全 文 ：当归多糖及其中性组分对巨噬细胞分泌 TNF-α的影响
奚瑾磊　彭仁王秀　杨哲琼
武汉大学医学院药理学教研室 ,武汉 430071
摘要　目的:观察当归多糖(ASP)及其中性组分(ASP-1)在体内外对小鼠腹腔巨噬细胞(MФ)分泌 TNF-α的影
响。方法:直接制取小鼠腹腔 MФ, 与 ASP及 ASP-1共同培养 16 h;ASP及 ASP-1 125 、250 mg kg 经口灌胃给药 7 d , 于
第 7 d 制取 MФ, 体外培养 16 h , 分别观察 ASP 及ASP-1在体外均可显著增强MФ对 TNF-α的分泌。ASP及 ASP-1 体
内给药无直接诱导MФ分泌 TNF-α的功能。结论:ASP及 ASP-1 在体内外均可增强小鼠腹腔 MФ分泌 TNF-α的功
能。
关键词　当归多糖;巨噬细胞;TNF-α
中图分类号　R 977.9
　　笔者在研究中发现主要成分为当归多糖(ASP)
的当归醇沉物[ ethanol sediments from tuber of Angelica
sinensis(Oliv.)Diels(ESA)] ,具有促进淋巴细胞增殖
的效应[ 1] ,对卡介苗加脂多糖所致小鼠免疫性肝损
伤有明显的保护作用[ 2] 。与此同时 ,笔者亦曾观察
到将ASP 继续分离得到的中性组分(ASP-1)可以明
显增强小鼠单核吞噬细胞功能 。本文通过体内 、体
外试验来进一步观察了 ASP 、ASP-1对腹腔巨噬细胞
(MΥ)分泌 TNF-α分泌的影响 ,以求更全面地认识当
归多糖的免疫作用。
1　材料
1.1　药品与试剂　ASP为易溶于水的深棕色粉末 ,
含糖量为 65.5%,主要含 D-半乳糖和 D-阿拉伯糖;
ASP-1为易溶于水的棕灰色粉末 ,含糖量为 72.14%,
主要含 D-阿拉伯糖和 α-葡萄糖醛酸 ,本实验室制
备[ 1] 。噻唑蓝(MTT)、放线菌素-D 、十二烷基磺酸钠
(SDS)、LPS 为 Sigma 产品。 RPMI-1640 培养基购自
Gibco公司 。
1.2　L929细胞株　购自武汉大学生物标本典藏中
心。
1.3　实验动物　健康昆明种雄性小鼠 ,8周龄 ,体重
18 ～ 22 g ,武汉大学医学实验动物中心提供。
1.4　仪器　CO2培养箱 ,美国 Forma公司;DG-3022A
型酶联比色仪 ,国营华东电子管厂;倒置显微镜 ,日
本Nikon;SartoriusBP110S精密电子天平 ,德国;梅特
勒-托利多 Delta 320 型 pH 计 , 美国;80-2型台式离
心机 ,上海手术器械厂;手提式高压蒸汽消毒器 ,上
海三申医疗器械有限公司。
2　方法与结果
2.1　ASP 、ASP-1体外对小鼠腹腔MΥ分泌 TNF-α的
影响:参照文献[ 3 ,4] ,小鼠摘眼球放血 , 颈椎脱臼处
死。腹腔注射 RPMI-1640 ,无菌条件下取腹腔 MΥ悬
液 ,1 000 r min离心 10 min 后收集细胞 ,洗涤 3次 ,
以完全 1640培养液调细胞浓度为2×106 ml ,加入 24
孔板中 ,每孔 1 ml。5%CO2 37 ℃下孵育 2 h 后 ,洗
掉非贴壁细胞 ,加入 ASP 、ASP-1(终浓度均为 5 μg
ml 、10μg ml 、20 μg ml)各0.5 ml ,以完全 1640培养液
作为对照 ,继续孵育。于 16 h 吸取上清 , -80 ℃保
存 ,供检测 TNF-α用 。TNF-α测定用 L929细胞株细
胞毒法[ 3 , 4] ,检测结果以吸光度值A570表示 ,吸光度值
越小 ,表明待测上清中 TNF-α含量越高 ,对 L929细
胞的杀伤作用越强 。结果见表 1。
ASP 、ASP-1有显著增强 TNF-α分泌的作用。在
5 ～ 20μg ml浓度范围 ,ASP 增强腹腔 MΥ分泌 TNF-α
的作用随浓度增大而增强 ,并表现出剂量依赖关系
(r=-0.995 2),20μg ml时对L929细胞的杀伤率达
到 54.4%。ASP-1 在 5 μg ml 和 10 μg ml 时促进
TNF-α分泌的作用相近 ,而 20 μg ml 时对 L929细胞
的杀伤率可达到 59.1%。
第 23卷　第1 期 武汉大学学报(医学版) Vol.23 , No.1
　 2002年 1 月 Medical Journal of Wuhan University Jan , 2002
作者简介:奚瑾磊 ,男 , 1975～ ,硕士,主要从事生化药理和中草药研究 ,现工作于武汉科技大学医学院药理学教研室(武汉 430063)
DOI :10.14188/j.1671-8852.2002.01.006
表 1　ASP、ASP-1体外对小鼠腹腔MΥ分泌
TNF-α的影响( x±s , n=3)
组别 剂量(μg ml) 吸光度值(A570)
RPMI-1640 - 0.193±0.006
ASP 5 0.138±0.012＊＊
10 0.117±0.011＊＊
20 0.088±0.008＊＊
ASP-1 5 0.116±0.005＊＊
10 0.119±0.012＊＊
20 0.079±0.009＊＊
　　与对照组比较 , ＊＊　P<0.01
2.2 　ASP 、ASP-1 体内给药对小鼠腹腔 MΥ分泌
