全 文 ：　○中药研究○
荔枝草及其混淆品的 HPLC指纹图谱鉴定
★　傅国强 1＊　王硕 2　王跃生 3＊＊　(1.江西中医学院科技学院　南昌 330006;2.上海中医药大学　上海
201203;3.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心　南昌 330006)
摘要:目的:建立荔枝草及其混淆品的指纹图谱鉴定方法。方法:色谱柱:HypersilC18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈
-0.1%磷酸水溶液 , 梯度洗脱;柱温:40 ℃;检测波长:290 nm;体积流量:0.9 mL/min。结果:共标出荔枝草药材 9个共有峰 ,
荔枝草药材与混淆品的指纹图谱有明显区别。结论:HPLC指纹图谱鉴别荔枝草及其混淆品具有重复性好 、特征性强 、方法简
便等特点 , 可作为荔枝草药材的鉴别方法。
关键词:荔枝草;指纹图谱;混淆品;HPLC
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A
IdentificationonCommonSageHerbanditsAdulterantsbyHPLCFingerprintChromato-
gram
FUGuo-qiang1 , WANGShuo2 , WANGYue-sheng3
1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine, Nanchang330006;
2.ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine, Shanghai201203;
3.NationalPharmaceuticalEngineeringCenterforSolidPreparationinChineseHerbalMedicine, Nanchang330006
Abstract:Objective:ToestablishthefingerprintchromatogramfortheidentificationofCommonSageHerbanditsadulterants.Methods:
TheseparationwasperformedbyHypersilC18 column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)withamobilephaseofAcetonitrileand0.1%Phos-
phoricAcidmodeataflowrateof0.9mL/min.Thedetectionofwavelengthwas290nm.Results:9 peakswereseparatedontheHPLC
fingerprintofCommonSageHerb.Itwasfoundthatthereweregreatdiferenceinfingerprintchromatogramamongthem.Conclusion:
Thismethodissimple, rapid, stableandwithgoodreproducibility.ItmaybeusedtoidentifyCommonSageHerb.
Keywords:CommonSageHerb;fingerprintchromatogram;adulterants;HPLC
　　荔枝草为唇形科植物荔枝草 SalviaplebeiaRBr的地上
部分 ,主产江苏 、浙江 、安徽。全草含黄酮苷类化合物 , 味苦 ,
辛 ,性凉 ,有清热解毒 , 止咳及平喘 , 凉血 , 利尿等功效。主治
感冒发热 , 咽喉肿痛 , 肺热咳嗽 , 咳血等。现代临床上常用荔
枝草及其复方制剂治疗咳嗽﹑咽炎等病症 , 效果良好 [ 1, 3] 。
本文参照《中药注射液指纹图谱研究的技术要求(暂行)》方
法 [ 4] ,研究了荔枝草及其混淆品的 HPLC指纹图谱 , 为制定
荔枝草药材质量标准提供科学依据。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪(Agilent1100型 , DAD检测器);乙腈 、
甲醇为色谱纯试剂 , 其余试剂均为分析纯 ,水为 Milipore水。
药材来源于江苏 , 十批批号分别为 200409001、 200409002、
200409003、 200412001、 200412002、 200412003、 200505002、
200505003、200505004、200505006,经江西中医学院赖学文副
教授鉴定为唇形科荔枝草的全草 , 混淆品来源于江西 , 经鉴
定为唇形科鼠尾草属植物的全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:HypersilC18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。流动
相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B), 梯度洗脱 0 ～ 15 min,
5% ～ 15%A;16 ～ 25 min, 15% ～ 20%A;25 ～ 30 min, A-B
(20∶80);30 ～ 45 min, 20% ～ 30%A;40 ～ 60 min, A-B(30∶
70)。体积流量:0.9 mL/min。柱温:40 ℃。检测波长:290
nm。进样量:10 μl。
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江 西中医学院学报 2 0 0 8年 1 2月第 2 0卷第 6期
JOURNALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM2008Vol.20No.6
＊
＊＊
作者简介:傅国强(1978-),男 ,江西新干 ,硕士研究生 ,研究方向为中药新制剂。
通讯作者:王跃生 , Tel:0791-7119658, E-mail:wylw@126.com
　○中药研究○
2.2　供试品溶液的制备
取荔枝草药材粉末(过 40目筛)2.0 g, 精密称定 , 置圆
底烧瓶中 , 加甲醇 50 ml, 称重 , 水浴回流 1 h, 放至室温 , 称
重 ,补足减失重量 ,滤过 , 续滤液用微孔滤膜(0.45 m)滤过 ,
即得。
2.3　方法学考察
2.3.1　稳定性试验　取同一供试品溶液 , 分别在 0、1.5、 3、
6、8、12h检测指纹图谱。结果表明 , 各色谱峰的相对保留时
间和峰面积的比值基本没有明显变化(RSD均在 3%以内),
符合指纹图谱要求。
2.3.2　精密度试验　取同一批供试品溶液 ,连续进样 6次 ,
检测指纹图谱 , 各色谱峰的相对保留时间和峰面积的比值基
本一致(RSD均在 3%以内), 符合指纹图谱要求。
2.3.3　重现性试验　取同一批药材 6份 , 精密称定 ,按供试
品溶液的制备方法 , 制备成供试品溶液 , 检测指纹图谱。结
果表明 , 各色谱峰的相对保留时间和峰面积的比值基本一致
(RSD均在 3%以内)。符合指纹图谱要求。
2.4　荔枝草药材指纹图谱及技术参数
2.4.1　指纹图谱及共有指纹峰的标定　按上述方法检测 10
批荔枝草药材的指纹图谱 , 结果表明:10批荔枝草药材的指
纹图谱的色谱峰在 60 min之内出完 ,其中有 9个色谱峰是
10批荔枝草药材共有的 , 因此 , 确定它们为共有指纹峰(见
图 1,见图 2)。
2.4.2　共有指纹峰面积及保留时间比值　按照《中药注射
剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》规定 , 在药材和混淆品
共有峰中 , 从峰纯度 、峰高方面考虑 , 选择图中参照物峰(S)
的相对保留时间和峰面积为 1,计算 10批指纹图谱中 9个共
有指纹峰的相对保留时间为:1(0.233-0.236), 2(0.268-
0.271), 3(0.362-0.365), 4(0.470 -0.471), 5(0.646-0.
