全 文 :金山、金焰绣线菊组织培养技术体系的建立1)
杜明广1,孙海滨2*
(1.黑龙江省林业科学院江山娇实验林场,黑龙江 宁安 157432;
2.黑龙江省林业科学院,哈尔滨 150081)
摘 要:以金山绣线菊和金焰绣线菊为试验材料,利用组织培养技术,通过对影响金山、金焰绣线菊
诱导分化、继代增殖和生根的多种因素进行筛选,建立稳定的组织培养繁育技术体系。
关键词:金山绣线菊;金焰绣线菊;组织培养;技术;体系
金山绣线菊(Spiraea×bumalda ‘Goalden
Mound’)落叶小灌木,高达30~60cm,冠幅可达60
~90cm。老枝褐色,新枝黄色,枝条呈折线状,不通
直,柔软。花期长,彩叶期5个月。喜光,稍耐阴,极
耐寒,耐旱,易成型。
金焰绣线菊(Spiraea×bumalda cv.coldfi-
ame),落叶灌木。株高0.4~0.6m,冠幅0.7~0.8
m。新梢顶端幼叶红色,下部叶片黄绿色,花期长达
4个月。喜光照及温暖湿润的气候,耐寒,耐修剪,
可作地被。
金焰绣线菊叶色有丰富的季相变化,橙红色新
叶,黄色叶片和冬季红叶颇具感染力。花期长,花量
多,是花叶俱佳的新优小灌木。可单株修剪成球型,
或群植作色块,或作花镜、花坛植物。植株大小控制
在30cm左右。一片橙红色新叶,似朵朵红花开放,
园林景观观赏效果很好。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料采集
试材采自黑龙江省森林植物园珍贵树种园,母
株选取生长无病虫害、冠型饱满、健壮、生长状况基
本一致的绣线菊。外植体选取金山绣线菊、金焰绣
线菊的幼嫩茎段为试验材材。
1.2 实验设计与试验方法
外植体的处理选取健壮植株的幼嫩茎段,将叶
子除去,在清水下冲洗2h左右。在超净工作台内进
行材料灭菌消毒。首先用70%酒精浸30s,之后采
用0.1% HgCl2 进行7min消毒处理,然后用无菌水
冲洗3次。将灭菌的金山、金焰绣线菊嫩枝放在无
菌纸上,用无菌刀将其切成2.0cm左右的带2~3
个腋芽的茎段,接种于初代培养基上,实验采用正交
实验设计。
2
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结果与分析
是701号,是最小家系706号2.1倍。目前看701
号家系排在第一位,为最优家系。
3.3 遗传力与遗传增益估算
3.3.1 遗传力估算
根据表2中的方差分量,通过遗传力模型计算得出:
产量h2=(3327.711-1086.546)/3327.711=0.67。
3.3.2 遗传增益估算
若从8个家系中选出最好的1个家系,入选率
p:1/8=0.125;查表选择强度i:1.42;平均值:
55.29;根据表 2 中的方差分量计算标准差 σ:
12.89。代入遗传增益计算公式,计算结果:产量=
0.67×12.89×1.42/55.29=0.22。
4 结论与讨论
4.1 五味子优树3年生子代测定结果表明,各家系
的产量之间差异极显著,说明根据表型选择得到的
优树,其后代仍分化明显,因此,用其子代建园遗传
测定是十分重要的。
4.2 在庞大的野生五味子群体中,种子资源遗传变
异丰富。本试验最大的家系是701号,是最小家系
706号2.1倍,遗传增益22%,表明家系间选择有明
显效果。家系选择在选择育种具有重要地位。在初
步测定结果基础上,进一步连续几年观测研究选择
优良家系用于生产定能取得更大效益。
4.3 定评比是一项需要几年完成的工作,按常规要
求需要达到结实盛期,其原因是多年生结实的树木
仅用结实初期的材料测定很难定论,选择的优良家
系可为今后测定提供参考。
参 考 文 献
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作者简介:李孟菊(1974-),女,汉族,营林工程师,会计
电算化专业;E-mail:pengziyang168@163.com。
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第4期(总第131期) 中 国 林 副 特 产 No.4(GSNO.131)
2014年8月 Forest By-Product and Speciality in China Aug.2014
DOI:10.13268/j.cnki.fbsic.2014.04.023
2.1 初代培养基选择
以 MS和 WPM为初代基本培养基。在 MS培
养基中共设置5组进行对比,分别为6-BA1.0mg/
L+NAA0.1mg/L;6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/
L;6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;6-BA2.0mg/L
+NAA0.15mg/L;6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/
L;在 WPM培养基中只设置一种培养,以6-BA 2.0
mg/L+NAA0.1mg/L进行初代培养。每种培养基
设置5个重复,每个培养基内接种2~3个外植体,
30d后进行统计见表1。
表1 初代培养基筛选
序号 培养基 6-BA/(mg·L-1)
NAA/
