全 文 ：其 1H-NMR和 13C-NMR波谱数据与文献报道的橙皮苷数据 [ 5]比
较 , 基本一致 ,所以化合物②鉴定为橙皮苷 ,即 5, 7, 3-三羟基 -
4-甲氧基二氢黄酮-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β -D-吡喃葡
萄糖苷。
化合物③:黄色粉末(MeOH), mp.185 ～ 188℃。 盐酸 -镁粉
反应阳性 , Molish反应阳性。由其 1H-NMR和 13C-NMR可知为
黄酮苷类化合物。1H-NMR(DMDO-d6)δppm为:6.20(1H, d, J=
1.5 Hz, H-6), 6.39(1H, d, J=1.5 Hz, H-8), 7.53(1H, d, J=2.0
Hz, H-2), 6.84(1H, d, J=8.0 Hz, H-5), 7.54(1H, dd, J=8.0,
2.0 Hz, H-6), 5.33(1H, d, J=8.0 Hz, H-1), 4.38(1H, br.s, H-1
), 1.07(3H, d, J=6.0, CH3).13 C-NMR(DMSO-d6)δppm为:
156.5(C-2), 133.3(C-3), 177.4(C-4), 161.3(C-5), 98.7(C-6),
164.1(C-7), 93.7(C-8), 156.7(C-9), 104.0(C-10), 121.2(C-
1), 115.3(C-2), 144.8(C-3), 148.5(C-4), 116.3(C-5), 121.7
(C-6), 101.2(C-1), 74.1(C-2), 76.5(C-3), 70.4(C-4), 75.9
(C-5), 67.1(C-6), 100.8(C-1), 70.0(C-2), 70.6(C-3),
71.9(C-4), 68.3(C-5), 17.8(C-6)。与芦丁共薄层 , Rf值
及显色均一致 , NMR数据与文献报道 [ 6]的数据吻合 , 故确定化合
物③为芦丁。
参考文献:
[ 1 ] 　王祝举 ,赵玉英 ,涂光忠 ,等.夏枯草化学成分的研究 [ J] .药学学
报 , 1999, 34(9):679.
[ 2 ] 　ZHU-JUWang, YUYINGZhao, BINWang, etal.DepsidesfromPru-
nellavulgaris[ J].ChineseChemicalLeter, 2000, 11(11):997.
[ 3 ] 　WangZhuju, ZhaoYuying, WangBin, etal.ANewPhenylpropanoid
fromPrunelavulgaris[ J] .JournalofChinesePharmaceuticalSciences,
2000, 9(3):128.
[ 4 ] 　于德泉 ,杨峻山.分析化学手册 -核磁共振分析 [ M] .北京:化学工
业出版社 , 1999:839.
[ 5 ] 　齐一萍 ,郭舜民 ,夏志林 ,等.木棉化学成分的研究 [ J] .中国中药杂
志 , 1996, 21(4):234.
[ 6 ] 　梁侨丽 , 丁林生.枳俱叶的化学成分研究 [ J] .中草药 , 1996, 27
(10):581.
收稿日期:2007-09-28;　修订日期:2008-01-25
作者简介:王祥培(1975-),男(侗族),贵州天柱人 ,现任贵阳中医学院副
教授 ,博士学位 ,主要从事中药品种 、品质与药效研究工作.
砂仁及其混淆品的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究
王祥培 1 ,吴红梅1 ,赵　杨 2 ,孙宜春 1 ,靳凤云1 ,万德光 3
(1.贵阳中医学院 ,贵州 贵阳　550002;
2.四川大学华西药学院 ,四川 成都　610041;3.成都中医药大学药学院 ,四川 成都　610075)
摘要:目的 建立砂仁及其混淆品的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱鉴定方法。方法 采用 RP-HPLC(DAD)法 , 梯度洗
脱 , 测定阳春砂 、海南假砂仁及艳山姜的指纹图谱 ,并作相似度比较分析 。结果 砂仁及其混淆品的 HPLC指纹图谱有明
显差异。结论 HPLC指纹图谱具有重现性好 ,特征性强 , 方法简便等特点 ,可用于砂仁与其混淆品药材的鉴别。
关键词:砂仁;　混淆品;　高效液相色谱;　指纹图谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)08-1967-02
IdentificationofAmomumvillosumanditsAdulterantsbyHPLCFingerprint
WANGXiang-pei1 , WUHong-mei1 , ZHAOYang2 ,SUNYi-chun1 , JINFeng-yun1 ,WANDe-guang3
(1.GuiyangColegeofTraditionalChineseMedicine, Guiyang550002, China;2.WestChinaSchoolofPhar-
macy, SichuanUniversity, Chengdu610041, China;3.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,
Chengdu610075, China)
Abstract:ObjectiveToestablishHPLCfingerprintfortheidentificationofAmomumvillosumanditsadulterants.Method-
sChromatographicfingerprintofAmomumvilosum, AmomumchinenseandAlpiniazerumbetwasdeterminedbyRP-HPLC
(DAD)andthegradientelutionmodewasappliedinchromatographicseparation, datawereanalyzedbyFingerprintSimilarity
EvalutionSoftwaretocomparethesimilarityofsamples.ResultsTherewasanapparentdiferenceinfingerprintbetweenAmomum
villosumanditsadulterants.ConclusionHPLCfingerprintmethodisrepeatableandfeasibleandcanbesuitableforidentifying
Amomumvillosumanditsadulterants.
