全 文 ：AC T A U N VI ER S IT A T IS T l七DA IT IO N IS M ED IC AL IS S INE N S IS PH从 M A CO LO G IAE QUE- S HA N G H A I V o l. 23 N o . l Jan 20() 9
刺山柑果实醇提物及不同萃取部位的
抗炎与镇痛活性研究
杨 涛 , ,2 于富生 , 王长虹 , ,2 王峥涛 , , ,
1
. 上海中医药大学中药研究所 ,中药标准化教育部重点实验室 (上海 201 2 10 )
2
. 上海中药标准化研究中心 (上海 20 121 0)
3
. 新疆华世丹药物研究有限公司 (新疆 乌鲁木齐 83 0 11)
【摘 要 1 目的 :对刺山柑果实乙醇提取物及不同萃取部位的抗炎与镇痛活性部位进行筛选。 方法 : 采用
乙醇对刺山柑进行提取制备总提取物 ,用水溶解后分别用石油醚 、乙酸乙醋进行萃取得到石油醚部位 、 乙
酸乙醋部位和水溶性部位 。 以阿斯匹林为阳性对照药 ,分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 、小鼠腹腔毛
细血管通透性实验 、热板法镇痛实验和醋酸扭体镇痛实验进行抗炎镇痛活性部位进行筛选 。 结果 : 结果显
示乙酸乙醋部位和水溶性部位对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用 ; 乙酸乙醋部位对小鼠毛细血管通
透性有明显抑制作用 ;乙酸乙醋部位和石油醚部位可显著提高小鼠热板痛阂值 ,而乙酸乙醋部位和水溶性
部位则能明显减少醋酸所致小鼠扭体次数。 结论 :刺山柑果实具有潜在的抗炎和镇痛作用。
【关键词】 刺山柑 ;抗炎 ;镇痛
[中图分类号 1 咫 85 . 5 [文献标志码 I A [文章编号 1 一0() 8一86 l X ( 20() 9 ) 0 1拍3 8秘
刺山柑 ( 公2子p a isr 胡 in o s a L . )为白花菜科 ( C a p p a r i -
da ce ae ) 山柑 属 ( 6 2尸尸a isr )植物 , 又 名野西瓜 、 老鼠
瓜 、褪果藤 、 菠里克果 ( 维名 ) , 主要分布于新疆 、 甘
肃 、西藏等地 。 其叶 、 果和根皮人药 , 味辛苦 , 性温 ,
具有祛风散寒 、除湿 、 镇痛 、 消肿的功效 ,外敷患处可
治疗风湿类关节炎 , 在新疆 民间广泛用于抗风湿 , 有
祛风 、 散寒 、 除湿 的作用 i `〕 , 治疗痛风有效率为
9 0%
, 风湿性关节炎为 6 0% 礼’ 石〕。 T r o m b e t t。 等仁6 〕报道
刺山柑花蕾的常温和 60 ℃ 甲醇提取物能拮抗由抗原
刺激所致的豚鼠的支气管痉挛 , 显著降低由组胺引
起的支气管痉挛 。 拮抗作用可能是抑制肥大细胞和
花生四烯酸代谢物的释放或直接的抗组胺作用 。 aP -
in c 。 等 〔’ 〕观察了刺山柑花蕾的甲醇提取物能降低白
细胞介素一 l p ( IL 一 l p )刺激人软骨细胞引起的炎症反
应 , 能显著拮抗 IL 一 l p 对软骨细胞的损伤 , 比叫噪美
辛的作用强 。 A ge el A M 等〔8 {研究发现刺山柑果实的
水提物对角叉菜胶诱发的大鼠足趾炎症反应具有明
显的消肿作用 ,同时具有一定的退热作用 , 但无镇痛
作用 。 近年来研究还发现刺山柑具有降血糖 、降血
脂和保肝等作用 〔9一 , ’ 〕。 对刺山柑的化学成分进行研
究主要含有硫昔类 、黄酮类 、 生物碱类 、挥发 油类以
及脂肪酸类等〔 ,` 一 ,` 〕 。 鉴于刺山柑中的抗炎活性成分
仍未明确 , 本研究利用系统溶剂萃取法将 85 % 乙醇
回提取液按极性不 同进行分离 , 进行镇痛和抗炎活
性部位的筛选 ,为刺山柑有效成分分离提供指导 。
!基金项目〕 上海市教委科研基金资助项 目 ( 05 c z 3 1 ) ; 上
海市重点学科建设资助项 目 ( Yo 301 )
[作者简介〕 杨涛 ( 19 79 一 ) ,男 ,湖北天门人 ,在读博士生 ,
主要从事中药药效物质基础与质量标准研究。
〔通讯作者 ] 王长虹 ,教授 , 硕士生导师。
E
一
m a i l
: w e h e x m @ 163
.
