全 文 ：表 1　LN肾功能衰竭患者血液透析前后血浆 NO、ET、ANP、BUN及 Scr含量( x±s)
组别 n NO(nmol/L)
ET
(ng/L)
ANP
(ng/L)
BUN
(mmol/L)
Scr
(μg/L)
正常对照组 32 305.53±125.35 54.33±6.20 191.35±61.13 9.23±2.20 81.21±24.89
病人透析前 32 565.33±101.01＊ 256.05±138.65＊ 868.32±98.65＊ 41.25±10.36＊ 978.30±196.20＊
病人透析后 32 465.83±102.11＊＊# 226.32±104.51＊＊ 590.30±297.13＊＊# 14.78±7.56＊＊# 463.50±71.10＊＊#
　　注:LN患者血液透析前与正常对照组比较＊P<0.05;血液透析后与正常对照组比较＊＊P<0.05;血液透析前后比较#P<0.05
2.2　LN肾功能衰竭患者血液透析前血浆血管活性因子与
血 BUN、Scr之间的相关分析　血液透析前 ET与相应的
BUN及 Scr水平呈正相关 (r=0.45, P<0.05;r=0.41,
P<0.05);NO与相应的 BUN呈正相关(r=0.40, P<0.05)。
ANP与相应的 BUN及 Scr水平呈正相关(r=0.46, P<0.05;
r=0.37, P<0.05)。
3　讨论
本文结果显示 , LN肾功能衰竭患者 ET及 NO含量明显
增高。造成 LN患者 ET、NO含量增高的原因 , 研究 [ 3 ～ 4]认为
是:LN发病过程中 ,致炎因子如 IL-1、TNF等分泌增多 , 促进
ET合成和分泌;同时受损的肾脏对 ET的降解减少 ,故 LN患
者血浆 ET的含量增加。ET的增加诱导内皮细胞表达诱导
型一氧化氮合酶(NOS)的水平增高 , NOS可催化产生大量
NO, 因此 ET的增加又导致 LN患者血浆 NO水平升高。 ANP
是心房分泌的排钠利尿激素 ,还具有扩血管及降压作用。本
文显示 , LN肾功能衰竭患者血浆 ANP亦明显升高。导致
ANP升高的原因 [ 5]包括:肾衰时 ,肾脏结构和功能受到严重
破坏 , 肾血流量明显减少 , 降解 ANP的物质产生或来源减
少 , 使 ANP的降解延缓;水 、钠潴留引起的高血容量和高血
压使心房压力增高 , 刺激 ANP分泌;肾组织广泛破坏 , ANP
受体赖以存在的细胞结构受到大量破坏而致受体数量减少 ,
ANP不能通过受体结合发挥生理效应 , 加重水钠潴留 , 被结
合的 ANP减少 , 血浆游离 ANP增加;血浆高 ET水平刺激可
增加 ANP的分泌。
本文发现 , LN肾衰患者血浆 ANP、ET、NO水平升高程度
与 BUN及 Scr水平呈正相关 , 说明 ANP、ET、NO水平升高的
程度与肾功能损害的严重性呈正比 , 血浆 ANP、ET、NO浓度
可以作为判断肾功能损害程度的指标 ,此结论与国内外研究
结果一致 [ 1, 5] 。
LN肾功能衰竭患者通常采用血液透析治疗。 本文发
现 , 血液透析后 NO、ANP血浆含量明显下降 , ET也有下降趋
势 , 但是 ANP、ET、NO含量均不能下降到正常水平 , 此结果
得到其他学者研究证实 [ 6 ～ 7] , 可见血液透析只可部分排除血
浆 ET、NO、ANP。
参考文献
[ 1] JulkunenH, SaijonmaaO, Grönhagen-RiskaC, etal.Raisedplasma
concentrationsofendothelin-1insystemiclupuserythematosus[ J] .Ann
RheumDis, 1991, 50(7):526-527.
