全 文 ：黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol.29 No.2 2016
作用。本研究中，Sema4D在三阴性乳腺癌组织中表达显著
高于非三阴性乳腺癌及正常乳腺组织。Sema4D表达与三
阴性乳腺癌患者肿瘤大小、淋巴结转移数目及远处转移相
关（P＜0.05）。
c-met基因位于人类第 7号染色体长臂（7q21-q31）。
c-met蛋白是由原癌基因 c-met编码的一类蛋白质，属于受
体酪氨酸蛋白激酶家族成员，正常组织只存在低水平表达,
而在恶性肿瘤组织呈高表达。c-met蛋白主要存在于上皮
细胞的胞膜和胞奖中，是干细胞生长因子（HGF）的上皮特
异性受体。HGF以旁分泌方式作用于 c-met从而调节上皮
细胞内的磷酸化程度和促进有丝分裂 [3]。有研究发现，
c-met和HGF信号传导通路影响恶性肿瘤的生物学行为，直
接促进肿瘤细胞的增殖、癌变、血管生成和抗细胞凋亡，尤
其能促进肿瘤细胞的浸润和转移，c-met蛋白的过度表达与
恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关。c-met蛋白的异常表达
提示预后不良及低生存率，c-met过表达与乳腺癌患者生存
期呈显著负相关[10]。本研究中，c-met在三阴性乳腺癌组织
中表达显著高于非三阴性乳腺癌及正常乳腺组织。c-met
表达与三阴性乳腺癌患者淋巴结转移数目及远处转移相关
（P＜0.05）。
微血管密度(micro-vessel density, MVD), 即用免疫
组化法检测新生血管数目,是血管生成评估的“金标准”[5]。
本研究借鉴血管研究的方法，将LMVD作为评估淋巴管生
成的指标，结果显示，三阴性乳腺癌组织中存在淋巴管新
生，管壁较薄，无肌层，多为单层内皮细胞组成,间隙较大，
形状不规则,呈连续或不连续的线状。本研究中，三阴性乳
腺癌组LMVD明显高于非三阴性乳腺癌组及正常乳腺组，
有淋巴结转移及远处转移的三阴性乳腺癌组LMVD明显高
于无淋巴结转及无远处转移组，提示增多的微淋巴管数量
可能增加了肿瘤细胞进入淋巴管腔内的机会，促进三阴性
乳腺癌淋巴结转移及远处转移，同时发现，三阴性乳腺癌
Sema4D、c-met阳性表达组LMVD明显增高，提示Sema4D、
c-met高表达可能促进了三阴性乳腺癌淋巴管的新生、淋巴
道转移及远处转移，对其更近一步的研究极有可能揭示三
阴性乳腺癌更具有侵袭性的机制。
肿瘤相关淋巴管的生成及淋巴道转移是一个复杂的过
程，其中可能涉及多种淋巴管生成因子、肿瘤的生物学行为
及微环境相互作用，与肿瘤的生长、转移及预后密切相关。
本研究结果提示 Sema4D、c-met阳性表达可能促进三阴性
乳腺癌淋巴管的新生、淋巴道转移及远处转移，在临床病理
活检中联合检测Sema4D和 c-met蛋白表达，能够更好的了
解三阴性乳腺癌的发生发展及生物学行为，增加判断预后
的准确性，相关的抑制剂研究也可为进一步揭示三阴性乳
腺癌发病机制、实现靶向治疗提供可能。
参考文献
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收稿日期：2016-04-20
（内文见下页）
响应面法优化东北茶藨子叶片中总酚、总黄酮提取工艺
·工业药学·
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杜伟伟1，王微1，邹维娜1，付玉杰1，李灵玉1，徐启江2*
1.东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室（哈尔滨 150040）；
2. 东北林业大学生命科学学院林木遗传育种国家重点实验室（哈尔滨 150040）
摘 要 目的：考察超声波辅助乙醇提取法对东北茶藨子叶片中总酚、总黄酮提取含量的影响。方法:采用比色法测定
总酚、总黄酮的含量。在单因素实验的基础上，通过Box-Behnken实验设计(BBD)结合响应面法(RSA)优化提取条件，并对不
同提取方法进行了比较。结果:超声波法提取东北茶藨子叶片中总酚（以没食子酸计）、总黄酮（以芦丁计）的最佳提取条件为
乙醇浓度70%、液固比24 mL/g、超声时间30 min、超声温度40℃、超声功率200 W，在此条件下东北茶藨子叶片中总酚、总黄
酮含量分别为135.80 mg/g和13.56 mg/g。结论:超声辅助乙醇提取法高效、快速，可以作为东北茶藨子叶片中总酚、总黄酮的
提取方法。
关键词:超声辅助；东北茶藨子叶片；总酚；总黄酮；响应面分析法
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1006-2882（2016）02-234-007
