全 文 ：玄参中环烯醚萜甙和苯丙素甙对 LTB4产生及血小板聚集的影响*
李医明　曾华武Δ　贺　祥▲　姜远英　蒋山好□　朱大元□
摘要　目的:探讨玄参化学成分和药理活性关系。方法: 应用大孔树脂、葡聚糖凝胶和正、反相硅胶等层析方法 ,摸索多种溶
剂系统对玄参中含量高的水溶性成分进行分离 ,应用化学和光谱方法鉴定结构。 观察分离得到的主要单体成分对大鼠腹腔中
性白细胞中花生四烯酸 ( AA )代谢产物白三烯 B4 ( LTB4 )的影响 ,及对阈剂量的二磷酸腺苷 , AA和 20 nmo l /L PAF诱导的血
小板聚集的抑制作用。结果: 共分得 11种玄参水溶性成分 ,发现它们属于环烯醚萜甙和苯丙素甙类型。药理实验中苯丙素
甙 XS-8, XS-10在 0. 5 mmo l /L时对 LTB4产生较强抑制作用 ; 环烯醚萜甙 XS-6, XS-7在相同条件下作用较弱。苯丙素甙和
环烯醚萜甙在 0. 5 mmo l / L时 ,对体外诱导的血小板聚集都有不同程度的作用 ,但苯丙素甙的作用强于环烯醚萜甙。结论:
玄参中的苯丙素甙和环烯醚萜甙成分与玄参的抗炎和抗血小板聚集作用有关。
关键词　玄参 ; 环烯醚萜甙 ; 苯丙素甙 ; 白三烯 B4;血小板聚集
中国图书资料分类法分类号　 R 285
Iridoid and phenylpropanoid glycosides of Scrophularia ningpoensis in-
hibit the formation of LTB4 and platelet aggregation
Li Yiming , Zeng Huawu, He Xiang, Jiang Yuanying , Jiang Shanhao , Zhu Dayuan ( Depart-
ment o f Natural Medical Chemis try, Co llege of Pharmacy, Second Military Medical U niver-
sity , Shanghai, 200433)
ABSTRACT　 Objective: To investig ate the rela tionship betw een constituents and pha rmaco logical ef fects
o f Scrophularia ningpoensis ( XuanSheng ) . Methods: The iso lation and identi fica tion of compounds w ere
done mainly by non-polar macroreticula r resin, sephadex LH-20, ODS, silica gel column chroma tog raphy
and FABM S, NM R etc , spectra. Results: The inhibition of the LTB4 fo rmation in the ra t abdominal neu-
tral leukocy tes by drug s isolated f rom S. ningpoensis were observ ed. The i ridoid g lycosides XS-6, XS-7
show ed w eak action, but the pheny lpropanoid g lyco sides X S-8, X S-10 show ed po tent action a t the concen-
tration o f 0. 5 mmo l /L. In the inhibi tion o f the rabbi t pla telet agg rega tion, iridoid and phenylpropanoid
g lycosides w ere active in inhibiting the rabbi t threshold ADP-induced and AA-induced but no t 20 nmol /L
PAF-induced platelet ag g regation at the concentration of 0. 5 mmol /L in vitro. Conclusion: The pheny l-
propanoid and iridoid g lycosides may be associa ted w ith anti-inf lamma tion and anti-platelet agg regation ef-
fects of S. ningpoensis.
