全 文 ：Isolation and Identification of Chemical Constituents from the Fruits of Acanthopanax Sessiliflorus
MENG Yong － hai，WANG Xin － wei，WU Gao － song，GUO Jiang － tao，JIANG Hai，ZHAI Chun － mei，
YANG Chun － juan，SONG Yang，WANG Zhi － bin
(Key Laboratory of Chinese Materia Medica (Ministry of Education) ，Heilongjiang Key Laboratory of
TCM Pharmacidynamic Material Bases，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin，150040，China)
Abstract:Objective:To study the chemical constituents of the extracts from Acanthopanax sessiliflorus fruits． Methods:
Column chromatography and liquid chromatography were carried out on the effective parts of chemical separation． Deter-
mine their structures based on 1H － NMＲ，13 C － NMＲ，1 H － 1 H COSY，HSQC and HMBC spectroscopy methods com-
bined with ESI － MS mass spectrometry． Ｒesults:The effective parts from MP were isolated and identified as 9 com-
pounds，respectively，perlolyrine (1) ，3 － carbox perlolyrine (2) ，5 － hydroxy － 2 － oxoindolin － 3 － acetic acid methyl
ester (3) ，nicotinamide (4) ，methyl pyroglutamate (5) ，hydroxyl phenylethanol (6) ，2 －(4 － hydroxyphenyl)pro-
pane 1，3 － diol － 1 － O － β － D － glucopyranoside (7) ，erytho － guaiacylglycerol 8 － O － β － glucopyranside (8) ，leu-
cine (9)． Conclusion:Compounds 2，3，5 ～ 8 are firstly isolated from Genus Acanthopanax．
Key words:Acanthopanax sessiliflorus fruits;Isolation;Identification;
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
Chemical constituents
HPLC法同时测定尖叶假龙胆中
三种山酮类化合物的含量
高彦宇，张雪，谢建先，李永鑫，胡晓阳，马育轩，李冀*
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:利用高效液相色谱法同时测定尖叶假龙胆中当药醇苷、雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆
酮的含量。方法:取尖叶假龙胆粗粉 0． 5 g，用甲醇 25 mL超声震荡提取 30 min，制成供试品溶液。色谱
条件:Waters Symmetry C18色谱柱(4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相:甲醇 － 磷酸水(pH2． 6) ;柱温
35 ℃;流速 1 mL /min;进样量:10 μL;梯度洗脱 45 min。结果:尖叶假龙胆中当药醇苷、去甲基雏菊叶龙
胆酮、雏菊叶龙胆酮分别在 13． 6 ～ 122． 4 μg /mL，10 ～ 90 μg /mL，10． 8 ～ 97． 2 μg /mL的范围内线性关系
良好(r值分别为 0． 997 4，0． 996 7，0． 998 0) ;当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮平均回收
率(n = 6)分别为 99． 97%，102． 02%，98%。结论:尖叶假龙胆中当药醇苷，去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊
