全 文 ：第２９卷第４期
２０１１年１０月
海 洋 科 学 进 展
ＡＤＶＡＮＣＥＳ　ＩＮ　ＭＡＲＩＮＥ　ＳＣＩＥＮＣＥ
Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．４
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１１
微板法测试１２种ＰＯＰｓ对新月菱形藻的毒性
＊
孙禾琳１，２，蔡恒江２，姚子伟１＊
（１．国家海洋环境监测中心，辽宁 大连１１６０２３；２．大连海洋大学，辽宁 大连１１６０２３）
摘　要：采用微板法研究了三丁基锡、苯并ａ芘、菲、芘、壬基酚、五氯酚、五氯苯、六氯苯、ＰＣＢ７７、ＰＣＢ１２６、甲基对硫
磷、马拉硫磷对我国近海常见藻种新月菱形藻的毒性效应，得到了１２种持久性有机污染物（ＰＯＰｓ）对藻的剂量效应
关系，并进行ｌｏｇｉｔ模型拟合，计算出９６ｈＥＣ５０值并进行统计分析。通过与传统锥形瓶测试方法得到的数据进行比
较，结果表明微板法操作简单，所需样品量少，可以快速测定这１２种持久性有机污染物（ＰＯＰｓ）对海洋微藻的毒性。
关键词：微板法；持久性有机污染物；新月菱形藻；ＥＣ５０
中图分类号：Ｘ５５　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１６７１－６６４７（２０１１）０４－０５２９－０８
随着工业的发展，持久性有机污染物的种类越来越多，分布也越来越广。根据环境监测数据显示，我国
近海持久性有机物的污染日益严重［１－２］。因而，研究水质及有毒化学品对海洋初级生产者—藻类的毒性具有
重要的意义［３］。目前，大多数国际组织和国家都制定了藻类生长抑制试验的标准方法，如 ＯＥＣＤ标准和
ＵＳＥＰＡ标准。这些方法采用的培养容器主要是锥形玻璃瓶，进行毒性测试时，所需样品体积较大，耗费时
间较长且工作量大。因此迫切需要一种高效简便的测试方法。微板试验法在发光细菌及微生物的毒性试验
中已经较为常用［４］，国外学者已利用微板法进行了藻类毒性试验，并将微板法与传统锥形瓶方法进行比较，
发现其试验结果具有很好的一致性［５－６］，测试过的污染物主要有农药［７－８］及重金属［９］等。Ｓａｔｏｈ等用荧光９６
孔微板法测试了Ｃｕ，Ａｓ，Ｓｂ，Ｐｂ和Ｃｄ对９种海洋微藻（隶属于５个门７个属）的毒性［１０］，表明这种方法对于
大部分藻类都适用，并且操作简单，易于设置多个平行和浓度。国内葛会林等人建立了藻类９６孔微板吸光
法，并测定了９种农药对斜生栅藻的抑制毒性［１１］，表明该方法具有简便快速、所需样品体积少的特点。但利
用该方法与传统锥形瓶测试方法比较测定持久性有机污染物对海洋微藻的毒性的研究未见报道。
选用我国近海优势藻种新月菱形藻（Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ）作为受试生物，应用微板法和锥形瓶法比较
分析了１２种持久性有机污染物对该藻的毒性效应，确定了微板法在监测持久性有机污染物对藻类毒性方面
的可行性。
１　材料与方法
１．１　试剂与仪器
药品：三丁基锡、苯并ａ芘、菲、芘、壬基酚、五氯酚、五氯苯、ＰＣＢ１２６、ＰＣＢ７７、六氯苯、甲基对硫磷、马拉
硫磷标准品，均购自德国Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司。
仪器：一级藻种培养机、光照培养箱、冷冻离心机、紫外分光光度计、倒置荧光显微镜、高压灭菌锅、三角
瓶、酶标仪、Ｃｏｓｔａｒ９６孔微板、超净工作台（表１）。
＊ 收稿日期：２０１０－０７－１９
资助项目：海洋公益性行业科研专项———海水水质基准的研究与制定（２００８０５０９０）
作者简介：孙禾琳（１９８６－ ），女，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，主要从事环境毒理学方面研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｅｔｅｏｒ２２２＠１６３．ｃｏｍ
＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｗｙａｏ＠ｎｍｅｍｃ．ｇｏｖ．ｃｎ
（陈　靖　编辑）
５３０　 海　洋　科　学　进　展 ２９卷
表１　试验中所用的主要仪器
Ｔａｂｌｅ　１　Ｍａｊｏｒ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ
仪器名称 型　号 厂　家
双目电子显微镜 Ｅ１００ Ｎｉｋｏｎ
智能光照培养箱 ＧＸＺ－５００Ｂ 宁波江南
藻种培养机 ＨＸＤＪＢ－４２ 大连汇新钛
超净工作台 ＳＷ－ＣＩ－１Ｆ 上海博迅实业有限公司
冷冻离心机 ３Ｋ１５ 德国ＳＩＧＭＡ公司
双光束紫外可见分光光度计 ＴＵ－１９００ 北京普析通用仪器有限责任公司
倒置荧光显微镜 ＤＭＩ４０００Ｂ 德国ＬＥＩＣＡ
酶标仪 雷杜ＲＴ６１００ 深圳雷杜生命科学股份有限公司
高压灭菌锅 ＹＸＱ－ＬＳ－３０ 上海博迅实业有限公司
１．２　藻种来源和培养条件
新月菱形藻（Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ）取自国家海洋环境监测中心。
培养条件：海水的盐度３１，ｐＨ为７～８［１２］，煮沸灭菌，营养盐选用康维方。毒理试验部分在智能光照培养
箱中进行，锥形瓶试验采用２５０ｍＬ三角瓶，微板试验采用９６孔微板，温度２２±１℃，光暗比为１２ｈ∶１２ｈ［１３］，
光照强度３　０００±５　０００ｌｘ。
１．３　测定方法、波长、生长曲线、暴露时间的选择
目前测定微藻生长情况的基本方法有细胞计数法、叶绿素ａ含量测定法、荧光分光光度法和可见分光光
度法［１４］。据报道，可见分光光度法［１５－１６］操作较简单，适用于连续测定。取生长良好的藻种，用紫外可见分光
光度计进行全程扫描，选择最佳波长６８４ｎｍ。在６８４ｎｍ下，以初始数量为２．４×１０４／ｍＬ的藻液进行培养，
每隔２４ｈ测定其光密度，得到该藻种１４ｄ的生长曲线（图１），在１～１０ｄ该藻都处于对数生长期，所以本研
究选取该生长阶段的藻种作为本研究测试对象。另外，不同的暴露时间下测得的污染物毒性大小不同，根据
ＯＥＣＤ标准，统一选择９６ｈ作为测试暴露时间。
１．４　助溶剂的选择
根据ＯＥＣＤ标准，对于难溶物质选用丙酮作为助溶剂，每１００ｍＬ藻液中加入１０μＬ丙酮，对试验结果
进行单因素方差分析，可得Ｐ＞０．０５，说明差异不显著，所以按此比例添加助溶剂不影响藻种生长（对照试验
４期 孙禾琳，等：微板法测试１２种ＰＯＰｓ对新月菱形藻的毒性 ５３１　
图２）。
１．５　锥形瓶试验方法
参考ＯＥＣＤ标准中藻类生长抑制试验方法，受试物浓度按等对数间距设置，最后根据预试验结果选取
５～７个浓度设置正式试验（具体浓度见图３），每组３个平行。试验中定时摇动锥形瓶，随机调整光照位置，
９６ｈ后在６８４ｎｍ处测量藻液的吸光值。
１．６　微板试验方法
参考国外文献［６，１７－１８］及葛会林等建立的方法［１１］，于超净工作台中将１００μＬ处于对数生长期的藻液加入
９６孔微板中，然后加入不同浓度的受试物１００μＬ，每个浓度３个平行，使总体积达到２００μＬ，空白为灭菌海
水。加盖用密封条密封，放入光照培养箱培养，条件设置同锥形瓶方法。每日定时用酶标仪测量藻液吸
光值。
２　试验结果与讨论
许多研究表明，大部分藻类在低浓度有机污染物的作用下，生长率反而会上升，即产生“兴奋效应”［１９］，
且随着时间的变化，藻类的生长率也发生变化。此外，由于很多有机物在海水中的溶解度较低，在实验中当
浓度上升到一定范围时，抑制率的变化幅度趋于稳定。因此，本研究采用Ｏｒｉｇｉｎ８．０软件对结果进行ｌｏｇｉｔ
曲线拟合，拟合系数更接近于１，同时可以更直观的反映出１２种化合物随着浓度的增加对新月菱形藻的抑
制率的变化。参考刘保奇［２０］选择优化的ｌｏｇｉｔ模型，利用Ｏｒｉｇｉｎ８．０软件拟合剂量 －效应曲线（图３）。
由图３可见，随着１２种污染物浓度的升高，其对藻的抑制率都在逐渐增大，但大部分污染物达到一定浓
度时，抑制率反而趋于平稳；试验中也观察到，某些污染物如三丁基锡、有机磷在较低浓度时，会对藻产生刺
激作用，但持续时间较短，超过４８ｈ后，刺激作用逐渐不明显；通过图３中各个曲线的拟合相关系数Ｒ２值的
比较，发现锥形瓶方法拟合效果较好，均大于０．９；微板法个别受试物拟合相关系数不到０．９，所以应当在以
后的试验中提高试验重复性，进一步优化试验方法。
从拟合曲线中得到１２种化合物的９６ｈＥＣ５０值，并将结果用ＳＰＳＳ１６．０进行统计分析（表２）。
表２　１２种持久性有机污染物对新月菱形藻的毒性大小（μｇ·Ｌ－１）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ　ｏｆ　１２ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｐｏｌｕｔａｎｔｓ　ｏｎ　Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ
