全 文 ：收稿日期:2007-09-14;　修订日期:2007-10-30
基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目(No.黔科合中
药专字 [ 2004] 20号)
作者简介:陈　化(1970-),女(汉族),四川成都人 ,现任贵州省兴义市人
民工人医院药剂科主管药师 、执业药师 , 学士学位 ,主要从事医院药学与
药物研究工作.
超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别
陈　化 ,吴迎椿
(贵州省兴义市人民工人医院 ,贵州 兴义　562400)
摘要:目的 为充分利用小叶榕植物资源 , 避免资源的浪费 ,探讨小叶榕总黄酮的提取及鉴别方法。 方法 采用超声波乙
醇浸提法从小叶榕中提取总黄酮类物质 ,对所提取的黄酮类物质进行验证 , 并用分光光度法测定含量。 结果 测得供试
品溶液中总黄酮的含量 C=0.391 6 mg/ml, 回收率为 100.16%, 其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程 , 无
任何污染 , 是一条提取小叶榕总黄酮类物质的有效途径。
关键词:超声波提取;　小叶榕;　总黄酮;　鉴别
中图分类号:R284.2;R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1677-02
ExtractionandIdentificationofTotalFlavanoneofXiaoyerongbyUltrasonicWave
CHENHua, WUYing-chun
(People′sWorkersHospitalofXingyiinGuizhou, Xingyi, Guizhou562400, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfortheextractionandidentificationoftotalflavanoneofXiaoyerong.MethodsThe
flavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromXiaoyerongwithultrasonicwave.Spectrophotometrywasusedtodetermine
theflavanoneofXiaoyerong.ResultsThecontentofthetotalflavanoneofXiaoyerongwasC=0.3917mg/mlandtherateofre-
coverywas100.16%.Conclusion Thismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypolution.Itisanidealwaytoex-
tracttheflavanoneofXiaoyerong.
Keywords:Ultrasonicwavetreatment;　Xiaoyerong;　Totalflavanone;　Identification
　　小叶榕为桑科植物榕树 FicusmicrocarpaL.f.的干燥叶 ,又名
细叶椿 、细叶榕 、垂叶榕 , 属桑科椿属常绿大乔木 , 高 20 ～ 25m,生
气根 [ 1～ 2] 。全年可采收 ,斩取叶和幼枝 , 除去树枝 , 取净叶片 , 晒
干。小叶榕多生长于村边或山林中 , 分布于广西 、广东 、福建 、台
湾 、浙江南部 、云南 、贵州。印度 、缅甸 、马来西亚也有。
小叶榕既可作风景树 、行道树 ,树皮纤维可制鱼网和人造棉 ,
又具有药用价值。小叶榕的茎 、皮 、果 、叶 、胶汁等均可入药 ,具有
祛风清热 、活血解毒 、散淤理湿等功效。民间多用于治疗关节风
湿痛 、跌打损伤 、小便不通 、风火牙痛 、急性痢疾及肠炎 、疥癣 、痔
疮等病症。其叶 、皮 、果等提取的浸膏是治疗咳嗽 、感冒类中成药
的主要原料。
近年来 , 超声技术应用于提取植物中的生物碱 、苷类 、生物活
性物质 、动物组织浆的毒质等研究已有报道 [ 3 ～ 4] , 表明其具有能
耗低 、效率高 、不破坏有效成分的特点。很多研究表明 ,利用超声
波产生的强烈振动 、高的加速度 、强烈的空化效应 、搅拌作用等 ,
可加速植物材料中的有效成分进入溶剂 ,从而增加有效成分的提
取率 , 缩短提取时间 , 并且还可避免高温对提取成分的影响 [ 4] ,
但超声技术应用于提取小叶榕中黄酮类物质的研究尚未见报道。
本文报道用超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别。
1 　仪器与试剂
1.1　仪器 HS10260D型超声波清洗器(超声工作频率 40 kHz,
天津市恒奥科技发展有限公司);UV-2450型紫外 -可见分光
光度计(日本岛津);ZF7C型三用紫外分析仪(上海康华生化仪
器制造有限公司);2×Z-1旋片式真空泵(浙江黄岩求精真空泵
厂);AUY220型电子天平(日本岛津)。
1.2 　试剂 甲醇 AR;乙醇 AR;镁粉 AR;盐酸 AR;芦丁(Rutin)
对照品(中国药品生物制品检定所);新鲜小叶榕采自贵州省兴
义市沧江乡。
2 　方法与结果
2.1 　总黄酮成分提取 取新鲜小叶榕 , 烘干(55℃),粉碎(过三
号筛)。取 55℃干燥至恒重的小叶榕粉末(过三号筛)约 0.2 g,
精密称定 ,置 100ml量瓶中 , 加 70%乙醇 90ml, ,超声处理(功率
250 W,频率 40 kHz)45 min, 放冷 , 用 70%乙醇稀释至刻度 , 摇
匀 , 滤过 ,得供试品溶液。
2.2　测定方法依据 以芦丁为对照品测定小叶榕中总黄酮的含
量 , 用盐酸 -镁粉显色法 , 在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 　定量实验 -总黄酮的含量测定
2.3.1　对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品适量 , 加甲醇