KEY WORDS　 Scrophularia ningpoensis; iridoid g lycoside; phenylpropanoid gly coside; leukot rienes B;
platelet agg rega tion
[ Acad J Sec Mil Med U niv , 1999, 20( 5): 301～ 303 ]

　 玄参是著名的传统中药 , 使用历史悠久 ,常用
于治疗热病烦渴、 发斑、 齿龈炎、 扁桃体炎、 咽喉
炎、痈肿、 急性淋巴结炎、淋巴结结核等。中国药典
1995年版收载了玄参和含玄参现代中成药达 22
种 [1 ]。多篇文献报道了玄参及其复方的抗菌、降压、
降血糖以及对心血管的作用 [2, 3 ]。但由于玄参中成分
的易氧化性 ,造成 了单体成分分离纯化的困难 , 对
玄参中单体成分的药理作用研究未见文献报道。本
研究对玄参的化学成分作了较为系统的分离 ,发现
玄参的主要成分为环烯醚萜甙和苯丙素甙 ,并比较
了玄参中这两类主要成分对大鼠腹腔中性白细胞中
炎性介质白三烯 B4 ( L TB4 )生成的影响及抗血小板
·301·第 二 军 医 大 学 学 报Acad J Sec Mi l Med Univ　 1999 M ay; 20( 5)
国家自然科学基金资助项目 , 批准号 29632050
作者单位　第二军医大学药学院天然药物化学教研室 , 上
海 , 200433;△海军 411医院药物研究中心 ;▲第二军医大学科
学研究处 ;□中科院上海药物研究所
李医明 , 男 , 1966年 1月生 ,博士 ,讲师
聚集作用。
1　材料和方法
1. 1　玄参单体成分的提取与分离　 8 kg 玄参根
( 1995年 10月采自浙江磐安 ,经中科院上海药物研
究所马晓强博士鉴定为 Scrophularia ningpoensis
Hemsl. ) , 粗粉经 95% , 60%乙醇回流提取后 ,合并
提取液 ,减压浓缩 ,浓缩液加水后分别用乙醚及正丁
醇萃取。正丁醇部分 ( 140 g ) 经大孔吸附树脂柱 ,
水 ,以及 20% , 40% , 60% , 80%和 95%乙醇水溶液
洗脱 , 分为 6个部分 ,经 TLC检测 , 水洗脱部分主
要含糖 , 80% , 95% 乙醇洗脱部分物质很少。 20% ,
40% , 60% 乙醇洗脱部分再经硅胶柱层析 (氯仿∶
甲醇∶水= 6∶ 1∶ 0. 1,乙酸乙酯∶甲醇∶水= 9∶
1∶ 0. 1, 二氯甲烷∶丙酮= 3∶ 2系统 ) , Sephadex-
LH20层析柱 (甲醇∶水 = 1∶ 9) , C18反相层析柱
(甲醇∶水= 3∶ 7)分得单体化合物。
1. 2　动物　雄性 SD大鼠 ,体质量 180～ 220 g;健
康成年新西兰兔 ,雌雄不拘 ,体质量 2. 5～ 3. 5 kg ,
由第二军医大学实验动物中心提供。
1. 3　玄参单体成分对 LTB4生成的影响实验　大
鼠腹腔注射 0. 4% 4℃的明胶 4～ 5 ml, 4 h后击头
部处死。用无 Ca2+ , Mg2+ 的 PBS缓冲液冲洗腹腔 ,
洗出液 3 500 r /min离心 15 min,沉淀即中性白细
胞。复用 PBS液悬浮 ,显微镜下计数 ,调整细胞密度
为 1. 0× 107个 /ml。上述中性白细胞悬液 ( 0. 95
m l /管 )中加入不同浓度的玄参单体成分溶液以及
溶剂对照液 ,并以不加溶剂为空白对照。37℃振荡孵
温 10 min。 加入 促进 Ca2+ 进 入细胞 的物质
A23187, Ca
2+ 和 Mg2+ , 使 其 终浓 度 分别 为 2
μmo l /L, 2 mmol /L和 0. 5 mmo l /L,继续孵温 5
min。随后加入 10%甲酸 ,使其 pH为 3. 5,置冰箱中
终止反应。加入 PGB2 50 ng作为内标 ,用 4倍体积
的乙酸乙酯提取 2次 ,等体积水提取杂质 ,收集 2次
提取的有机相 ,用氮气吹干 ,低温冰箱保存待测定中
性白细胞中花生四烯酸 ( AA)代谢产物 LTB4。
