全 文 ：［收稿日期］ 20120813(012)
［基金项目］ 贵州省中药现代化科技产业项目( ［2008］5002)
［第一作者］ 夏玉吉，硕士研究生，从事中药成分分析，Tel:
15114022187，E-mail:1392192077@ qq． com
［通讯作者］ * 鲍家科，主任药师，从事中药质量标准研究，
Tel:13985430537，E-mail:bjk2005@ 163． com
地耳草质量标准研究
夏玉吉1，鲍家科2* ，郑丽会1，许乾丽1，王珍珍3，欧恒熙3
(1. 贵州省药品检验所，贵阳 550004;2. 贵州省药品审评认证中心，贵阳 550004;
3. 贵阳医学院药学院，贵阳 550004)
［摘要］ 目的:以异槲皮苷、槲皮苷为指标，研究并完善地耳草药材的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)为定性鉴
别方法;HPLC测定其中异槲皮苷、槲皮苷含量。结果:不同产地 10 批地耳草药材异槲皮苷、槲皮苷薄层鉴别斑点清晰，分离
度好，结果一致;含量测定异槲皮苷平均含量为 0. 4%，槲皮苷平均含量为 0. 5%，异槲皮苷、槲皮苷的平均回收率分别为
99. 39%，98. 98%，RSD分别为 1. 85%，2. 76%。结论:定性定量方法快速、准确、专属性强、重复性好，可用于地耳草药材的质
量控制。
［关键词］ 地耳草;质量标准;薄层色谱;高效液相色谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)11-0105-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013110105
Study on Quality Standard of Hypericum japonicum
XIA Yu-ji1，BAO Jia-ke2* ，ZHENG Li-hui1，XU Qian-li1，WANG Zhen-zhen3，OU Heng-xi3
(1. Guizhou Institute For Drug Control，Guiyang 550004，China;
2. Guizhou Center for Drug Evaluation，Guiyang 550004，China;
3. School of Pharmacy of Guiyang Medical University，Guiyang 550004，China)
［Abstract］ Objective: To study and improve the quality standard of Hypericum japonicum with
isoquercitrin and quercitrin as index． Method:TLC was used for qualitative identification method． Quercitrin and
isoquercitrin were determined by HPLC． Result:The TLC spots of isoquercitrin and quercitrin were clear，well
separated;the results of 10 batch of H． japonicum from different area were consistent． Average content of
isoquercitrin was 0. 4%，the average content of quercitrin was 0. 5%;the recovery of isoquercitrin was 99. 39%
with RSD of 1. 85%，and the recovery of quercitrin was 98. 98% with RSD of 2. 76% ． Conclusion:Qualitative
and quantitative methods are rapid，accurate，with strong specificity and good reproducibility，which can be used
for the quality control of Hypericum japonicum．
［Key words］ Hypericum japonicum;quality standard;TLC;HPLC
本品为滕黄科植物地耳草的新鲜或干燥全草，
春、夏二季开花时采收，除去杂质，鲜用或干燥;具有
清热解毒、利湿消肿、散瘀止痛等功效;用于湿热黄
疸、目赤肿痛、跌扑损伤等症。地耳草始载于《生草
药性备要》、《植物名实图考》又名田基黄、雀舌草
等［1］，药材标准收载于 1977 年版一部《中国药
典》［2］及《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003
年版)［3］等，原标准比较简单仅有性状和显微等检
测项目。据报道，地耳草主要含黄酮类［4，5］、色原酮
类化合物［5］等。王永刚等［6］对地耳草药材指纹图
谱进行研究，通过对指纹图谱色谱峰的指认发现地
耳草中黄酮类成分异槲皮苷、槲皮苷含量较高。本