TNF-α的影响　小鼠随机分为 5 组 ,每组 6 只 ,分别
给予ASP 125 mg kg 、250 mg kg ,ASP-1 125 mg kg 、250
mg kg 及等容量生理盐水经口灌胃 7 d ,按上述方法
制取腹腔MΥ悬液 ,调细胞浓度为 2×106 ml ,在 5%
CO2 37 ℃条件下 ,一部分直接孵育 ,另一部分与终浓
度为 10μg ml 的 LPS共同孵育 ,16 h 后取上清 , -80
℃保存待测 ,检测方法同上。结果见表2 、表 3。
表 2　ASP、ASP-1体外对小鼠腹腔 MΥ分泌
TNF-α的影响( x±s , n=3)
组别 剂量(mg kg) 吸光度值 A570
RPMI-1640 - 0.320±0.010
NS - 0.313±0.015
ASP 125 0.313±0.023
250 0.320±0.026
ASP-1 125 0.313±0.021
250 0.330±0.026
　　ASP 、ASP-1灌胃给药无直接诱导小鼠腹腔 MΥ
分泌 TNF-α的功能;但给药剂量为 250 mg kg 时 ,均
可显著增强 LPS诱导的小鼠腹腔MΥ分泌 TNF-α的
功能 。
表 3　ASP、ASP-1 体内对小鼠腹腔MΥ在 LPS刺激下
分泌 TNF-α的影响( x ±s , n=3)
组别 剂量(mg kg) 吸光度值(A570)
RPMI-1640 - 0.320±0.010
NS - 0.223±0.015＊＊
ASP 125 0.210±0.017＊＊
250 0.157±0.025＊＊■■
ASP-1 125 0.207±0.006＊＊
250 0.163±0.015＊＊■■
　　vsRPMI-1640, ＊＊P<0.01;vsNS , ΔΔP<0.01
NS 、ASP 、ASP-1组均与终浓度 10μg ml LPS 共同培养
3　讨论
当归的免疫药理作用 ,最终是要通过作用于各
种免疫效应细胞 ,诱生各种细胞因子 ,并参与机体的
神经 、体液及免疫调节作用来实现的[ 5] 。笔者曾证
明:ESA能单独或协同 ConA LPS 发挥促进小鼠脾脏
及胸腺 T 、B淋巴细胞增殖的作用 ,尚可对抗氢化泼
尼松(HP)对ConA诱导的脾脏及胸腺 T 淋巴细胞的
增殖反应的抑制作用[ 1] 。ASP 及其分离组分能提高
补体 C3 含量 , 显著增强小鼠单核巨噬细胞功能。
TNF-α作为活化的巨噬细胞所分泌的细胞因子 ,在机
体免疫监视 、免疫调节中均有重要作用[ 6] 。
本次实验结果表明 ASP 、ASP-1在体外可以显著
增强腹腔 MΥ分泌 TNF-α的功能。与此同时 ,笔者
在实验中亦观察到 ASP 、ASP-1体内用药无直接促进
腹腔 MΥ分泌 TNF-α的功能 ,但在给药剂量为 250
mg kg 时 ,均可使腹腔MΥ在 LPS刺激下分泌 TNF-α
的功能得到显著增强。提示ASP 、ASP-1对正常腹腔
MΥ无影响 ,但可以增强活化的腹腔MΥ分泌细胞因
子的功能 ,呈现出间接的免疫调节作用 ,其具体机制
有待进一步实验阐明。
综上所述 ,笔者认为从当归醇沉物中提取得到
ASP 、ASP-1具有重要的免疫活性 ,参与巨噬细胞激
活 ,促进细胞因子分泌 ,调节机体免疫功能 ,是 ASP、
ASP-1免疫活性的一个重要方面。
参考文献
1　夏雪雁 ,彭仁王秀.当归醇沉物对体外小鼠脾 、胸腺淋巴细
胞增殖的影响.中草药 , 1999 , 30(2):112
2　李颖 , 彭仁王秀.阿魏酸钠和当归醇沉物对免疫性肝损伤
的干预作用.中草药 , 2000 , 31(4):274
3　胡映辉 , 林志彬 ,何云庆 , 等.灵芝菌丝体多糖通过增强小
鼠巨噬细胞功能诱导 HL-60细胞凋亡.中国药理学通报 ,
1999 , 15(1):27
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版社 , 1999 , 602 ～ 603
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结合杂志 , 1992 , 12(6):378
6　龙振洲.医学免疫学.第二版.北京:人民卫生出版社 ,
1998 , 104 ～ 105
(2001-03-25 收稿)
22 武汉大学学报(医学版) 第 23卷
Effects of Angelica Sinensis Polysaccharides and Its Litmusless Component
on TNF-αProduced by Peritoneal Macrophages
Xi Jinlei ,Peng Renxiu ,Yang zheqiong
Department of Pharmacology , School of Medicine , Wuhan University , Wuhan 430071 ,China
Abstract
Objective:To odserve the effect of Angelica sinensis polysaccharides(ASP)and litmusless component(ASP-1)on
