全 文 ：※成分分析 食品科学 2016, Vol.37, No.10 151
高效液相色谱法测定巴旦木青皮提取物中
齐墩果酸和熊果酸
李维霞1，魏 佳2，苏玉红1，吴 斌2，张 平2,*
（1.新疆大学化学化工学院，新疆 乌鲁木齐 830046；
2.新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所，新疆 乌鲁木齐 830091）
摘  要：采用质谱仪对巴旦木青皮提取物中齐墩果酸（oleanolic acid，OA）和熊果酸（ursolic acid，UA）进行鉴
定，进一步用高效液相色谱法测定OA和UA含量，优化提取条件。高效液相色谱条件：利用Platisil ODS C18色谱柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-0.2%磷酸（85∶15，V/V）溶液为流动相，流速0.8 mL/min；柱温20 ℃；检测
波长210 nm。结果表明：OA在0.005～0.5 mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.999 9），回收率在89.67%～94.85%之
间，相对标准偏差在1.28%～3.16%之间（n=3）；UA在0.005～0.5 mg/mL范围内线性关系良好（R2=0.999 9），回
收率在88.67%～94.77%之间，相对标准偏差在1.07%～1.92%（n=3）之间。在不同提取条件下，提取剂为体积分数
95%乙醇、料液比1∶40（g/mL）、提取时间40 min及提取3 次为最佳条件。
关键词：巴旦木青皮；齐墩果酸；熊果酸；高效液相色谱法
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in Almond Green Husk Extract by High Performance Liquid Chromatography
LI Weixia1, WEI Jia2, SU Yuhong1, WU Bin2, ZHANG Ping2,*
(1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Xinjiang University, Ürümqi 830046, China;
2. Institute of Agro-Products Storage and Processing, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Ürümqi 830091, China)
Abstract: Oleanolic acid (OA) and ursolic acid (UA) were identified by mass spectrometry (MS) in almond green husk
extract. Further, a high performance liquid chromatographic (HPLC) method was established for the determination of the
contents of OA and UA, and the extraction conditions were optimized using single factor and orthogonal array experiments.
The HPLC conditions were set as follows: separation column, Platisil ODS C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); mobile phase,
methanol-0.2% phosphorus acid (85:15, V/V); flow rate, 0.8 mL/min; column temperature, 20 ℃; and detection wavelength,
210 nm. In the range of 0.005–0.5 mg/mL (R2 = 0.999 9), both OA and UA presented a good linear relationship. The average
recoveries of OA varied from 89.67% to 94.85% with RSD of 1.28%–3.16% (n = 3). The average recoveries of UA ranged
from 88.67% to 94.77%, and the RSD was between 1.07% and 1.92% (n = 3). The optimum conditions for extracting
OA and UA from almond green husk extract were as follows: 95% ethanol as extractant; solid/solvent ratio, 1:40 (g/mL);
extraction time, 40 min; and 3 extraction cycles.
Key words: almond green husk; oleanolic acid (OA); ursolic acid (UA); high performance liquid chromatography (HPLC)