文收集了不同产地、不同采收时间的地耳草药材 10
批，采用薄层色谱法及高效液相色谱法对其成分异
槲皮苷、槲皮苷进行定性定量检测，专属性强，灵敏
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度、准确度高，该方法旨在为地耳草药材质量标准的
提升研究，为合理开发利用地耳草药材资源提供理
论依据［7］。
1 材料
日本岛津 LC-20AD 型高效液相色谱仪(SPD-
M20A二极管阵列检测器、CBM-20A 系统控制器、
CTO-20AC柱温箱、LC-20AT 泵、SIL-20A 自动进样
器、LC2000 色谱数据工作站) ，XS205 型电子分析天
平(梅特勒-托利多仪器有限公司) ，CH-300 型超声
波清洗机(北京创新德超声电子研究所) ，DK-98-
11A型电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公
司) ，中药材粉碎机(浙江温岭市林大机械有限公
司)。
异槲皮苷对照品(批号 111809-201102)、槲皮
苷对照品(批号 111538-200403)由中国药品生物制
品检定所提供。硅胶 G薄层板(青岛海洋化工厂) ，
乙腈为色谱纯，甲醇为色谱纯、分析纯，其余试剂均
为分析纯，水为重蒸馏水。10 批地耳草样品，均由
贵阳中医学院陈德媛研究员鉴定为为滕黄科植物地
耳草 Hypericum japonicum Thunb．的全草。药材来源
见表 1。
2 方法与结果
2. 1 薄层色谱鉴别
2. 1. 1 对照品溶液的制备 取异槲皮苷对照品，加
乙醇制成每 1 mL中含 1 mg 的溶液，作为异槲皮苷
对照品溶液。另取槲皮苷对照品，加乙醇制成每
1 mL中含 1 mg的溶液，作为槲皮苷对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取地耳草药材粉末
0. 1 g，置具塞锥形瓶中，加入乙醇 10 mL，超声处理
10 min，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇
1 mL使溶解，作为供试品溶液。
2. 1. 3 薄层色谱条件及其结果 照薄层色谱法
(2010 年版《中国药典》一部附录Ⅵ B)试验［8］，吸
取上述两种溶液各 5 ～ 7 μL，分别点于同一以羧甲
基纤维素纳为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙
酯-甲酸-水 (16 ∶ 0. 5 ∶ 3)上层溶液为展开剂，展开，
取出，晾干，喷以 5%三氯化铝乙醇溶液，105 ℃加热
至斑点清晰。置紫外灯(365 nm)下检视，供试品色
谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的
斑点。结果表明，10 批不同产地地耳草药材与对
照品比较均能出现相同 Rf值斑点。见图 1。
2. 2 异槲皮苷、槲皮苷含量测定
2. 2. 1 色谱条件 Diamosil C18色谱柱 (4. 6 mm ×
200 mm，5 μm) ，以甲醇-0. 1%磷酸溶液(42∶ 58)为
1. 异槲皮苷对照品;2. 槲皮苷对照品;3 ～ 12. 10 批地耳草样品
图 1 地耳草药材薄层鉴别
流动相，检测波长 350 nm，柱温 30 ℃，流速 1. 0 mL·
min －1，进样量 10 μL。
2. 2. 2 混合对照品溶液的制备 精密称定异槲皮
苷对照品 10. 45 mg置 50 mL量瓶中，加甲醇溶解并
定容至刻度，制得 0. 209 0 g·L －1异槲皮苷对照品储
备液。精密称定槲皮苷对照品 15. 31 mg 置 50 mL
量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制得 0. 306 2 g·
L －1槲皮苷对照品储备液。分别取异槲皮苷对照品
储备液(0. 209 0 g·L －1)6 mL、槲皮苷对照品储备液
(0. 306 2 g·L －1)3 mL至 25 mL量瓶，加甲醇溶解并
定容至刻度，得异槲皮苷质量浓度为 0. 050 16 g·
L －1、槲皮苷质量浓度为 0. 036 74 g·L －1的混合对照
品溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 取地耳草粉末(过四
号筛)约 0. 3 g，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加入甲
醇适量，超声处理 30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇
匀，经 0. 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2. 2. 4 标准曲线的绘制 分别精密吸取异槲皮苷
苷、槲皮苷混合对照品溶液(异槲皮苷0. 050 16 g·
L －1、槲皮苷0. 036 74 g·L －1)1，2，4，6，8，10，12，14
μL进样，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以峰面