Keywords:Amomumvilosum;　Adulterants;　HPLC;　Fingerprint
　　砂仁为姜科植物阳春砂 AmomumvillosumLour.绿壳砂 A.
villosumLour.var.xanthioidesT.L.WuetSenjen或海南砂 A.
longiligulareT.L.Wu的干燥成熟果实 [ 1] 。具有化食开胃 , 温脾
止泻 , 理气安胎之功效。 近年来由于砂仁药材市场需求量大 ,各
种混淆品也流入医药市场。李传印等 [ 2]对砂仁的药材性状进行
了鉴别研究。而采用 HPLC指纹图谱鉴别砂仁与其混淆品的研
究尚未见报道 , 本实验采用高效液相色谱法对砂仁与其混淆品指
纹图谱鉴定进行了初步探讨 ,以期为砂仁质量控制和药材鉴别提
供一些依据。
1 　材料与仪器
1.1 　材料 砂仁购于贵州贵阳 、四川成都 、广东深圳等地 ,共 10
份样品 ,经笔者鉴定为姜科植物阳春砂 AmomumvilosumLour.
的干燥成熟果实;海南假砂仁购于四川成都 ,经笔者鉴定为姜科
植物海南假砂仁 AmomumchinenseChunexT.L.Wu的干燥成熟
果实;艳山姜购于四川成都经笔者鉴定为姜科植物艳山姜 Alpinia
chinenseChunexT.L.Wu的干燥成熟果实。
1.2　仪器与试剂 Agilent1100 型高效液相色谱仪(自动进样
品),二极管阵列检测器(DAD);《中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 A版》(国家药典委员会);槲皮苷对照品(中国药品生物制
品检定所 ,批号:111538-200301);乙腈为色谱纯 , 其余试剂均为
·1967·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.8 时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期
分析纯 , 水为重蒸镏水。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 Dikma公司 DiamonsilC18(250 mm×4.
6 mm, 5μm);流动相为乙腈(A)与 0.1%磷酸(B)梯度洗脱 ,梯
度条件 0※ 11 min, A(%)0.5 ～ 5, B(%)99.5 ～ 95, 11※ 61min, A
(%)5 ～ 20, B(%)95 ～ 80, 61※ 75 min, A(%)20 ～ 25, B(%)80
～ 75, 75※ 80 min, A(%)25 ～ 25, B(%)75 ～ 75;流速 0.8 ml/
min;柱温 25℃;检测波长 258 nm;参比波长 360 nm;分析时间 80
min;进样量 10 μl。
2.2 　供试品的制备 精密称取药材细粉 2.0 g, 加石油醚(60 ～
90℃)50ml,超声 15 min, 滤过 ,残渣挥干溶剂 , 加甲醇 50ml回流
1 h, 滤过。残渣加甲醇 50ml, 继续回流 1h,滤过 , 合并两次滤液。
置蒸发皿水浴挥干溶剂 ,残渣加甲醇溶解并定容至 10 ml。用微
孔滤膜(0.45μm)滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.3　对照品的制备 精密称取槲皮苷对照品适量 , 加甲醇制成
24.72μg/ml的溶液 ,作为对照品溶液。
2.4 　方法学考察 以购于广东深圳的阳春砂药材为样品 , 对其
稳定性 、仪器精密度 、重复性作了相应考察 ,结果证明稳定性及重
复性良好。
2.4.1　精密度实验 取同一份供试品溶液 ,重复进样 6次 , 直观
观察指纹图谱的全貌无明显差别 ,用相似度软件计算 ,在同一台
仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为:0.986, 0.992, 0.991,
0.981, 0.982, 0.972, 均大于 0.95。表明该仪器的精密度良好。
符合指纹图谱检测要求 [ 3] 。
2.4.2　稳定性实验 取同一份供试品溶液 , 分别在 0, 2, 6, 12,
20, 30h进行检测 , 直观观察指纹图谱的全貌无明显差别 , 用相似
度软件计算 , 在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为:
