全 文 ：第 37 卷第 7 期
2016 年 7 月
环 境 科 学
ENVIＲONMENTAL SCIENCE
Vol． 37，No． 7
Jul．，2016
葡萄藻生物膜贴壁培养处理含钴工业废水与烃类生产
的耦合
程鹏飞1，2，王艳3，杨期勇1，2，汤明1，2，刘天中4
(1．九江学院鄱阳湖生态经济研究中心，九江 332005;2． 九江市流域管理与生态保护重点实验室(九江学院)，九江
332005;3．九江学院电子商务学院，九江 332005;4．中国科学院青岛生物能源与过程研究所，青岛 266101)
摘要:工业废水污染日趋严重，水体中重金属钴污染因难处理、高危害等问题成为废水净化的关键． 传统治理重金属工业废
水的方法难以应用． 为寻求处理工业废水“绿色生态”可行性路径，本文以葡萄藻 Botryococcus braunii SAG 807-1 为研究对象，
应用贴壁培养技术对含钴工业废水进行处理研究． 结果表明，葡萄藻贴壁培养可处理工业废水，4. 5 mg·L －1 Co2 +对葡萄藻生
长影响不大，却可以促进长链烃类的合成，提高烃产量． 葡萄藻贴壁培养去除 Co2 +的能力为1 473. 9 μmol·g －1，远高于报道的
微藻 P． littoralis． 本研究为绿色高能燃料烃类的生产与工业废水处理耦合提供理论基础．
关键词:葡萄藻;贴壁培养;烃类;含钴工业废水;耦合
中图分类号:X703. 1 文献标识码:A 文章编号:0250-3301(2016)07-2666-07 DOI:10． 13227 / j． hjkx． 2016． 07． 033
收稿日期:2015-10-27;修订日期:2016-02-23
基金项目:国家自然科学基金项目(31560724)
作者简介:程鹏飞(1984 ～)，男，博士，副教授，主要研究方向为环境
生物技术，E-mail:pfcheng1792@ 163． com
Coupling of Hydrocarbon Accumulation and Cobalt Ｒemoval During Treatment
of Cobalt Enriched Industrial Wastewater with Botryococcus braunii Biofilm
Attached Cultivation
CHENG Peng-fei1，2，WANG Yan3，YANG Qi-yong1，2，TANG Ming1，2，LIU Tian-zhong4
(1． Poyang Lake Eco-economy Ｒesearch Center of Jiujiang University，Jiujiang 332005，China;2． Jiujiang Key Laboratory of Basin
Management and Ecological Protection，Jiujiang University，Jiujiang 332005，China;3． E-business Institute of Jiujiang University，
Jiujiang 332005，China;4． Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology，Chinese Academy of Sciences，Qingdao
266101，China)
Abstract:Industrial wastewater pollution is an increasing problem． The wastewater infiltrated cobalt is a key to purify wastewater
because it is seriously hazardous and hard to treat． Traditional management method of heavy metals in industrial wastewater is difficult
to apply． To seek for green ecological feasible approaches of industrial wastewater treatment，this paper studied the effect of
industrial wastewater containing cobalt on the growth and hydrocarbon accumulation of Botryococcus braunii SAG 807-1 with biofilm
attached cultivation． The research results obtained were as follows:B． braunii with biofilm attached cultivation could treat industrial
