全 文 ：收稿日期：２０１４－０４－１８；修回日期：２０１４－０８－１０
基金项目：吉林省科技厅项目（２０１１１５１５５）
作者简介：李晓玲（１９７１－ ），女，吉林舒兰人，副教授，博士，主要
从事植物生物技术与分子生物学研究，已发表论文近２０篇，Ｅ－ｍａｉｌ：
ｌｉｘｉａｏｌｉｎｇ＠ｍａｉｌ．ｃｃｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ．
文章编号：１６７３－５０２１（２０１５）０１－０１１１－０５
短芒大麦草组织培养体系的建立
李晓玲１，＊，张金龙１，房　强１，张春艳２
（１．长春工业大学化学与生命科学学院，吉林　长春　１３００１２；２．吉林省生物研究所，吉林　长春　１３００１２）
摘要：以短芒大麦草幼穗为外植体，建立了比较稳定高效的组织培养体系。研究结果表明，在含有３．０～
４．０ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ的 ＭＳ＋３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ＋３％蔗糖＋０．７％琼脂（ｐＨ５．８）培养基上，短芒大麦草幼穗切段愈伤组织诱
导率可达到８０．０％以上；经 ＭＳ＋３００ｍｇ／ＬＣＨ＋０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ ＋３％蔗糖＋０．７％琼脂（ｐＨ５．８）培养基上继代培
养后，其胚性愈伤组织在 ＭＳ＋３００ｍｇ／ＬＣＨ＋０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ ＋３％蔗糖＋０．７％琼脂（ｐＨ５．８）
分化培养基上的分化率为６２．９％；短芒大麦草组培苗在１／２ＭＳ＋ ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖１％ ＋琼脂０．７％（ｐＨ５．８）
培养基上生根后，移栽成活率可达到９８．０％以上。
关键词：短芒大麦草；幼穗；组织培养
中图分类号：Ｑ９４３．１　　　文献标识码：Ａ
　　随着生物技术和分子生物学研究的不断发展，
植物体细胞无性系变异、基因工程和分子标记辅助
育种等植物生物技术在作物品种改良方面的优势也
越来越受到牧草育种研究者的青睐。目前，应用植
物体细胞无性系变异或转基因等植物生物技术培育
抗逆性优质牧草新品种，正逐渐成为牧草品质改良
和选育研究领域中一个新的研究热点［１～３］。其中，
建立成熟、稳定高效的组织培养体系和遗传转化体
系，是牧草生物技术育种研究的前提和基础。
短芒大麦草［Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｔｉｎ．）
Ｌｉｎｋ］又名野大麦，从土耳其西部到中国的东北部均
有分布，为禾本科大麦属直刺颖组多年生牧草。该
牧草产量高、品质好，具有耐盐碱、耐贫瘠、耐践踏和
抗寒耐旱等优良性状，具有良好的生产性能和较高
的经济价值［４］，常成为建植人工草地和天然低湿盐
碱化草地改良过程中比较理想的优良牧草品种。同
时，短芒大麦草也是耐盐碱牧草品质改良和选育工
作中常用的牧草材料［５］。本研究旨在通过对短芒大
麦草幼穗切段愈伤组织诱导及分化条件的研究，建
立比较成熟、稳定的短芒大麦草组织培养和植株再
生体系，为进一步探索该牧草生物技术育种及其相
关机理研究提供一定的参考依据和技术支撑。
１　材料和方法
１．１　实验材料
短芒大麦草幼穗采自于吉林省前郭县境内松嫩
草地盐生草甸。
１．２　实验方法
１．２．１　愈伤组织诱导
在 ＭＳ培养基中加入３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ、３％蔗糖和
０．７％琼脂作为基本培养基，再分别添加１．０ｍｇ／Ｌ、
２．０ｍｇ／Ｌ 、３．０ｍｇ／Ｌ 、４．０ｍｇ／Ｌ 、５．０ｍｇ／Ｌ 和
６．０ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ配制成各种待筛选愈伤组织诱导
培养基（ｐＨ５．８）。
选择打包尚未抽出的短芒大麦草幼穗，连同其
旗叶一块儿取下冷藏备用。然后在超净工作台上，
将所取外植体用７０％酒精棉球仔细擦洗３次，于无
菌条件下用镊子取出幼穗。选取其中长度约为１．５
ｃｍ左右的幼穗，用剪刀将其剪成小段，分别接种于
上述待筛选的愈伤组织诱导培养基上。于２５±１℃
条件下进行暗培养，４周后统计幼穗切段出愈率。
１．２．２　继代培养
各继代培养基均以 ＭＳ培养基中加入３００ｍｇ／Ｌ
ＣＨ、３％蔗糖和０．７％琼脂作为基本培养基，分别将
其中２，４－Ｄ的含量调整为０ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌ、１．０
ｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ、２．０ｍｇ／Ｌ和３．０ｍｇ／Ｌ。
将短芒大麦草幼穗切段在诱导培养基上长出的
愈伤组织，转接到上述各种继代培养基上，置于２５
±１℃、黑暗条件下继代培养３～６个月（继代周期为
每隔四周继代转接一次）。在继代培养及转接过程
中，定期观察并及时弃掉颜色、状态或质地不正常的