[ 2]尹培达.狼疮性肾炎的发病机制和治疗近况 [ J] .风湿病学杂
志 , 1997, 2(2):1-3.
[ 3] OrisioS, ZojaC, RemuzziG.Theroleofendothelinintheprogres-
sionoftherenaldiseaseinanexperimentalmodelofchronickidneyfailure
[ J] .AnnItalMedInt, 1993, 8(4):213-217.
[ 4] KonV, BadrKF.Biologicalactionsandpathophysiologicsignificance
ofendothelininthekidney[ J] .KidneyInt, 1995, 40(1)1-12.
[ 5]马建伟 ,刘占民 ,陈宝 ,等 .慢性肾功能衰竭患者血浆内皮素 、心
钠素变化及临床意义 [ J].空军总医院学报 , 1999, 15(3):172-174.
[ 6]罗国华 ,李光明 ,崔杰 ,等 .慢性血透患者血浆内皮素、心钠素 、肾
素和血管紧张素的相关研究 [ J].标记免疫分析与临床, 1998, 5(3):
123-124.
[ 7]颜安华 ,黄元伟 .血液透析对慢性肾功能衰竭患者血浆心钠素水
平的影响 [ J].浙江预防医学 , 2007, 19(11):79.
(2009-05-18收稿)
粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠 NK细胞的影响
王亚飞1　孟庆勇 2＊
　　摘要　目的:研究粗江蓠多糖(GracilariaGigasHarveyPolysaccharides, GHPS)对辐射损伤小鼠 NK细胞的
影响。方法:采用 60Coγ射线 5Gy全身照射小鼠制造辐射损伤模型 , 通过乳酸脱氢酶释放法检测不同剂量
(10mg/kg, 20mg/kg, 40mg/kg)的 GHPS对辐射损伤小鼠 NK细胞杀伤靶细胞能力的影响。结果:辐射对照组小
鼠接受 60Coγ射线 5Gy照射后 , NK细胞的活性显著低于正常对照组 (P<0.01)。 经腹腔注射
(10、20、 40 )mg/kgGHPS,再接受 γ射线 5Gy照射后 ,小鼠 NK细胞活性明显高于辐射对照组(P<0.01), 并有
剂量依赖性。结论:5Gyγ射线可以抑制小鼠 NK细胞杀伤靶细胞的活性 , 而 GHPS对辐射损伤小鼠的 NK细胞
有保护作用。
关键词　粗江蓠多糖　辐射损伤　NK细胞
1山西长治医学院附属和平医院检验科(046000)
2广东医学院检验系(523808)
＊通讯作者
—557—放射免疫学杂志 2009年第 22卷第 6期 JofRadioimmunology2009, 22(6)
EfectofGracilariaGigasHarveyPolysaccharides(GHPS)on
NaturalKilerCelsActivityinMicewithRadiationInjury
WangYafei, MengQingyong
ClinicalLaboratoryofHepingHospitalAfiliatedtoChangZhiMedicalCollege, Changzhi(046000), China
　　Abstract　Objective　Toinvestigatetheefectofgracilariagigasharveypolysaccharides(GHPS)onnaturalkilercellsactivity
inmiceafterirradiation.Methods　TheactivityofNKcelsin40 irradiatedmicewasassessedbylacticaciddehydrogenase(LDH)
releaseassay(withELISAtechnique).Althemicereceived60Coiradiation(5Gy).GHPSwasgivenintraperitoneallytothree10
micegroupsatthedoseof10, 20, 40mg/kgrespectivelybeforeirradiation.Results　Folowing5Gyγ-irradiation, theactivityofNK
celswasdecreasedNKactivityinnon-irradiatedmicevsthatinmicewithoutGHPStreatment.GHPScouldrestoretheirraditioncould
impair(P<0.01)functionofinjuredNKcels.TheactivityofNKcelswashighestinthegroupreceiving40mg/kgGPHSwithsignif-
icantdifferencesamongthatinthethreetreatedgroups.Conclusion　IrraditioncouldimpairintheactivityofNKcelsinmicewhile
GHPScouldprotecttheNKcellsfromradiationinjury.
