全 文 ：收稿日期:2014 － 11 － 27;修回日期:2014 － 12 － 08
基金项目:农业部“十二五”公益性行业(农业)科研专项(20
1203062)
作者简介:刘晓学(1984 －)，男，硕士研究生，研究方向为动物
中毒病与毒理学，550597881@ qq． com．
通信作者:赵宝玉(1964 －)，男，教授，博士，研究方向为动物
中毒病与毒理学研究，zhaobaoyu12005@ 163． com．
西藏瑞香狼毒总黄酮和总生物碱
含量测定
刘晓学1，马青成2，严杜建3，吴晨晨1，王建国1，赵宝玉1，马 烽1，冯 柯1
(1．西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100;2．内蒙古阿拉善左旗吉兰泰镇动监站，
内蒙古 阿拉善 750300;3．阿克苏职业技术学院，新疆 阿克苏 843000)
中图分类号:S859． 81 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2015)07 － 0126 － 03
关键词:西藏;瑞香狼毒;总黄酮;总生物碱;含量测定
摘 要:为了研究西藏瑞香狼毒的药用开发与综合利用，试验采用荧光分光光度法和非水滴定法对西
藏天然草原主要有毒植物瑞香狼毒不同物候期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定。结果
表明:瑞香狼毒花前期、花期和花果期总黄酮含量分别为 0． 410%、0． 445%和 0． 471%;总生物碱含量
分别为 0． 255%、0． 308%和 0． 368%。说明瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期 ＞花期 ＞花前期，
花果期是瑞香狼毒药用开发的较好时期。
Determination of the contents of total flavonoids and total alkaloids of
Stellera chamaejasme in Tibet
LIU Xiao － xue1，MA Qing － cheng2，YAN Du － jian3，WU Chen － chen1，WANG Jian － guo1，
ZHAO Bao － yu1，MA Feng1，FENG Ke1
(1． College of Veterinary Medicine，Northwest A＆F University，Yangling 712100，China;2． Animal Health Supervision Station at the
Jilantai town in Alashan Zuoqi of Inner Mongolia，Alashan 750300，China;3． Aksu Vocational and Technical College，Aksu 843000，China)
Key words:Tibet;Stellera chamaejasme;total flavonoids;total alkaloids;content determination
Abstract:To study the exploitation and utilization of medicinal Stellera chamaejasme in Tibet，the fluorescence spectrophotometry and non － a-
queous titration method were used to detect the contents of total flavonoids and total alkaloids from the aboveground part of Stellera chamaejasme，
which was a major poisonous plant from the natural grassland in Tibet at different phenological phases． The results showed that total flavonoids
of Stellera chamaejasme at early flowering stage，flowering stage and flower / fruiting stage were 0． 410，0． 445 and 0． 471%，respectively;and
the contents of its total alkaloids were 0． 255，0． 308 and 0． 368 %，respectively． The results indicate that the contents of total flavonoids and
alkaloids of Stellera chamaejasme in descending order are as follows:the flower / fruiting stage，flowering stage and early flowering stage;and the