wastewater，and 4. 5 mg·L －1 cobalt could accelerate the accumulation of hydrocarbon while having little influence on the growth of B．
braunii，the ability of B． braunii with biofilm attached cultivation to remove Co2 + from industrial wastewater was 1 473. 9 μmol·g －1，
which was much higher than the report of P． littoralis culture． Through the study in this paper，the theoretical basis for the coupling of
production of green high energy fuel hydrocarbon and industrial wastewater treatment was established．
Key words:Botryococcus braunii;biofilm attached cultivation;hydrocarbon;industrial wastewater containing cobalt;coupled
在当今环境污染中，水体污染已严重威胁着社
会发展与人类健康，成为亟待解决的主要污染问题
之一［1，2］． 一直以来，金属污染因其危害大、治理难
等特点成为工业废水治理过程中的一大难题［3，4］．
随着冶金、电镀及核技术等的迅猛发展，水体重金
属污染中钴元素污染也随之而来． 当钴离子浓度较
高时会对植物产生毒害作用，危害人类健康． 目前
的方法对于废水中 Co2 +的去除比较困难，普遍采用
的物理-化学处理方法效果不佳［5］． 因此，治理工业
废水中难处理、高危害的金属污染问题成为净化废
水的重中之重．
传统治理重金属工业废水的方法一般如化学沉
淀、溶剂萃取、离子交换及膜分离等［6］． 这些技术
由于金属去除不完全、昂贵的设备及大量的试剂和
能量需求等原因而难以应用［5，7］． 一种以具有替代
不可再生资源潜力的微藻净化为首的生物学方法，
可克服传统物理-化学方法缺陷成为金属废水污染
净化或恢复的研究热点［8，9］． 利用微藻处理工业废
水的同时，还可以固定 CO2，生产生物燃料，这对缓
7 期 程鹏飞等:葡萄藻生物膜贴壁培养处理含钴工业废水与烃类生产的耦合
解化石燃料短缺与改善水体环境都有重要意义［10］．
然而，前人研究表明通过传统的液体悬浮培养藻类
净化富含金属废水，藻细胞生长受到抑制，生物产率
较低［11］． 因此，寻求开发高效的微藻培养方式处理
废水具有重要意义．
相比于传统液体悬浮培养，微藻的生物膜贴壁
培养是一种新型培养模式． 不同的是，生物膜贴壁
培养是根据光稀释与固定化的原理，将藻细胞与培
养基相分离，并固定在一定生物膜材料上，极少量的
培养基液体通过附着多孔材料的背面或内部滴入以
使藻细胞处于半干湿润状态，并在一定光照强度与
CO2 浓度下进行生长的培养方式(图 1)，其在培养
过程中的取样和培养后的培养液回收均比传统液体
悬浮培养更为经济、简便［12］． 前期对包括葡萄藻在
内的多种藻类的生物膜贴壁培养进行了深入研究，
其中葡萄藻可见光光能利用率最高可达 14. 9%，培
养过程每生产 1kg 生物量所需培养基 NaNO3 仅为
27. 5g，生物产率和烃产率等也都优于传统培养方
式［13］． 贴壁培养因为藻细胞与培养基相分离，利用
废水进行微藻的生物膜贴壁培养，藻细胞培养完成
后无需离心，具有一定优势． 在生产生物燃料的同
时耦合处理环境废水，为工业废水处理净化提出新
的尝试．
图 1 葡萄藻生物膜培养装置示意
Fig． 1 Schematic of the attached cultivation device for B． braunii
众多微藻中，葡萄藻因能产生大量的烃类而闻
名． 从生物能源替代化石能源的角度，烃类燃料比
脂肪酸甲酯更接近于传统化石燃料［14］． 而且葡萄
藻生成的烃类燃烧后产热值高且对大气 CO2 含量
无净增加，是一种非常有潜力的可再生能源［15，16］．
Sawayama 等［17］用经过二次处理的生活污水(second
treated sewage，STS)培养葡萄藻，发现生活污水中
的氮和磷含量大大减少，而同时有毒重金属元素砷、
铬、镉等的浓度也大为降低． 本研究利用废水培养
葡萄藻可以净化环境、降低培养成本，以期为葡萄
藻生物燃料生产奠定基础．
本文结合贴壁培养反应装置的特殊性及前人的
实验研究，主要考察了电镀厂排放的含钴工业废水
对葡萄藻贴壁培养生长及烃积累情况的影响，以期
净化工业水环境，在生产生物燃料的同时降低葡萄
藻贴壁培养工艺成本．
1 材料与方法
1. 1 藻种来源与培养
藻株:A 品系葡萄藻(Botryococcus braunii SAG
807-1，A race)购买于德国哥廷根大学．