DOI：10.14035/j.cnki.hljyy.2016.02.015
Optimization of Extraction Condition of Total Phenols and Flavonoids
From the Leaf of Ribes Mandshuricum（Maxim.）Kom by
Response Surface Analysis
Du Weiwei , et al
Key Laboratory of Forest Plant Ecology, Ministry of Education, Northeast Forestry University,
（Harbin 150040, China）
Abstract Objective: Ethanol ultrasonic-assisted extraction of total phenols and flavonoids from Ribes mandshuricum（Max-
im.）Kom leaves was investigated to optimumize the extraction conditions.Method：Colorimetric method was used to determine the to-
tal content of phenols and flavonoids. Based on the single factor, we used Box-Behnken Design combined with response surface analy-
sis to optimize extraction conditions, finally compared the different extracting methods. Results：The optimum condition of extracting
total phenols(Gallic acid/g extract) and flavonoids(rutin/g extract) was as follows: 70% ethanol, ratio of liquid to material of 24mL/g, at
40℃, under 200W, for 30min. The yields of total phenols and flavonoids could reach 135.80mg/g and 14.56mg/g, respectively. Con-
clusion：With its high efficiency as well as rapid extracting speed, Ultrasound-assisted alcohol extraction method is suitable to extract
total phenols and flavonoids from Ribes mandshuricum（Maxim.）Kom leaves.
Key words: ultrasound-assisted; the leaf of Ribes mandshuricum; total phenols; total flavonoids; response surface analysis
基金项目：E类中央高校基本科研业务费专项资金项目（创新团队与重大项目培育资金项目）—茶藨子属植物花发育及次生代谢产物合成分
子调控机制研究（2572014EA03）；黑龙江省博士后科研启动金：茶藨子属植物花发育及次生代谢产物合成分子调控机制研究
(LBH-Q14011)。
作者简介：杜伟伟（1990—），女，硕士研究生在读，研究方向：生药学。
*通讯作者：徐启江，男，教授，硕士研究生导师，研究方向：植物分子系统发育生物学。
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东北茶藨子[Ribes mandshuricum（Maxim.）Kom]为
虎耳草科、茶藨子属植物的一种。又称满洲茶藨子（华北经
济植物志要），山麻子（中国高等植物图鉴），东北醋李（小兴
安岭木本植物），狗葡萄、山樱桃、灯笼果[1]。属落叶灌木，高
1～3m，果实红色可食。东北茶藨子主要分布在中国、朝鲜、
俄罗斯等国，在中国，东北茶藨子主要分布在东北地区，华
北地区也有零星分布。以黑龙江省最多，新疆、辽宁次之
[2]。盛果期可达 30年，果实富含丰富的营养成分，维生素C
含量高出苹果几十倍，果皮中大量的红色素可用于食品添
加剂，对于其果实的研究开发已得到重视[3]。而对于东北茶
藨子叶的开发利用还比较少，有文章记载茶藨子叶可代替