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201610026
中图分类号：O657.72 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2016）10-0151-07
引文格式：
李维霞, 魏佳, 苏玉红, 等. 高效液相色谱法测定巴旦木青皮提取物中齐墩果酸和熊果酸[J]. 食品科学, 2016, 37(10):
151-157. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201610026. http://www.spkx.net.cn
LI Weixia, WEI Jia, SU Yuhong, et al. Determination of oleanolic acid and ursolic acid in almond green husk extract by
high performance liquid chromatography[J]. Food Science, 2016, 37(10): 151-157. (in Chinese with English abstract)
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201610026. http://www.spkx.net.cn
收稿日期：2015-08-24
基金项目：新疆特色林果贮运保鲜及精深加工关键技术研究与示范项目（2011BAD27B01）
作者简介：李维霞（1990—），女，硕士研究生，研究方向为天然产物分析。E-mail：912861088@qq.com
*通信作者：张平（1964—），男，研究员，博士，研究方向为食品科学。E-mail：zhangpingyys@163.com
152 2016, Vol.37, No.10 食品科学 ※成分分析
巴旦木，又名扁桃（Amygdalus Communis L.），是
蔷薇科（Rosaceae）李亚科（Prunoideae）桃属乔木，为
世界著名干果及木本油料树种[1]。因其果仁营养丰富，含
有人体所必需的多种微量元素[2-4]而广受欢迎。巴旦木作
为新疆地区的特色果品，在南疆喀什与和田地区被大量
种植，每年为当地果农带来巨大经济利益，同时也产生
了大量的巴旦木青皮。
巴旦木青皮为巴旦木的干燥外果皮，其含有的三
萜酸是自然界药用植物的主要活性成分之一。齐墩果酸
（土当归酸，oleanolic acid，OA）和熊果酸（乌索酸，
ursolic acid，UA）是巴旦木青皮提取物中三萜酸的主要
有效成分，二者属于同分异构体，是广泛存在于自然界
中的五环三萜类化合物。现代药理学研究表明，OA和
UA具有较强的生理活性，其中OA具有保肝、降血糖、抗
心律失常、消炎、增强免疫、抑制血小板聚集和抗氧化
等多种药理作用[5-8]；UA具有镇静、抗糖尿病、抗炎、抗
菌、降血脂、稳定肝功能、抗氧化和抗肿瘤等作用[9-10]。
三萜类物质结构复杂，目前人工合成技术不成熟，其主
要来源是从植物中提取[11]，因此，从植物提取物中分离
检测UA和OA是当今研究的热点之一。
目前，常用的OA和UA的分析方法主要有薄层色谱
法[12-14]、分光光度法[15]、气相色谱法[16]、高效液相色谱
（high performance liquid chromatography，HPLC）法[17-18]
及毛细管电泳法[19]等。其中HPLC法具有分析时间短、
分离度好、灵敏度高、操作简便的特点，近几年来得到
迅速发展并被广泛应用[20]。采用HPLC法测定OA和UA的
含量已有大量文献报道，但对巴旦木青皮提取物中OA和
UA提取方法的优化及含量的检测报道较少。本实验通过
单因素和正交试验优化了巴旦木青皮提取物中OA和UA
的提取条件，采用质谱仪对提取物中OA和UA做了定性
分析，并通过HPLC法测定了巴旦木青皮提取物中OA和
UA的含量，为巴旦木青皮及其中药制剂的质量标准提供
参考，也为巴旦木青皮资源的深加工提供理论依据和实
验数据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
巴旦木青皮采自新疆喀什市莎车县国营二农场。将
采集的青皮材料从－20 ℃冰箱中取出，立即放入用液氮
冷冻过的植物粉碎机中粉碎，在－50 ℃条件下真空冷冻
干燥除去水分，研磨并过40 目筛，置于干燥器中备用。
OA、UA标准品（纯度≥98%） 上海源叶生物科
技有限公司；甲醇（色谱纯） 霍尼韦尔贸易（上海）
有限公司；磷酸、乙醇（均为分析纯） 天津市福晨化
学试剂厂；实验室用水均为高纯水（≥18 MΩ/cm）。
1.2 仪器与设备
Q EXACTIVE PLUS型质谱仪 美国Thermo公司；
1260型高效液相色谱仪（配有可变波长紫外检测器、示差
折光检测器和EZChrom Elite工作站） 美国安捷伦公司；
DZG-303A艾柯实验室专用超纯水仪 成都唐氏康宁科
技发展有限公司；A11基本型研磨机 德国IKA公司；
LGJ-10冷冻干燥机 北京松源华兴科技发展有限公司；
SK 7200H超声波清洗器 上海科导超声仪器有限公司；
RE100-Pro旋转蒸发仪 美国Scilogex公司。
1.3 方法
1.3.1 样品溶液的制备
参照黄浩[21]、邹盛勤[22]等的方法，并略加改动。准
确称取巴旦木青皮干粉1.0 g，加入30 mL体积分数95%乙
醇溶液，超声提取40 min，抽滤，残渣以相同的方法提