叶龙胆酮的含量分别为 23． 94 mg /g，4． 49 mg /g，7． 92 mg /g。
关键词:尖叶假龙胆;雏菊叶龙胆酮;去甲基雏菊叶龙胆酮;当药醇苷;稳心草
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2016)02 － 0016 － 03
收稿日期:2015 － 09 － 02 修回日期:2015 － 10 － 20
基金项目:国家自然科学基金项目(12511516，81202638) ;黑龙江省自
然科学基金(H2015021)
作者简介:高彦宇(1963 －) ，男，博士，副教授，硕士研究生导师，研究方
向:药效物质基础。
* 通讯作者:李冀(1960 －) ，男，教授，博士研究生导师，研究方向:方剂
配伍研究。
尖叶假龙胆系龙胆科假龙胆属尖叶假龙胆(Gen-
tianella acuta (Michx．)Hulten)的干燥全草。蒙药名
为阿古特 －其其格。部分地区称之为“稳心草”。全
草主治黄疸型肝炎、胆囊炎、心绞痛、发热及外伤感
染［1 － 2］。分布于兴安南北，岭西，阴山，贺兰山等，生于
山地林下，灌丛及低湿草甸［3］。研究发现，山酮类化
合物具有抗肿瘤、抗菌、抗疟、治疗心血管疾病等药理
作用［4 － 5］。尖叶假龙胆中含有丰富的山酮类化合物。
本文主要利用高效液相色谱仪，同时测定尖叶假龙胆
中当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮的含
量，为之后制定药材标准与药理实验提供实验依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
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中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
2016 年 4 月第 44 卷第 2 期
Vol. 44，No. 2，Apr． 2016
Waters e2695 高效液相色谱仪;Waters 2998 检测
器;Waters Symmetry C18色谱柱(4． 6 mm × 150 mm，
5 μm) ;KQ －800KDE型超声波清洗器;分析天平。
1． 2 材料
尖叶假龙胆，购于内蒙古根河市，经黑龙江中医药
大学药用植物教研室樊锐峰老师鉴定为龙胆科尖叶假
龙胆 Gentianella acuta (Michx．)Hulten 的全草。去甲
基雏菊叶龙胆酮，上海维塔化学试剂有限公司，批号:
2980 － 32 － 7。雏菊叶龙胆酮，上海市维塔化学试剂有
限公司，批号:2798 － 25 － 6。当药醇苷，Huich Bio －
tech inc，批号 23445 － 00 － 3。标准品经 HPLC 检测纯
度均≥98%。甲醇，色谱级(美国 Dikama试剂公司)。
2 实验方法及结果
2． 1 标准品溶液的制备
取当药醇苷 3． 4 mg、去甲基雏菊叶龙胆酮 2． 5
mg、雏菊叶龙胆酮 2． 7 mg，用甲醇定容至 25 mL，制成
标准品混合溶液。
2． 2 供试品溶液的制备
取尖叶假龙胆粗粉(20 目)0． 5 g，加入甲醇 25
mL，超声震荡 30 min。用甲醇补足失去重量，取上清
液 6000 rpm，离心 5 min。取离心后供试溶液 2 mL，置
于 10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线。
2． 3 色谱条件
采用 Waters Symmetry C18色谱柱(4． 6 mm × 150
mm，5 μm)。柱温:35 ℃;流速 1 mL /min;检测波长:
252 nm;流动相为磷酸水(pH2． 6)－甲醇，梯度洗脱，
见表 1;进样量:10 μL。运行时间:45 min。
表 1 梯度洗脱表
时间(min) 流量(mL /min) 甲醇(%) 磷酸水(%) (pH2． 6)
0． 00 1． 00 25． 00 75． 00
5． 00 1． 00 30． 00 70． 00
15． 00 1． 00 40． 00 60． 00
35． 00 1． 00 75． 00 25． 00
45． 00 1． 00 75． 00 25． 00
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 标准曲线及线性范围
取 2． 1 中混合标准溶液浓度为 1． 1 mg /mL，1 mg /
mL，1 mg /mL的当药醇苷，去甲基雏菊叶龙胆酮，雏菊
叶龙胆酮混合标准溶液 1 mL，3 mL，5 mL，7 mL，9 mL
甲醇定容于 10 mL 容量瓶中。以浓度(X，μg /mL)为
横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线。当药醇