(mg·L-1)
芽萌动状况
1 MS 1.0 0.1 1个有萌动现象
2 MS 1.5 0.1 1个有萌动现象
3 MS 2.0 0.1 2
个有萌动现象并有展
叶的趋向
4 MS 2.0 0.15 1个有萌动现象
5 MS 2.0 0.2 1个有萌动现象
6 WPM 2.0 0.1 4个有萌动现象并展叶
在初代培养基上进行带芽茎段的诱导培养,30d
后观测结果见表1。从表1中可以看出,6号培养基
WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L对金山、金焰
绣线菊嫩茎的组织培养有良好的效果,所用时间最少
且效果最佳。1号、2号、3号、4号、5号培养基对金山
绣线菊、金焰绣线菊嫩茎的组织培养有一定的促进作
用,其中3号培养基的促进效果稍微明显,并有展叶
的趋向,表明在以 MS为基本培养基,在6-BA浓度一
定的情况下,NAA的浓度以0.1mg/L为最佳;另外1
号培养基中的外植体萌动最晚,组培苗长势最差,表
明在以 MS为基本培养基,NAA浓度一定的情况下,
6-BA的浓度以1.0mg/L为最差。
由此可见,以 WPM为基本培养基,芽的诱导和
分化情况远远好于以 MS作为基本培养基,这表明
WPM培养基比 MS培养基培养效果好。WPM 培
养基在接种4d后达到萌动并展叶,大大提高了培养
的速率,是金山、金焰绣线菊最适的初代培养基。
2.2 继代增殖培养基选择
金山、金焰绣线菊以 WPM 为继代增殖培养的
基本培养基,附加不同浓度的激素后,设计出以下培
养基:6-BA0.25mg/L+NAA0.1mg/L,培养基6-
BA0.5mg/L+ NAA0.1mg/L 和 培 养 基 6-BA
1.0mg/L+NAA0.1mg/L。在上述3种培养基中
筛选增殖培养基,添加2%蔗糖,每种培养基设置4
个重复,接种30d后分别进行统计结果。
将2~3cm长的无菌苗从茎段上切下,再分别将
其切成1~2cm的带1~2个腋芽的茎段,转入继代增
殖培养基中进行培养,30d后统计结果见表2。从表2
可以看出,1号培养基几乎没有增殖迹象表现,2、3号
培养基表现出增殖迹象,并在3号培养基上绣线菊长
势最好,2号培养基虽然长势良好,但有些只能形成
愈伤组织并不生长,不能达到增殖的目的。分析比较
得出,3号培养WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/
L为金山、金焰绣线菊的最适增殖培养基。
表2 增殖培养基筛选
序号 基本培养基 6-BA/(mg·L-1)
NAA/
(mg·L-1)
增殖状况
1 WPM 0.25 0.1
有愈伤,刚萌动,
株高1.6cm
2 WPM 0.5 0.1 株高2.5cm,有愈伤
3 WPM 1.0 0.1 株高3.5,无愈伤
2.3 壮苗与生根
以 WPM为基本培养基,配方采用不同的激素
配比 (IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L)培 养 基、
(IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L)培养 基、(IBA
0.3mg/L+NAA1.0mg/L)培养基。在3种培养基
中进行壮苗生根培养,每种培养基设置4个重复,接
种12d后统计生根情况,对生根的长度、生的条数以
及培养苗的高度进行统计。
表3 生根培养基筛选
培养基 株高/cm 生根数/条 根生长状况
根平均长
/cm
WPM+IBA0.3mg/L
+NAA0.2mg/L 4.6
长势旺盛 ≥10
根多有分枝,
初为白色 1.5
WPM+IBA0.3mg/L
+NAA0.5mg/L 2.5
长势较好 6 根多分叉
,顶端
有黄褐色突起 0.8
WPM+IBA0.3mg/L
+NAA01.0mg/L 1.5
长势弱 4 根为白色 0.8
将生长健壮、高2~3cm的无根苗转入生根培
养基中,培养12d后调查统计试验结果。从表3可
以看出,3种培养基培育12d后茎均有生长,且3种
培养基中外植体均能生根,经观察比较,其中培养基
WPM+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L在壮苗的同
时可以达到较好的生根效果。
3 结论
3.1 选择健壮的母树,以带腋芽的茎段为外植体,
建立无菌苗繁育体系。
3.2 以 WPM为基本培养基,增殖培养基为 WPM
+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+2%蔗糖。
3.3 生根培养 WPM+IBA0.3mg/L+NAA
0.2mg/L。
参 考 文 献
[1] 李浚明.植物组织培养教程[M].北京:中国农业大学
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作者简介:杜明广(1972-),男,林学专业,工程师,现从
事营林工作。*通讯作者:孙海滨,E-mail:lijing0426@163.
com。
1)资助项目:小兴安岭地区重点公益林健康评价指标体
系研究(sgzjQ2011002)
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2014年 中 国 林 副 特 产 第4期