取40 min，合并2 次滤液，将滤液在45 ℃、20 r/min旋转
浓缩蒸干乙醇，残渣用水溶解，石油醚萃取2 次，水层旋
转蒸发近干，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶后，取上
清液过0.22 μm滤膜后直接注入进样瓶以供HPLC分析。
1.3.2 标准溶液的配制
分别准确称取OA和UA标准品各5.0 mg，用甲醇溶解
并定容于10 mL棕色容量瓶中，其质量浓度为0.5 mg/mL，
将其作为标准储备液放置冰箱备用。采用逐步稀释法得
到0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/mL一系列不同质
量浓度的标准工作溶液，过0.22 μm滤膜后进样。
1.3.3 质谱条件
电喷雾离子源；检测方式：正离子模式；鞘气流速
5 psi；辅助气流速1 psi；喷雾电压3.5 kV；毛细管温度
320 ℃；辅助气加热器温度300 ℃。
1.3.4 HPLC条件
参照文献[23-24]等并稍作调整，确定色谱条件为：
Platisil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动
相：甲醇-0.2%磷酸（85∶15，V/V）溶液；流速0.8 mL/min；
柱温20 ℃；检测波长210 nm；进样量20 μL。
1.3.5 提取条件的优化
提取条件单因素水平：提取剂为甲醇、乙醇、乙酸
乙酯、丙酮和三氯甲烷；提取剂体积分数为65%、75%、
85%、95%、100%；料液比为1∶10、1∶20、1∶30、
1∶40、1∶50（g/mL）；提取时间为10、20、30、40、
50 min；提取次数为1、2、3、4 次，在单因素试验基础
上设计了L9（3
4）正交试验对提取条件进行全面考察。
※成分分析 食品科学 2016, Vol.37, No.10 153
2 结果与分析
2.1 巴旦木青皮提取物中OA和UA的鉴定
457.2 457.3 457.4
m/z
m/z⴨ሩѠᓖ/% ⴨ሩѠᓖ/%
457.5 457.6
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18 A 457.327 03
457.200 96
457.305 82
457.365 54 457.443 02
457.348 51 457.462 16457.290 37
457.355 457.365 457.375 457.385
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110 457.365 54
OA઼UA
457.1 457.2 457.3 457.4 457.5 457.6 457.7
457.146 70
457.366 42
457.219 57
457.292 18
457.110 47
457.240 84
457.171 14
457.443 79457.399 17 457.739 38
457.090 03
B
OA઼UA
m/z
⴨ሩѠᓖ/%
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
457.366 42
m/z
⴨ሩѠᓖ/%
457.355 457.365 457.375 457.385
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
图 1 OA、UA标准品（A）和巴旦木青皮提取物（B）电喷雾-质谱图
Fig. 1 ESI-MS spectra of mixed OA and UA standards (A) and
almond green husk extracts (B)
对巴旦木青皮提取物和OA、UA混合标准品进行电
喷雾-质谱正离子模式扫描，通过样品和混合标准品的精
确质荷比判断巴旦木青皮提取物是否含有OA及其同分异
构体UA。由图1可以看出，巴旦木青皮提取物中目标物
的质荷比与混合标准品的质荷比相吻合，故推测巴旦木
青皮提取物中可能含有OA或其同分异构体UA[25]，采用
HPLC法进一步对样品进行分析。
2.2 提取条件的优化
以巴旦木青皮提取物中OA和UA的提取量为指标，
采用单因素试验和正交试验对提取条件进行了优化。
2.2.1 提取剂的选择 ᦤপࠖᦤপ䞣/ ˄mg/ g ˅ ⬆䝛 Э䝛 Э䝌Э䝃 ϭ䝂 ϝ∃⬆⛋0.00.20.40.60.81.01.2 OAUA
图 2 提取剂对OA和UA提取量的影响
Fig. 2 Effect of organic solvents on the extraction efficiency of OA and UA
OA和UA可溶于多种有机溶剂，本实验采用5 种试剂进
行溶剂优化，由图2可知，5 种溶剂的提取能力为甲醇＞乙
醇＞乙酸乙酯＞丙酮＞三氯甲烷，由于甲醇有毒，且提取后
溶液颜色较深，脂溶性成分较多，故选用乙醇为提取剂。
2.2.2 提取剂体积分数的优化ᦤপࠖԧ⿃ߚ᭄/%65 75 85 95 100ᦤপ䞣/ ˄mg/ g ˅ 0.00.20.40.60.81.0 OAUA
图 3 提取剂体积分数对OA和UA提取量的影响
Fig. 3 Effect of different ethanol concentrations on the extraction
yields of OA and UA
由图3可知，随着乙醇体积分数的增加，OA和UA的
提取量逐渐增加，当乙醇体积分数为95%时提取效果最
