全 文 ：［基金项目］武汉市科技供需对接项目“当归芍药胶囊的二次开发研究”（２０１２１ｇ００８１）资助　［作者简介］张雪琼，女，博士，电话：１３８８６１２３７３６，
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｘｑｉｏｎｇ０２０４＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］熊富良，男，教授，电话：１３８０７１１１０５８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｆｌ１３８０７１１１０５８＠１６３．ｃｏｍ
当归芍药胶囊的质量控制
张雪琼１，何园园１，李心愿１，徐仕奇１，陶正恒２，宋利辉２，熊富良１　 （１．武汉理工大学化学工程学院，湖北 武汉
４３００７０；２．湖北虎泉药业有限公司，湖北 武汉４３００００）
［摘要］　目的：建立当归芍药胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法对当归、白芍、白术、泽泻和川芎进行定性鉴别，采用
ＨＰＬＣ法对当归芍药胶囊中的芍药苷进行含量测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈－磷酸二氢钾溶液（１６∶８４）为
流动相，测定波长２３０　ｎｍ；流速为１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１。结果：薄层色谱中，供试品溶液在与对照药材相应位置上出现相同颜色的斑
点，斑点清晰，阴性对照无干扰；高效液相色谱中，芍药苷进样量在０．２０８～１．８７２μｇ范围内有良好的线性关系（ｒ＝０．９９９　９５），
平均回收率为９８．４５％，ＲＳＤ％为０．７５％（ｎ＝６）。结论：方法可靠，操作简便，重复性良好，可用于该制剂的质量控制。
［关键词］　当归芍药胶囊；质量标准；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ；芍药苷
［中图分类号］Ｒ２８３　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１６－１３５６－０３　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１６．０６
Ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　Ｄａｎｇｇｕｉｓｈａｏｙａｏ　ｃａｐｓｕｌｅｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｑｉｏｎｇ１，ＨＥ　Ｙｕａｎ－ｙｕａｎ１，ＬＩ　Ｘｉｎ－ｙｕａｎ１，ＸＵ　Ｓｈｉ－ｑｉ　１，ＴＡＯ　Ｚｈｅｎｇ－ｈｕａｎ２，ＳＯＮＧ　Ｌｉ－ｈｕｉ　２，
ＸＩＯＮＧ　Ｆｕ－ｌｉａｎｇ１（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｗｕｈａｎ　４３００７０，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｈｕｂｅｉ　Ｈｕｑｕａｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｗｕｈａｎ　４３００００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｆ　Ｄａｎｇｇｕｉｓｈａｏｙａｏ　ｃａｐｓｕｌｅｓ（Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐａｅｏｎｉａ　ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ，Ａｔ－
ｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｍａｃｒｏｃｅｐｈ，Ｐｏｒｉａ，Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ　Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ，Ａｌｉｓｍａ　ｐｌａｎｔａｇｏ－ａｑｕａｔｉｃａ）．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐａｅｏｎｉａ　ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ，
Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ　ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｅ，Ａｌｉｓｍａｐｌａｎｔａｇｏ－ａｑｕａｔｉｃａ　Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ　Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ，ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＴＬＣ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｉｎ
Ｄａｎｇｇｕｉｓｈａｏｙａｏ　Ｃａｐｓｕｌｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｕｓｉｎｇ　ａ　Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ｍｍ×