茶饮，具有清热、明目、润肝、利尿、强心、抗菌之功能[4]。因
此，叶片也同样具有很高的经济价值，对提高人民生活及健
康水平有着重要意义。
文章对东北茶藨子叶片中的两大类次生代谢产物酚
类、黄酮类的含量进行检测，酚类化合物(phenolic acid)是指
同一苯环上有若干个酚性羟基的一类化合物。一些酚类化
合物本身具有较好的清除自由基的作用，因此是一类良好
的天然抗氧化剂[5]。黄酮类化合物广泛存在于维管植物中，
属于植物在长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产
物。该类成分具有软化血管、降血脂、增强免疫系统作用、
抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、调血压等功能[6]。二者皆具有良
好的药理活性和临床应用前景。这两类次生代谢产物广泛
存在于植物叶片中[7-8]，众所周知，植物叶片较茎、根更易生
长，叶片的部分掉落不会对植物体本身产生过多影响，因此
以植物叶片为实验材料更符合合理开发资源的理念。
目前总酚和总黄酮的提取方法主要有热水提取法、有
机溶剂提取法、酶辅助提取法、微波辅助提取法、超声辅助
提取法等[9]。其中超声提取法具有机械振动的超声波能够
产生猛烈振动，促使临近部分形成瞬时高温高压，彼此之间
发生剪切效应，因此，超声波能够破坏植物材料的胞壁，使
细胞内部的活性成分渗出，同时加速活性成分溶解于溶剂
中，提高溶剂提取率[10]，这种得率高、溶剂消耗少、节时、低能
耗的提取方法一直受到研究者的青睐。迄今，采用这种方
法提取生物活性成分的文章也很多，证明这种提取方法是
可行的。文章以东北茶藨子中的总酚、总黄酮含量做为评
价指标，通过5组单因素试验筛选出主要影响因素，再进行
响应面试验设计，从而优选建立了东北茶藨子叶片总酚、总
黄酮的最佳提取工艺条件，以期达到东北茶藨子资源食品
和药品同时开发的效果。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
东北茶藨子于2015年6月采自哈尔滨东北林业大学知
园，东北林业大学徐启江教授鉴定为虎耳草科植物东北茶
藨子(Ribes mandshuricu)叶片，晾干，粉碎，过 80目筛，置
阴凉干燥处备用；没食子酸、芦丁（南京泽郎医药科技有限
公司），Folin-Ciocalteu(2N)（sigma公司），碳酸钠、亚硝酸钠、
硝酸铝、氢氧化钠、乙醇均为市售分析纯。
1.2 仪器与设备
KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)、植物粉碎机 HX-200A(永康市溪岸五金药具厂)、
WK891型电热恒温鼓风干燥箱(重庆四达实验仪器厂)、
SHB-III型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公
司)、电子分析天平FA1104(上海天平仪器厂)、721可见分光
光度计(上海佑科仪器仪表有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 标准工作曲线的绘制
以没食子酸为标准品，采用Folin-Ciocalteu法计算总酚
含量[11]。取 1.8 mL稀释 20倍的Folin-Ciocalteu试剂（2 N），
加入40 μL不同浓度（0、100、200、300、400以及500 μg/mL）
没食子酸于离心管中。混合均匀并静置 5 min后，添加 1.2
mL7.5%Na2CO3避光静置2 h，取澄清液用721可见分光光度
计在波长 760 nm处测吸光度，根据此吸光度与没食子酸浓
度关系求出标准曲线之回归式。结果如图1所示。
图1 没食子酸标准曲线
以芦丁为标准品，采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[12]计算总
黄酮含量。准确称取在 105℃干燥恒重的芦丁对照品适量
溶于 70%乙醇溶液使之浓度为 5 mg/mL。准确吸取标准应
用液 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL于 6只容量瓶中，加入浓度
70%乙醇至10 mL，使之浓度为0、50、100、150、200、250 μg/mL，
分别吸取 3 mL，加 5%亚硝酸钠水溶液 0.5 mL，放置 6 min。
加10%硝酸铝0.5mL，混匀后放置6 min。加入5%氢氧化钠
溶液2.5 mL，混匀，放置15 min后，蒸馏水定容至10 mL（加
3.5 mL水）。用 721可见分光光度计，在λ＝510 nm处测吸
收度，以吸光度A为纵坐标，浓度C (μg/mL)为横坐标进行