647), 6(0.823-0.824), S(1.000), 7(1.359-1.360), 8(1.
579-1.580);其峰面积与参照物峰(S)面积的比值为:1(0.
115-0.117), 2(0.237-0.245), 3(0.079-0.084), 4(0.608
-0.620), 5(0.166-0.168), 6(0.457 -0.472), S(1.00), 7
(0.120-0.137), 8(0.146-0.173),其中 4、 6、S号峰的单峰
面积占总峰面积为 10%以上 , 比值差异在 ±20%内。共有峰
总面积占总峰面积的 90%以上。
2.5　荔枝草及其混淆品的指纹图谱比较
本试验条件下荔枝草及其混淆品的 HPLC指纹图谱明
显不同 , 峰的数量 、峰面积和峰高都有显著差异 , 荔枝草标定
的 9个共有指纹峰中 , 除 2、8号外 , 其他 7个共有指纹峰混
淆品也都含有;而混淆品则比荔枝草含有更多的指纹峰 , 特
别是 36 ～ 48 min时间段内有 4个荔枝草中不含有的指纹峰 ,
可做为鉴别依据。试验表明 , 通过 HPLC指纹图谱 , 可以很
容易地将它们相互区别开来。
2.6　荔枝草药材色谱指纹图谱的相似度评价
用 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统 ”软件进行数据
处理 , 选取九点校正 ,将多个色谱图进行比较 , 得到可全面反
映多个色谱图特征的对照色谱图。 以此模式为基准 , 计算每
个色谱图与之相比较的相似度。实验中对十批次荔枝草药
材进行了相似度评价 , 并确定了对照色谱图 , 与以上对照色
谱指纹图谱相比 , 收集的十批荔枝草药材中 , 相似度均大于
0.96;混淆品药材中 , 相似度为 0.72,考虑到药材产地的差异
性 , 在荔枝草药材色谱指纹图谱标准中 , 建议相似度阈值规
定大于 0.90为合格药材。
3　讨论
(1)采用指纹图谱鉴别中药材(中药饮片或中成药)的
真伪具有明显优势。本试验条件下荔枝草有 9个明显的特
征峰 , 可以清楚地表达荔枝草指纹图谱鉴别的专属性 , 与混
淆品的指纹图谱比较 , 可以十分明显地看出他们之间的差
异 ,很容易地将荔枝草与其混淆品区别开。本试验条件下的
荔枝草指纹图谱作为荔枝草药材的鉴别无疑是一种可靠的
方法。
(2)指纹图谱已成为控制中药或天然药物质量的有效手
段。柱色谱给出的分辨率高轮廓图谱重现性好 、操作相对容
易 、稳定性好 ,适合指纹图谱研究和应用。本文采用了 HPLC
色谱法测定了 10批荔枝草药材指纹图谱 , 建立了荔枝草药
材的指纹图谱分析方法 ,用 “中药色谱指纹图谱相似度评价
系统”软件进行了数据处理 ,选取九点校正 , 得到荔枝草对照
色谱图。以此模式为基准 , 计算每个色谱图与之相比较的相
似度 , 建议相似度阈值规定大于 0.90为合格药材。结果表
明方法可靠稳定 、重现性好。
参考文献
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[ 4] TechnicalRequirementsoftheFingerprintinInjectionofChineseMa-
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研究技术要求(试行)[S] .2000.
(收稿日期:2008-06-06)
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傅国强等:荔枝草及其混淆品的 HPLC指纹图谱鉴定