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植物生长调节剂对大岩桐离体培养的影响



全 文 :农业生物技术科学
ChineseAgriculturalScienceBuletinVol.24No.32008March
htp:/www.casb.org.cn
大岩桐(Sinninginaspeciosa),又名落雪泥、巴西芙
蓉,为苦苣苔科苦苣苔属多年生肉质草本植物,春末至
秋初开花。原产于南美巴西等国,现已广植于世界各
地。大岩桐花顶生或腋生,花冠钟形,有丝绒感,有红、
蓝色及复色,花色奇特,深受人们喜爱,是重要的花叶
兼赏的小型盆花[1~5]。大岩桐为异花受粉植物,种子量
少,种子繁殖后代难以保持原有的优良性状,具有一定
的局限性[6]。常规繁殖需要较好的温湿条件,繁殖速度
慢,管理养护较困难,而利用组织培养可大大提高繁殖
速度且能保持品种的优良性状。因此利用组织培养手
段对大岩桐进行快繁技术研究,以期为批量生产大岩
桐优质种苗提供科学依据[7~11]。笔者就植物生长调节剂
对大岩桐叶片愈伤组织诱导、试管苗继代增殖及试管
苗生根的影响进行了较全面的研究,以求筛选出离体
培养的最佳植物生长调节剂组合及其配比。
1材料与方法
1.1试验时间、地点
试验于2007年在安徽农业大学林学与园林学院
组培室内进行。
1.2试验材料
选用实验室内生长健壮的大岩桐试管苗为试验材
料。
1.3试验方法
1.3.1叶片愈伤组织诱导 以MS为基本培养基,采用
BA、NAA、IBA、2,4-D4种植物生长调节剂的不同配
比,设计5种培养基配方(表1),探讨诱导效果最佳的
第一作者简介:侯卓婕,女,1984年出生,硕士研究生,研究方向为植物组织培养。通信地址:230036安徽农业大学林学与园林学院。E-mail:
guyu60@126.com。
通讯作者:傅玉兰,女,1944年出生,教授,主要从事花卉培育的教学与科研。通信地址:230036安徽农业大学林学与园林学院花卉研究室。E-mail:
fuyulan@ahau.edu.cn。
收稿日期:2007-01-16,修回日期:2008-01-24。
植物生长调节剂对大岩桐离体培养的影响
侯卓婕,傅玉兰
(安徽农业大学林学与园林学院,合肥230036)
摘 要:以大岩桐(Sinninginaspeciosa)无菌试管苗为试材,进行了叶片愈伤组织诱导培养、试管苗继代
增殖培养和试管苗生根培养的对比实验,以求筛选出离体培养的最佳植物生长调节剂组合及其配比。
结果表明:叶片愈伤组织诱导培养基以 MS+BA1.0mg/L+2.4-D0.1mg/L最有利于愈伤组织生成,而
MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L最有利于不定芽生成;试管苗继代增殖最佳组合为:MS+BA2.
0mg/L+NAA0.5mg/L;生根培养最佳配比为:1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA0.5mg/L。
关键词:大岩桐;诱导愈伤;离体培养;生根
中图分类号:S682.31 文献标示码:A
PlantGrowthHormone’sInfluenceonIsolatedCultureofSinninginaspeciosa
HouZhuojie,FuYulan
(ColegeofForestyandGarden,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036)
Abstract:TheexperimentwasconductedwiththeSinninginaspeciosaaxenictubeplantletstodothecon-
trastiveexperimentsoftheleave’scalusinducement,tubeplantlets’multiplicationandrootcultivation,to
investigatethebestcombinationandmatchofplantgrowthhormoneinisolatedculture.Theresultsshowed
thattheoptionalmediumswereMS+BA1.0mg/L+2.4-D0.1mg/Lintheleave’scalusinducement;MS+BA
1.0mg/L+NAA0.1mg/Lintheadventivebuds’formation;MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/Lintheadventive
bud;1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA0.5mg/Lintherootcultivation.