葡萄藻种子液培养:将培养至对数期葡萄藻接
种于含 Chu 13 培养基的玻璃柱 800 mL(高 80 cm ×
直径 5 cm)中［13］，使其初始培养浓度约 0. 1 g·L －1，
温度 (25 ± 1)℃，连续光照强度 (100 ± 10)
μmol·(m2·s)－ 1，通入含有 1%(体积分数)CO2 的
压缩空气(0. 1 MPa)，气体流速为1 mL·s － 1，培养液
的 pH值约为 7. 5．
图 2 葡萄藻贴壁培养实验装置
Fig． 2 Test device of attached cultivation for B． braunii
1. 2 葡萄藻贴壁培养及生物量测定
葡萄藻的贴壁培养反应装置如图 2 所示，一长
0. 4 m，宽 0. 2 m，厚 3 mm的玻璃板置于 0. 5 m ×0. 3
m ×0. 05 m的玻璃腔中，玻璃板的一面附有滤纸，并
接受正上方的光照． 将葡萄藻藻种接种到醋酸纤维
素膜上，贴于附着在玻璃板的滤纸上，将附有藻种的
玻璃板放入玻璃腔室内，为保障玻璃腔室内的稳定
环境，用保鲜膜封住玻璃腔的一面． 二氧化碳混合
气通过玻璃腔的小孔进入培养室，培养基通过循环
泵滴加(培养基循环使用)． 为了培养液更好均匀地
渗入藻细胞内，将玻璃培养腔放置一定倾斜角度，荧
7662
环 境 科 学 37 卷
光灯置于培养腔正上方提供光源． 贴壁培养条件与
种子液培养条件相同．
葡萄藻生物量测定:将孔径 0. 45 μm，面积
0. 001 m2 的醋酸纤维膜煮沸 3 次后，在 105℃ 烘箱
中烘至恒重(W1)，将待测藻样(DW)用蒸馏水冲洗
完全入干净烧杯中，并倒入抽滤装置内抽滤至已称
重的膜上，将附有藻的膜放入 105℃ 烘箱中烘至恒
重(W2)，用分析天平称量藻样的重量(g·m
－2):
DW = (W2 － W1)/0. 001 (1)
1. 3 葡萄藻烃类的提取与分析
将葡萄藻溶液于2 500 r·min －1离心 8 min，洗涤
离心 3 次后收集藻体，然后进行冷冻干燥． 称取一
定质量的干燥藻粉，加入正己烷超声 15 min，1 500
r·min －1离心 10 min后，收集正己烷提取液，提取过
程重复 3 ～ 4 次，直到提取液无色，合并正己烷提取
液，25℃ 水浴下旋转蒸发掉正己烷，室温下用氮气
吹干所剩残余，称其重量即为“粗烃”质量，计算后
得到粗烃含量． 本研究中涉及到的“烃”如无特殊说
明均指“粗烃”．
粗烃经硅胶柱(硅胶粒度 200 ～ 300 目，层析柱
尺寸 10 mm × 100 mm，正己烷为流动相)纯化，收集
黄色条带出来之前的所有样品，25℃ 旋转蒸发掉正
己烷，氮气吹干所剩残余，称重得到“纯烃”质量，计
算后得到纯烃含量［18，19］． 然后硅胶柱分别用氯仿
和甲醇进行洗脱，分别收集洗脱后的样品，旋转蒸
发、氮气吹干，称重，即得非极性脂肪酸和极性脂肪
酸含量［20］．
GC /GC-MS 分析［21，22］:气相色谱为安捷伦
7890A，检测器为 FID 检测器，所得到的纯烃溶于色
谱纯的正己烷中，色谱柱为 Agilent HP-5-二苯基聚
硅氧烷共聚物色谱柱(30 m × 0. 25 id)，进样口温度
240℃，检测器温度 250℃;初始温度 130℃ (5
min)，然后以 8℃·min －1 的速度升到 200℃ (2
min)，再以5℃·min －1的速度升到 280℃ (20 min)．
质谱条件:电子能量 70 eV，质荷比 m/z 范围 40 ～
600，结果鉴定对比已报道谱图．
1. 4 葡萄藻贴壁培养基中 N浓度与 Co2 +浓度的测定
葡萄藻贴壁培养液中氮含量的测定方法参照
Collos等［23］的实验研究． 准确量取 2 mL 培养液，
10 000 r·min －1下离心 5 min，收集上清液在 220 nm
下分光光度计测定，氮的浓度参照以下公式:
c = 0. 282 9D220 － 0. 038 8 (r
2 ＞ 0. 99)(2)
式中，c是氮浓度(mmol·L －1)．
葡萄藻贴壁培养液中钴浓度的测定参照 Wang
等［24］的离子色谱法．
1. 5 工业废水应用于葡萄藻的贴壁培养
将葡萄藻种子液培养 14 d 后，在温度(25 ±
1)℃，连续光照强度(100 ± 10)μmol·(m2·s)－ 1，1%
(体积分数)CO2 条件下接种于二次工业废水中(由
青岛黄岛废水处理厂提供)，培养 8 d 后，研究葡萄
藻贴壁培养生长及烃类积累情况．
1. 6 统计分析和数学计算
本实验中，多组数据间差异显著性分析利用
SPSS 11. 0(SPSS Inc．，Chicago，Illinois，USA)的方
差分析(ANOVA)程序完成，当 P ＜ 0. 05 时表示差
异显著． 实验中，曲线作图及拟合用 Sigmaplot 8. 0
(SPSS Inc．，Chicago，Illinois，USA)完成．
2 结果与讨论
2. 1 工业废水贴壁培养葡萄藻
本研究首先将青岛黄岛废水处理厂提供的二次
