全 文 ：淡黄花百合的组织培养
收稿日期:2005-05-29。
作者简介:李黛(1962-),女 ,副教授;主要从事植物生理研究工作。
李　黛 1　谈　锋 2　祝顺琴 2
(1.遵义师范学院生物系　贵州遵义　563002;2.西南师范大学生命科学学院　重庆　400715)
摘要:采用正交试验的方法 , 在 MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖 、6-BA(6-苄基腺嘌呤)及 NAA(α-奈乙酸)对淡黄花百
合芽增殖和愈伤组织生长的影响 ,结果表明:芽增殖的最佳培养基为 MS +0.5 ppm 6-BA +0.5 ppm NAA+4%蔗糖。愈伤
组织增殖的最适培养基为 MS +0. 5 ppm 6-BA+1 ppm NAA +3%蔗糖。
关键词　淡黄花百合　芽增殖　愈伤组织　正交试验
T issue Culture ofLilium su lphureum Baker
L iDai
1　 Tan Feng2　 Zhu Shunqin2
(1. Dep t. o f B iology, Zuny iN orma lCo llege, Zuny i　563002,
2. Co llege of L ife Science Southw est China No rmalUn iversity, Chongqing　400715)
Abstract:U sing the me thod o f o rthogona l experimen t, we study the influence o f differen t density of sucrose,
6-BA andNAA on the bud and callus g row th ofLilium sulphureum Baker inM S so lidmedium.The resu lt show s
that The bestmedium o f bud grow th isM S+0.5 ppm 6-BA +0.5 ppm NAA +4% sucrose. The bestmedium of
callus g row th isM S+0.5 ppm 6-BA +1 ppm NAA +3% sucrose.
Key words　Lilium sulphureum Bake r　Bud g row th　Callus O rthogona l experimen t
随着社会的进步 ,人民生活水平的提高及对健康的重视 ,开发未病先防的保健产品成为一种发展趋势 。百合
属植物除具有极高的观赏价值外 ,还具食用价值 ,是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物 ,不仅临床上有着
广泛的应用 ,而且作为加工保健产品的原料也极具开发前景。 20世纪 90年代以来 ,我国开发了多种百合饮料和
百合粉 [ 1 ] 。淡黄花百合 (Lilium sulphureum Baker)作为一个药食两用的野生种 ,为多年生宿根草本植物 ,产于贵
州省 ,是百合开发的重要资源 ,由于百合组织培养繁殖与传统繁殖方法相比具有节省用种量 、繁殖速度快 、减少病
害等优点 ,目前对百合组培快繁研究较多 [ 2 ～ 7] ,但对药食两用品种淡黄花百合的研究尚未见报道 ,本文介绍了对
淡黄花百合组培技术的研究。
1　材料与方法
1.1　材料
淡黄花百合 (Lilium sulphureum Baker)采自贵州务川县野生林下 ,在西南师范大学生命科学院药用植物园地
内盆栽于紫色壤土中 。将鳞茎用自来水冲洗干净 、分瓣 ,在自来水下流水冲洗 30m in左右 ,于超净工作台上用
75%的酒精浸泡 10 s左右 ,然后用 0.1%的升汞消毒 15m in,无菌水冲洗 5次以上。切去鳞片上部 ,留下长约
1 cm的中下部 ,将其接种在 pH值为 5.8的 MS+0.5mg /L6-BA +1mg /LNAA +3%蔗糖固体培养基中 ,每瓶接种
一个切段 ,在温度为 25℃,光照强度为 1 200 lx,照光时间为 12 h /d的条件下培养 , 36 d后可获得无菌丛生芽和愈
伤组织 。将所得的愈伤组织和不定芽分别接种到 MS+0.5mg /L 6-BA +0.5mg /L NAA +3%蔗糖的培养基中扩
繁 ,即可获得供试材料 。
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DOI牶牨牥牣牨牰牭牴牥牤j牣cnki牣牨牥牥牨牠牬牱牥牭牣牪牥牥牭牣牥牴牣牥牭牱
表 1　L9(3)4正交试验
水平 因　　子
A:6-BA(mg /L) B:NAA(m g /L) C:蔗糖(g /L) (空列)
芽增殖
1 0. 1 0. 1 2
2 0. 5 0. 5 3
3 1. 0 1. 0 4
愈伤组织增殖
1 0. 1 0. 5 3
2 0. 5 1. 0 4
3 1. 0 2. 0 5
芽分化
1 0. 5 0. 0 2
2 1. 0 0. 1 3
3 2. 0 0. 5 4
表 2　芽增殖 L9(3)4试验结果
组号 因子
A B C
接种芽
总数
芽增殖
总数
增殖
总数
1 0. 1 0. 1 2 20 48 2. 40
2 0. 1 0. 5 3 20 78 3. 90
3 0. 1 1. 0 4 20 45 2. 25
4 0. 5 0. 1 3 20 79 3. 95
5 0. 5 0. 5 4 20 106 5. 25
6 0. 5 1. 0 2 20 65 3. 25
7 1. 0 0. 1 4 20 70 3. 50
8 1. 0 0. 5 2 20 50 2. 50
9 1. 0 1. 0 3 20 57 2. 85
K1 171 197 163
K
2 250 234 214
K3 177 167 221
表 3　芽增殖试验结果的方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 平均偏差平方和 F值 F0.05 F0.01