佳，当乙醇体积分数为100%时，其提取效果有所下降，
可能是由于溶剂中少量水的存在增加了溶剂的相对极
性，从而增加了其传质过程，提高了对OA和UA的溶解
能力[25]。
2.2.3 料液比的优化
1IJ10 1IJ20 1IJ30᭭⎆↨˄g/mL˅1IJ40 1IJ50ᦤপ䞣/ ˄mg/ g ˅ 0.00.20.40.60.81.01.2 OAUA
图 4 料液比对OA和UA提取量的影响
Fig. 4 Effect of solid/solvent ratio on the extraction yields of OA and UA
由图4可看出，随着提取剂用量的增加，OA和UA
提取量也逐渐增加，当料液比为1∶30时，巴旦木青皮提
取物中OA和UA提取量基本保持不变，由于溶剂用量增
大，增加了提取成本，同时对后续浓缩操作过程不利，
因此选择料液比为1∶30。
2.2.4 提取时间的优化
10 20 30ᦤপᯊ䯈/min 40 50ᦤপ䞣/ ˄mg/ g ˅ 0.00.20.40.60.81.01.2 OAUA
图 5 提取时间对OA和UA提取量的影响
Fig. 5 Effect of extraction time on the extraction yields of OA and UA
由图5所示，OA和UA在提取时间低于40 min时，
随着提取时间的延长，OA和UA的提取量随之增加，当
154 2016, Vol.37, No.10 食品科学 ※成分分析
再延长提取时间其提取量有下降趋势，可能原因是在提
取时间到达40 min时，巴旦木青皮充分溶胀，进而增加
了溶剂的溶解能力。随着时间的延长至50 min时，杂质
溶出量会相应增加，同时OA和UA的提取量并无明显增
大，因此，选用40 min为最佳提取时间。
2.2.5 提取次数的优化 ᦤপ⃵᭄1 2 3 4ᦤপ䞣/ ˄mg/ g ˅ 0.00.20.40.60.81.0 OAUA
图 6 提取次数对OA和UA提取量的影响
Fig. 6 Effect of number of extraction cycles on the extraction yields of
OA and UA
由图6可看出，当提取1 次时，对OA和UA的提取不
彻底，含量低于第2、3次提取；继续提取，OA和UA的
提取量基本保持不变，而且当提取大于2 次时，提取溶剂
和提取时间增加，故提取2 次为宜。
2.2.6 正交试验优化和验证实验结果
在以上单因素试验基础上，以巴旦木青皮提取物
中OA和UA提取量为指标，选择提取剂体积分数、料液
比、提取时间和提取次数，设计了L9（3
4）正交试验，以
确定OA和UA的最佳提取条件。结果和数据处理如表1、
2所示。
表 1 L9（3
4）正交试验设计及结果（OA）
Table 1 The design and results of L9(3
4) orthogonal tests for OA extraction
试验
号
A提取剂
体积分数/%
B料液比
（g/mL）
C提取
时间/min
D提取
次数
OA提取量/
（mg/g） 排序
1 1（85） 1（1∶30） 1（30） 1（1） 0.756 9
2 1 2（1∶40） 2（40） 2（2） 0.953 4
3 1 3（1∶50） 3（50） 3（3） 0.883 6
4 2（95） 1 2 3 1.016 1
5 2 2 3 1 0.797 7
6 2 3 1 2 0.987 2
7 3（100） 1 3 2 0.887 5
8 3 2 1 3 0.954 3
9 3 3 2 1 0.790 8
k1 0.864 0.886 0.899 0.780
k2 0.934 0.901 0.920 0.942
k3 0.877 0.887 0.856 0.951
R 0.070 0.015 0.064 0.171 D＞A＞C＞B
由表1可知，各因素对巴旦木青皮提取物中OA提取
量影响的主次顺序是：D＞A＞C＞B，即提取次数是最
主要因素，提取剂体积分数料液比、提取时间是次要因
素。由极差分析可得出最佳提取条件为A2B2C2D3，从正
交试验表中得出最优组合为A2B1C2D3，通过验证实验确
定提取工艺组合为A2B2C2D3，即提取剂体积分数95%、料
液比1∶40、提取时间40 min及提取3 次。
表 2 L9（3
4）正交试验设计及结果（UA）
Table 2 The design and results of L9(3
4) orthogonal tests for UA extraction
试验号 A提取剂体积分数/%
B料液比
（g/mL）
C提取
时间/min
D提取
次数
UA提取量/
（mg/g） 排序
1 1（85） 1（1∶30） 1（30） 1（1） 0.599 9
2 1 2（1∶40） 2（40） 2（2） 0.666 1
3 1 3（1∶50） 3（50） 3（3） 0.625 6
4 2（95） 1 2 3 0.660 3
5 2 2 3 1 0.607 7
6 2 3 1 2 0.662 2
7 3（100） 1 3 2 0.628 5
8 3 2 1 3 0.647 4
9 3 3 2 1 0.605 8
k1 0.630 0.629 0.636 0.604
k2 0.643 0.640 0.644 0.652
k3 0.627 0.631 0.620 0.644
R 0.016 0.011 0.024 0.048 D＞C＞A＞B
由表2可知，各因素对巴旦木青皮提取物中UA提取
量影响的主次顺序是：D＞C＞A＞B，即提取次数是最