非胚性愈伤组织，挑选较干燥、长势较旺盛的嫩黄色
颗粒状胚性愈伤组织进行继代转接和培养。
—１１１—
第３７卷　第１期
Ｖｏｌ．３７　Ｎｏ．１
　　　　　　　　　
中　国　草　地　学　报
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ
　　　　　　　　　
２０１５年１月
Ｊａｎ．２０１５
１．２．３　愈伤组织分化及植株再生
根据继代培养过程中短芒大麦草胚性愈伤组织
生长状态与分化能力，筛选出合适的继代培养基组
成后，分别添加０～１．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ用于诱导其愈
伤组织分化（见表１）。
无菌条件下将胚性愈伤组织夹成小块，分别接
种于上述各种待筛选分化培养基上，置于２５±１℃、
８０μｍｏｌ／（ｍ
２·ｓ）光照强度、１４ｈ／ｄ光周期条件下培
养。随时观察培养瓶内愈伤组织分化状况，并于
３０ｄ后统计分化率。
表１　短芒大麦草愈伤组织分化结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｙｏｕｎｇ　ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）
Ｌｉｎｋ　ｏｎ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
培养基编号
Ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ｍｅｄｉｕｍ
２，４－Ｄ含量
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　２，４－Ｄ
６－ＢＡ含量
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　６－ＢＡ
愈伤组织
分化率（％）
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ
Ｄ１　 ０．５　 ０　 １０．３ｃＣ
Ｄ２　 ０．５　 ０．１　 ６２．９ａＡ
Ｄ３　 ０．５　 ０．３　 ３３．３ｂＢ
Ｄ４　 ０．５　 ０．５　 ６．７ｃＣｄＤ
Ｄ５　 ０．５　 ０．７　 ０ｄＤ
Ｄ６　 ０．５　 １．０　 ０ｄＤ
　　注：小写字母表示０．０５水平下显著性分析，大写字母表示０．０１
水平下显著性分析；下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｕｎ－
ｄｅｒ　０．０５ｌｅｖｅｌ，ｔｈｅ　ｕｐｐｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｕｎ－
ｄｅｒ　０．０１ｌｅｖｅｌ；ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｂｅｌｏｗ．
１．２．４　生根壮苗与移栽驯化
将高至３．０～４．０ｃｍ的短芒大麦草再生苗转接
到含有 ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ、蔗糖１％ 和琼脂０．７％的
１／２ＭＳ（ｐＨ５．８）培养基上，在相同光照培养条件下
进行生根壮苗培养，待再生苗长出３～５条根后，将
根系发达、长势旺盛的小苗置于温室（温度２５±
３℃）中敞开培养瓶炼苗３～５ｄ。然后用自来水流水
冲洗，彻底洗掉小苗根部残留的琼脂培养基；最后将
小苗移栽至混匀的花土和蛭石（２∶１）无菌混合基质
中，在温室中保湿培养３周后统计成活率。
２　结果与分析
２．１　愈伤组织诱导
在所有添加２，４－Ｄ的待筛选愈伤组织诱导培养
基上，短芒大麦草幼穗小切段均能长出愈伤组织。
在诱导培养４～５ｄ后，幼穗小切段开始逐渐膨大。
在培养至第８ｄ时，在有些幼穗小切段的切口处可见
少量较透明的愈伤组织，在随后的约２０ｄ培养期内
愈伤组织陆续出现并逐渐增多、颜色逐渐转变为浅
黄色。当培养基中２，４－Ｄ浓度增至３．０～４．０ｍｇ／Ｌ
时，对短芒大麦草幼穗切段愈伤组织诱导效果及状
态维持均比较适宜，愈伤组织诱导率可达到８０％以
上（见表２），且绝大多数愈伤组织状态正常、长势良
好，外观上呈现出比较湿润的嫩黄色颗粒状构造。
进一步增加培养基中２，４－Ｄ含量，虽然幼穗小切段
出愈率也很理想，但其中多数愈伤组织颜色或外观
不正常，呈现灰白色或白色半透明状、透明状或水浸
状。这样的愈伤组织在培养基上生长非常缓慢，经
多次继代培养后也很难转化为具有分化潜能的胚性
愈伤组织。
表２　短芒大麦草幼穗切段愈伤组织诱导结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｙｏｕｎｇ　ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｈｏｒｄｅｕｍ
ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ
培养基编号
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｍｅｄｉｕｍ
２，４－Ｄ含量
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　２，４－Ｄ
