全 文 ：·220· Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 3 中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 3 期
·实验研究·
苍耳草的质量标准研究
王仕平1* ，刘惠民2，谢 勇3，刘 卿2(1．宜春市食品药品检验所，江西 宜春 336000;2．宜春市人民医院，江
西 宜春 336000;3．丰城市中医院，江西 丰城 336000)
中图分类号 Ｒ965 文献标志码 B 文章编号 1672 － 2124(2014)03 － 0220 － 03
摘 要 目的:建立苍耳草的质量标准。方法:鉴别采用薄层色谱法;含量测定采用高效液相色谱法，应用 Diamonsil C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以甲醇-0. 5%磷酸溶液(梯度洗脱)为流动相，流速为 1. 0 ml /min，检测波长为 326 nm，柱温为 25 ℃。
结果:薄层色谱分离好，斑点清晰;绿原酸在 0. 771 2 ～ 321. 330 2 μg /ml范围内具有良好的线性关系，r = 1. 000 0(n = 7) ，平均回收
率为 99. 87%，ＲSD = 0. 7%(n = 9)。结论:本方法灵敏、准确、专属性强、重复性好，可用于苍耳草的质量控制。
关键词 苍耳草;质量标准;绿原酸
Quality Standard of Siberian Cocklebur Herb
WANG Shi-ping1，LIU Hui-min2，XIE Yong3，LIU Qing2(1． Yichun Institute for Food and Drug
Control，Jiangxi Yichun 336000，China;2． Yichun People’s Hospital，Jiangxi Yichun 336000，
China;3． Fengcheng Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jiangxi Fengcheng 336000，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish the quality standard of siberian cocklebur herb． METHODS:Siberian
cocklebur herb was identified by TLC，and the content of chlorogenic acid was determined by HPLC using Diamonsil
C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)chromatographic column． The mobile phase consisted of methanol-0. 5% phosphoric
acid solution (gradient elution)at flow rate of 1. 0 ml /min，detection wavelength of 326 nm and column temperature of
25 ℃ ． ＲESUTLS:The TLC was well separated with clear spots． The linear range of chlorogenic acid was 0. 771 2-
321. 330 2 μg /ml(r = 1. 000 0;n = 7)with an average recovery rate of 99. 87% (ＲSD = 0. 7%;n = 9)．
CONCLUSION:The method is sensitive，accurate，specific and reproducible and it can be used for the quality control
of siberian cocklebur herb．
KEYWOＲDS Siberian cocklebur herb;Quality standard;Chlorogenic acid
* 主管药师。研究方向:食品药品检验标准的研究、新产品的开
发、快速鉴别方法的研究等。E-mail:wangshiping6@ 126． com
苍耳草为菊科植物苍耳 Xanthium sibiricum Patrin．的干燥
地上部分，具有祛风散热、除湿解毒作用，用于治疗感冒、头风、
头晕、鼻渊、目赤、风湿痹痛、拘挛麻木、目翳、风癞、疔肿、热毒疮
疡、皮肤瘙痒、痢疾等症［1］。全草含苍耳苷(strumaroside)、隐苍
耳内酯(xanthinin)、苍耳内酯(xanthumin)、8-(3-异戊烯基)-5，
7，3，4-四羟基黄酮、咖啡酸(caffeic acid)、1，4-二咖啡酰奎宁酸、
β-谷甾醇、豆甾醇、二十八醇、β-香树脂醇等［2］。苍耳草在全国
各地均有分布，其主产区有山东的荣城、文登、菏泽，江西宜春，
湖北黄冈，江苏及安徽等地［3］。该品种收载于《江西省中药材
标准》(1996年版) ，原标准仅收载部分理化鉴别，无含量测定
项。为了更有效地控制苍耳草的质量，江西省食品药品检验所
组织重新修订《江西省中药材标准》，并拟增加色谱鉴别和含量
测定。笔者参考相关文献［1-10］，研究建立了苍耳草的薄层色谱
法(TLC)鉴别和高效液相色谱法(HPLC)测定其中绿原酸含量。
1 材料
1. 1 仪器
Waters e2695 高效液相色谱仪、Waters 2998 二极管阵列检
测器;BP211D Sartorius电子天平(十万分之一，德国赛多利斯
公司生产) ;FA2004 电子天平(万分之一，上海天平仪器公司