工业废水与正常 Chu 13 培养基在相同条件下贴壁
培养，其中工业废水各主要参数指标见表 1． 相比于
正常 Chu13 培养基，工业废水培养基(表 1)中 Co2 +
浓度为 0. 86 mg·L －1，明显高于正常 Chu 13 培养基
中 Co2 +浓度(约为 0. 09 mg·L －1)．
表 1 工业废水各主要参数指标
Table 1 Content of different components in industrial wastewater
项目 pH Na + NH +4 K + Mg2 + Co2 + Ca2 + Cl － NO －3 SO2 －4 TOC
数值 /mg·L －1 8. 3 1250 20. 8 51. 37 40. 94 0. 86 108. 5 155. 4 52. 6 272. 2 84. 3
实验研究工业废水与正常培养基下贴壁培养葡
萄藻生长与烃积累情况． 由图 3 (a)与 3(b)可知，
葡萄藻在工业废水及正常 Chu 13 培养基下长势相
当，培养 8 d后工业废水贴壁培养葡萄藻生长状况
略优 于 正 常 培 养 基 下 培 养，分 别 约 为 6. 0
g·(m2·d)－ 1与 5. 6 g·(m2·d)－ 1 ． 对于烃类积累而
言［图 3(c)］，葡萄藻在工业废水中烃含量高于正
常 Chu 13 培养基中的含量，分别约是 60. 2% 和
51. 2%;而相应的工业废水贴壁培养葡萄藻烃产率
为 3. 6 g·(m2·d)－ 1，高于正常 Chu 13 培养基中的
2. 9 g·(m2·d)－ 1 ．
同时，还观察了葡萄藻在工业废水与正常 Chu
8662
7 期 程鹏飞等:葡萄藻生物膜贴壁培养处理含钴工业废水与烃类生产的耦合
13 培养基贴壁培养 8 d的细胞显微图(图 4)． 从图
4 的光学显微照片可看出，葡萄藻在正常 Chu 13 培
养基中贴壁培养藻细胞较为鲜绿［图 4(a)］． 整个
藻体细胞串状集落生，类似成串葡萄，由形态不规则
且长短各异的绳索状透明胶质部分(折射绍丝)连
接而成外型不规则或略近球形的复合集落． 相比较
而言，葡萄藻在工业废水中培养，藻细胞中脱落在培
养基中“杯鞘”较正常 Chu 13 培养基中的多;而且
培养基中分散的透明颗粒状堆积物也较正常培养基
中多，这些或许是分泌烃类的产物．
葡萄藻在工业废水中贴壁培养生长与烃类的积
累情况优于正常 Chu 13 培养基，这或许因为工业废
水中氮等营养盐浓度优于正常 Chu 13 培养基． 值得
注意的是，本研究工业废水中 Co2 +浓度相比较正常
Chu 13培养基约高 10 倍，这是否是促进葡萄藻生长
和烃积累的关键因素，具体原因需要设计实验研究．
图 3 工业废水对葡萄藻贴壁培养生长与烃积累的影响
Fig． 3 Effect of industrial wastewater on the growth and hydrocarbon accumulation of B． braunii with biofilm attached cultivation
图 4 葡萄藻在工业废水与正常培养基贴壁培养下藻细胞显微图
Fig． 4 LM images of B． braunii in industrial wastewater and Chu 13 with biofilm attached cultivation
2. 2 Co2 +浓度对葡萄藻贴壁培养生长影响
为了进一步验证 Co2 +浓度对葡萄藻贴壁培养
生长的影响，在上述实验基础上于正常 Chu 13 培养
基中分别设计了不同钴浓度 0. 09(正常)、0. 18、
0. 45、0. 90、4. 50、45. 00 mg·L －1对葡萄藻贴壁生
长的影响(图 5)． 由图 5 可知，在相同条件下 Co2 +
浓度从 0. 09 mg·L －1至 4. 50 mg·L －1均能支持葡萄
藻贴壁培养较好的生长． 从图 5 (b)可看出，在葡
萄藻贴壁培养 8 d 内，Co2 + 浓度为 0. 09、0. 18、
0. 45、0. 90 mg·L － 1下生物产率相差不大，分别是
6. 9、6. 6、6. 5 和 6. 6 g·(m2·d)－ 1 ． 当 Co2 +浓度
为 4. 50 mg·L － 1时，葡萄藻贴壁培养前 4 d 内生物
产率与正常培养相差不大，培养 8 d后生物产率略
微下降，约为 5. 5 g·(m2·d)－ 1;当 Co2 + 浓度为
45. 00 mg·L － 1时，葡萄藻贴壁培养生长明显受到
抑 制，培 养 8 d 后 生 物 产 率 仅 为 0. 98
g·(m2·d)－ 1 ． 由此可知，4. 50 mg·L － 1钴浓度对葡
萄藻贴壁生长影响不大． 在此基础上，为进一步研
究 Co2 +对葡萄藻贴壁培养烃合成的影响，实验选
取 Co2 +浓度 0. 09 mg·L － 1(正常)与 4. 50 mg·L － 1
(钴富余)为研究对象，研究烃积累情况及培养基
中 Co2 +浓度变化情况．
9662
环 境 科 学 37 卷