A 64. 48 2 32. 24 7. 92** 3. 11 4. 88
B 37. 54 2 18. 77 4. 61*
C 33. 41 2 16. 71 4. 11*
e 704. 88 173 4. 04
　　注:*显著;**极显著。
1.2　方法
采用正交试验筛选不定芽增殖及
愈伤组织增殖和分化的最佳培养基。
所用基本培养基均为 MS培养基 ,正交
实验采用 L9(3)4 正交表 , 6-BA、NAA、
蔗糖浓度三因素三水平的试验设计见
表 1 , D因素作为空列。
将上述供试材料按正交试验方案
进行增殖和分化试验。芽增殖试验是
将扩繁后的不定芽接到芽增殖培养基
中 ,每瓶 2株 ,每组 20个重复 ,培养 40
d;愈伤组织增殖试验是将扩繁后的愈
伤组织接到愈伤组织增殖培养基中 ,每
瓶接 0.5 cm见方的愈伤组织一块 ,每组
10个重复 ,培养 40 d。培养前后用电子
天平分别称重计算愈伤组织质量 ,得出
愈伤组织增重 (mg /d g FW )。芽分
化试验是将扩繁后的愈伤组织接到芽
分化培养基中 ,每瓶接约 0.5 cm3的愈
伤组织 2块 ,每组 13个重复 , 50 d后统
计分化出的芽数 。
芽增殖 、愈伤组织增殖和分化的培
养条件与鳞片的芽诱导相同。
2 　结果与分析
2.1　芽增殖试验结果与分析
淡黄 花百合 芽增殖 正交 试验
L9(3)4结果见表 2。对表 2的结果进行
方差分析 ,结果见表 3。
表 2、表 3显示:6-BA浓度的差异
对淡黄花百合芽增殖的效果以 0.5mg /
L为最好 ,差异达极显著水平 , NAA和
蔗糖浓度的效果则分别以 0.5mg /L和
4%为最好 ,差异均达显著水平。正交
实验中 ,第 5组培养基中增殖的芽较
多 ,生长较好(见图 1),此外 ,从 K值看
出 ,蔗糖浓度为 3%时效果也较好 , 因
此 ,淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应
为:MS +0.5 mg /L 6-BA +0.5 mg /L
NAA +3%蔗糖。
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表 4　愈伤组织增殖 L9(3)4试验结果
组号 因子
A B C
平均接种量
(m g)
每天平均增重
(m g /d g W)
1 0. 1 0. 5 3 157. 5 200. 66
2 0. 1 1. 0 4 149. 2 403. 59
3 0. 1 2. 0 5 219. 9 53. 74
4 0. 5 0. 5 4 183. 2 202. 63
5 0. 5 1. 0 5 190. 2 272. 75
6 0. 5 2. 0 3 139. 3 345. 05
7 1. 0 0. 5 5 138. 7 145. 12
8 1. 0 1. 0 3 106. 1 219. 25
9 1. 0 2. 0 4 124. 8 158. 47
表 5　淡黄花百合愈伤组织增殖实验结果的直观分析
因素和 愈伤组织每天平均增重(m g /d g W)
6-BA NAA 蔗糖
K
1 6 579. 9 5 483.4 7 648.9
K2 8 204. 3 8 955.9 7 773.5
K3 5 228. 4 5 699.2 4 716.1
R 992.0 1 157.5 1 019.1
表 6　芽分化 L9(3)4试验结果
组号 因　　子
A B C
接种的愈伤
组织块数
分化出的
芽总数
每块愈伤组织
分化出的平均芽数
1 0. 5 0. 0 2 14 1 0. 07
2 0. 5 0. 1 3 14 3 0. 21
3 0. 5 0. 5 4 14 4 0. 29
4 1. 0 0. 0 3 14 24 1. 71
5 1. 0 0. 1 4 14 9 0. 64
6 1. 0 0. 5 2 14 7 0. 50
7 2. 0 0. 0 4 14 19 1. 36
8 2. 0 0. 1 2 14 12 0. 86
9 2. 0 0. 5 3 14 3 0. 21
K 1 0. 57 3. 14 1. 43
K 2 2. 85 1. 71 2. 13
K 3 2. 42 1. 00 2. 29
2.2　愈伤组织增殖和芽分化实验结果与分析
2.2.1　愈伤组织增殖实验
淡黄花百合愈伤组织增殖正交试验
L9(3)4结果见表 4。
对表 4试验结果进行方差分析表明 , 6-BA
浓度间 、NAA浓度间和蔗糖浓度间的差异不
显著 ,对实验结果进行直观分析 ,结果见表 5。
由表 3进行直观分析可知 , 6-BA浓度对愈
伤组织增生的影响以 0.5 mg /L为最好 , NAA
以 1 mg /L为最好 , 蔗糖以 4%为最好 , 但和
3%的差异不大 ,三个因素对淡黄花百合愈伤
组织增殖影响的大小顺序为:NAA 、蔗糖 、
6-BA。由此可知 ,愈伤组织增生的最适培养基
为:MS+0.5mg /L 6-BA +1mg /LNAA +4%蔗
糖 。图 2是在 2号培养基中增殖良好的愈伤
组织。
2.2.2　芽分化实验结果与分析
由愈伤组织分化芽的试验结果见表 6。
由表 6可知 ,在实验范围内 ,各因素不同
配比均能诱导愈伤组织分化芽 ,其中 6-BA浓
度以 1mg /L最好 , NAA以 0mg /L最好 ,蔗糖
3% ～ 4%均可 ,但每块愈伤组织分化出的平均
芽数不多 ,最高的仅有 1.71个 ,因此 ,诱导愈
伤组织分化芽的最适培养基还有待进一步研
究 。
2.3　壮苗及组培苗移栽
将芽增殖所得的不定芽转接在 MS +
1mg /L 6-BA +0.5mg /L NAA +3%蔗糖的培
养基中 , 10 d左右鳞茎开始膨大 , 20 d左右形
成较大的鳞茎 ,芽也生长得较为健壮 ,移栽后
较易存活且生长良好 。
参考文献
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