0.976, 0.991, 0.980, 0.971, 0.993, 0.985, 均大于 0.95。表明在
30 h内供试品溶液的成分是稳定的。 符合指纹图谱检测
要求 [ 3] 。
2.4.3　重复性实验 取同一产地的供试品 5份 , 同法检测 , 直观
观察指纹图谱的全貌无明显差别 ,用相似度软件计算 ,在同一台
仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为:0.981, 0.955, 0.965,
0.973, 0.979,均大于 0.95。表明该方法的重复性较好 ,符合指纹
图谱检测要求 [ 3] 。
2.5　指纹图谱建立 精密吸取对照品与供试品溶液各 10 μl,注
入高效液相色谱仪 ,按选定的色谱条件 , 进行检测。 同一实验条
件下 , 测定所有供试品 HPLC色谱图。根据不同供试品测定结果
所给出的峰数 、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参
数进行分析 、比较 ,制定优化的指纹图谱见图 1～ 3。
图 1　阳春砂药材 HPLC指纹图谱
图 2　 10批阳春砂药材HPLC指纹图谱
2.6 　指纹图谱分析
2.6.1　共有指纹峰标定 比较购于贵州贵阳 、四川成都及广东
深圳共 10批的阳春砂供试品溶液给出的相关参数 , 其中 17个峰
是各批供试品共有 ,因此确定这 17个峰为其共有指纹峰 ,由于槲
皮苷峰较小 ,保留时间靠后 , 没有选作为参照峰。
S1 -阳春砂　S2 -海南假砂仁　S3 -艳山姜　S4槲皮苷
图 3　砂仁及混淆品的 HPLC指纹图谱
2.6.2　阳春砂指纹图谱相似度评价 将购于贵州贵阳 、四川成
都及广东深圳的阳春砂样品测定数据导入中药指纹图谱相似度
计算软件 ,经选峰 , 设定匹配模板 , 将峰自动匹配 ,然后设定标准
模板 , 进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。通过中药指纹图
谱相似度计算软件得出阳春砂 HPLC指纹图谱共有模式 ,与共有
模式比较 , 10个批次不同产地阳春砂药材的相似度:贵阳三桥药
材市场①0.971, 贵阳三桥药材市场②0.931, 贵阳三桥药材市场
③0.972, 贵阳花果园药材市场①0.957, 贵阳花果园药材市场②
0.970 , 贵阳同仁堂药房 0.967,贵阳芝林大药房 0.971, 深圳市中
医院药房 0.973,成都荷花池药材市场①0.974, 成都荷花池药材
市场②0.927。
2.6.3　阳春砂与海南假砂仁 、艳山姜的指纹图谱比较 从各自
的指纹图谱中 ,可以直观地看出 , 阳春砂与海南假砂仁 、艳山姜的
指纹图谱明显不同 , 其特征峰数目 、位置(相对保留时间)、积分
值都有差异 , 海南假砂仁 、艳山姜与阳春砂指纹图谱的共有模式
相比 , 相似度结果分别为:0.806, 0.219。
3　讨论
在色谱条件优化过程中 , 本研究主要考察阳春砂的色谱图 ,
适当兼顾其它的色谱峰分离情况。 经实验比较 , 用乙腈 -0.1%
磷酸溶液系统要比甲醇 -0.1%磷酸溶液的系统分离度高 ,峰形
对称性好 ,基线稳定。
本实验采用 DAD分别在 210, 243, 258, 280 , 310 nm处检测
以确定合适的检测波长。结果表明 , 低波长处基线漂移严重 , 而
高波长处各组分的响应很小 ,故采用 258 nm为检测波长。
实验中分别采用不同浓度的乙醇 、甲醇对砂仁及其混淆品进
行超声及回流提取考察 ,并作综合分析 , 拟定上述供试品的制备
方法。
相似度分析结果表明 ,购于不同药材市场的阳春砂样品指纹
图谱相似度较好 ,而阳春砂与混淆品海南假砂仁 、艳山姜的指纹
图谱具有明显差异。
本实验对砂仁 HPLC指纹图谱的构建进行了初步探讨 ,可为
砂仁药材的品种鉴定和质量评价提供参考依据。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:177.
[ 2 ] 　李传印 , 宋春华.砂仁的真伪鉴别 [ J] .时珍国医国药, 2005, 16
(3):225.
[ 3 ] 　国家食品药品监督管理局.关于印发《中药注射剂指纹图谱研究
的技术要求(暂行)的通知 》[ S] .中国药品标准 , 2000, 1(4):3.
·1968·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.8