４．６　ｍｍ，５μｍ）ａｎｄ　ａ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２３０　ｎｍ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｋｅｐｔ　ｔｏ　１．０ｍｌ·ｍｉｎ
－１．
ＲＥＳＵＬＴＳ　ＴＬＣ　ｓｐｏｔｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｗｅｒｅ　ｆａｉｒｌｙ　ｃｌｅａｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｎｏ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．２０８－１．８７２μｇ（ｒ＝０．９９９　９５）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｗａｓ　９８．４５％，ＲＳＤ％＝０．７５％ （ｎ＝６）．ＣＯＮＣＬＵ－
ＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｐｓｕｌｅｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｄａｎｇｇｕｉｓｈａｏｙａｏ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ；ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ；ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ
　　当归芍药胶囊是由当归、白芍、茯苓、白术、泽
泻、川芎等药制成的中药口服制剂，处方来源于《金
匮要略》，具有养血疏肝，健脾利湿，活血调经功效，
用于血虚、肝郁、脾虚型的原发性痛经等病症，临床
应用已有多年，是湖北虎泉药业有限公司的独家品
种。为有效地控制该制剂质量，本实验对其质量标
准进行了研究，采用高效液相色谱法对芍药苷进行
了含量测定，薄层色谱法对当归、白芍、白术、泽泻和
川芎进行了鉴别。
１　材料
日本岛津公司Ｓｃｈｉｍａｄｕ　１０Ａ型高效液相色谱
仪。芍药苷对照品（批号１１０７３６－２００９３３），当归对
照药材（批号１２０９２７－２００６１３），白芍对照药材（批号
１２０９０５－２０１１０９），白 术 对 照 药 材 （批 号 １２０９２５－
２００７０８），泽泻对照药材（批号１２０９８３－２００５０３），川
芎对照药材（批号１１０７３６－２００４２４）均购自中国食品
药品检定研究院。当归芍药胶囊样品（湖北虎泉药
业有限公司，批号２０１１０７０１，２０１１０６０１，２０１１０６０２，
２０１１０６０３）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均
为分析纯。
２　方法与结果
２．１　薄层鉴别
２．１．１　当归　取内容物５　ｇ，加１％碳酸氢钠溶液
５０　ｍｌ，超声处理３０　ｍｉｎ，离心，取上清液用稀盐酸调
节ｐＨ至２～３，用２０　ｍｌ乙醚振摇提取，将乙醚液挥
干，残渣加甲醇１　ｍｌ使溶解，作为供试品溶液。另
取当归对照药材１　ｇ，同法制成对照药材溶液。按供
试品溶液制备方法制备缺当归的阴性样品溶液。照
薄层色谱法（中国药典２０１０年版一部附录ⅥＢ）试
验，吸取上述３种溶液各１０μｌ，分别点于同一以羧
甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以环己
烷－二氯甲烷－醋酸乙酯－甲酸（４∶１∶１∶０．１）为展开剂，
·６５３１· 中国医院药学杂志２０１４年８月第３４卷第１６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１６
展开，取出，晾干。置紫外光灯（３６５　ｎｍ）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显
相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
２．１．２　白芍　取内容物３　ｇ，加乙醇１０　ｍｌ，超声处
理３０　ｍｉｎ，滤过，滤液蒸干，残渣加１　ｍｌ乙醇使溶
解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材１　ｇ，同法
制成对照药材溶液。按供试品溶液制备方法制备缺
白芍的阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典
２０１０年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上述３种溶液各
１０μｌ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的
硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（４０∶
５∶１０∶０．１）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以５％香
草醛硫酸溶液，在１０５℃烘至显色清晰。供试品色
谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色
的荧光斑点，阴性对照无干扰。
２．１．３　白术　取内容物３　ｇ，用２０　ｍｌ水溶解后，取
醋酸乙酯２０　ｍｌ振摇萃取，取上层液，将其挥干后，
加２　ｍｌ氯仿使残渣溶解，作为供试品溶液。另取白
术对照药材１　ｇ，同法制成对照药材溶液。按供试品
溶液制备方法制备缺白术的阴性样品溶液。照薄层
色谱法（中国药典２０１０年版一部附录ⅥＢ）试验，吸
取上述３种溶液各１０μｌ，分别点于同一以羧甲基纤
维素钠为黏合剂的硅胶 ＧＦ２５４薄层板上，以环己