e o m
1 材料与方法
1
.
1 材料
1
.
1
.
1 动物 SF G 级昆明种小鼠 , 体质量 ( 20 士 2) 9 ,
共 4 0 只 ,均由上海中医药大学实验动物中心提供 ,合
格证号 : S CXK (沪 ) 2 00 7 一2X() 5 。
1
.
1
.
2 药材与试剂 刺山柑成熟果实 ,采自新疆 ,经
王长虹研究员鉴定为白花菜科山柑属植物刺山柑
( 。 明尸a ir s 胡 i n o s a L . ) 的果 实 。 阿司 匹 林 ( A s p iir n ,
AS P )
,
-IJ 东新华制药股份有限公司 (批号 : 0 60 1 10 4 ) :
生理盐水 ( N or m al s al ne , N S ) ,上海华源长富药业有限
公司 。 冰醋酸 、二甲苯 、 伊文思兰等其他试剂均为市售
分析纯 。
1
.
1
.
3 仪器 Y L S一 B 智能热板仪 , 山东省医学科学
院设备站提供 ; 7 52 紫外可见分光光度计 ,上海精密科
上海中医药大学学报 第 2 3卷 第 1期 2 9 00年 1月
学仪器有限公司提供 ;BZ S0 1分析天平 , Sart ior us 公司 。
1
.
2 供试品溶液的制备 取药材 1 . 5 k g ,粉碎成粗
粉 ,加人 6 倍量 85 % 乙醇回流提取 3 次 ,每次 3 h ,合并
提取液 ,减压浓缩 ,冷冻干燥成乙醇总提取物 ( CT , 2 . 4
k g )
。 取 c (T 1 . 87 kg )用水溶解后 ,先后分别用石油醚
和乙酸乙醋萃取 3 次 ,所得萃取液合并后 , 减压浓缩并
干燥 ,得石油醚部位 ( CP , 10 0 9 )和乙酸乙醋部位 ( C E ,
60 9 )
。 剩余的水溶液部分减压浓缩后冷冻干燥得水
溶性部位 ( CW , 1 . 67 kg ) 。 分别取各部位用水配制以
下浓度药液备用 : CT 一 H ( 0 . 13 1 9/ 耐 ) , C T 一 L ( 0 . 0 66 酬
m l ) ; CE
一
H ( 0
.
004 3 酬m l ) , C E一 L ( 0 . 0 0 2 酬 m l ) ; CW 一 H
( 0
.
1 22 岁m l ) , CW一 L ( 0 . 06 0 岁耐 ) ; CP 一H ( 0 . 0 07 6 岁
m l )
,
C P
一
L ( 0
.
0 0 3 7 酬m l ) 。 溶解时 , CE 和 C p 部分采
用 1% 的吐温 一80 水溶液溶解 , 其余均用 0 . 9% NaC I
( N S )溶解 。
称取 A sP 1 . 0 9 于 250 耐 的容量瓶中 ,加蒸馏水
溶解 ,定容至刻度 ,配成浓度为 0 . 004 酬 iln 的溶液 ,作
为阳性对照药 。 给药剂量 :经急性毒性实验测定刺山
柑乙醇总提取物的半数致死量 ( DL 50 ) 为 15 4 . 3 岁k g
(当于原药材 ) 。 乙醇总提取物按 L D S。的 1l/ 0 和 1/ 20
给药 ,其余各部分均按所占浸膏的比例计算其给药量 。
1
.