受试物
９６ｈＥＣ５０
锥形瓶试验 微板试验
文献参考值范围＊
三丁基锡 １１．６１±０．２８　 ６．５１±０．１１　 １．１３～１２．９６［２１－２２］
苯并ａ芘 ５０．５４±６．４０　 ７３．４７±３．７８　 ７６～９８［２３－２４］
芘 ５６．６９±１．４３　 ６０．７８±４．５０　 ７１～１０７［２５］
菲 ７１．８２±１．８２　 ７３．７１±４．４８　 ５９～８９［２５］
壬基酚 １３３７．９８±３．２９　 １４２３．０３±１０９．６１　 １４８６０［２６］
五氯酚 ９３６．１４±１４．７４　 ６４１．８０±１２０．９０　 １１２５～５５００［２７－３０］
五氯苯 １１９６．９２±４８．０９　 １０９３．５５±２０．２０ －
六氯苯 １４８．６８±２．４３　 １１３．０７±１２．３１ －
ＰＣＢ　７７　 ９０．７２±３．５１　 ８５．２８±２．４５ －
ＰＣＢ　１２６　 ５９．７１±６．０６　 ３２．０３±３．４４ －
甲基对硫磷 ２５９１．３４±４６６．７０　 ２５７９．１８±１１７．４６　 ３８９０～１５０００［１３，２８］
马拉硫磷 ８８７４．７５±２６８．８４　 ８１６９．６３±１２８．２６ －
　　　　　注：９６ｈＥＣ５０为９６ｈ半抑制浓度；＊为均为相应受试物对海洋优势藻种的毒性数据
５３２　 海　洋　科　学　进　展 ２９卷
图３　１２种污染物对新月菱形的剂量效应曲线
Ｆｉｇ．３　Ｄｏｓａｇｅ－ｅｆｆｅｃｔ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　１２ＰＯＰｓ　ｔｏ　Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ
４期 孙禾琳，等：微板法测试１２种ＰＯＰｓ对新月菱形藻的毒性 ５３３　
图４　微板法和锥形瓶法的９６ｈＥＣ５０值的相关性比较
Ｆｉｇ．４　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｌａｓｋ
ｂｉｏａｓｓａｙｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＥＣ５０－９６ｈｄａｔａ　ｐａｉｒｓ
　　从９６ｈ半抑制浓度数据可知，三丁基锡
的毒性最大，多环芳烃类、多氯联苯类毒性较
大，有机磷农药毒性相对较小，该结果与国内
外研究结果基本一致［１３，３１－３２］；酚类结果略大于
国内文献报道五氯酚对斜生栅藻的毒性参考
值０．５ｍｇ／Ｌ［３０］，这可能是由淡水藻种和海水
藻种对受试物的敏感性不同造成的；由于在海
水中的溶解度和含量的不同及其结构上的差
异，同类化合物得到的ＥＣ５０值也不同，如五氯
苯和六氯苯；ＰＣＢ７７的毒性小于ＰＣＢ１２６，这
与沈华萍报道的ＰＣＢ对人类的癌细胞和斑马
鱼毒性顺序相同［３３］，说明研究ＰＣＢ对海洋微
藻的毒性也可以为研究该类化合物对动物的
毒性提供参考；在两种方法的测试中，有机磷
农药的毒性都是最小的，但由于农药的使用量
较大以及在环境中的残留，将对海洋生物产生更为长久的影响，所以也要引起重视［３４］。表２中搜集的参考
值为近年来国内外文献中相应化合物对海洋优势藻种的毒性数据，从参考值范围来看，芘的毒性值略低，壬
基酚、五氯酚、甲基对硫磷也低于参考值。由于影响藻类毒性试验结果的因素很多，不同藻种对不同浓度的
ＰＯＰｓ化合物的耐受性也各不相同，此外试验中的误差如瓶壁的吸附、微藻对ＰＯＰｓ化合物的富集等也可能
造成测定的毒性值偏低，所以需要尽量提高试验的重复性，排除可能产生的误差，以确保试验结果的准确性。
按照Ｐａｉｘ珘ａｏ的方法［３３］，将微板法与锥形瓶法的测定数据进行回归分析，结果表明二者具有很好的线性相关
性（图４）。
综上所述，微板法在一定范围内适于微藻毒性测试。对于利用微板试验法测得的个别结果较利用锥形
瓶试验法测得的结果偏低的现象，可能是由于以下因素造成：微孔板的材质，试验中震荡不足，水分的蒸发
等。国外研究也表明，在使用微板测试难溶性有机物毒性时，如多环芳烃类，微板的材质可能会影响实验结
果，使测得毒性值偏低［３５］。此外，由于微板试验中添加藻液的量较少，添加受试物的量也较小，极易产生误
差，因此在试验中应尽量设置多个平行及浓度，提高测试的准确度。
３　结　论