KeyWords　gracilariagigasharveypolysaccharides(GHPS), radiationdamage, NKcells
　　随着天然药物研究的不断深入 ,人们发现海藻多糖具有
抗感染 、抗肿瘤 、抗凝血 、抗辐射 、清除氧自由基和延缓衰老
的作用。为寻找天然低毒高效的抗辐射免疫调节剂 , 本文探
讨了粗江蓠多糖对 60Coγ射线辐射损伤小鼠 NK细胞活性的
影响。粗江蓠(GracilariaGigasHarvey)是多年生的大型红
藻 , 属于红藻门 , 真红藻纲 , 杉藻目 ,江蓠科 , 江蓠属 , 是我国
广东 、浙江 、台湾沿海藻类养殖品种之一。目前 ,粗江蓠主要
用于工业生产琼胶 , 对生理调节作用的报道较少 , 为开发粗
江蓠的应用价值 , 本文探讨了粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠
NK细胞活性的影响。
1　材料和方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物　昆明小鼠 ,雌雄各半 , SPF级 , (6 ～ 10)周
龄 , 体重(20±2)g,广东医学院动物中心提供。
1.1.2　材料与试剂　粗江蓠多糖由本实验室提取 , 生理盐
水配制成 10%的多糖原液 , 10磅高压消毒 10min备用。使
用前用 RPMI-1640培养液配制成(0.4, 0.8, 1.6)mg/ml终浓
度的多糖溶液。 RPMI1640培养基(美国 Gibco公司), 小牛
血清(杭州四季青公司)。
1.1.3　仪器　SW-CJ-1D型净化工作台(苏州净化设备厂),
TC2323型 CO2培养箱(美国 SHELLAB公司), 台式离心机
(上海安亭科学仪器厂), ELx800酶标仪(美国 Bio-Tek公
司),微量加样器(法国 Gilson公司)。
1.2　方法
1.2.1　分组处理　按随机区组法将 50只小鼠分为正常对
照组(A组), 照射对照组(B组)和 3个不同 GHPS剂量加照
射组(C, D, E组), 每组 10只。正常对照组和照射对照组每
只小鼠腹腔注射生理盐水 0.5ml/d。 3个不同 GHPS剂量加
照射组小鼠分别腹腔注射(0.4, 0.8, 1.6)mg/ml的 GHPS溶
液 0.5ml/d,各组小鼠均连续注射 14d。 B, C, D, E组小鼠第
15d均一次性给予 60Coγ射线全身照射(照射距离为 80cm,
剂量率为 0.673Gy/min-1 , 吸收剂量为 5Gy)。
1.2.2　脾细胞悬液的制备　将小鼠颈椎脱位处死 , 置 75%乙
醇中浸泡 5min,无菌取出脾脏置于平皿中 , 去掉结缔组织 ,分
别用生理盐水清洗 3次。加入 2mlRPMI-1640培养液 ,用剪刀
将脾剪成 1mm3碎块后 ,用毛玻片轻柔研磨组织碎片, 经 8层
纱布过滤制成单细胞悬液, 用 Hanks液离心洗涤后, 将细胞悬
浮于含 10%小牛血清的 RPMI-1640培养液中。经台盼兰染
色 ,计数活细胞在 95 %以上, 调整细胞数至 5×107 /ml。
1.2.3　靶细胞的制备　取经培养 24h的小鼠 T淋巴瘤细胞
(YAC-1), 用 RPMI-l640培养液以 1000r/min-1 , 离心 5min,
洗涤 1次。 用 RPMI-l640培养液重悬 YAC-1后计数 , 并用
0.5%台盼蓝染色检测活细胞在 95%以上 , 调整细胞浓度至
1×105 /ml, 备用。
1.2.4　效-靶细胞作用　取 96孔细胞培养板 ,每孔加入效应
细胞和靶细胞各 0.1ml,每份标本设 3复孔 , 同时设靶细胞自