flower / fruiting stage is the better period to develop medicinal Stellera chamaejasme．
狼毒(Stellerachamaejasme)又称断肠草、馒头花、
燕子花等，是瑞香科狼毒属多年生草本植物，广泛分
布于我国东北各省及西南地区海拔 2 300 ～ 4 200 m
向阳山坡草地［1］，为了与大戟科大戟属狼毒(Euphor-
biafischeriana)相区别，常称为瑞香狼毒。瑞香狼毒中
含有香豆素、黄酮、甾醇类成分，是重要的药用植物，
也是严重危害畜牧业发展的有毒植物［2］。瑞香狼毒
味苦、性平，具有袪痰、散结、杀虫和抗肿瘤的作用，在
传统中医中被逐步开发利用［3］;但是，瑞香狼毒是一
种有毒植物，误食可引起家畜中毒甚至死亡，而且由
于其根系发达、生命力顽强，导致牧草大幅减产，给草
原畜牧业造成巨大损失。瑞香狼毒的大量生长被认
为是草原(场)退化的标志。近年来，随着我国天然
草原(场)退化不断加剧，瑞香狼毒顺势扩张，仅青
海、甘肃和内蒙古 3 个省区分布面积在182． 81 万 hm2
以上［4 － 5］，对畜牧业的危害程度与日俱增，如何有效
防控瑞香狼毒，降低其所致经济损失，并对其加以合
理利用在当前显得尤为必要和迫切。
瑞香狼毒在西藏多个地市均有分布，其中那曲、
林芝(波密)、阿里(日土、噶尔、普兰)及昌都等地区
危害较为严重。面对瑞香狼毒的危害，人们趋利避
621
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 07 2015
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2015.1185
2015 年 07 月(下)
害，积极利用，早在 1 300 多年前瑞香狼毒根已被用
来造纸，狼毒纸驱虫避鼠、久不变色［6］。随着有毒植
物利用的多样化，也给瑞香狼毒的防控与利用诸多启
发。王敏等［7 － 8］研究表明，瑞香狼毒总黄酮和总生物
碱提取物均具有较强的抗肿瘤作用。由于不同生长
阶段、生长环境和放牧强度下瑞香狼毒总黄酮含量可
能不同［9 － 10］，因此本研究对西藏瑞香狼毒不同物候
期地上部分全草总黄酮和总生物碱含量进行测定，旨
在为西藏瑞香狼毒药用开发与综合利用提供基础
资料。
1 材料与方法
1． 1 植物样品
瑞香狼毒花前期、花期和花果期地上部分全草，
分别于 2013 年 7—9 月份采集于西藏自治区当雄县
(30°2858″ ～ 72″N，91°0628″ ～ 74″E)，将植物样品阴
干、粉碎、过 40 目筛，保存备用。
1． 2 主要仪器和试剂
电子分析天平(FA3204B)，上海精科天美贸易有
限公司生产;旋转蒸发仪(EV311)，北京莱伯泰科仪
品有限公司生产;荧光分光光度计(930A)，上海三科
仪器有限公司生产;电热恒温水浴锅(DK － 98 －
ⅡA)，天津市泰斯特仪器有限公司生产;数控超声波
清洗器(KQ － 500DE)，昆山市超声仪器有限公司生
产;芦丁标准品，上海融禾医药科技有限公司生产;氢
氧化钠、无水三氯化铝、无水甲醇、高氯酸、冰醋酸、氯
仿、正丁醇等均为市售分析纯。
1． 3 方法
1． 3． 1 荧光分光光度法测定总黄酮含量 标准品溶
液的制备:精密称取 10 mg 芦丁，用 10 mL 无水甲醇
溶解制成 1 mg /mL 标准贮备液。分别取贮备液 5，
10，15，20，25 μL置于 5 mL比色管中，加 0． 01%三氯
化铝甲醇溶液 0． 8 mL，以无水甲醇定容至刻度，摇
匀，配制成系列标准工作溶液。
样品贮备溶液的制备:准确称取 0． 5 g 样品置于
带塞锥形瓶中，加入 50 mL 无水甲醇室温静置过夜，
超声提取 40 min 过滤，滤液加无水甲醇定容至
50 mL，作样品贮备液。
列线性回归方程:芦丁系列标准工作溶液配制完
毕 20 min后，在 EX435 nm、EM490 nm条件下测定其
荧光强度，列出线性回归方程。
样品溶液总黄酮含量测定:样品溶液配制好
20 min后，置工作曲线相同条件下测吸光度，代入线
性回归方程即可求得样品溶液总黄酮含量。
1． 3． 2 非水滴定法测定总生物碱含量 总生物碱制
备:精密称取样品粉末 50 g，工业乙醇热回流提取总
浸膏。总浸膏转入蒸发皿，60 ℃蒸干后用 1 mol /L稀
盐酸溶解过滤，滤液碱性氯仿萃取得碱性氯仿部分生
物碱。余液继续用碱性正丁醇萃取得碱性正丁醇部
分生物碱，合并两部分生物碱作为总生物碱。
滴定:总生物碱用 30 mL无水冰醋酸溶解于锥形
瓶中，滴加结晶紫指示剂 4 滴，以高氯酸标准液滴定
至蓝色为终点，记录高氯酸体积 V1;同时做空白对
照，记录消耗高氯酸体积 V0。计算公式:总生物碱
(%)=(V1 － V0)M /50 × 100%。式中 M 为瑞香狼毒
所含主要生物碱毫克当量数，计算样品总生物碱含量。
2 结果(见表 1)与分析
表 1 瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量测定结果 %
项目 花前期 花期 花果期
总黄酮 0． 410 0． 445 0． 471
总生物碱 0． 255 0． 308 0． 368
由表 1 可见，瑞香狼毒不同生长阶段中花果期总