生产) ;KH-250DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有
限公司生产) ;CAMAG 紫外观测箱(254 nm /365 nm) (瑞士卡
玛公司生产) ;929 型薄层铺板仪。
1. 2 药品与试剂
绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号:
110753-201214，含量:96. 6%) ;苍耳草对照药材(自采，经省中
草药研究院检验为菊科植物苍耳 Xanthium sibiricum Patrin．的
干燥地上部分) ;苍耳草药材(自采或市场购买) ;硅胶 GF254
(青岛海洋化工厂生产) ;甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯，水为
超纯水，其他试剂均为分析纯。
DOI:10.14009/j.issn.1672-2124.2014.03.005
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2 方法与结果
2. 1 TLC法
2. 1. 1 溶液的配制:取苍耳草对照药材粉末(过三号筛)1 g，
置具塞锥形瓶中，加 50%甲醇 25 ml，超声 30 min，滤过，滤液
蒸干，残渣加 50%甲醇 1 ml 溶解，作为对照药材溶液。另取
苍耳草粉末(过三号筛)约 1 g，同法制成供试品溶液。
2. 1. 2 试验结果:取对照药材溶液、供试品溶液、空白试剂溶
液各 2 μl，分别点于同一以 0. 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的
硅胶 GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(16∶ 4 ∶ 1)为展
开剂，展开，取出晾干，在紫外光灯(254 nm /365 nm)下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，分别显相同
颜色的荧光斑点;空白试剂无影响，见图 1。
2. 2 HPLC法
2. 2. 1 色谱条件:Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ;柱温:25 ℃;流动相:甲醇-0. 5%磷酸溶液(梯度洗脱，
见表 1) ;检测波长:326 nm;流速:1. 0 ml /min;进样量:10 μl。
2. 2. 2 对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品20. 79 mg，
置 25 ml量瓶中，加 50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对
照品贮备液。精密吸取上述对照品贮备液 2 ml，置 25 ml量瓶
中，加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备:取苍耳草粉末(过三号筛)约
0. 5 g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入 50%甲醇 25 ml，称
定质量，加热回流 30 min，放冷，再称定质量，用 50%甲醇补足
表 1 梯度洗脱
Tab 1 Gradient elution
时间 /min 甲醇 /% 0. 5%磷酸 /%
0 10 90
10 20 80
20 25 75
30 30 70
37 30 70
减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2. 2. 4 专属性考察:按“2. 2. 1”项下色谱条件，取绿原酸对照
品溶液、供试品溶液、供试品溶液加对照品溶液(1∶ 1)的混合
液(阳性对照)分别进样，结果绿原酸色谱峰无拖尾，分离度良
好。色谱图见图 2。
2. 2. 5 线性关系考察:精密量取“2. 2. 2”项下对照品贮备液
适量，分别加 50% 甲醇配制成 0. 771 2、2. 570 6、8. 033 3、
32. 133 0、64. 266 0、160. 665 1 与 321. 330 2 μg /ml 的溶液，作
为对照品溶液。分别精密量取上述对照品溶液各 10 μl 注入
高效液相色谱仪，并记录色谱图。以浓度 C为横坐标(X) ，峰面
积 A为纵坐标(Y) ，得绿原酸的线性回归方程:Y = 31 140X －
7 083，r = 1. 000 0(n = 7) ，结果表明，绿原酸在 0. 771 2 ～
321. 330 2 μg /ml范围内呈良好的线性关系。
2. 2. 6 精密度试验:精密量取对照品溶液(64. 266 0 μg /ml)
10 μl，按“2. 2. 1”项下色谱条件测得对照品峰面积的 ＲSD
值为 0. 5%(n = 6) ，结果表明仪器精密度良好，理论塔板
1—5．供试品(1—5) ;6．对照药材;7—9．供试品(6—8) ;10．空白;11—12．供试品(9—10)
1-5． test samples(1-5) ;6． control substances;7-9． test samples(6-8) ;10． blank;11-12． test samples(9-10)
图 1 薄层色谱图
Fig 1 TLC chromatograms
A． 对照品;B．供试品;C．阳性对照;1．绿原酸
A． reference;B． test sample;C． positive control;1． chlorogenic acid
图 2 高效液相色谱图
Fig 2 HPLC chromatograms
·222· Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 3 中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 3 期