烷－甲苯－醋酸乙酯（１４∶３∶３）为展开剂，展开，取出，
晾干。置紫外光灯（３６５　ｎｍ）下检视。供试品色谱
中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的
荧光斑点，阴性对照无干扰。
２．１．４　川芎　取内容物３　ｇ，用２０　ｍｌ水溶解后，取
乙醚２０　ｍｌ振摇萃取，乙醚液挥干后，加１　ｍｌ甲醇使
残渣溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材１　ｇ，
同法制成对照药材溶液。按供试品溶液制备方法制
备缺川芎的阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典
２０１０年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上述３种溶液各
１０μｌ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅
胶Ｇ薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯（７∶３）为展开剂，
展开，取出，晾干。置紫外光灯（３６５　ｎｍ）下检视。供
试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相
同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
２．１．５　泽泻　取内容物３　ｇ，用２０　ｍｌ水溶解后，取
醋酸乙酯２０　ｍｌ振摇萃取，醋酸乙酯液挥干后，加１
ｍｌ甲醇使残渣溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对
照药材１　ｇ，同法制成对照药材溶液。按供试品溶液
制备方法制备缺泽泻的阴性样品溶液。照薄层色谱
法（中国药典２０１０年版一部附录ⅥＢ）试验，吸取上
述３种溶液各１０μｌ，分别点于同一以羧甲基纤维素
钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以苯－丙酮（５∶１）为
展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯（３６５　ｎｍ）下检
视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置
上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
图１　Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ分别为当归、白芍、白术、川芎、泽泻的薄层色谱
１－阴性对照；２－对照药材；３，４，５－供试品
Ｆｉｇ　１　Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ＴＬＣ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐａｅｏｎｉａｅ
Ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ，Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ，Ｌｉｇｕｓｔｉｕｍ　Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ，Ａｌ－
ｉｓｍａｔｉｓ　ｐｔａｎｔａｇｏ－ａｑｕａｔｉｃａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
１－ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ；２－ｃｏｎｔｒｏｌ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ；３，４，５－ｓａｍｐｌｅｓ
２．２　含量测定
２．２．１　色谱条件　色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８柱（２００
ｍｍ×４．６　ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－磷酸二氢钾溶
液（取磷酸二氢钾２．０４５　ｇ，加水３００　ｍｌ使溶解，用
磷酸调节ｐＨ至３．５）（１６∶８４）；检测波长：２３０　ｎｍ；流
速：１．０ｍｌ·ｍｉｎ－１；进样量：２０μｌ。
２．２．２　溶液的制备　（１）对照品溶液：精密称取在
６０℃减压干燥４　ｈ的芍药苷对照品适量，加甲醇制
成每１　ｍｌ含芍药苷５２μｇ的溶液，摇匀，即得。（２）
供成品溶液：取本品内容物约０．２　ｇ，精密称定，置
５０　ｍｌ具塞三角瓶中，精密加入甲醇２５　ｍｌ，精密称
定，超声处理３０　ｍｉｎ，放冷，称重，用甲醇补足减失
的质量，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液用０．４５μｍ
微孔滤膜滤过，即得。
２．２．３　专属性实验　按制备工艺制得白芍的阴性
样品，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶
液，按色谱条件检测。结果阴性无干扰。见图２。
２．２．４　线性关系考察　精密称取芍药苷标准品
１０．４　ｍｇ，置１００　ｍｌ量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇
匀，分别精密吸取上述溶液各１，３，５，７，９　ｍｌ置１０
ｍｌ量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按上述色谱