3 杭炎实验
1
.
3
.
1 二甲苯致小鼠耳郭肿胀实验〔” 〕 取雄性小
鼠 10 0 只 ,称重标记后随机分为 10 组 , 分别按高 、低
2 个剂量分为 CT 一 H 和 C T 一 L 、 CE 一H 和 C E一 L 、 C P 一H 和
CP
一
L
、
CW
一
H 和 CW 一 L 实验组及空 白对照组 ( N )S 和阳
性对照组 ( A SP ) 。 各实验组分别按 CT 一H 3 . 2 80 岁kg 、
C T
一
L 1
.
6 40 岁 k g 、 CE一 H 0 . 10 8 岁k g 、 C E 一 L 0 . 0 5 4 酬 kg 、
CW
一
H 0
.
19 0 岁k g 、 CW 一 L 0 . 0 9 5 酬k g 、 C P一 H 3 . 00 酬
k g
、
C p
一
L I
.
50 o 群 kg 剂量灌胃给药 ( 0 . 2 m F l o g 体
重 ) , 阳性对照组给予 A S P 0 . 0 80 留 kg , 空白对照组给
予相同体积的 N S。 每天 l 次 , 连续给药 7 d 。 分别于
末次给药 l h 后 ,将 30 讨 二甲苯均匀涂布于小鼠右
耳 ,左耳不涂作为对照 。 致炎 20 m in 后 ,脱颈椎处死
小鼠 ,剪下左右两耳片 ,用直径 8 m m 的打孔器冲下左
右耳郭 ,分别在电子天平上称重 ,左右耳片重量之差为
肿胀度 ,计算各实验肿胀抑制率 (% ) = 「(致炎耳片
重 一未致炎耳片重 ) /未致炎耳片重 」x 10 0% 。
1
.
3
.
2 小鼠腹腔毛细血管通透性实验 〔” 】 取小鼠
10 0 只 ,雌雄各半 ,称重标记后随机分为 10 组 , 每组 10
只 。 实验分组及给药剂量和方法与二甲苯致小鼠耳郭
肿胀实验相同 。 分别于末次给药 l h 后 , 尾静脉注射
0
.
5% 伊文思兰 0 . 1 m l / or g ,立即腹腔注射 0 . 6% 醋酸
溶液 0 . 3 11 11/ 只 。 20 m in 后 , 脱颈椎处死小鼠 ,剪开腹
腔 ,用 5 而 0 . 9% Nac l 溶液 ( N )S 冲洗腹腔数次 , 收集
洗涤液于 5 耐 量瓶中 ,用 N S定容至刻度 , 3 0 0 r/ m in
离心 5 m in , 以 NS 为空白 ,用 7 5 2 型分光光度计于 608
n m 波长处测定上清液的吸收度 ( O D 值 ) ,记录结果 ,
按下式计算毛细血管通透性抑制率 。 毛细血管通透性
抑制率 (% ) 二 仁(空白对照组 O D 值一实验组 OD 值 ) /
空白对照组 OD 值 ] x lOO% 。
1
.
4 镇痛实验
1
.
4
.
1 热板法实验〔’ 6 〕 取雌性小鼠若干 ,于正式实
验前先逐 只用 Y LS石B 智能热板仪 (温度调至 5 土
0
.
5℃ )进行筛选 。 筛选时每次取小鼠 1 只 ,记录小鼠
足底接触热板至舔后足所需时间 ( , ,热板反应潜伏期 )
作为痛阑指标 (共测定 2 次 ,求出 2 次测定的平均值 ) ,
先剔除反应潜伏期大于 30 5 的或小于 5 5 的反应迟钝
或过敏的小鼠。 将筛选合格的动物 (由 150 只小鼠筛
选出合格动物 10 0 只 )随机分为 10 组 , 每组 or 只 ,称
重后标记 。 实验分组及给药剂量和方法与二甲苯致小
鼠耳郭肿胀实验相同。 分别于末次给药后 30 、 60 、 90 、
120 m in 按上述基础痛阂值测定法分别测定痛闭值 ,如
痛阂超过 60 5 , 即停止测试而按 60 5 计 , 以免烫伤足
部。 按下式计算其痛阂提高百分率。 痛阂提高百分率
( % )
= 〔(给药后平均痛闽值一给药前平均痛阂值 ) / 给
药前平均痛阑值 ] x 10 % 。
1
.