主要，提取剂体积分数料液比、提取时间是次要因素。
由极差分析可得出最佳提取条件为A2B2C2D2，从正交试
验表中得出最优组合为A1B2C2D2，通过验证实验确定提
取工艺组合为A2B2C2D2，即提取剂体积分数95%、料液比
1∶40、提取时间40 min及提取2 次。
在巴旦木青皮提取物中OA和UA同时存在，且二者
属于同分异构体，性质很相似，在提取过程中共存。由
于巴旦木青皮提取物中OA含量较高，故提取条件以OA为
主。因此巴旦木青皮提取物中OA和UA经正交试验确定的
最佳提取工艺组合为A2B2C2D3，即提取剂体积分数95%、
料液比1∶40、提取时间40 min及提取3 次。在此基础上，
对正交试验结果和单因素试验结果进行验证实验，由表
3可知，在正交试验条件下，OA和UA含量要高于单因素
试验结果，因此确定巴旦木青皮提取物中OA和UA最佳提
取工艺组合为A2B2C2D3，即提取剂体积分数95%、料液比
1∶40、提取时间40 min及提取3 次。
表 3 验证实验（OA、UA）
Table 3 Experimental verification of optimized extraction conditions
提取含量/（mg/g） 单因素试验最佳组合A2B1C2D2 正交试验最佳组合A2B2C2D3
OA 1.008 1.014
UA 0.655 0.670
2.3 标准品及巴旦木青皮提取物中OA和UA的色谱分离
将0.2 mg/mL的OA和UA混合标准溶液在1.3.4节色
谱条件下注入HPLC仪，如图7A所示。将样品进行处理
后用HPLC进行分析，如图7B所示。理论塔板数以OA和
UA峰计均不低于6 000。当甲醇和0.2%磷酸溶液配比为
85∶15（V/V）时，OA和UA分离度良好（R＞1.5）且峰形
较好。
※成分分析 食品科学 2016, Vol.37, No.10 155
OA
UA
0 10 20 30ᯊ䯈/min 40 50 60mAU 050100150 A
OA
UA
0 10 20 30ᯊ䯈/min 40 50 60mAU 050100 B
图 7 标准品（A）和巴旦木青皮样品（B）HPLC色谱图
Fig. 7 HPLC chromatograms of mixed standards (A) and
almond green husk (B)
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线的绘制
对不同质量浓度的标准溶液OA、UA分别自动进
样20 μL，按1.3.4节色谱条件测定，记录峰面积。以
每个标准工作溶液对应的峰面积Y和其质量浓度X进行
线性回归分析，得到OA回归方程：Y=3.144×108X＋
1.512×105，R2=0.999 9；UA回归方程：Y=1.349×108X＋
1 . 3 6 5× 1 0 5，R 2= 0 . 9 9 9 9。结果显示O A和U A在
0.005～0.5 mg/mL范围内线性关系良好。将最小质量浓度
的标准品溶液无限稀释，按照1.3.4节色谱条件进样测定
空白和稀释的标准品溶液，计算信噪比，以3 倍信噪比
对应的标准品质量浓度作为检出限，以10 倍信噪比对应
的OA、UA标准品质量浓度作为定量限，计算结果得出
OA、UA的检出限分别为0.38、0.41 μg/mL，定量限分别
为1.28、1.43 μg/mL。
2.4.2 精密度实验结果
表 4 精密度实验结果（n=5）
Table 4 Results of precise test (n = 5)
组分 质量浓度/（mg/mL）
峰面积
RSD/%
1 2 3 4 5 平均值
OA
0.2 61 578 535 61 155 796 61 755 742 61 828 036 61 228 280 61 509 278 0.50
0.05 15 807 364 15 736 581 15 917 814 16 071 731 16 023 393 15 911 377 0.89
UA
0.2 27 818 043 27 916 141 27 939 030 28 030 692 27 894 468 27 919 675 0.28
0.05 6 657 398 6 668 371 6 679 377 6 702 093 6 693 231 6 680 094 0.27
分别取质量浓度0.2 mg/mL和0.05 mg/mL的OA和UA
标准液自动进样20 μL，平行测定5 次，测定OA和UA
峰面积积分值，计算平均值和相对标准偏差（relative
standard deviation，RSD），由表4可知，OA的RSD分别
为0.50%和0.89%；UA的RSD分别为0.28%和0.27%，说明
仪器精密度良好，满足实验要求。
2.4.3 重复性实验
精确称取相同质量的样品5 份，按1.3.1节制备巴旦
木青皮提取液，分别进样20 μL，用HPLC仪测定峰面
积，计算峰面积，由表5可知，OA的RSD为2.85%；UA
的RSD为3.29%，说明该方法的重复性较好。
表 5 重复性实验结果（n=5）
Table 5 Results of repeatability test (n = 5)
组分
峰面积
RSD/%
1 2 3 4 5 平均值
OA 28 725 311 27 637 690 27 452 149 29 413 752 28 502 861 28 346 353 2.85
UA 8 445 799 8 512 390 9 125 605 8 734 651 8 953 894 8 754 468 3.29