然释放对照组(0.1ml靶细胞 +0.1mlRPMI-1640培养液)和
最大释放对照组 (0.1ml靶细胞 +0.1ml1%NP-40 液),
1000r/min-1 , 低速离心 2min后 , 置 37℃、 5% CO
2
培养箱中
孵育 2h。
1.2.5　酶促反应　吸取各孔上清 0.1ml加于另一培养板孔
中 , 置 37℃预温 10min, 每孔加入新鲜配制的乳酸脱氢酶底
物溶液 0.1ml, 室温避光反应 15min,每孔加 1mol/L柠檬酸终
止液 30μl,终止酶促反应。
1.2.6　结果计算　用酶联检测仪在 570nm波长下读取各孔
吸光度值 , 并计算 NK细胞活性。
NK细胞活性= 实验组 A值 -自然释放对照组 A值最大释放对照组 A值 -自然释放对照组 A值 ×100%
1.2.7　统计学处理　用 SAS8.0软件进行方差齐性检验 , 然
后进行完全随机设计方差分析 , 组间差异的显著性用 q检
验 , 多个样本均数与对照组样本均数之间比较用 t检验。
2　结果
从表 1和图 1可见 , 辐射对照组小鼠接受 60Coγ射线
5Gy照射 后 , NK细 胞的 活性 显著低 于正 常对 照组
(P<0.01)。C、D、E组小鼠经腹腔注射不同剂量的 GHPS,
再接受 γ射线 5Gy照射后 , C、D、E组小鼠 NK细胞活性明显
高于 B组(P<0.01)。
—558— 放射免疫学杂志 2009年第 22卷第 6期 JofRadioimmunology2009, 22(6)
表 1　GHPS对辐射损伤小鼠 NK细胞活性的影响( x±s, n=10)
组别 GHPS(mg/kg)
Dose
(Gy)
NK
(%)
A 0 0 64.92±4.95
B 0 5 12.00±2.02##
C 10 5 20.00±2.93＊＊
D 20 5 44.72±2.65＊＊
E 40 5 64.82±4.50＊＊
　　##P<0.01, vsA组;＊＊P<0.01, vsB组
图 1　GHPS对辐射损伤小鼠腹腔 NK细胞活性的影响
3　讨论
目前放疗是治疗恶性肿瘤的主要手段。但其缺乏特异
性 ,在杀死肿瘤细胞的同时也损伤正常组织细胞 ,特别是对免
疫系统的损伤尤为严重。放疗引起免疫系统抑制将会导致机
体出现感染等并发症 ,加重病情, 同时也使肿瘤细胞逃脱免疫
监视 ,这往往是肿瘤治疗失败的主要原因。因此, 提高机体免
疫功能 ,增强机体的抵抗力是提高放疗效果的重要手段。
多糖是生物体内普遍存在的一大类生物大分子 , 具有许
多重要的生物功能。许多研究者从各种生物体内提取大量
活性多糖 , 发现多糖具有明显的抗辐射作用 , 能显著延长辐
射损伤机体的存活时间 , 提高存活率 , 拮抗辐射引起的免疫
功能低下 , 降低造血系统的损害 , 清除氧自由基 [ 1 , 2] 。
NK细胞是在骨髓中从共同淋巴样祖细胞分化发育而来
的一群独立的淋巴细胞群。 NK细胞能参与机体的非特异免
疫作用(抗感染、抗肿瘤), 其杀伤靶细胞(被感染细胞 、肿瘤细
胞)的独特之处是不需要抗原的刺激 ,不依赖抗体或补体的协
助 ,也没有 MHC的限制性 ,反应迅速 ,作用明显 [ 3]。这种效应
发生于特异性免疫应答之前 , 所以 NK细胞在抗感染免疫早期
发挥重要作用。啮齿类动物的 NK细胞主要分布在脾脏和外
周血。因此在研究 NK细胞的活性时 ,常以小鼠脾脏为研究对
象。本文发现 ,照射对照组小鼠接受 5Gyγ射线全身照射后
NK细胞活性明显低于正常对照组 , GHPS加照射组小鼠 NK
细胞杀伤靶细胞的能力比照射组高 ,说明粗江蓠多糖可以增
强辐射损伤小鼠 NK细胞杀伤靶细胞的能力。
海藻多糖抗辐射及对淋巴细胞免疫活性的调节机制尚