数为 32 895。
2. 2. 7 稳定性试验:取供试品溶液 10 μl，按“2. 2. 1”项下色
谱条件试验，在 0、2、4、8、12、24、48 h 进样，测定其峰面积，计
算 ＲSD为 1. 5%(n = 7) ，表明供试品溶液在 48 h 内稳定性
良好。
2. 2. 8 检出限:精密量取“2. 2. 2”项下绿原酸对照品贮备液，
加 50%甲醇稀释成一系列的浓度，过滤，精密量取 10 μl 注入
液相色谱仪中，以 S /N = 10 为定量限，S /N = 3 为检出限，得出
定量限和检出限分别为 7. 712、2. 098 ng。
2. 2. 9 重复性试验:取同一批号供试品粉末 5 份，按“2. 2. 3”
项下方法制备供试品溶液，按“2. 2. 1”项下色谱条件测定其含
量，结果平均含量为 1 596. 68 μg /g，ＲSD = 0. 4 %(n = 5) ，结果
表明本法重现性良好。
2. 2. 10 回收率试验:精密称取已知含量的苍耳草粉末
(1 596. 68 μg /g)9 份，分 3 个浓度梯次分别加入浓度为
96. 399 1、128. 532 1、160. 665 1 μg /ml 的绿原酸对照品溶液
5 ml，再分别精密加入 50%甲醇 20 ml，分别称定质量，加热回
流 30 min，放冷，再分别称定质量，用 50%甲醇补足减失的质
量，摇匀，滤过，取续滤液，按“2. 2. 1”项下色谱条件测定其含
量，计算回收率，结果见表 2。
表 2 回收率试验结果(n =9)
Tab 2 Ｒesults of recovery test(n =9)
取样量 /
g
测得含量 /
μg
加入量 /
μg
原有量 /
μg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
ＲSD /
%
0. 282 1 931. 74 482. 00 450. 34 99. 88
0. 276 6 926. 76 482. 00 441. 61 100. 65
0. 265 6 912. 63 482. 00 424. 00 101. 38
0. 251 3 1 041. 30 642. 66 401. 25 99. 59
0. 268 8 1 068. 29 642. 66 429. 11 99. 46 99. 99 0. 8
0. 250 0 1 044. 28 642. 66 407. 23 99. 13
0. 236 6 1 179. 26 803. 33 377. 77 99. 77
0. 275 3 1 235. 06 803. 33 439. 57 99. 02
0. 258 9 1 224. 68 803. 33 413. 38 100. 99
2. 2. 11 样品测定:精密称取样品粉末(过三号筛)约 0. 5 g，按
“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 2. 1”项下色谱条件
测定，记录色谱图。计算其含量，结果见表 3。
表 3 苍耳草含量测定结果
Tab 3 Ｒesults of content determination of siberian
cocklebur herb
编号 产地 含量平均值 /(μg /g) ＲSD /%
样品 1 宜春袁州区 1 760. 53 1. 0
样品 2 宜春坪田 1 841. 10 1. 5
样品 3 樟树市场购买 1 594. 00 0. 5
样品 4 樟树市场购买 608. 61 1. 2
样品 5 宜春明月山 3 029. 03 1. 9
样品 6 宜春化成岩 1 834. 97 1. 7
样品 7 宜春洪江 2 953. 62 1. 3
样品 8 萍乡 1 798. 47 1. 0
样品 9 宜春明月山 3 289. 69 2. 0
样品 10 樟树市场购买 340. 55 0. 3
3 讨论
3. 1 提取溶剂的选择
取同一批号样品粉末(过三号筛)6 份各约 0. 5 g，精密称
定，置平底烧瓶中，各取 2 份分别精密加入 50%甲醇、甲醇、乙
醇各 25 ml，按“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 2. 1”
项下色谱条件测定其含量，结果 50%甲醇为 340. 55 μg /g，甲
醇为 60. 34 μg /g，乙醇无相应色谱峰，结果表明以 50%甲醇提
取效果较好。
3. 2 提取方法与提取时间的考察
本实验对比了超声 10、30 和 50 min 与加热回流 10、30 和
50 min，结果表明回流提取比超声提取更完全，且回流 30 min
基本提取完全，故本方法采用回流提取 30 min。
3. 3 色谱柱和柱温的考察
本实验考察了 Diamonsil C18、Thermo C18、Welch μtimate
C18等 3 种不同品牌的色谱柱及不同的柱温对实验的影响，结
果表明不同色谱柱、不同柱温的出峰时间不同，但对含量测定
结果无明显差异。柱温升高，出峰时间减少，分离度和理论塔
板数将减小。因此，为使色谱峰出峰完全，且分离度和理论塔
板数最佳，可选择柱温为 25 ℃，并可根据所使用色谱柱的实际
出峰情况适当调整梯度甲醇-0. 5%磷酸溶液(30∶ 70)的保持时
间，以使样品杂质峰出峰完全。
3. 4 与原标准和《中华人民共和国药典》(2010 年版)比较
本品种未收载于《中华人民共和国药典》(2010 年版) ，只
收载在各地的地方中药材标准中，且仅有部分理化鉴别和水分
测定等简单项目，不能很好地控制苍耳草的质量。而本文采用
TLC法鉴别苍耳草的真伪，采用 HPLC测定苍耳草中的绿原酸
的含量，能更有效地控制苍耳草的质量。
参考文献
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(收稿日期:2013-11-13)