4
.
2 醋酸扭体法实验 [ ’ 6 1 取小鼠 10 只 ,雌雄各
半 ,称重标记后随机分为 10 组 ,每组 or 只 。 实验分组及
给药剂量和方法与二甲苯致小鼠耳郭肿胀实验相同。
分别于末次给药后 l h ,腹腔注身扣 . 6%醋酸溶液 0 . l rn l /
or g (醋酸溶液临用前配制 ) , 5 而 n 后观察并记录 巧
m in 内出现扭体反应 (腹部收缩内凹 ,伸展后肢 , 臀部抬
高 ,蠕行 )的次数 ,按下式计算扭体反应抑制率 。 扭体
反应抑制率 ( % ) 二 [ (对照组平均扭体次数一给药组平
均扭体次数 ) /对照组平均扭体次数〕 x 10 % 。
1
.
5 统计学方法 实验数据采用 SPS S or . 0 软件包
进行统计学处理 ,实验数据进行 t检验分析 。
2 结果
2
.
1 抗炎实验结果
2
.
1
.
1 二 甲苯致小鼠耳郭肿胀实验结果 刺山柑
不同提取部位对二 甲苯致小 鼠耳郭肿胀的影响 ,如表
1所示 。 经 t 检验分析可见 , 阳性对照药 A SP 、 乙酸乙
醋部位和水溶性部位与空白对照 N S 组相比 ,对二甲苯
致小鼠耳廓肿胀的抑制率的差异具有统计学意义 ( 尸
< o
,
05 或 尸 < 0 . 0 1 ) ,石油醚部位和乙醇总提物也表现
出一定的抑制作用 ( 尸 < 0 . 05 ) 。
40A A U C T NIS V R ET IA T IA S D R T T IS O I I NM ED ICA L IS S IL E N NS IS pH A A M RC OL O G IA EQU ESH A NGH A V I
o l
.
23 No
.
IJa n
,
2X() 9
表 1 刺山柑不同提取部位对二 甲苯致 小鼠耳郭肿
胀的影响 (无士 、 )
表 2 刺山柑不同提取部位对小鼠毛细管通透性的
影响 ( 无土 s )
n一81098
圭￡一-.K一n入石J斗1工ré0nUO户利红/02615
(
一nU,、l八ǎ日气、ICùn组别 剂量
(岁 kg ) 肿胀度 (
g ) 抑制率 (% ) O D值 抑制率 ( % )
勺ó,`尹乃一nU只ùn两ù
/丘民.60.8王叭么
内j,`一气`1.1,,.`i
N S / 10 0
.
0 1 8 士 0
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.
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.
2
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一
L
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64
0
.
11
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.
0 14 士 0 . 0 0 6 *
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.
0 13 土 0
.
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0 12 士 0 . 00 4 * 中
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.
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.
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.
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.
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2 5
.
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.
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.
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.
8
组别
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一
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0
.
4 6 2 土 0 . 0 99
0
.
2 86
土 0
.
102
巾
0
.
34 6
土 0 . 14
0
.
33 9
士 0 . 120
0
.
3 2 3 士 0
.
14 1
*
0
.
3 7 9 士 0
.
2 15
0
.
3 9 8 土 0
.
1 11
0
.
37 1 土 0
.
17 1
0
.
4 0 6 士 0
.
13 3
0
.
4 3 6 士 0
.
12 6 5
.
6
29
.
5
3 2
.
2
2 3
.
5
24
.
0
2
.
2 镇痛实验结果
2
.
2
.