线性回归，求出线性方程。结果如图2所示。
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图2 芦丁标准曲线
1.3.2 单因素实验
称取东北茶藨子叶片粉末 5份，每份 1.00 g，固定液固
比 24 mL/g、提取时间 30 min、提取温度 40℃、超声功率 200
W。考察乙醇浓度为10％、30％、50％、70％、90％时对提取
效果的影响。提取 2次，合并提取液浓缩至 24 mL，每组实
验重复 3次。通过 721可见分光光度计测得吸光度代入回
归方程计算质量浓度，代入如下公式计算提取得率，并以此
表示待测液中总酚或总黄酮的含量。然后将优选的最佳乙
醇浓度做为固定数值，依次选取考察液固比为 8 mL/g、16
mL/g、24 mL/g、32 mL/g、40 mL/g，提取时间为 10 min、20
min、30 min、40 min、50 min，提取温度为 30℃、40℃、50℃、
60℃、70℃，超声功率为50 W、100 W、150 W、200 W、250 W
时对提取效果的影响。
式中：C代表根据回归方程计算得到的质量浓度mg/
mL，V代表提取液总体积mL，n代表稀释倍数，M代表东北
茶藨子叶片粉末的质量g。
1.3.3 响应面法对东北茶藨子叶片总酚、总黄酮提取条件的
优化
在单因素试验的基础上，优选出液固比、提取时间。使
用Box-Behnken中心设计，考察乙醇浓度、提取温度、超声功
率3个因素在彼此水平组合下对东北茶藨子叶片中总酚、总
黄酮提取得率的影响。实验数据结果的分析通过Design
ExpertV8.0.6软件实现，并利用方差分析来计算和拟合试验
参数的最佳值，三维响应曲面采用Statistica6.0软件进行处
理。
1.3.4 不同提取工艺的比较
将超声辅助乙醇提取的提取结果与热水提取法、索氏
提取法进行比较。超声辅助乙醇提取法过程：将1 g东北茶
藨子叶片粉末加入装有24 mL70%的乙醇溶液的烧瓶中，置
于超声提取仪中，设置反应条件为超声时间 30 min、温度
40℃、超声功率 200 W。提取 2次，合并提取液浓缩至 24
mL，每组实验重复 3次。热水提取法过程：将 1 g东北茶藨
子叶片粉末加入装有24 mL热水的烧瓶中置于加热套上加
热，设置温度为 40℃，提取 6 h。提取 2次，合并提取液浓缩
至24 mL，每组实验重复3次。索氏提取法过程：将1 g东北
藨子叶片粉末加入索氏样品套管中，添加24 mL70%的乙醇
溶液到索氏烧瓶中，提取温度 40℃，提取 6 h。提取 2次，合
并提取液浓缩至24 mL，每组实验重复3次。
2 结果与分析
2.1 单因素实验
2.1.1 乙醇浓度对提取得率的影响
从图3可以看出，在乙醇浓度为10%时，总酚、总黄酮的
得率最低，当乙醇浓度达到 70%时，二者得率都达到最大
值，而后随着乙醇浓度的升高得率下降。这是因为随着乙
醇体积分数的增加，溶剂的亲脂性增强，促进了溶剂进入东
北茶藨子颗粒内部，从而使得提取得率增大，当乙醇体积分
数超过 70%时，溶剂亲脂性过高，减少水溶性提取物的溶
出，而使得提取率下降 [13]。因此，最佳的乙醇体积分数为
70%左右。
图3 乙醇浓度的影响
2.1.2 液固比对提取得率的影响
图4 液固比的影响
提取得率/mg/g= C×V×n
M
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从图 4可知，在液固比在 8:1～24:1 mL/g之间时，随着
所加试剂量的增加，所得提取物含量均呈上升趋势，在24:1
mL/g时，总酚、总黄酮得率都达最大值，之后随着所加试剂
量的进一步增加，所得提取物含量变化不大。从提取效果
和减少溶剂用量等方面综合考虑，用量应不宜过大，故液固
比定在24:1 mL/g比较适合。
2.1.3 提取时间对提取得率的影响
从图 5可知，在提取时间为 10 min～30 min之间时，随
着时间的延长，所得提取物中总酚、总黄酮含量有上升趋
势，在 30 min时，得率达最大值，之后随着时间延长到
50min，提取物含量变化不大，因此，最佳提取时间为30min。
图5 时间的影响
2.1.4提取温度对提取得率的影响
从图 6可知，在温度为 40℃时，总酚的含量达到最高。
在 50℃时，总黄酮得率达最大值，之后随着温度的升高，提
取物含量有下降趋势，可能是因为随着温度的升高，溶剂黏
度降低，分子热运动增强，促进了溶剂与颗粒的接触与传
质，而使得总酚、总黄酮提取率增大，而当温度继续升高时，
会使酚类、黄酮类物质中耐热性较差的部分分解或氧化[14]，
从而造成了提取得率的下降。因此，提取时适宜的温度应
为40℃左右。
2.1.5 超声功率对提取得率的影响