苷线性回归方程:Y =29 873X +79 574，r = 0． 997 4，线
性范围为 13． 6 ～ 122． 4 μg /mL。去甲基雏菊叶龙胆酮
线性回归方程:Y =41 128X +99 187，r = 0． 996 7，线性
范围为 10 ～ 90 μg /mL。雏菊叶龙胆酮线性回归方程:
Y =34 122X +98 173，r = 0． 998 0，线性范围为 10． 8 ～
97． 2 μg /mL。
2． 4． 2 精密度试验
按 2． 2 项制备样品，按照 2． 3 项下的色谱条件重
复进样 6 次，其中当药醇苷峰面积 ＲSD值为 1． 1%，去
甲基雏菊叶龙胆酮峰面积 ＲSD值为 0． 06%，雏菊叶龙
胆酮峰面积 ＲSD值为 0． 04%，数据均显示仪器精密度
良好。
2． 4． 3 重复性试验
取 5 批样品，按 2． 1 制成供试品溶液，记录当药醇
苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮的峰面积，计
算 ＲSD值。其中当药醇苷 ＲSD值为 3%，雏菊叶龙胆
酮 ＲSD值为 5%，去甲基雏菊叶龙胆酮 ＲSD值为 1%，
ＲSD值均小于 5%，样品重现性较好。
2． 4． 4 样品稳定性
每隔 4 h进样 1 次，样品在 36 h内成分稳定。
2． 4． 5 加样回收率
取尖叶假龙胆 6 份，每份 0． 05 g，平均分成 3 份，
按样品中含量一半的 80%、100%、120%加入浓度为
1． 1 mg /mL，1 mg /mL，1 mg /mL的当药醇苷，去甲基雏
菊叶龙胆酮，雏菊叶龙胆酮混合标准溶液，定容至 10
mL容量瓶中。2． 3 项色谱条件下，每个浓度样品做 2
个平行，进样 10 μL，记录各个标准品的峰面积。结果
见表 3。
2． 5 含量测定
取 5 批尖叶假龙胆粗粉 0． 5 g 按 2． 2 项下方法制
备成供试液，过 0． 45 μm 有机滤膜后，进样 10 μL，在
2． 3 项下的色谱条件，记录峰面积，代入回归方程中，计
算出各个标准品的浓度。含量% =浓度 ×稀释倍数 ×
体积 /样品量 × 100%。结果如表 2。色谱图见图 1。
表 2 尖叶假龙胆中当药醇苷、去甲基雏菊
叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮含量
当药醇苷 去甲基雏菊叶龙胆酮 雏菊叶龙胆酮
浓度
μg /mL
含量
mg /g
浓度
μg /mL
含量
mg /g
浓度
μg /mL
含量
mg /g
样品 1 95． 5 23． 88 17． 21 4． 30 34． 4 8． 60
样品 2 91． 2 22． 80 16． 93 4． 23 29． 99 7． 50
样品 3 98． 9 24． 73 17． 05 4． 26 32． 07 8． 02
样品 4 99． 3 23． 45 17． 11 4． 28 32． 18 8． 05
样品 5 93． 8 24． 83 21． 42 5． 36 29． 83 7． 46
均值 95． 74 23． 94 17． 95 4． 49 31． 69 7． 92
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图 1 对照品(A)和样品(B)色谱图
表 3 尖叶假龙胆加样回收率试验
标准品 序号
样品量
g
含量
mg
加入量
mg
测得值
mg
回收
率%
平均回
收率%
ＲSD
%
1 0． 05 1． 197 0． 48 1． 053 95． 74 99． 97 2． 58
2 0． 05 1． 197 0． 48 1． 092 102． 26
当药醇苷 3 0． 05 1． 197 0． 6 1． 193 99． 08
4 0． 05 1． 197 0． 6 1． 213 102． 42
5 0． 05 1． 197 0． 72 1． 327 101． 42
6 0． 05 1． 197 0． 72 1． 312 98． 91
1 0． 05 0． 198 0． 16 0． 261 102． 02 102． 02 2． 31
2 0． 05 0． 198 0． 16 0． 257 97． 98
雏菊叶
龙胆酮
3 0． 05 0． 198 0． 2 0． 296 96． 97
4 0． 05 0． 198 0． 2 0． 298 98． 99
5 0． 05 0． 198 0． 24 0． 342 103． 03
6 0． 05 0． 198 0． 24 0． 338 98． 99
1 0． 05 0． 11225 0． 09 0． 145 98． 00 98． 00 2． 91
2 0． 05 0． 112 25 0． 09 0． 147 101． 56
去甲基雏
菊叶龙胆酮
3 0． 05 0． 112 25 0． 11 0． 167 101． 56
4 0． 05 0． 112 25 0． 11 0． 166 99． 78
5 0． 05 0． 112 25 0． 13 0． 183 94． 43