TNF-αproduced by mice peritoneal macrophages.Methods:Mice peritoneal macrophages with no pretreatment were co-
cultured with ASP or ASP-1 in vitro for 16 hours.After prepared from mice administered with ASP or ASP-1(125 、250
mg kg)for 7 days in vivo , macrophages were cultured for 16 hours.L929 cell line cytotoxicity was used for assay of TNF-
αsecreted by macrophages.Results:The production of TNF-αcould be significantly promoted by ASP or ASP-1 in vitro.
ASP or ASP-1 in vitro.ASP or ASP-can not directly induced the macrophages to secret TNF-αin vivo ,but could enhance
hte production of TNF-αby macrophages induced by LPS.Conclusions:ASP andASP-1 can promote macrophages to se-
cret TNF-αin vitro and in vivo.
Key Words　Angelica sinensis polysaccharides;macrophages;TNF-α1
(上接第 20页)
Effect of Androgen on Vascular Endothelial Cell
Function in Rabbits of Balloon Injury
Fu Haixia , Zhao Ziniu , Xu Jiali , et al
Department of Cardiology , Renmin Hospital , Wuhan University , Wuhan 430060 , China
Abstract
Objective:To study the influence of androgen on vascular endothelial cell function in rabbits of balloon injury.
Methods:Twelve male rabbits were randomly divided into two groups:treatment group and only castrated group.All ani-
mals were castrated and performed deendothelializing balloon injury in right iliac artery.Treatment group was received an-
drogen replacement therapy.Nitric oxide(NO)and endothelin-1(ET-1)were measured in different intervals during the
experiment.After 2 weeks of endothelial denudation all animals were killed , vascular cell adhesion molecule-1(VCAM-
1)expression was tested with immunohistochemistry and morphological changes were observed withHE staining.Results:
Compared with only castrated group , plasma NO levels were significantly reduced and plasma ET-1 levels were signifi-
cantly increased at 1 week and 2 weeks after endothelial denudation in treatment group(P<0.01).Meantime VCAM-1
expression and the neointimal area were increased in treatment group(P <0.001 and P <0.01 , respectively).Conclu-
sion:The high levels of androgens can injury endothelial cell function and promote neointimal formation.
Key Words　androgens;endothelium , vascular;angioplasty;rabbits
23第 1期 奚瑾磊 ,等.当归多糖及其中性组分对巨噬细胞分泌 TNF-α的影响