Keywords:Sinninginaspeciosa,Inductivecalus,Isolatedculture,Rootcultivation
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农业生物技术科学
中国农学通报 第24卷 第3期 2008年 3月
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植物生长调节剂配比。在无菌条件下取试管苗上部叶
片,切成 5mm×5mm小块,叶面朝上,平铺于培养基
上,每组9瓶,每瓶3片,重复3次。40d后统计愈伤组
织和不定芽的发生及生长状况。
1.3.2继代增殖培养 以MS为基本培养基,采用BA、
NAA两种植物生长调节剂的不同配比,设计6种培养
基配方(表2),筛选继代增殖培养基的最佳激素配比。在
无菌条件下将无菌试管芽苗基部切去,茎顶端留有2片
小叶,长度约1~1.5cm,接种于培养基上,每组9瓶,每
瓶2株,重复3次。培养60d后对新生侧芽数、侧芽高、
侧芽粗度、叶色、4项指标进行观测,统计其增殖状况。
1.3.3试管苗生根培养 以1/2MS为基本培养基,采用
IBA、NAA两种植物生长调节剂的不同配比,设计6组
培养基配方(表3),探讨培养基中最适植物生长调节
剂配比。挑选出生长健壮、整齐一致的试管苗,将其基
部切去,均保留为高约2cm,转入生根培养基中,每组
9瓶,每瓶1株,重复3次。培养45d后统计试管苗的
根数、根长等指标。
2结果与分析
2.1植物生长调节剂对叶片愈伤组织诱导和不定芽形
成的影响
在叶片接种后每3d观察1次。接种于培养基上的
叶片约1周后切口处开始膨大,2周后出现淡绿色颗
粒状愈伤组织。随着愈伤组织的生长,3周后在其表面
陆续分化出一些淡绿色的芽点,随后由芽点陆续生长
出不定芽,见图1、2。40d后对愈伤组织面积、愈伤组织
发生率、新生不定芽数、不定芽高、不定芽产生率、整体
生长状况6项指标进行观测,结果见表4。
如表4可知,4-4组的叶片生成的愈伤组织面积最
大,达16.89mm2,愈伤组织发生率也最高,为89%;其
试验组 基本培养基
植物生长调节剂浓度/(mg·L-1)
表1大岩桐叶片愈伤组织诱导培养基配方
注:糖30g/L,琼脂7.5g/L,pH=5.8,温度为(25±2)℃,光照时间为12h/d。
BA
2
1
1
1
2
NAA
0.2
0.1
/
/
/
IBA
/
/
0.1
/
/
2.4-D
/
/
/
0.1
0.5
MS
MS
MS
MS
MS
1-1
1-2
1-3
1-4
1-5
试验组 基本培养基
植物生长调节剂浓度/(mg·L-1)
表2大岩桐试管苗继代增殖培养基配方
注:糖30g/L,琼脂7.5g/L,pH=5.8,温度为(25±2)℃,光照时间为12h/d。
BA
1
1
2
2
2
3
NAA
0.1
0.2
0.5
0.2
0.3
0.2
MS
MS
MS
MS
MS
MS
2-1
2-2
2-3
2-4
2-5
2-6
表3大岩桐诱导生根培养基配方
注:糖30g/L,琼脂7.5g/L,pH=5.8,温度为(25±2)℃,光照时间为12h/d。
试验组 基本培养基
植物生长调节剂浓度/(mg·L-1)
NAA
0.5
1.0
/
/
0.5
1.0
IBA
/
/
0.5
1.0
0.5
0.5
1/2MS
1/2MS
1/2MS
1/2MS
1/2MS
1/2MS
3-1
3-2
3-3
3-4
3-5
3-6
注:优:3片叶片均有愈伤,良:1-2片叶片有愈伤,差:3片叶片均没有愈伤。
试验组
实验材料数
/个
愈伤组织 不定芽
整体生长状况
表4植物生长调节剂对愈伤组织和不定芽形成的影响
愈伤组织面积/mm2
4.67
4.78
6
16.89
2.44
愈伤组织发生率/%
65
66
67
89
22
27
27
27
27
27
4-1
4-2
4-3
4-4
4-5
优~良




不定芽产生率/%
78
89
55
11
11
不定芽高/mm
2.50
4.39
2.89
0.17
0.56
不定芽数/个
4.67
5.00
3.67
0.33
0.78
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ChineseAgriculturalScienceBuletinVol.24No.32008March
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次为4-3组,叶片生成的愈伤组织面积为6mm2,愈伤
组织发生率为67%。另外,由4-2组、4-3组、4-4组的
结果可看出,当BA浓度不变时,2,4-D较NAA和IBA
更有利于愈伤组织诱导,同时还可发现,IBA较NAA
有利于愈伤组织的诱导。
就不定芽来说,4-2组的愈伤组织产生的不定芽数
最多,达5个,不定芽高及产生率均为最高,分别为
4.39mm、89%;其次为 4-1组,不定芽数为 4.67个,不
定芽高及产生率分别为2.50mm和78%。由4-2组,
4-3组的结果可看出,当BA浓度不变,NAA较IBA更
有利于愈伤组织产生不定芽。
2.2植物生长调节剂对试管苗继代增殖和生长的影响
继代培养后每3d观察1次,60d后对每瓶新生侧
芽数、侧芽高、侧芽粗度、叶色、4项指标进行观测,统
计出增殖倍数。结果如表5所示。
植物生长调节剂种类及其浓度对继代增殖及生长