1 热板法镇痛实验结果 刺山柑不同提取部位
对小鼠热板法镇痛实验痛阂的影响 ,如表 3 所示 。 以
痛阑提高百分率大于 50 % 时有镇痛效力来说 ,乙醇总
提物 、 乙酸乙醋部位和石油醚部位的高 、低剂量组均能
明显提高小鼠热板法实验的痛阂 (痛阂提高百分率 >
5 0% )
,并且随着作用时间的延长 ,镇痛作用有增强的
趋势 ,表现出较好的镇痛效果 。 而水溶性部位的痛阑
提高百分率虽然也大于 50 % ,但相比之下作用较其它
部位弱 。 除 C P一 H 以外 , 其他部位均显示一定的镇痛
作用 ,而且起效快 , 30 m in 即表现出镇痛作用 , 且持续
时间比较长 ,在 12 0 m in 时还表现有明显的镇痛作用 。
0on
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n
àù11月`, .1
J
I
3
.
0
CP
一
H
1
.
50
0
.
19
C P
一
L 0
.
10
注 :与 NS 组比较 , * 尸 < 0 . 05 , * 尸 < 0 . 01 。 下同。
2
.
1
.
2 小鼠腹腔毛细血管通透性实验结果 刺山
柑不同提取部位对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 ,
如表 2 所示 。 经 t 检验分析可见 ,刺山柑果实乙醇提
取物的乙酸乙醋部位高剂量组和阳性对照 A S P 组对
小鼠腹腔毛细血管通透性的抑制作用与空白对照 N S
组比较有显著性差异 (尸 < 0 . 05 ) 。
表 3 刺山柑不同提取部位对不同时间段小鼠痛阂及痛阂提高率的影响 (无士 、 )
组别 剂量 (岁 kg ) 给药前痛阂 ( s )
痛闭 ( s )及痛域提高率 (% )
3 0m in 6 0 m in 90 而 n 12 0 而 n
N S
A S P
CT
一
H
C T
一
L
CE
一
H
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一
L
已W一 H
CW
一
L
C P
一
H
CP
一
L
14
.
1 士 2 . 0
10
.
5 士 3 . 1
13
.
6 士 3 . 3
10
.
3 士 2
.
0
12
.
5 士 4
.
3
10
.
4 士 2 . 7
13
.
2 士 4
.
8
13
.
0 士 3
.
8
10
.
7 士 4
.
9
10
.
4 士 1
.
9
16
.
4 土 5
.
6 ( 16
.
6 )
2 1
.
0 士 10 . 3 ( 10 0
.
4 )
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2 8
.
2 士 8
.
8 ( 10 7
.
4 )
* .
2 1
.
6 土 9
,
9 ( 10 9
.
5 )
申
2 9
.
2 士 16 . 5 ( 13 2
.
9 )
.
17
.
9 士 4 . 3 ( 7 1
.
7 )
,
2 3
.
4 士 15 . 4 ( 7 8
.
0 )
19
.
5 士 5 . 8 ( 5 0
.
1 )
16
.
7 士4 . 6 ( 5 6
.
5 )
16
.
5 土4 . 8 ( 5 7
.
6 )
18
.
4 土 6 . 8 ( 30
.
5 )
2 0
.
3 士 9
.
5 ( 9 3
.
7 )
2 6
,
7 士 16
.
8 ( 9 6
.
5 )
2 6
.
0 士 12 . 4 ( 15 2
,
5 )
3 2
.
9 士 16 . 4 ( 16 2
.
4 )
16
.
2 士 3 . 6 ( 5 5
.
7 )
19
.
1 士 1 1 . 0 ( 4 5
.
6 )
13
.
6 士 2
.
9 ( 4
.
6 )
2 1
.
5 士 14 . 2 ( 10 1
.
6 )
2 6
.
4 士 18 . 9 ( 15 2
.
9 )
18
.
6 士 11 . 4 ( 3 1
.
6 )
2 2
.
0 士 15 . 1 ( 109
.
8 )
2 8
.
3 士 16 . 4 ( 10 8
.
1 )
25
.
6 土 13 . 0 ( 14 8
.
6 )
29
.
4 士 16
.
3 ( 13 4
.
9 )
18
.
7 土 4 . 1 ( 7 9
.
4 )
20
.
0 士 1 1
.
3 ( 5 2
.
5 )
14
.
6 士 5
.
6 ( 12
.
4 )
2 3
.
8 士 19
.
3 ( 12 3
.
3 )
24
.