无定论 , 多认为是受体机制。免疫细胞表面存在海藻多糖受
体 , 可与海藻多糖分子特异性结合 , 调节细胞信号转导 , 影响
基因的表达 , 从而调节免疫细胞的活性。
近年研究发现 , NK细胞可表达两种不同受体 [ 4] 。一种
是能够激发 NK细胞杀伤作用的受体 , 称为杀伤细胞活化受
体(killeractivatoryreceptor, KAR);一种是能够抑制 NK细胞
杀伤作用的受体 , 称为杀伤细胞抑制受体(killerinhibitoryre-
ceptor, KIR), 二者同属 C型凝集素家族 。正常情况下 , KIR
能够识别结合自身组织细胞表面 MHC-Ⅰ类分子 , 并可通过
胞浆内免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-
basedinhibitorymotif, ITIM)产生抑制信号 , 阻断 NK细胞活
化 , 使之丧失杀伤活性 , 自身组织细胞不被破坏 [ 5] 。感染细
胞和肿瘤细胞表面 MHC-Ⅰ 分子表达减少或缺失 , 或由于
MHC-Ⅰ分子结构发生异常 , NK细胞将其识别为非己细胞 ,
并与表面相应的糖类配体结合 , 通过 ITIM信号转导途径产
生杀伤作用。粗江蓠多糖增强 NK细胞杀伤靶细胞活性可
能和 KAR与靶细胞表面配体的相互识别有关。
参考文献
[ 1] DiasPF, SiqueiraJMJr, VendruscoloLF, etal.Antiangiogenicand
antitumoralpropertiesofapolysaccharideisolatedfromtheseaweedsar-
gassumstenophylum[ J].CancerChemotherPharmacol, 2005, 56(4):
436-446.
[ 2] DamonteEB, MatulewiczMC, CerezoAS.Sulfatedseaweedpolysac-
charidesasantiviralagents[J].CurrMedChem, 2004, 11(18):2399-
2419.
[ 3] LebbinkRJ, MeyaardL.Non-MHCligandsforinhibitoryimmunere-
ceptors:novelinsightsandimplicationsforimmuneregulation[ J] .Mol
Immunol, 2007, 44(9):2153-2164.
[ 4] RadaeyS, SunPD.Structureandfunctionofnaturalkillercellsur-
facereceptors[ J] .AnnuRevBiophysBiomolStruct, 2003, 32:93-114.
[ 5] AnfossiN, AndreP, GuiaS, etal.HumanNKceleducationbyin-
hibitoryreceptorsforMHCclassI[ J].Immunity, 2006, 25(2):331-
342. (2009-05-14收稿)
缺血缺氧脑损伤大鼠 IL-6和 TNF-α的变化及其临床意义＊
兰州军区兰州总医院动物实验科(730050)　　牛廷献　史智勇　罗建军
　　摘要　目的:探讨缺血缺氧脑损伤大鼠白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化及其临床意
＊甘肃省自然科学基金资助项目(0804NKCA105)
通讯作者
—559—放射免疫学杂志 2009年第 22卷第 6期 JofRadioimmunology2009, 22(6)