2.4.4 回收率实验结果
在巴旦木青皮样品中分别加入一定量的OA、UA
标准品，进行加标回收率实验。由表6、7可知，OA的
回收率在89.67%～94.85%之间，RSD在1.28%～3.16%
之间；UA的回收率在88.67%～94.77%之间，RSD在
1.07%～1.92%之间，可能的原因是由于标准物质添加到
样品中存在基质效应导致回收率偏低，但不影响采用该
方法测定巴旦木青皮提取物中OA和UA的含量。
表 6 OA加标回收率实验结果（n=3）
Table 6 Results of recovery test for OA (n = 3)
样品中OA含量/mg 加入标准量/mg 加标后OA含量/mg 回收率/% RSD/%
0.912±0.011 0.5 1.360±0.006 89.67 3.16
0.926±0.008 1 1.833±0.014 90.70 2.07
0.934±0.013 2 2.834±0.009 94.85 1.28
表 7 UA加标回收率实验结果（n=3）
Table 7 Results of recovery test for UA (n = 3)
样品中UA含量/mg 加入标准量/mg 加标后UA含量/mg 回收率/% RSD/%
0.654±0.022 0.2 0.832±0.022 88.67 1.17
0.660±0.024 0.5 1.122±0.024 92.60 1.07
0.636±0.017 1 1.584±0.031 94.77 1.92
2.5 巴旦木青皮提取物中OA和UA含量测定
准确称取一定质量巴旦木青皮粉末，按1.3.1节制
备巴旦木青皮提取液，分别进样20 μL，按1.3.4节色谱
条件测定（平行测定3 份），由表8可知，通过外标法
测得巴旦木青皮提取物中OA含量是0.101%，UA含量是
0.068%。
表 8 巴旦木青皮提取物中OA和UA含量的测定（n=3）
Table 8 The contents of OA and UA in almonds green husk extract (n = 3)
%
样品 1 2 3 平均值
OA 0.102 0.098 0.104 0.101
UA 0.069 0.066 0.068 0.068
156 2016, Vol.37, No.10 食品科学 ※成分分析
3 讨论与结论
OA和UA作为一种三萜类物质，在中药材中共存，
常用提取溶剂主要有甲醇、乙醇、氯仿等[26]。本实验通
过对不同提取溶剂的考察，选用体积分数95%乙醇溶液
为提取剂，并采用正交试验设计，对样品提取过程进行
了单因素和正交试验优化，确定最佳提取条件为提取剂
体积分数95%乙醇溶液、料液比1∶40、提取时间40 min及
提取3 次；并采用质谱仪对用最优工艺提取出的巴旦木青
皮提取物中OA和UA进行了初步的鉴定。
OA和UA为三萜类同分异构体，因结构相似，分离
检测较困难。本实验采用紫外分光光度计对OA和UA在
波长190～400 nm处进行扫描，最终确定波长210 nm为
检测波长。有文献[27]报道采用HPLC分离OA和UA时流动
相通常为甲醇-水和乙腈-水。本实验参考文献[28-29]，
分别考察了甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液、
乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-醋酸溶液等流动相，结
果表明采用甲醇-0.2%磷酸（85∶15，V/V）溶液时分离效
果较好，可能的原因是在流动相中加入一定比例的酸调
节流动相pH值，有助于改善色谱峰峰形，提高目标物的
分离度；进一步对流速和柱温进行考察，结果显示，当
流速为0.8 mL/min、柱温为20 ℃时，OA和UA基本可以
分离，且基线较平稳。
在上述色谱条件下测得巴旦木青皮提取物中的OA和
UA的含量分别为0.101%和0.068%，精密度和准确度均符合
分析要求，重复性好，OA回收率在89.67%～94.85%之间，
RSD在1.28%～3.16%之间；UA回收率在88.67%～94.77%之
间，RSD在1.07%～1.92%之间，表明该方法准确可靠，可
用于巴旦木青皮提取物中OA和UA含量测定。
OA和UA主要存在于木瓜、夏枯草、女贞子等植物
中，主要以游离形式或与糖苷结合的形式存在，二者的
药理活性有所差别，OA是临床治疗慢性病毒性肝炎和黄
疸型肝炎较理想的药物；UA具有多种生物活性；尤其在
抗肿瘤、抗氧化、护肝、降血脂方面的作用显著，通常
利用HPLC对二者分离，使其起到独特的药理作用，欧
洋等[30]采用HPLC对西藏木瓜中OA和UA含量进行测定，
测得木瓜样品中OA、UA的含量分别为0.18%、0.49%。
刘伟等[31]通过HPLC测定了河南夏枯草中OA、UA含量，
测得河南夏枯草中OA和UA含量分别为0.08%和0.31%。
通过与上述文献对比，本实验所建立的测定OA与UA的
HPLC方法与文献中的方法基本一致，同时巴旦木青皮
提取物中OA和UA的含量较高，表明采用本研究建立的
HPLC方法对巴旦木青皮提取物中OA、UA的分离检测有
一定的研究价值。该方法为巴旦木青皮及其中药制剂的
质量标准提供了参考方法和一定的科学依据，同时也为
其他天然产物同类化合物的研究提供了一种借鉴。
参考文献：
[1] 成建红, 侯平, 李疆. 巴旦杏的产业发展及其研究进展[J]. 干旱区研
究, 2000, 17(1): 32-39. DOI:10.13866/j.azr.2000.01.007.