经２种方法比较研究１２种持久性有机污染物对新月菱形藻的毒性，发现采用微板法测定持久性有机污
染物对海洋微藻毒性的特点：１）试验用藻液量和受试物量少，降低试验成本，试验操作较简单；２）测试的试验
结果，经与锥形瓶方法比较，差异不显著，且在测定毒性大小顺序方面具有一致性；３）试验中应注意无菌操
作、微板材质的选择及试验误差。随着监测工作的发展，需要测试的样品种类也越来越多，微板法不仅可以
测试单一的化学品，还可以测试不同情况的受污染的水质，所以该试验的结果可以作为今后扩大微板法测试
范围的基础研究。
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ｃｒｏｐｌａｔｅ　ｇｒｏｗｔｈ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｓｓａｙｓ［Ｊ］．Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００６，７６（５）：８８３－８９０．
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ｎｕｔｕｍ　Ｂｏｈｌｉｎ：ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ［Ｊ］．Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００７，７９（５）：４９４－４９８．
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ｅｎｔｉａｒｕｍ　ｎａｔｕｒａｌｉｕｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ　Ｓｕｎｙａｔｓｅｎｉ，２００２，４１（１）：６８－７１．聂湘平，蓝崇钰，林里．多氯联苯对蛋白核小球藻和斜生栅藻生长
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［３３］　ＳＨＥＮ　Ｈ　Ｐ，ＨＵＡＮＧ　Ｃ　Ｊ，ＬＵ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ＰＣＢｓ　ａｎｄ　ＰＢＤＥｓ　ｕｓｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｎｄ　Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ　ｅｍｂｒｙｏｓ
［Ｊ］．Ａｓｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００９，４（５）：６２５－６３３．沈华萍，黄长江，陆芳，等．ＰＣＢｓ和ＰＢＤＥｓ对人类癌细胞和斑马鱼胚胎的
毒性对比［Ｊ］．生态毒理学报，２００９，４（５）：６２５－６３３．
［３４］　ＴＡＮＧ　Ｘ　Ｘ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　ｔｏ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ［Ｊ］．Ｍａｒｉｎｅ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，１７
（１）：１－５．唐学玺．有机磷农药对海洋微藻致毒性的生物学研究 －对硫磷对４种海洋微藻的毒性效应［Ｊ］．海洋环境科学，１９９８，１７（１）：１－５．
［３５］　ＨＩＲＭＡＮＮ　Ｄ，ＬＯＩＢＮＥＲ　Ａ　Ｐ，ＢＲＡＮＵ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　９６－ｗｅｌ　ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ　ｆｏｒｍａｔ
ｆｏｒ　ＰＡＨ－ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｅｌｕｔｒｉａｔｅｓ　ｏｆ　ＰＡＨ－ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ｓｏｉｌｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｏｓｐｈｅｒｅ，２００７，６７（６）：１２３６－１２４２．
５３６　 海　洋　科　学　进　展 ２９卷