2. 3 Co2 +浓度对葡萄藻贴壁培养烃积累影响
在相同条件下，本实验研究了 Chu 13培养基中钴
富余(4. 50 mg·L －1)与正常培养(0. 09 mg·L －1)下烃积
累的情况(图 6)．从图 6可看出，随着培养时间的延长
无论是 Co2 +富余还是正常下烃的含量都增加，但烃含
量在 Co2 +富余下相对较高．培养 8 d后，葡萄藻贴壁培
养在 Co2 +富余与正常浓度下烃含量分别是 52. 9%、
43. 2%．因为 Co2 +富余下生物产率低于正常的，因而其
对应的烃产率与正常 Co2 +浓度相当，分别约是 2. 8
g·(m2·d)－1、2. 9 g·(m2·d)－1［图 6(b)］．
图 5 Co2 +浓度对葡萄藻贴壁生长的影响
Fig． 5 Effect of cobalt concentration on the growth of B． braunii under attached cultivation
图 6 Co2 +对葡萄藻贴壁培养烃含量、烃产率的影响
Fig． 6 Effect of cobalt on the content of hydrocarbon and productivity of hydrocarbon for B． braunii with attached cultivation
一般地，A品系葡萄藻所产烃类为 C25-C31奇数
二烯和三烯类化合物． 本实验中 A 品系葡萄藻在
Co2 +富余与正常浓度下贴壁培养所合成烃构架如图
7 所示． 从中可知，Co2 + 富余下 C31 含量约为
24. 9%，高于 Co2 +含量正常下的 15. 3%;C27的含量
低于正常 Co2 + 浓度下的量，分别约为 13. 9% 与
18. 0%;而 C29下的含量在两种 Co
2 +浓度下相当．
总体来说，其它类型的烃类含量正常 Co2 +浓度下略
高于 Co2 +富余下的量． Dennis 等［25］认为一定的高
Co2 +浓度可以提高钴-卟啉复合酶的活性，进而促进
脂肪醛到烃类的转换． 因此，4. 50 mg·L －1 Co2 +促进
了葡萄藻长链烃等的合成．
2. 4 葡萄藻贴壁方式下培养基中 Co2 +与 N浓度变
化情况
本研究葡萄藻贴壁培养在 Chu 13 培养基中
Co2 + 富余(4. 50 mg·L －1)与正常情况下(0. 09
mg·L －1)培养基中 N、Co2 +的消耗情况(图 8)． 由
图 8(a)可知，葡萄藻在 Co2 +富余下培养，Co2 +浓度
在前 2 d 急剧下降，而在随后的 6 d 中 Co2 +浓度减
少趋于平缓，培养 8 d 后最终 Co2 + 浓度约为 0. 71
0762
7 期 程鹏飞等:葡萄藻生物膜贴壁培养处理含钴工业废水与烃类生产的耦合
图 7 Co2 +对葡萄藻贴壁培养烃构架的影响
Fig． 7 Effect of cobalt on the hydrocarbon profile of B． braunii
with biofilm attached cultivation
mg·L －1 ． 这说明葡萄藻在 Co2 +富余浓度下的贴壁
培养基中约 85%的 Co2 +被去除． 结合生物产率计
算，葡萄藻贴壁培养 Co2 + 的结合能力为1 473. 9
μmol·g －1，远高于 Carrilho 等［26］的报道微藻 P．
littoralis的结合力 560 μmol·g －1 ．
从图 8(b)可看出，培养基中 N 含量的消耗在
Co2 +浓度富余情况下消耗速率低于正常值，但最
终趋势类似，N浓度均从最初的 1. 98 mmol降到约
0． 通过比较图 8 发现，在当培养基中 Co2 +含量变
化不大后，N的消耗继续直至消耗殆尽． 这可能是
因为培养基中 Co2 +的消耗伴随着离子交换，当培
养基中 Co2 +浓度较高时阻止 N通过位于细胞膜上
的离子通道输出细胞［27］． 由此可知，葡萄藻贴壁
培养或许在钴元素去除方面比其它培养方式更有
优势．
图 8 葡萄藻贴壁培养下培养基中 Co2 +、N含量的变化情况
Fig． 8 Effects of cobalt enrichment on the cobalt and nitrate concentrations in
cultivation broth of B． braunii with biofilm attached cultivation
3 结论
(1)葡萄藻贴壁培养对工业废水中重金属钴元
素的去除效率较高，而且可以促进生物燃料烃类的
合成． 在利用藻类生产生物燃料的同时，去除工业
废水中 N、P及重金属元素，可为绿色高能燃料烃类
的生产与工业废水处理耦合提供理论基础，为工业
废水处理提供“绿色生态”途径．
(2)葡萄藻贴壁培养可处理含钴工业废水，一
定范围内 Co2 +浓度(＜ 4. 5 mg·L －1)对藻细胞生长
影响不大，反而有利于烃类的合成． 4. 5 mg·L －1
Co2 +可以促进葡萄藻长链烃类的合成，提高烃产量．