制成每毫升中含芦丁 0.230 8 mg的溶液 ,即得。
2.3.2　波长的选择 精密量取芦丁对照品溶液(0.230 8 mg/ml)
和供试品溶液各 1.0 ml, 分别置加有镁粉 100 mg的具塞刻度试
管中 , 将试管置冷水浴(15℃左右)中缓缓滴加浓盐酸 3.0 ml, 摇
匀 , 加 70%乙醇至 6ml, 摇匀 ,置沸水浴中保温 35min,取出 , 迅速
冷却至室温 ,用 70%乙醇补充至原体积 , 以相应试剂为空白 , 在
400 ～ 700 nm波长范围内扫描测定吸收光谱。
采用盐酸 -镁粉显色法对总黄酮进行显色并进行全波长扫
描。结果发观 , 用盐酸 -镁粉显色后 , 芦丁对照品 、供试品的最大
吸收波长基本一致 ,均为(510 ±5)nm, 重复性好 , 同时空白溶液
显色前后及芦丁对照品 、样品显色前在该波长处均无明显吸收 ,
故选择盐酸 -镁粉显色法 , 在 510 nm波长处测定小叶榕总黄酮
含量。
2.3.3　标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 1.0, 1.5, 2.0,
2.5, 3.0ml, 分别置加有镁粉 100 mg的具塞刻度试管中 , 将试管
置冷水浴(15℃左右)中缓缓滴加浓盐酸 3.0 ml,摇匀 ,加 70%乙
醇至 6 ml,摇匀 , 置沸水浴中保温 35 min, 取出 ,迅速冷却至室温 ,
用 70%乙醇补充至原体积 , 以相应试剂为空白 , 在 510 nm波长
处测定吸光度(见表 1)。 以吸光度为纵坐标 , 浓度为横坐标 , 绘
制标准曲线 ,得回归方程:A=0.048 1+1.169 6C, r=0.999 5(n
=3)。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期
表 1　紫外-可见分光光度计测定吸光度结果
对照品 /ml 芦丁含量 C/mg· ml-1 ABS
1.0 0.230 8 0.316
1.5 0.346 2 0.452
2.0 0.461 6 0.588
2.5 0.577 0 0.734
3.0 0.692 4 0.850
2.3.4　提取物含量的测定 精密量取样品溶液 1.0ml,置加有镁
粉 100 mg的具塞刻度试管中 , 按标准曲线的制备方法测定其吸
光度 A=0.506,根据回归方程:A=0.048 1+1.169 6C, 计算出供
试品溶液中总黄酮的含量 C=0.391 6mg/ml,小叶榕供试品中含
总黄酮以芦丁(C
27
H
30
O
16
)计为 19.58%。
2.3.5　回收率实验 [ 5] 精密量取供试品溶液 1.0 ml, 加入芦丁
对照品溶液 1.0 ml(0.230 8 mg/ml), 同前供试品测定方法操作
测定吸光度 , 求出回收率为 100.16%。
2.4 　定性实验 -总黄酮的鉴别
2.4.1　纸层析 取供试品溶液 、对照品溶液各 2 μl分别点在同
一滤纸上 , 以正丁醇 -醋酸 -水(4∶ 1∶ 5)为展开剂 , 展开 , 取
出 , 晾干 ,喷以 1%三氯化铝乙醇溶液 , 晾干 , 置紫外光灯(365
nm)下检视。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 , 显
相同颜色的荧光斑点 。
2.4.2　盐酸 -镁粉反应 取供试品溶液 1ml置加有镁粉适量的
试管中 , 加浓盐酸数滴 ,在泡沫处呈紫红色。
2.4.3　三氯化铝反应 取供试品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%三
氯化铝乙醇溶液 , 吹干。在可见光下呈灰黄色 , 置紫外光灯(365
nm)下呈黄色荧光斑点。
2.4.4　紫外光下呈色反应 取供试品溶液点在滤纸上 , 在可见
光下呈灰黄色 , 置紫外光灯(365nm)下呈灰褐色并有荧光斑点。
2.4.5　浓氨水反应 取供试品溶液点在滤纸上 , 将滤纸在氨水
上方薰 30s,立即置紫外光灯(365 nm)下检视 , 呈极明显的黄褐
色荧光斑点。
2.4.6　乙酸镁反应 取供试品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%乙酸
镁甲醇溶液 , 吹干 ,置紫外光灯(365 nm)下检视 , 呈黄色斑点。
3 　讨论
实验结果表明 , 本实验方法工艺简单 , 回收率为 100.16%,
本实验所提供的超声波提取 、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯
度较高。超声波可以强化乙醇浸提法 ,达到省时 、高效 、节能的目
的 [ 6] 。该方法采用全物理过程 , 无任何污染 , 是一条理想的提取
小叶榕总黄酮类物质的途径 ,具有广阔的应用前景。
黄酮类化合物是一大类天然产物 , 广泛存在于植物界 , 是
许多中草药的有效成分 。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮
醇 , 其它包括双氢黄(醇)、异黄酮 、双黄酮 、黄烷醇 、查尔酮 、
橙酮 、花色苷及新黄酮类等 [ 7] 。天然来源的生物黄酮分子量
小 , 能被人体迅速吸收 , 能通过血脑屏障 , 进入脂肪组织 , 进而
体现出如下功能:消除疲劳 、保护血管 、防动脉硬化 、扩张毛细
血管 、疏通微循环 、抗脂肪氧化 、抗衰老 、活化大脑及其他脏器
细胞的功能 。
黄酮类化合物具有抗癌 、抗肿瘤 、抗心脑血管疾病 、抗炎镇
痛 、免疫调节 、降血糖 、治疗骨质疏松 、抑菌抗病毒 、抗氧化 、抗衰
老 、抗辐射等作用 [ 8 ～ 13] 。近年来 , 世界上掀起了植物药开发的热
潮 , 植物药以天然低毒的特点备受青睐 , 而黄酮类化合物以广谱
的药理作用引人瞩目。小叶榕分布广泛。本实验结果表明 ,小叶
榕中含有较为丰富的黄酮。因此 ,小叶榕具有广泛的开发和利用
价值 , 值得综合利用并加强资源开发。
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7