Ｔｏｘｉｃ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１２Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｐｏｌｕｔａｎｔｓ　ｏｎ　Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ
ＣｌｏｓｔｅｒｉｕｍＤｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　Ｕｓｉｎｇ　Ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｔｅ　Ａｓｓａｙ
ＳＵＮ　Ｈｅ－ｌｉｎ１，２，ＣＡＩ　Ｈｅｎｇ－ｊｉａｎｇ２，ＹＡＯ　Ｚｉ－ｗｅｉ　１
（１．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｌｉａｎ　１１６０２３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｄａｌｉａｎ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ　１１６０２３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　１２ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｐｏｌｕｔａｎｔｓ（ＰＯＰｓ）ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ＴＢＴＣ，ｂｅｎｚｏ　ａ　ｐｙｒｅｎｅ，ｐｈｅ－
ｎａｎｔｈｒｅｎｅ，ｐｙｒｅｎｅ，ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ，ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ　ｐｈｅｎｏｌ，ＰｅＣＢ，ＨＣＢ，ＰＣＢ７７，ＰＣＢ１２６，ｍｅｔｈｙｌ　ｐａｒａ－
ｔｈｉｏｎ，ｍａｌａｔｈｉｏｎ　ｏｎ　Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｔｅ　ａｓｓａｙｓ．Ｔｈｅ　ｄｏｓａｇｅ－ｅｆｆｅｃｔ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　１２ＰＯＰｓ　ａｎｄ　ａｌｇａｅ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｆｉｔｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｌｏｇｉｔ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｏｆ
９６ｈ－ＥＣ５０ ｗｅｒｅ　ｆｉｇｕｒｅｄ　ｏｕｔ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｈａｖｅ　ｓｈｏｗｎ　ｔｈａｔ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｆｌａｓｋ
ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｔｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒｅｑｕｉｒｅｓ　ｌｅｓｓ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｆｏｒ　ａ
ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１２ＰＯＰｓ　ｏｎ　ｍａｒｉｎｅ　ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｔｅ　ａｓｓａｙ；ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｐｏｌｕｔａｎｔ；Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ；ＥＣ５０
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｊｕｌｙ　７，２０１０