(3)葡萄藻贴壁培养去除工业废水中 Co2 +的能
力为 1 473. 9 μmol·g －1，远高于报道的微藻 P．
littoralis．
参考文献:
［1］ 孟伟． 中国流域水环境污染综合防治战略［J］． 中国环境科
学，2007，27(5):712-716．
［2］ 郑丙辉，罗锦洪，付青，等． 基于人体健康风险的水污染事
件污染物安全阈值研究［J］． 环境科学，2012，33(2):337-
341．
［3］ Guo X J，Yang Z，Dong H Y，et al． Simple combination of
oxidants with zero-valent-iron (ZVI) achieved very rapid and
highly efficient removal of heavy metals from water［J］． Water
Ｒesearch，2016，88:671-680．
［4］ 马迎群，时瑶，秦延文，等． 浑河上游(清原段)水环境中重
金属时空分布及污染评价［J］． 环境科学，2014，35(1):
108-116．
［5］ Eccles H． Ｒemoval of heavy metals from effluent streams-why
select a biological process? ［J］． International Biodeterioration ＆
Biodegradation，1995，35(1-3) :5-16．
1762
环 境 科 学 37 卷
［6］ 支田田，程丽华，徐新华，等． 藻类去除水体中重金属的机
理及应用［J］． 化学进展，2011，23(8):1782-1794．
［7］ 王建龙，陈灿． 生物吸附法去除重金属离子的研究进展［J］．
环境科学学报，2010，30(4):673-701．
［8］ Pittman J K， Dean A P， Osundeko O． The potential of
sustainable algal biofuel production using wastewater resources
［J］． Bioresource Technology，2011，102(1) :17-25．
［9］ Wijffels Ｒ H，Barbosa M J． An outlook on microalgal biofuels
［J］． Science，2010，329(5993) :796-799．
［10］ 高政权，孟春晓． 微藻与水环境修复［J］． 环境科学与技术，
2008，31(3):30-34．
［11］ Mehta S K，Gaur J P． Use of algae for removing heavy metal ions
from wastewater:progress and prospects［J］． Critical Ｒeviews in
Biotechnology，2005，25(3) :113-152．
［12］ Liu T Z，Wang J F，Hu Q，et al． Attached cultivation technology
of microalgae for efficient biomass feedstock production［J］．
Bioresource Technology，2013，127:216-22．
［13］ Cheng P F，Wang J F，Liu T Z． Effects of nitrogen source and
nitrogen supply model on the growth and hydrocarbon
accumulation of immobilized biofilm cultivation of B． braunii
［J］． Bioresource Technology，2014，166:527-533．
［14］ Banerjee A，Sharma Ｒ，Chisti Y，et al． Botryococcus braunii:a
renewable source of hydrocarbons and other chemicals［J］．
Critical Ｒeviews in Biotechnology，2002，22(3) :245-279．
［15］ Keasling J D，Chou H． Metabolic engineering delivers next-
generation biofuels［J］． Nature Biotechnology，2008，26(3) :
298-299．
［16］ Ｒude M A， Schirmer A． New microbial fuels: a biotech
perspective［J］． Current Opinion in Microbiology，2009，12
(3) :274-281．
［17］ Sawayama S， Minowa T， Dote Y， et al． Growth of the
