环磷鸟苷(cGMP)系
统 , 并调节子宫收缩性。 NO在细胞内形成后通过旁分泌(parac-
rine)作用可迅速扩散到细胞外 ,作用于邻近的平滑肌细胞 ,激活
细胞膜上的鸟苷酸环化酶 , 使该酶活性增大 50 ～ 200倍 , 导致细
胞内 cGMP生成增多 , cGMP进而激活 cGMP依赖性蛋白激酶 , 或
直接作用于细胞膜上的钙通道 ,引起钙离子外流或加速细胞内游
离钙的的结合 ,从而引起平滑肌细胞舒张和血管扩张。痛经时 ,
子宫发生缺血 -再灌注损伤 , 使钙离子大量进入细胞内 , 细胞内
钙离子超载引起细胞的能量耗竭 、细胞膜受损 , 此处还可以导致
子宫肌挛缩。研究表明 ,钙离子超载可导致细胞核钙离子稳态失
衡 , 这一切均引起并加重了子宫肌缺血 -再灌注损伤。药物通过
降低组织内钙离子浓度 ,使子宫组织趋向正常化。
实验结果表明 ,当归油可升高痛经模型小鼠子宫组织中 NO
的含量 , 同时降低钙离子水平 , 推测其治疗痛经的作用机理与影
响子宫组织中一氧化氮和钙离子水平有关。当归油对痛经模型
小鼠子宫重量比亦有一定影响 , 但无统计学显著差异 , 提示在相
同剂量己烯雌酚作用下 ,对动物子宫内膜增殖有一定促进作用 ,
结合其活血补血之功效 ,推测可能与改变子宫组织微循环有关。
由已有文献和实验结果分析 ,当归油除了干涉炎症过程和子宫平
滑肌收缩外 , 还可能通过影响子宫组织中一氧化氮和钙离子水
平 、改善子宫组织微循环而起到治疗痛经的作用 , 其完整机理尚
需进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:89.
[ 2 ] 　董　岩 ,魏兴国 ,崔庆新 ,等.当归挥发油化学成分分析 [ J] .山东中
医杂志 , 2004, 23(1):43.
[ 3 ] 　闫　升 ,乔国芳.当归油对大鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响
[ J] .中草药 , 2000, 31(8):604.
[ 4 ] 　刘琳娜 ,梅其炳 ,尚　磊 ,等.当归精油对大鼠离体子宫平滑肌收缩
的影响 [ J] .中成药 , 2004, 26(4):308.
[ 5 ] 　刘琳娜 ,梅其炳 ,程建峰 ,等.当归精油治疗痛经的药理研究 [ J] .解
放军药学学报 , 2002, 18(2):77.
[ 6 ] 　钟慈声.一氧化氮的生物医学 [ M] .上海:上海医科大学出版社 ,
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[ 7 ] 　孙海燕 ,曹永孝 ,刘　静 ,等.小鼠痛经模型的建立 [ J] .中国药理学
通报 , 2002, 18(2):233.
[ 8 ] 　YalampaliC, IzumiHByam-SmithM, etal.AnL-arginine-nitric
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL.17NO.5