从图 7可知，提取率随着超声功率的增加而增大,当超
声功率在150 W-200 W之间时提取率增加较快,之后有减少
的趋势。可能是因为超声作用加速了提取液的流动,温度过
高,使细胞破壁效果减弱,影响了总酚、总黄酮提取得率的缘
故，因此超声提取功率应选择为200 W左右。
2.2 响应面分析法优化提取工艺的结果
2.2.1 回归模型的建立与分析
试验中，采用BBD试验设计及响应面分析法对东北茶
藨子叶片中总酚、总黄酮提取得率影响比较显著的3个参数
做了模型拟合以及条件预测。将乙醇浓度%（X1）、提取时间
min（X2）、超声功率W（X3）做3因素3水平共17个试验点的
BBD实验及响应面分析。设计方案及结果如表 1所示，方
差分析结果如表2所示。
表1 BBD实验水平及结果
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
水平
乙醇浓度
（X1）
-1（50）
-1（50）
0（65）
1（85）
0（65）
0（65）
1（85）
0（65）
0（65）
0（65）
0（65）
1（85）
0（65）
1（85）
-1（50）
0（65）
-1（50）
提取时间
min（X2）
0（30）
-1（20）
0（30）
0（30）
-1（20）
0（30）
-1（20）
1（40）
1（40）
0（30）
-1（20）
0（30）
0（30）
1（40）
0（30）
0（30）
1（40）
超声功率
W（X3）
1（250）
0（200）
0（200）
-1（150）
1（250）
0（200）
0（200）
-1（150）
1（250）
0（200）
-1（150）
1（250）
0（200）
0（200）
1（250）
0（200）
0（200）
总酚得率
Y1(mg/g)
104.01
116.23
136.83
112.23
120.51
137.99
118.37
103.37
107.66
133.63
123.23
120.51
135.42
112.51
108.37
134.8
103.37
总黄酮得率
Y2(mg/g)
9.98
10.57
13.77
10.04
11.02
13.42
10.72
11.62
11.62
13.27
10.72
12.22
13.74
11.62
10.19
13.62
10.77
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表2 二次回归模型的方差分析
通过Design-Epert V8.0.6软件对该实验结果进行分析，
东北茶藨子叶片中的总酚和总黄酮含量的二次模型方差统
计分析的结果我们能够看出该实验模型具有良好的相关
性，R2值分别我 0.9751 和 0.9816，模型拟合显著（P＜
0.0001），失拟项不显著（P＞0.05），表明建立的此模型为有
效模型。我们最终得到其编码变量的二次回归方程，其提
取含量作为函数的等式分别为Y1、Y2：
以总酚的提取得率Y1（mg/g）为响应值的多元函数回
归方程：
Y1=135.74+3.96X1-6.43X2+1.78X3+1.75X1X2+0.98X2X3+
1.75X1X3-12.76X12-10.35X22-11.69X32
以总黄酮的提取得率Y2（mg/g）为响应值的多元函数回
归方程：
Y2=14.56 + 0.40X1 + 0.33X2 + 0.35X3 + 0.17X1X2 +
0.47X2X3-0.075X1X3-2.15X12-1.49X22-1.83X32；
2.2.2 响应面结果
图 8中A代表乙醇浓度和超声时间相互作用时对东北
茶藨子叶片中总酚提取得率的影响；B代表乙醇浓度和超
声功率相互作用时对东北茶藨子叶片中总酚提取得率的影
响；C代表超声时间和超声功率相互作用时对东北茶藨子
叶片中总酚提取得率的影响；D代表乙醇浓度和超声时间相
互作用时对东北茶藨子叶片中总黄酮提取得率的影响；E代
表乙醇浓度和超声功率相互作用时对东北茶藨子叶片中总
黄酮提取得率的影响；F代表超声时间和超声功率相互作用
时对东北茶藨子叶片中总黄酮提取得率的影响。从各因素
之间两两相互作用的响应面图形观察，发现其中曲线走势
越陡，其影响越显著；曲线走势越平滑，其影响越小。由De-
sign-Expert V8.0.6 软件进行系统分析，得出影响东北茶藨
子叶片中总酚、总黄酮提取得率的最佳提取工艺条件为：乙
醇浓度66.86 %、超声时间29.12 min、超声功率204.73 W，综
合响应面分析结果和模拟方程得出总酚、总黄酮的预期值
分别为136.55 mg/g和14.56 mg/g。结合实际操作过程中的
局限性，最终确定修正后的工艺条件为：乙醇浓度 70%、超