[2] 孙士伟, 张李华. 扁桃的开发价值及栽培技术[J]. 中国新技术新产
品, 2010(10): 228-228. DOI:10.13612/j.cnki.cntp.2010.10.168.
[3] 尤努斯江·吐拉洪, 马木提·库尔班, 木妮热·依布拉音. 巴旦木
的营养保健作用研究进展[J]. 中国食物与营养, 2008(10): 56-58.
DOI:10.3969/j.issn.1006-9577.2008.10.018.
[4] 杨晓君, 韩海霞. 巴旦杏的近代研究[J]. 中国药业, 2009, 18(10): 85-
86. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2009.10.066.
[5] JEONG H G. Inhibition of cytochrome P450 2E1 expressionby
oleanolic acid: hepatoprotective effects against carbon tetrachloride-
induced hepatic injury[J]. Toxicology Letters, 1999, 105(3): 215-222.
DOI:10.1016/S0378-4274(99)00004-1.
[6] UDAYAMA M, OHKAWA M, YOSHIDA N, et al. Structures of
three new oleanene glucuronides isolated from Lathyrus palustris var.
pilosus and hepatoprotective activity[J]. Chemical and Pharmaceutical
Bulletin, 1998, 46(9): 1412-1415. DOI:10.1248/cpb.46.1412.
[7] 王汉屏, 王立志. 木瓜齐墩果酸的研究进展[J]. 食品科学, 2007,
28(10): 621-624. DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2007.10.157.
[8] TEODORO T, ZHANG L, ALEXANDER T, et al. Oleanolic acid
enhances insulin secretion in pancreatic β-cells[J]. FEBS Letters, 2008,
582(9): 1375-1380. DOI:10.1016/j.febslet.2008.03.026.
[9] 张新华, 朱萱. 熊果酸药理学的最新研究进展[J]. 中国中西医结合
杂志, 2011, 31(9): 1285-1289.
[10] OVESNA Z V, ACHALKOVA A, HORVATHOVA K, et al.
Pentacyclic triterpenoic acids: new chemoprotective compounds
minireview[J]. Neoplasma, 2004, 51(5): 327-333.
[11] 张立华, 张元湖, 孙蕾, 等. 鞣花酸和三萜类物质在石榴不同器官中
的分布[J]. 食品科学, 2015, 36(6): 136-139. DOI:10.7506/spkx1002-
6630-201506025.
[12] DU Hui, WU Jie, LI Hui, et al. Polyphenols and triterpenes from
Chaenomeles fruits: chemical analysis and antioxidant activities
assessment[J]. Food Chemistry, 2013, 141(4): 4260-4268. DOI:10.
1016/j.foodchem.2013.06.109.
[13] 严华, 王宝琹, 鲁静. 薄层色谱法分离齐墩果酸和熊果酸[J]. 药
物分析杂志, 2009, 29(12): 2168-2170. DOI:10.16155/j.0254-
1793.2009.12.016.
[14] BANERJEE A, SANE R T, MANGAONKAR K, et al. Quantitation
of oleanolic acid in Oldenlandia corymbosa L. whole-plant powder
by high-performance thin-layer chromatography[J]. Journal of Planar
Chromatograpy, 2006, 19(107): 68-72. DOI:10.1556/JPC.19.2006.1.12
[15] 杨剑芳, 路福平, 黄明勇, 等. 分光光度法测定山茱萸及其保健酒
中三萜酸的含量[J]. 食品科学, 2008, 29(6): 321-323. DOI:10.3321/
j.issn:1002-6630.2008.06.068.