黄酮和总生物碱含量均最高，其次为花期，以花前期
瑞香狼毒中总黄酮和总生物碱含量最低。
3 讨论
瑞香狼毒通常以根茎为药用部分，研究表明，瑞
香狼毒叶中总黄酮含量显著高于根部;而且西藏高寒
草地植被易破坏难修复，采挖瑞香狼毒根部对植被损
害较大，开发利用意义不大。因此，本研究以地上部
分总黄酮和总生物碱含量为研究对象，采用荧光分
光光度法测定总黄酮含量简便易行，精确性较好［11］。
总生物碱含量测定时，以碱性氯仿和正丁醇两部分生
物碱作为总生物碱，与一般以碱性氯仿部分生物碱作
为总生物碱的作法不同，主要考虑到碱性正丁醇提取
部分可能含有生物碱。虽然这种方法提取的总生物
碱会混入更多杂质，但对滴定结果影响并不大。
毕凌霄等［9］研究表明，瑞香狼毒 5— 9 月份总黄
酮含量呈先降低后升高的趋势，与本研究结果一致。
本研究中不同物候期总黄酮含量均显著偏低，主要由
于西藏特殊的地理环境及植物采集地放牧强度较低
所致。因此，采集当地放牧强度相对较高草场瑞香狼
毒测定其总黄酮含量，并进行差异性分析是解决此问
题的最佳方法。
4 结论
西藏瑞香狼毒总黄酮和总生物碱含量花果期 ＞
花期 ＞花前期。花果期西藏瑞香狼毒地上部分全草
总黄酮和总生物碱含量相对较高，是药用开发利用的
最佳时期，但对于总黄酮和总生物碱含量是否达到药
用开发利用限值有待进一步研究。
参考文献:
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收稿日期:2014 － 10 － 22;修回日期:2015 － 01 － 07
基金项目:辽宁医学院大学生创新创业训练计划项目(2013
10160012)
作者简介:史艳丽(1990 －)，女，本科生．
通信作者:许云贺(1978 －)，男，副教授，博士，研究方向为饲
料资源开发利用，sn_97@ 126． com．
枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕
产品质量评定
史艳丽1，曹新民2，马明振1，李文强1，徐 彬1，豆改艳1，
冯金宝3，史东辉1，张莉力1，许云贺1
(1．辽宁医学院，辽宁 锦州 121000;2．辽宁省种畜禽监督管理站，沈阳 110000;
3．辽宁省阜蒙县福兴地镇畜牧兽医站，辽宁 阜新 123000)
中图分类号:S852． 61 + 6 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2015)07 － 0128 － 02
关键词:枯草芽孢杆菌;发酵豆粕;大豆抗原蛋白;三氯乙酸可溶性氮;质量评定
摘 要:为了研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XZ35 株固态发酵豆粕的效果，试验以纯化水和市售
枯草芽孢杆菌 B1 株为对照，在最优工艺条件下固态发酵豆粕，对发酵产品进行大豆抗原蛋白残留
率、三氯乙酸可溶性氮(TCA － NSI)、粗蛋白、水分和挥发性盐基氮含量测定。结果表明:枯草芽孢杆
菌 XZ35 株发酵豆粕后抗原蛋白残留率为 5． 9%，显著低于空白对照组和枯草芽孢杆菌 B1 株对照组
(P ＜ 0． 05);TCA － NSI 含量为 7． 24%，显著高于空白对照组和枯草芽孢杆菌 B1 株对照组(P ＜
0． 05);枯草芽孢杆菌 XZ35 株和 B1 株发酵豆粕后粗蛋白含量显著高于空白对照组(P ＜ 0． 05)，各组
水分含量差异不显著(P ＞ 0． 05);挥发性盐基氮含量为 30． 37 mg /100 g，显著低于空白对照组和枯草
芽孢杆菌 B1 株对照组(P ＜ 0． 05)。说明枯草芽孢杆菌 XZ35 株在豆粕发酵过程中能够将豆粕中大分
子蛋白降解为小分子多肽，同时具有较强的抗原蛋白降解能力，进而提高豆粕蛋白质的消化率和利用
率，提高豆粕在饲料中的应用范围和使用价值。
豆粕营养丰富，但存在多种抗营养因子。由于豆
粕在加工受热过程中大部分抗营养因子可以除去，但
大豆抗原蛋白热稳定性好，加热不易除去，是影响豆
粕应用的主要抗营养因子，其可以引起仔猪肠道过敏
及腹泻。目前，微生物发酵法在饲料加工中广泛应
用，微生物发酵法能够有效去除豆粕中的抗营养因
子［1 － 2］。
课题组前期对能够降解大豆抗原蛋白的枯草芽
孢杆菌(Bacillus subtilis)XZ35 株固态发酵豆粕工艺
进行了优化［3］，通过单因素试验和正交试验研究结
果表明，在实验室阶段的最佳发酵条件为:豆粕粒度
2． 0 mm，以小麦麸作为碳源，添加量为 2%，接种量为
10%，料水比为 1∶0． 8，发酵温度为 40 ℃，发酵时间为
3 d。本研究对该最佳工艺条件下发酵的产品进行指
标检测，并对该产品进行客观地评定，为枯草芽孢杆
菌 XZ35 株固态发酵豆粕生产奠定基础。
1 材料
1． 1 豆粕
粗蛋白含量为 45． 56%，水分为 8． 90%，购自辽
宁省锦州市古塔区某大型饲料厂原料部。
1． 2 菌种
枯草芽孢杆菌 XZ35 株，由辽宁医学院微生物实
821
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 07 2015
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2015.1186