6 0． 05 0． 112 25 0． 13 0． 187 101． 56
3 讨论
3． 1 流动相的选择
本文考察了不同的流动相:甲醇 －水，甲醇 －磷酸
水，乙腈 －水，乙腈 －磷酸水，实验过程中发现甲醇的
分离效果要好于乙腈，而 pH2． 6 的磷酸水能明显改善
峰形。
3． 2 吸收波长与柱温的选择
应用 Empower PDA 软件，分析尖叶假龙胆的 3D
谱图，发现当药醇苷，去甲基雏菊叶龙胆酮，雏菊叶龙
胆酮分别在 252． 2 nm，252． 2 nm，253． 4 nm 处有最大
吸收，所以将吸收波长设定为 252 nm。柱温考察了
30 ℃，35 ℃，40 ℃，结果显示柱温的升高只会缩短各
个成分的保留时间，对峰形影响不大，柱温为 35 ℃时，
出峰时间适中。
4 小结
在实验过程中发现，尖叶假龙胆中含量最高是图
1(B)中的峰 1，通过 PDA 分析 3D 谱图发现其在
249． 8 nm处有最大吸收，但利用现有的标准品无法将
其定性，查阅现有资料［6］发现其很有可能属于山酮类
化合物。后期实验，我们将对峰 1 进行鉴定与含量测
定研究。山酮类化合物具有广泛的药理活性，尤其在
抗癌与心血管方面作用明显。而尖叶假龙胆中山酮类
化合物成分含量相对较高，所以有必要对尖叶假龙胆
中此类成分，建立稳定高效的含量测定方法的研究。
参考文献:
［1］ 内蒙古植物药志编委会．内蒙古植物药志(第二卷) ［M］．呼和浩
特:内蒙古人民出版社，1993:354 － 373，377 － 379．
［2］ 吴琼，王知斌，于莹，等．尖叶假龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷的含
量测定［J］．中医药信息，2015，32(2) :47 － 49．
［3］ 内蒙古植物志编委会．内蒙古植物志(第四卷) ［M］． 2 版．呼和浩
特:内蒙古人民出版社，1993:80 － 108．
［4］ 李冀，丁莹． 尖叶假龙胆对 MIＲI 大鼠血清中 TXB_2 和 6 －酮 －
PGF1α的影响［J］．中医药信息，2016，33(2) :9 － 11．
［5］ 王丽莉，张铁军，刘黄刚．山酮类化合物的研究进展［J］．中草药，
2010，41(7) :1196 － 1206．
［6］ 王杨，王世盛，周丹红，等．植物山酮类化合物的波谱特征［J］．天
然产物研究与开发，2002，14(5) :85 － 90．
Quantitative Analysis of Three Xanthones in Gentianella Acuta by HPLC
GAO Yan － yu，ZHANG Xue，XIE Jian － xian，LI Yong － xin，HU Xiao － yang，MA Yu － xuan，LI Ji
(Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective:To simultaneously determinate the Swertianolin ，bellifolin，desmethybellidifolin of Gentianella acu-
ta by HPLC． Methods:The analysis was aehieved on an Waters Symmetry C18column(4． 6 mm ×250 mm，5 μm)by using
a mobile phase of MeOH － Water(pH2． 6)gradient elution in a total run time of 45 minutes and the detection wave-
length was set at 252 nm． Ｒesults:Swertianolin，desmethybellidifolin and bellifolin were linear over the range of 13． 6 ～
122． 4 μg /ml，10 ～ 90 μg /ml，10． 8 ～ 97． 2 μg /ml(r was 0． 997 4，0． 996 7，0． 998 0)． The average recoveries (n = 6)
were 99. 97%，102． 02% and 98% ． Conclusion:The contents of swertianolin，desmethybellidifolin and bellifolin in Gen-
tianella acuta were 23． 94 mg /g，4． 49 mg /g and 7． 92 mg /g．
Key words:Gentianella acuta;Swertianolin;Desmethybellidifolin;Bellifolin;Wenxin Cao
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