积 A对进样量(μg)进行线性回归计算，得线性回归
方程为 A异槲皮苷 = 2. 9 × 10
6X － 58 142(R2 = 0. 999 3) ，
A槲皮苷 = 3. 1 × 10
6 X － 75 102(R2 = 0. 999 4)。
2. 2. 5 精密度试验 精密吸取异槲皮苷、槲皮苷混
合对照品溶液(异槲皮苷 0. 050 16 g·L －1、槲皮苷
0. 036 74 g·L －1)10 μL，连续进样 6 次测定，异槲皮
苷、槲皮苷峰面值的 RSD分别为 0. 14%，0. 17%，表
明仪器精密度良好。
2. 2. 6 稳定性试验 取供试品溶液(1 号样品) ，分
别于 0，4，8，24 h 进样测定，异槲皮苷、槲皮苷峰面
积值 RSD分别为 0. 82%，1. 0%，表明供试品溶液在
24 h内具有良好的稳定性。
2. 2. 7 重复性试验 对同一批地耳草药材(1 号样
品)平行制备 6 份供试品溶液，分别进样测定，按干
燥品计算其异槲皮苷、槲皮苷含量，其 RSD 分别为
1. 3%，1. 1%，表明该方法的重复性良好。
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A．混合对照品;B．样品;1. 异槲皮苷;2. 槲皮苷
图 2 混合对照品及样品液相色谱
2. 2. 8 加样回收率试验 精密称取地耳草粉末(1
号样品)约 0. 15 g，共 6 份，每份等量加入异槲皮苷、
槲皮苷对照品，按 2. 5. 3 项下进行样品制备并测定，
计算回收率。异槲皮苷的平均回收率为 99. 39%，
RSD 1. 85%，测定结果见表 2;槲皮苷的平均回收率
98. 98%，RSD 2. 76%。测定结果见表 3。
2. 2. 9 样品测定 按 2. 2. 3 项，对 10 批地耳草药
材进行测定，每批平行测定 2 份，测定结果见表 1。
表 1 药材来源及样品含量测定 mg·g － 1
No． 产地 收集日期 异槲皮苷 槲皮苷
1 贵阳市花溪久安 2010-10 5. 437 5 6. 095 6
2 贵州省水城市郊 2010-08 4. 685 5 4. 169 7
3 贵阳市乌当区新场乡 2011-07 5. 494 4 8. 092 9
4 安徽省亳州 2011-08 1. 664 2 2. 207 6
5 贵州黔东南州雷山县 2011-07 3. 141 2 5. 274 0
6 贵州黔东南州凯里 2011-09 5. 062 3 4. 379 6
7 贵州黔东南州榕江县 2011-08 5. 136 1 7. 903 1
8 贵州省都匀市郊 2011-09 4. 718 6 6. 293 9
9 贵州省都匀邦水 2011-10 1. 120 1 0. 729 9
10 贵州省清镇市郊 2011-10 5. 362 0 7. 729 7
根据 10 批样品测定结果分析，异槲皮苷含量最
高值 5. 494 4 mg·g －1，平均值为 4. 182 2 mg·g －1;槲
皮苷含量最高值 8. 092 9 mg·g －1，平均值为 5. 287 6
mg·g －1，各批次样品中异槲皮苷、槲皮苷含量相差
较大。考虑到异槲皮苷含量测定结果绝大多数在 1
mg·g －1以上，故暂定地耳草含异槲皮苷不得少于
0. 1%，槲皮苷含量测定结果绝大多数在 2 mg·g －1
以上，故暂定地耳草含槲皮苷不得少于 0. 2%。
表 2 异槲皮苷加样回收率试验测定
取样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
0. 153 3 0. 833 6 0. 836 0 1. 677 5 100. 95
0. 155 6 0. 846 1 0. 836 0 1. 651 9 96. 40
0. 156 6 0. 851 5 0. 836 0 1. 678 8 98. 96
99. 39 1. 85
0. 155 3 0. 844 4 0. 836 0 1. 666 8 98. 36
0. 156 1 0. 848 8 0. 836 0 1. 690 0 100. 62
0. 153 4 0. 834 1 0. 836 0 1. 678 8 101. 04
表 3 槲皮苷加样回收率试验测定
取样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
0. 153 3 0. 934 5 0. 918 6 1. 882 1 103. 16
0. 155 6 0. 948 5 0. 918 6 1. 873 3 100. 68
0. 156 6 0. 954 6 0. 918 6 1. 858 0 98. 35
98. 98 2. 76
0. 155 3 0. 946 6 0. 918 6 1. 822 6 95. 36
0. 156 1 0. 951 5 0. 918 6 1. 862 9 99. 21
0. 153 4 0. 935 1 0. 918 6 1. 827 4 97. 14
3 讨论
分别以乙酸乙酯-甲酸［9］、乙酸乙酯-甲酸-水［8］
等展开系统的不同配比进行了展开剂的选择，最终
选定以乙酸乙酯-甲酸-水 (16 ∶ 0. 5 ∶ 3)上层溶液为
展开剂进行测定。对薄层色谱鉴别进行了耐用性考