[16] JANICSAK G. Gas chromatographic method for routine determination
of oleanolic and ursolic acids in medicinal plants[J]. Chromatographia,
2003, 58(5/6): 295-300. DOI:10.1365/s10337-003-0058-y.
[17] ZHANG Shijuan. Determination of triterpenic acids in fruits by a
novel high performance liquid chromatography method with high
sensitivity and specificity[J]. Food Chemistry, 2014, 146(1): 264-269.
DOI:10.1016/j.foodchem.2013.09.056.
[18] WU Hongliang. Simultaneous determination of six triterpenic
acids in some Chinese medicinal herbs using ultrasound-assisted
dispersive liquid-liquid microextraction and high-performance
liquid chromatography with fluorescence detection[J]. Journal
of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2015, 107: 98-107.
DOI:10.1016/j.jpba.2014.10.031.
※成分分析 食品科学 2016, Vol.37, No.10 157
[19] YANG Ping, LI Yuqin, LIU Xia, et al. Determination of free isomeric
oleanolic acid and ursolic acid in Pterocephalus hookeri by capillary
zone electrophoresis[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis, 2007, 43(4): 1331-1334. DOI:10.1016/j.jpba.2006.10.042.
[20] 谢越, 俞浩, 汪建飞, 等. 高效液相色谱法同时测定滁菊样品中的9
种酚酸[J]. 分析化学, 2013, 41(3): 383-388.
[21] 黄浩 , 邹盛勤 . 高效液相色谱法测定春根藤中的齐墩果酸和
熊果酸[J]. 光谱实验室, 2012, 29(4): 2023-2026. DOI:10.3969/
j.issn:1004-8138.2012.04.018.
[22] 邹盛勤 , 孙伟 . 反相高效液相色谱法同时测定柿叶中齐墩果
酸和熊果酸[J]. 分析试验室, 2009, 28(4): 18-21. DOI:10.3969/
j.issn:1000-0720.2009.04.005.
[23] 王岱杰, 王晓, 耿岩玲, 等. 反相高效液相色谱测定不同品种皱皮木
瓜中齐墩果酸和熊果酸含量[J]. 食品科学, 2008, 29(10): 497-499.
DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2008.10.118.
[24] 罗智敏, NAVARRO E, 陶燕铎, 等. HPLC-DAD法测定血满草中
熊果酸和齐墩果酸的含量[J]. 天然产物研究与开发, 2011, 23(6):
1095-1098. DOI:10.3969/j.issn.1001-6880.2011.06.026.
[25] FU Quanjuan, ZHANG Lihua, CHENG N, et al. Extraction
optimization of oleanolic and ursolic acids from pomegranate (Punica
granatum L.) flowers[J]. Food and Bioproducts Processing, 2014, 92:
321-327. DOI:10.1016/j.fbp.2012.12.006.
[26] 沈晓丹, 袁杰, 徐乃玉, 等. HPLC测定蓝萼香茶菜中齐墩果酸和
熊果酸的含量[J]. 中成药, 2010, 32(12): 2182-2183. DOI:10.3969/
j.issn.1001-1528.2010.12.047.
[27] 赵永席, 马国营, 梁恒. RP-HPLC-ELSD测定山茱萸中齐墩果酸与
熊果酸的含量[J]. 中成药, 2005, 27(11): 1314-1316. DOI:10.3969/
j.issn.1001-1528.2005.11.027.
[28] WÓJCIAK-KOSIOR M, SOWA I, KOCJAN R, et al. Effect of
different extraction techniques on quantification of oleanolic and
ursolic acid in Lamii albi flos[J]. Industrial Crops and Products, 2013,
44(2): 373-377. DOI:10.1016/j.indcrop.2012.11.018.
[29] WEI Mingchi, YANG Yuchao. Extraction characteristics and
kinetic studies of oleanolic and ursolic acids from Hedyotis diffusa
under ultrasound-assisted extraction conditions[J]. Separation
and Purification Technology, 2014, 130: 182-192. DOI:10.1016/
j.seppur.2014.04.029.
[30] 欧洋, 马静, 张朝阳, 等. 西藏木瓜的鉴别及其齐墩果酸、熊果酸的
测定[J]. 华西药学杂志, 2014, 29(6): 670-672. DOI:10.13375/j.cnki.
wcjps.2014.06.022.
[31] 刘伟 , 丁海杰 . HPLC测定夏枯草中熊果酸、齐墩果酸、迷迭
香酸的含量[J]. 中成药, 2008, 30(4): 577-580. DOI:10.3969/
j.issn.1001-1528.04.033.