·７５３１·中国医院药学杂志２０１４年８月第３４卷第１６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１６
条件测定，以峰积分面积（Ｙ，ｍＶ）对进样量（Ｘ，μｇ）
进行线性回归，得回归方程为：Ｙ＝１５７．４　Ｘ＋
２　４３７．４，ｒ＝０．９９９　９５。结果表明，芍药苷进样量在
０．２０８～１．８７２μｇ的范围内线性关系良好。
图２　高效液相色谱图
Ａ．阴性样品；Ｂ．芍药苷对照品；Ｃ．当归芍药胶囊样品
Ｆｉｇ　２　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
Ａ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｓａｍｐｌｅｓ；Ｂ．ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ；Ｃ．ｔｈｅ
ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｄａｎｇｇｕｉｓｈａｏｙａｏ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ
２．２．５　精密度试验　取样品（批号２０１１０１０１），按
拟定的含量测定方法操作，计算，ＲＳＤ为０．４１％，结
果表明方法精密度良好。
２．２．６　稳定性试验　取供试品（批号２０１１０１０１）溶
液室温保存，分别在２，４，６，８，１２，２４　ｈ测定峰面积
（ｎ＝３），ＲＳＤ为０．１５％。结果表明：样品溶液在２４
ｈ内保持稳定。
２．２．７　 重 复 性 试 验 　 取 同 一 批 样 品 （批 号
２０１１０１０１）６份，按样品溶液制备方法制备，测定峰
面积，ＲＳＤ为０．６９％，结果表明方法重复性良好。
２．２．８　加样回收率试验　精密称取已知含量
（７．２１３　ｍｇ·ｇ－１）的 同 一 批 号 的 样 品 （批 号
２０１１０１０１）０．１　ｇ，共６份，再分别精密加入０．０２８
ｍｇ·ｍｌ－１的芍药苷对照品２５　ｍｌ，按供试品溶液的制
备方法配制供试液，精密量取该溶液２０μｌ，按上述
色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，并按外标法
以面积计算，结果见表 １，结果平均回收率为
９８．４５％，ＲＳＤ为０．７５％。
２．２．９　样品测定　取供试品０．５　ｇ（每批平行操作２
份），制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计
算，即得。结果样品２０１１０６０１，２０１１０６０２，２０１１０６０３
中芍药苷含量分别为７．２２９，７．４２７，７．３３４　ｍｇ·ｇ－１。
３　讨论
本实验建立的薄层色谱方法专属性强，重复性
好，灵敏度高，可作为该制剂的定性依据。鉴别方法
表１　芍药苷回收率试验结果
Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｌｔ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ
项目 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６
称样量／ｇ　 ０．１０４　４　 ０．１０２　６　 ０．１０４　７　 ０．１０８　５　 ０．１００　７　 ０．１０６　９
已知量／ｍｇ　 ０．７５３　０　 ０．７４０　１　 ０．７５５　２　 ０．７８２　６　 ０．７２６　３　 ０．７７１　１
加入量／ｍｇ　 ０．７　 ０．７　 ０．７　 ０．７　 ０．７　 ０．７
测得量／ｍｇ　 １．４４８　６　 １．４３２　４　 １．４４４　９　 １．４６３　８　 １．４１７　２　 １．４５６　５
回收率／％ ９９．３７　 ９８．９０　 ９８．５３　 ９７．３１　 ９８．７０　 ９７．９１
平均值／％ ９８．４５
ＲＳＤ／％ ０．７５
在参照中国药典的基础上，做了相应的调整，使其背
景干扰较小。
在含量测定中，分别对供试品制备中的提取溶
媒、提取方法和提取时间进行了考察。提取溶媒考
察中，分别采用甲醇、乙醇、７０％乙醇提取，结果表明
采用甲醇提取效果好。提取方法考察中分别采用了
超声、回流和冷浸提取，结果以超声、回流提取较好，
因超声提取简便，故采用超声的提取方法。提取时
间考察中，分别考察了提取２０，３０，４０　ｍｉｎ对芍药苷
含量的影响，结果提取３０　ｍｉｎ即可。含量测定时，
曾选用流动相乙腈－０．１％磷酸溶液等，发现在上述
流动相系统下芍药苷的峰与其他峰不能完全分开，
改变流动相比例后，仍达不到满意效果。经过多次
试验，改用乙腈－磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾
２．０４５　ｇ，加水３００　ｍｌ使溶解，用磷酸调节ｐＨ 至
３．５）（１６∶８４）作为流动相，峰形最好，分离效果理想，
出峰时间适当。
方法学考察结果表明，所建立的质量标准方法
可靠，操作简便，重复性良好，可用于该制剂的质量
控制。
参考文献：
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内酯的含量［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８（８）：２４－２６．
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［Ｊ］．中国中药杂志，２００１，２６（９）：６０２－６０５．
［收稿日期］２０１３－１２－０６
·８５３１· 中国医院药学杂志２０１４年８月第３４卷第１６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１６