察，即不同温度(高温 40 ℃、室温、低温 4 ℃) ，不同
湿度(高湿、中湿、低湿) ，不同品牌薄层板(预制板、
手铺板) ，结果表明在上述各条件下色谱行为基本
一致，各斑点能较好的分离，说明本方法具有很好的
环境耐用性。参照《中国药典》2010 年版贯叶金丝
桃中金丝桃苷含量测定方法［8］，对流动相进行选
择，考虑到乙腈的毒性和价格［10］，故用甲醇-磷酸系
统作为流动相，考察了不同比例的甲醇-0. 1%磷酸，
最终确定甲醇-0. 1%磷酸(42∶ 58)作为流动相。
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20120421(004)
［基金项目］ 贵阳市科技局现代药业计划项目(筑科合同［2011204］13 号) ;贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目［黔省专合字
(2011)80 号］
［通讯作者］ * 张丽艳，教授，从事中药、民族药质量控制及新药研究，Tel:13984870641，E-mail:zly1964@ 163． com
黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱研究
谭家华1，张丽艳2* ，徐昌艳2，黄健2，汪毅2，杨玉琴2
(1. 贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 550002;2. 贵阳中医学院，贵阳 550002)
［摘要］ 目的:建立黔产苗药石吊兰的 HPLC指纹图谱，比较了贵州不同产地石吊兰的差异，为科学评价石吊兰的质量
提供参考依据。方法:采用 HPLC 法，Agilent Zorbax SB-C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈-0. 05%磷酸水为流动相梯度洗
脱，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 334 nm。结果:建立了黔产石吊兰药材的 HPLC指纹图谱，并对 12 批样品的相似
度进行了比较，标定了 15 个共有峰;贵州不同产地石吊兰的主成分组成基本相同，但各组分的含量有较大的差异。结论:所建
立的方法简便，重复性良好，特征性强，可用于黔产石吊兰的 HPLC指纹图谱测定，并可为其今后规范药材资源及质量评价提
供科学依据。
［关键词］ 苗药;石吊兰;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)11-0108-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013110108
Study on HPLC Fingerprint of the
Miao Medicine Lysionotus pauciflorus from Guizhou
TAN Jia-hua1，ZHANG Li-yan2* ，XU Chang-yan2，HUANG Jian2，WANG Yi2，YANG Yu-qin2
(1. The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China;
2. Guiyang College of Chinese Traditional Medicine，Guiyang 550002，China)
［Abstract］ Objective:To establish the HPLC fingerprint of Lysionotus pauciflorus from Guizhou，and to
compare the difference of L． pauciflorus，so as to provide scientific basis for quality evaluation of L． pauciflorus．
Method:HPLC analysis was performed on a Agilent Zorbax SB-C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)with the
eluting system of gradient consisted of acetonitrile-0. 05% H3PO4. The flow rate was 1. 0 mL·min
－1 ． The column
temperature was maintained at 30 ℃ and the detection wavelength was set at 334 nm． Result:The HPLC
fingerprint was established and compared by 12 batch of samples similarity with 15 common peaks． The main
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2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 11
Jun．，2013