采用 Beckman334型 HPLC仪 , C18 Bondapak
层析柱 ( 0. 39 mm× 30 cm ) ,流动相为甲醇∶水∶三
氟乙酸∶三乙胺= 80∶ 20∶ 0. 1∶ 0. 05,流速为 0. 8
m l /min。 UV检测波长为 280 nm。根据 LTB4吸收
峰面积和内标物 PGB2峰面积之比作定量计算。其
中 , LTB4和 PGB2吸收峰位置分别用标准品在相同
条件下先测定 HPLC的保留时间。
1. 4　玄参单体成分对血小板聚集抑制作用 [4 ]　取
成年兔心脏血 18 ml,分别置 2根含 1 m l 3%柠檬酸
三钠的离心管中 , 1 000 r /min离心 3 min,抽取上层
液 ,合并为富含血小板 ( PRP)液 ,继续 3 500 r /min
离心 15 min,吸取上层液为贫含血小板 ( PPP)液。预
热血小板聚集仪 30 min,将 PPP液放入比色皿中 ,
平衡血小板聚集仪。取 PRP液 200μl加入溶剂对照
品或相同体积的样品水溶液 ,浓度为 0. 1, 0. 3, 0. 5,
0. 8 mmo l /L, 37℃温浴搅拌 3 min,分别加入阈
剂量 3～ 9μmol /L二磷酸腺苷 ( ADP) , 0. 1～ 0. 2
mmol /L AA以及 20 nmo l /L血小板活化因子
( PAF) ,观察样品抑制血小板聚集活性。
2　结　果
2. 1　化合物的结构鉴定　通过各种层析方法共分
得 11种玄参主要水溶性成分 ,运用 IR, FABM S,
1H-NMR, 13 C-NM R, 1H-1 HCOSY, HMBC, HMQC,
CD等多种光谱学方法鉴定了它们的结构 ,分别为
6-O-β -D-吡喃半乳糖基哈帕酯甙 ( XS-1) , 8-O-阿魏
酰基哈帕甙 ( X S-2) , 8-O-( 2-羟基肉桂酰基 )哈帕甙
( XS-3) , 6-O-反式肉桂酰基 -1-O-α-D-呋喃果糖基-
β-D-吡喃葡萄糖 (X S-4) , 4-O-咖啡酰基-3-O-α-L-吡
喃鼠李糖基-D-吡喃葡萄糖 ( XS-5) ,哈帕酯甙 ( XS-
6) ,哈帕甙 ( XS-7) , ang ro side C( XS-8) , cistanoside
D ( X S-9) , acteoside ( XS-10) , decaffeo ylacteoside
( XS-11)。其中 ,化合物 XS-1, X S-2, XS-3, XS-6和
XS-7为环烯醚萜甙 ;化合物 XS-4, XS-5, X S-8,
XS-9, XS-10和 XS-11为苯丙素甙。此结果说明玄
参中水溶性成分以此两类为主 ,含量以 XS-6和 XS-
8最高 ,分别为 0. 37% , 0. 21% 。其他成分除化合物
XS-1,X S-2和 XS-3外 ,含量也> 0. 01% 。
2. 2　对 LTB4生成的影响　 LTB4是 AA代谢过程
中脂氧化酶途径的产物之一 , 此代谢途径的产物往
往同炎症反应紧密联系。从图 1中看出 , 玄参中苯
丙素甙成分 ( X S-8, XS-10)在 0. 5 mmo l /L浓度下
能有效抑制大鼠腹腔中性白细胞产生 LTB4的能
力。环烯醚萜成分 ( XS-6, XS-7)在此浓度下活性较
弱 , 提示苯丙素类化合物与玄参的抗炎活性可能有
关。
2. 3　对血小板聚集的抑制作用　从图 2与表 1中
看出 , 所用玄参样品在测量浓度下 ( 0. 1～ 0. 8
mmol /L)对 ADP及 AA诱导的血小板聚集都有不
同程度的抑制作用 ,但对 20 nmol /L PAF诱导的血
小板聚集无抑制作用。其中带 4个酚羟基的苯丙素
类化合物 XS-10对 ADP和 AA诱导的血小板聚集
的抑制作用最强 ,提示苯丙素甙苯环上带有酚羟基
的数目可能与作用强度有关。
·302· 第二军医大学学报　 1999年 5月 ,第 20卷
图 1　玄参成分 ( 0. 5 mmol /L)对大鼠腹腔白
细胞中 LTB4生成的影响
Fig 1　 The inh ibition of the LTB4 formation in