hydrocarbon-rich microalga Botryococcus Braunii in secondarily
treated sewage［J］． Applied Microbiology and Biotechnology，
1992，38(1) :135-138．
［18］ Inoue S，Dote Y，Sawayama S，et al． Analysis of oil derived
from liquefaction of Botryococcus braunii［J］． Biomass and
Bioenergy，1994，6(4) :269-274．
［19］ Okada S，Murakami M，Yamaguchi K． Hydrocarbon composition
of newly isolated strains of the green microalga Botryococcus
braunii［J］． Journal of Applied Phycology，1995，7(6) :555-
559．
［20］ Singh Y，Kumar H D． Lipid and hydrocarbon production by
Botryococcus spp． under nitrogen limitation and anaerobiosis［J］．
World Journal of Microbiology and Biotechnology，1992，8(2) :
121-124．
［21］ Metzger P，Villarreal-rosales E，Casadevall E． Methyl-branched
fatty aldehydes and fatty acids in Botryococcus braunii［J］．
Phytochemistry，1991，30(1) :185-191．
［22］ Metzger P，David M，Casadevall E． Biosynthesis of triterpenoid
hydrocarbons in the B-race of the green alga Botryococcus braunii．
Sites of production and nature of the methylating agent［J］．
Phytochemistry，1986，26(1) :129-134．
［23］ Collos Y，Mornet F，Sciandra A，et al． An optical method for
the rapid measurement of micromolar concentrations of nitrate in
marine phytoplankton cultures ［ J］． Journal of Applied
Phycology，1999，11(2) :179-184．
［24］ Wang W N，Chen Y J，Wu M T． Complementary analytical
methods for cyanide， sulphide，certain transition metals and
lanthanides in ion chromatography［J］． Analyst，1984，109(3) :
281-286．
［25］ Dennis M，Kolattukudy P E． A cobalt-porphyrin enzyme converts
a fatty aldehyde to a hydrocarbon and Co［J］． Proceedings of the
National Academy of Sciences of the United States of America，
1992，89(12) :5306-5310．
［26］ Carrilho E N V M，Gilbert T Ｒ． Assessing metal sorption on the
marine alga Pilayellalittoralis［J］． Journal of Environmental
Monitoring，2000，2(5) :410-415．
［27］ Crist Ｒ H，Martin J Ｒ，Carr D，et al． Interaction of metals and
protons with algae． 4． Ion exchange vs adsorption models and a
reassessment of scatchard plots;ion-exchange rates and equilibria
compared with Calcium Alginate［J］． Environmental Science ＆
Technology，1994，28(11) :1859-1866．
2762