的影响较显著,见图3、4。如表5所示,5-3组增殖倍数
最高,达13.06倍,侧芽高度及侧芽茎粗均为最大,分
别为26.7mm和1.45mm。其次为5-2组,增殖倍数为
11.78倍,侧芽高为14mm,侧芽茎粗为 1.15mm,均明
显优于其他各组。效果最差的是5-5组培养基,增殖倍
数最低,只有4.5倍,侧芽高度及侧芽茎粗均为最低,
分别为8.5mm和0.85mm。另外,由5-2组,5-4组,5-6
组的结果可以看出,在BA和NAA组合中,当NAA
浓度不变时,增殖倍数随BA浓度升高而降低,当浓度
为 1.0mg/L时,增殖可高达 11.78倍,当 BA为
3.0mg/L时,增殖倍数反而下降至6.17倍,其侧芽茎粗
也偏低,平均高度仅为1.05mm。
表5植物生长调节剂对试管苗继代增殖和生长的影响
图1 图2 图3
图4 图5 图6
试验组
5-1
5-2
5-3
5-4
5-5
5-6
新生侧芽/个
15.56
21.56
24.12
15.66
7.0
10.34
侧芽高/mm
11.6
14
26.7
12.4
8.5
9.4
侧芽茎粗/mm
1.45
1.15
1.45
1.1
0.85
1.05
整体叶色
浅绿
深绿
深绿
深绿
深绿
浅绿
增殖倍数
8.78
11.78
13.06
8.83
4.5
6.17
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农业生物技术科学
中国农学通报 第24卷 第3期 2008年 3月
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2.3植物生长调节剂对大岩桐试管苗生根的影响
生根培养后每3d观察1次,45d后对生根培养苗
的株高、根数、根长、叶色、4项指标进行统计,结果见
表6。
由表 6可知,6-6组试管苗长出的根最长,为
7.1mm,根数多,见图 5、6,其次为6-5组,根长为
4.3mm,根数多。效果最差的是6-1组培养基,根长最
小,只有1.4mm,株高、根数、叶色均不佳。另外,由6-1
组,6-2组结果可看出,NAA1.0mg/L较NAA0.5mg/L
更有利于生根,且叶色更健康,状态更佳。由6-3组,
6-4组结果可看出,IBA的浓度为0.5mg/L和1.0mg/L
时,结果只是在株高上有些区别,其他状况大致相同。
由6-5组,6-6组结果可看出,当IBA浓度不变时,苗
的株高、根数、根长随NAA浓度的升高而增加。由6-1
组和 6-5组结果对比可看出,NAA浓度为 0.5mg/L
时,加IBA0.5mg/L较有利于生根,由6-2组和6-6组
结果也可得出相同结论。
3讨论
在培养中发现小部分的试管苗在接种后出现了生
长缓慢长势弱的类似休眠的现象,这与周根余[12]等报
道的休眠现象是一致的。这有可能与外植体的活性有
关,所取部位、叶龄、以及灭菌过程都有可能影响外植
体细胞和组织的分化和生长,其确切的机理和原因有
待于进一步研究。
4结论
大岩桐叶片愈伤组织诱导培养基以MS+BA1.0mg/L+
2,4-D0.1mg/L最有利于愈 伤组 织 生 成 ,MS+BA
1.0mg/L+NAA0.1mg/L最有利于不定芽的生成。继代
增殖培养基配方以MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L最
佳,试管苗不仅新生侧芽多,且高而健壮,利于出瓶移
栽。生根培养基以1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA0.5mg/L
最有利于根的生长。
参考文献
[1] 卢聪.室内盆栽花卉.北京:金盾出版社,1991:107-109.
[2] 王耘.玲珑娇巧的大岩桐.中国花卉盆景,2003,(3):30.
[3] 邓国文,大岩桐.中国花卉盆景,2005,(3):19.
[4] 何惠英,兰芹英.大岩桐的繁殖方法.广西农业生物科学,2003,22(1),
35-37.
[5] 周钟信,李建科,朱惠珍,等.大岩桐开花生物学的观察级快速繁殖
技术的研究.天津农学院学报,1998,5(2):1-8.
[6] 王鸿鹤,葛欣,徐启江,等.秋水仙碱诱导重瓣大岩桐多倍体的研究.
热带亚热带植物学报,1999,7(3):237-242.
[7] 曹桂萍,王建美.大岩桐的组织培养与快速繁殖研究.山东农业科
学,2002,(5):16-22.
[8] 赵秀芳,胨景秀.大岩桐的组织培养技术.林业科技通讯,2001,(2):
44.
[9] 陈家银,朱鹿鸣.大岩桐愈伤组织的诱导和植株再生.植物生理学通
迅,1990,26(3):46.
[10] 杜启兰,赵秀芳.大岩桐的组织培养技术.山东林业科技,2000,(2):
41-42.
[11] 杨振堂,胡桂珍.重瓣大岩桐的组织培养与快速繁殖.植物生理学通
讯,1997,33(1):41-42.
[12] 周根余,周卫华,程磊.大岩桐组培中休眠现象的初步研究.上海农
业学报,2000,16(2):69-72.
表6植物生长调节剂对试管苗生根影响
注:统计方法:少:<5根,中:5-10根,多:>10根。
试验组
6-1
6-2
6-3
6-4
6-5
6-6
株高/mm
41
46
60
46
67
58
根数






根长/mm
1.4
3.3
1.7
1.6
4.3
7.1
叶色
黄色
浅绿
浅绿
浅绿
深绿
深绿
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