声时间30 min、超声功率200 W。
图8 东北茶藨子叶片中总酚酸（A-C）、总黄酮（D-F）提取
得率的响应面曲线图
2.2.3 模型验证
为了对模型预计响应值的适应性进行验证，将进行验
证性实验。东北茶藨子叶片中总酚、总黄酮的提取得率条
件优化结果为乙醇浓度 70%、超声时间 30min、超声功率
200W。在此优化条件下进行3次平行实验。东北茶藨子叶
片中总酚、总黄酮的平均值分别为135. 80mg/g和13.56mg/g，
且R.S.D.为 2.53%和 3.85%（n=3）。这与模型回归方程产生
的预测值是基本一致的，偏差小，同时证明该响应面模型的
建立是合理可靠的。
2.3 不同提取工艺的比较
超声提取、热水提取、索氏提取对东北茶藨子中总酚总
黄酮含量的提取结果如图9，从结果可以看出超声的提取效
果是热水提取法的二倍，表明有机溶剂乙醇更适合提取，这
可能是由于乙醇的渗透性更强，更容易使细胞中的活性成
分溶出。索氏提取的结果虽只是略低于超声提取，但索氏
提取耗时长。因此，可以看出超声作为一种提取总酚、总黄
变量
总酚
Model
X1
X2
X3
X1X2
X2X3
X1X3
X12
X22
X32
Residual
Lack of Fit
R2
总黄酮
Model
X1
X2
X3
X1X2
X2X3
X1X3
X12
X22
X32
Residual
Lack of Fit
R2
平方和
2421.52
125.14
330.63
25.24
12.25
3.84
12.29
685.98
451.18
575.55
61.81
50.09
0.9751
51.93
1.26
0.85
0.97
0.12
0.88
0.023
19.50
9.37
14.05
0.97
0.79
0.9816
自由度
9
1
1
1
1
1
1
1
1
1
7
3
9
1
1
1
1
1
1
1
1
1
7
3
均方
269.06
125.14
330.63
25.24
12.25
3.84
12.29
685.98
451.18
575.55
8.83
16.70
5.77
1.26
0.85
0.97
0.12
0.88
0.023
19.50
9.37
14.05
0.14
0.26
F值
30.47
14.17
37.44
2.86
1.39
0.44
1.39
77.68
51.09
65.18
5.70
41.56
9.1
6.09
6.96
0.88
6.36
0.16
140.45
67.51
101.23
5.72
P值
＜0.0001
0.0070
0.0005
0.1347
0.2774
0.5306
0.2767
＜0.0001
0.0002
＜0.0001
0.0630
＜0.0001
0.0195
0.0430
0.0335
0.3788
0.0396
0.6993
＜0.0001
＜0.0001
＜0.0001
0.0626
显著性
显著
不显著
显著
不显著
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黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol.29 No.2 2016
酮的提取方法具有提取工艺简单、节约时间、提取效率高等
特点。
图9 不同提取工艺对提取得率的比较
3 结论
使用响应面法试验设计，克服了正交设计只能处理离
散的水平值，而无法找出整个区域上因素的最佳组合和响
应值的最优值的缺陷，并能减少试验次数，分析几种因素间
的交互作用，以达到较全面地反映各因素水平的效果[15-16]。
本试验首先考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间、液固比、
超声功率5组单因素水平对茶藨子总酚、总黄酮提取得率的
影响，最终筛选出3组主要因素进行响应面试验设计，确定
其最佳提取工艺条件为：乙醇浓度 70%、液固比 24mL/g、超
声时间 30min、超声温度 40℃、超声功率 200W，在此条件下
东北茶藨子叶中总酚、总黄酮含量分别为 135.80mg/g和
13.56mg/g。
通过对东北茶藨子叶片中总酚、总黄酮的提取工艺研
究，为其生物活性成分的快速提取找到了方法，为东北茶藨
子植物资源食品与药品同时开发提供了理论基础。
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收稿日期：2016-03-01
抗乙肝药物恩替卡韦重要中间体的合成工艺
吴霞
佳木斯市妇幼保健和计划生育服务中心（154002）
（内文见下页）
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