4 土 13 . 6 ( 13 3
.
2 )
14
.
5 士 5 . 8 ( 2
.
7 )
2 0
.
9 士 14 . 9 (9 9
.
4 )
’
3 4
.
0 士 18 . 3 ( 15 0
.
1 )
* 咖
3 6
.
4 士 17
.
0 ( 25 3
.
6 ) ”
3 4
.
1 土 12 . 8 ( 17 1
.
8 )
* 率
2 2
.
0 士 6
.
0 ( 1 10
.
8 )
市 ’
2 2
.
8 士 9 . 4 ( 7 3
.
2 )
.
2 2
.
7 土 1 1 . 9 ( 7 4
.
2 )
2 7
.
2 土 18 . 1 ( 155
.
0 )
*
2 5
.
9 士 17 . 7 ( 14 7
.
8 )
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J,1, .L. l曰l
注 :括号内数字为痛阀提高百分率 (% ) 。
2
.
2
.
2 扭体反应实验结果 刺山柑不同提取部位对
醋酸扭体反应的镇痛实验的影响 ,如表 4 所示 。 从表 4
可以看出 ,乙醇总提物 、石油醚部位 、 乙酸乙醋部位和
水溶性部位均可以明显减少醋酸注人腹腔内引起的脏
层和壁层腹膜较大面积 、较长时间的炎性疼痛 ,其中乙
醇总提物的高剂量组和水溶性部位的高剂量组的镇痛
效果最好 。
表 4 刺山柑不同部位对醋酸致 小鼠扭体反应的影
响 (无士 、 )
组别 剂量盯 k只)
3 讨论
本实验研究针对刺山柑果实的乙醇总提物以及不
N S /
A S P 0
.
0 8
C T
一
H 3
.
2 8
CT
一
L 1
.
64
C E
一
H 0
.
1 1
CE
一
L 0
.
0 5
CW
一
H 3
.
0
CW
一
L 1
.
5 0
C P
一
H 0
.
19
C P
一
L 0
.
10
扭体次数 (次 )
3 8
.
9 士 14 . 2
2 8
.
0 土 7
.
5
.
2 5
.
1 土 6
.
8
晰
2 8
.
9 上 9
.
5
27
.
3 土 9
.
9
,
2 6
.
5 上 16 . 2 率
2 5
.
2 土 11 7 率
2 8
.
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.
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申
2 5
.
2 士 11 . 1 申
33
.
0 上 5
.
3
抑制率 (% )
上海中医药大学学报 第 23 卷 第 1期 2 00 9年 1月 · 4 1
同极性的萃取部位进行了初步的抗炎 、镇痛活性筛选 ,
结果表明刺山柑果实具有一定的抗炎和镇痛的作用 。
二甲苯致小鼠耳郭肿胀实验和小鼠腹腔毛细血管通透
性实验结果表明 ,刺山柑的抗炎活性部位主要集中在
乙酸乙醋部位和水溶性部位 。
热板法和醋酸所致扭体实验是两种用于镇痛药初
筛的常用方法。 热板法实验比较适合评价有高位中枢参
与的镇痛作用 ,而醋酸扭体法比较适合具有外周镇痛作
用机制药物的筛选〔’ 6〕 。 实验结果表明 ,刺山柑果实乙醇
总提物及其石油醚和乙酸乙酷萃取部位具有一定的中枢
性镇痛活性 ,而乙醇总提物及其乙酸乙醋部位和水溶性
部位具有一定的外周性镇痛活性 。 这可能与石油醚和乙
酸乙酷部位的成分具有较强的脂溶性 , 口服吸收后易于
通过血脑屏障而发挥中枢性镇痛作用 。
综合分析 ,以乙酸乙醋部位和水溶性部位的抗炎 、镇
痛效果较为显著。 表明刺山柑果实具有潜在抗炎与镇痛
作用 。 活性部位的确定为目标化合物的分离 、 制备和疗
效评价提供了一定的理论依据 。 但实验中的量一效关系
反映不明显 ,有待于在后期的实验中进行剂量调整。
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编辑 : 季春来
收稿日期 : 2X() 8习 3一 19
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