外植体出愈率（％）
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｐｅｒｃｅｎｔ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
Ｃ１　 １．０　 ２６．７ｅＥ
Ｃ２　 ２．０　 ４６．７ｄＤ
Ｃ３　 ３．０　 ８３．３ｂＢ
Ｃ４　 ４．０　 ９０．０ａＡ
Ｃ５　 ５．０　 ８６．７ａｂＡＢ
Ｃ６　 ６．０　 ７０．０ｃＣ
２．２　愈伤组织继代培养
将诱导出的短芒大麦草愈伤组织转接到不含
２，４－Ｄ的继代培养基上培养，愈伤组织生长很缓慢。
即使在黑暗培养条件下，该种培养基上也有少数愈
伤组织小块在培养初期就开始出现分化迹象。因
此，不含２，４－Ｄ的继代培养基，不适合用于短芒大麦
草愈伤组织的继代培养和保存。在２，４－Ｄ含量为
０．５ｍｇ／Ｌ的继代培养基上，愈伤组织生长比较迅
速，多呈现较湿润的淡黄色颗粒状，即多为胚性愈伤
组织，表明在培养基中添加少量的２，４－Ｄ有利于短
芒大麦草愈伤组织的继代培养；随着继代培养基中
２，４－Ｄ浓度的进一步升高，愈伤组织生长速度明显
加快，部分愈伤组织呈现徒长状态，个别愈伤组织小
块在很短时间内就能迅速长满培养瓶，其颜色也逐
渐变白变褐。与此同时，愈伤组织结构也逐渐变得
松散，呈现一触即碎的状态。随着继代培养时间的
延长，这些生长状态不正常的愈伤组织比例逐渐增
多。其中有些愈伤组织逐渐变成透明或半透明的胶
冻状、粉末状或褐色老化状态，另有少部分愈伤组织
呈现坚硬的一整块，表面布满密集的白色毛状根。
后续实验结果表明，这些愈伤组织已经完全丧失分
—２１１—
中国草地学报　２０１５年　第３７卷　第１期
化潜能，因而短芒大麦草愈伤组织继代培养选用含
０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ的继代培养基比较合适。
２．３　愈伤组织分化及植株再生
在适宜的分化培养基上，一般要经过半个月左
右的培养，短芒大麦草胚性愈伤组织表面开始出现
少量浅绿色的芽点。继而芽点颜色变深、面积逐渐
增大，深绿色芽点逐渐转变为叶片卷曲的成簇小芽
（见图１－Ａ、图１－Ｂ）。随后簇生芽卷曲叶片迅速伸
长、伸展，长成植株。研究结果表明，短芒大麦草愈
伤组织对培养基中的６－ＢＡ反应敏感，微量的６－ＢＡ
（０．１ｍｇ／Ｌ）即可明显提高其分化率（见表２）。进一
步提高培养基中６－ＢＡ含量，短芒大麦草愈伤组织
分化率反而有所下降。如将培养基中６－ＢＡ含量增
加至０．７ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织表面仅出现大量分布
较均匀的嫩绿色小点，此类绿色小点在分化培养过
程中没有不定芽产生。培养约一个月后，整个培养
瓶内愈伤组织都变成嫩绿色或暗绿色，一部分愈伤
组织表面还出现了零星的小黑点，另有极少数愈伤
组织表面会分化出绿色较透明的不定根。
２．４　再生苗生根培养和移栽驯化
短芒大麦草再生苗极易生根，部分再生苗在分
化培养基上即可生出少数几条根，但整个根系相对
比较细弱。研究结果表明，短芒大麦草所有再生苗
在生根培养基上都能长出发达健壮的根系，且小苗
长势旺盛（见图１－Ｃ）。经温室炼苗后，将再生植株
移栽到混匀的花土和蛭石（２∶１）无菌基质中培养，
其成活率可达到９８．０％以上（见图１－Ｄ）。
Ａ、Ｂ：短芒大麦草愈伤组织开始分化；Ｃ：短芒大麦草再生苗生根与壮苗；Ｄ：移栽成活的短芒大麦草再生植株
Ａ　ａｎｄ　Ｂ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ；Ｃ：Ｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓ　ｗｈｉｃｈ　ａｒｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎｄ
ｇｒｏｗｉｎｇ　ｓｔｒｏｎｇ；Ｄ：Ａ　ａｃｃｌｉｍａｔｉｚｅｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｉｎ　ａ　ｐｏｔ
图１　短芒大麦草愈伤组织分化、再生苗生根和移栽成活
Ｆｉｇ．１　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ，ｒｏｏｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓ
３　讨论
植物生长调节剂种类、含量及其浓度配比对植
物愈伤组织的诱导及分化具有重要影响。其中，
２，４－Ｄ对禾本科植物愈伤组织诱导效果最明显，通
常培养基中含有１．０～３．０ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ对植物胚性
愈伤组织的诱导效果比较好。在大麦、朝鲜碱茅和
星星草等多种禾本科作物组织培养体系研究中，均
得到了相类似的结果［６～７］。短芒大麦草组织培养研
究结果也表明，培养基中２，４－Ｄ含量对其胚性愈伤
组织的诱导、保存及其分化潜能的保持均具有重要
的作用。较高浓度的２，４－Ｄ（３．０～４．０ｍｇ／Ｌ）对短
芒大麦草幼穗切段愈伤组织诱导效果较明显，而适