the rat abdominal neutral leukocytes by drugs
( 0. 5 mmol /L) isolated from S. ningpoensis
* * P < 0. 01 vs solvent g roup; n= 5, x-± s
图 2　玄参成分 ( 0. 5 mmol /L)对阈剂量 AA
诱导的兔血小板聚集的体外抑制作用
Fig 2　 Inhibitory ef f ect of drugs( 0. 5 mmol /L)
on rabbit platelet aggregation induced
by threshold AA in vitro
* * P < 0. 01 vs s olv en t;n= 5, x-±s
表 1　玄参成分对阈剂量 ADP诱导的
兔血小板聚集的体外抑制作用
Tab 1　 Inhibitory ef fect of drugs on rabbit platelet
aggregation induced by threshold ADP in vitro
(n= 3, x-± s )
Group
Concen t ration (cB /mmol· L- 1 )
0 0. 1 0. 3 0. 5 0. 8
　 IC50
Solv ent 3± 6
XS-6 22± 10* * 38± 7* * 41± 5* *
XS-7 22± 9* * 48± 6* * 58± 4* *
XS-8 26± 8* * 31± 6* * 47± 5* * 62± 5* * 0. 55
XS-10 19± 5* * 43± 12* * 63± 6* * 84± 3* * 0. 30
XS-9 19± 8* * 32± 7* * 55± 5* * 62± 4* * 0. 48
XS-4 16± 10* * 29± 5* * 48± 6* * 68± 5* * 0. 50
　　* * P < 0. 01 vs solvent g roup
3　讨　论
血小板聚集是血栓形成过程中的重要现象 ,它
同多种心血管疾病有关。 常见的体外血小板诱导凝
集剂有 ADP, PAF和 AA。本实验显示玄参中环烯
醚萜甙和苯丙素甙能抑制 ADP和 AA诱导的血小
板聚集。
以往的文献报道 [5～ 7 ] ,玄参中得到的化合物较
集中于环烯醚萜甙类成分。而本实验结果显示 ,玄参
中主要含苯丙素甙及环烯醚萜甙两类成分 ,这可能
是因为苯丙素甙很易氧化而易被忽略的原因。药理
实验中此两类成分对炎性介质的产生和体外诱导的
血小板聚集都有不同程度的抑制作用。 文献报道此
两类成分具有许多生物活性 [8, 9 ]。同时 ,对玄参属植
物的研究发现 ,环烯醚萜甙类成分单用的有效剂量
远大于原生药中的相应含量 [7 ] ,表明环烯醚萜甙并
非玄参单一的抗炎活性物质。 这些结果提示今后在
对中药玄参的质量标准制定及规范用药中应以环烯
醚萜甙和苯丙素甙类成分为主 ,尤其不能忽视苯丙
素甙类成分。
参 考 文 献
1　马广恩 ,申雅雅 . 玄参的化学和药理研究概况 . 国外医药· 植物
药分册 , 1997, 12( 6): 251
2　陈少英 ,贾丽娜 ,刘德发 ,等 .玄参叶的抗菌和毒性作用 . 福建中
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3　 Pauli GF, Of terdinger-Daegel S, Teborg D, et al . Digi talis ,
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A和海风藤醇 B对兔血小板聚集的影响 . 第二军医大学学报 ,
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( 1998-10-26收稿 , 1999-03-12修回 )
(本文编辑　姚春芳 )
·303·第 5期 . 李医明 ,等 . 玄参中环烯醚萜甙和苯丙素甙对 L TB4产生及血小板聚集的影响