当降低培养基中２，４－Ｄ含量（０．５ｍｇ／Ｌ）则有利于
—３１１—
李晓玲　张金龙　房　强等　　　　短芒大麦草组织培养体系的建立
其愈伤组织的继代保存或诱导分化；短芒大麦草幼
穗切段愈伤组织对６－ＢＡ的反应敏感，在培养基中
添加０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ即可明显促进其愈伤组织的分
化，这与张亚兰［８］和程肖蕊［９］等人对短芒大麦草组
培体系的研究结果相类似。随着培养基中６－ＢＡ含
量的进一步增加，短芒大麦草愈伤组织分化率反而
呈现出下降趋势。在较高含量６－ＢＡ的分化培养基
上，其愈伤组织只变绿，很难分化出再生植株。
建立多种牧草组织培养体系，加强牧草生物技
术的基础研究和应用研究，对进一步推动生物技术
在牧草育种工作中的应用具有重要意义。短芒大麦
草是一种耐盐碱的优质牧草，可用于人工栽培草地
或盐碱化草地的改良，因而其组织培养和品种选育
研究工作受到了较多的重视，并取得了一定的进
展［８～１０］。相比较而言，选取幼穗或幼胚作为植物组
织培养的外植体，其表面灭菌操作简单易行。且幼
穗或幼胚分化程度低，因而愈伤组织诱导及植株再
生均相对比较容易。因此，本研究以短芒大麦草幼
穗为外植体，建立了比较成熟、稳定的组织培养体
系。该体系操作简单，愈伤组织分化率及再生苗移
栽成活率均比较理想，可为进一步探索短芒大麦草
体细胞无性系遗传变异机理及其基因工程等生物技
术育种研究工作提供一定的参考。
４　结论
以短芒大麦草幼穗为外植体，成功筛选出各培
养阶段适宜培养基组成：愈伤组织诱导培养基的
ＭＳ＋３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ＋３％蔗糖＋０．７％琼脂＋３．０～
４．０ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ（ｐＨ５．８）、继 代 培 养 基 ＭＳ＋
３００ｍｇ／ＬＣＨ＋０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ ＋３％蔗糖＋０．７％
琼脂（ｐＨ５．８）、分化培养基 ＭＳ＋３００ｍｇ／ＬＣＨ＋
０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ ＋０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ ＋３％蔗糖＋
０．７％琼脂（ｐＨ５．８）、生根培养基１／２ＭＳ＋ ＮＡＡ
０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖１％ ＋琼脂０．７％（ｐＨ５．８）。该组
培体系操作相对简单，愈伤组织分化率可达到６０％
以上，再生苗移栽成活率可达到９８．０％以上，能够
满足生物技术育种研究需要。
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Ｃｈｅｎｇ　Ｘｉａｏｒｕｉ，Ｚｈａｎｇ　Ｙａｌａｎ，Ｙａｎｇ　Ｓｏｎｇｔａｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂ－
ｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ．［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉ－
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２９０－２９２．
Ｚｈａｎｇ　Ｌｉｙｉｎｇ，Ｌｉ　Ｘｉｗｅｎ，Ｘｕ　Ｈｏｎｇｌｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｔｉｓ－
ｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｂａｒｌｅｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－
ｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｎｇｏｌｉｃａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉ－
ｔｉｏｎ），２００４，１９（３）：２９０－２９２．
—４１１—
中国草地学报　２０１５年　第３７卷　第１期
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ
Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ．
ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｌｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎ－ｌｏｎｇ１，ＦＡＮＧ　Ｑｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｕｎ－ｙａｎ２
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００１２，
Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉｌｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００１２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｓｔａｂｌｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｗａｓ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｆｏｒ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ　ｉｎ－
ｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｙｏｕｎｇ　ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎ－
ｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｙｏｕｎｇ　ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ
ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｂｏｖｅ　８０．０％ ｏｎ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ＭＳ　ｂａｓａｌ　ｓａｌｔｓ　ａｎｄ　ｖｉｔａｍｉｎｓ，３．０ｏｒ
４．０ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ，３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ　ａｎｄ　３％ｓｕｃｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　０．７％ａｇａｒ（ｐＨ５．８）．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ
ｗａｓ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ＭＳ　ｂａｓａｌ　ｓａｌｔｓ　ａｎｄ　ｖｉｔａｍｉｎｓ，３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ，０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－
Ｄ　ａｎｄ　３％ｓｕｃｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　０．７％ａｇａｒ（ｐＨ５．８），ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ　ｃａｌｕｓ　ｗｅｒｅ
６２．９％ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ＭＳ　ｂａｓａｌ　ｓａｌｔｓ　ａｎｄ　ｖｉｔａｍｉｎｓ，３００ｍｇ／Ｌ　ＣＨ，０．５ｍｇ／Ｌ　２，４－Ｄ，
０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ　ａｎｄ　３％ｓｕｃｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄ　ｗｉｔｈ　０．７％ａｇａｒ（ｐＨ５．８）．Ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｍａｎｙ
ｓｔｒｏｎｇ　ｒｏｏｔｓ　ｒｅａｄｉｌｙ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　１／２ＭＳ，０．１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　１％ｓｕｃｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｓｏｌｉｄｉｆｉｅｄ
ｗｉｔｈ　０．７％ａｇａｒ（ｐＨ５．８），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　９８．０％ａｆｔｅｒ　ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｔｏ　ｓｏｉｌ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ （Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ；Ｙｏｕｎｇ　ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
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李晓玲　张金龙　房　强等　　　　短芒大麦草组织培养体系的建立