全 文 ：江西农业学报　2007, 19(9):105 ～ 107
Acta Ag riculturae Jiangx i
海头红提取物抑制食用菌竞争性杂菌的研究
欧阳桐娇1 ,郑 怡2 ,刘艳如2 ,郭文杰 1 ,江枝和 3 ,林 勇3
　 　收稿日期:2007 -07 -04
基金项目:福建省科技厅重点项目(2005N036)。
作者简介:欧阳桐娇(1963 -),福建平潭人 ,助理研究员 ,从事植物资源化学研究。
(1. 福建省农科院生物技术研究所 ,福建福州 350003;2. 福建师范大学生命科学学院 ,福建福州 350007;
3. 福建省农科院土壤肥料研究所,福建福州 350013)
摘　要:用纸片法和玻片法检测了海头红的 4种有机溶剂提取物及极性分离物对食用菌 4种竞争性真菌的抑制作用。结
果表明:海头红的无水乙醇和甲醇∶甲苯(3∶1)提取物(0. 1 mg /g)对黑曲霉和圆弧青霉的抑制作用明显, 乙酸乙酯和苯提取物
对 4种真菌无抑制活性, 4种溶剂提取物对绿色木霉和红色链孢霉均无抑制作用。无水乙醇提取物通过不同的极性溶剂(石
油醚 、苯 、乙醇)分离并对其进行抗菌活性检测 ,结果表明, 在 3种分离组分中, 只有乙醇极性分离物对 4种真菌的孢子萌发具
有不同程度的抑制作用 ,乙醇极性组分浓度为 0. 05 mg /g和 0. 002 mg /g时对黑曲霉和圆弧青霉的孢子萌发抑制作用明显。
关键词:海头红;食用菌杂菌;提取物;抑制作用
中图分类号:S436. 46　文献标识码:A　文章编号:1001 -8581(2007)09 -0105 -03
Inh ib ition E ffect of Extract from P locam ium telfairae on Competitive
Fungi in Ed ibleM ushroom
OUYANG Tong - jiao1 , ZHENG Yi2 , L IU Yan - ru2 , GUO Wen - jie1 , JIANG Zhi - he3 , LIN Yong3
(1. Bio techno logy Institute, Fu jian Academy o f Agricu ltu ra l Sciences, Fuzhou 350003, Ch ina;
2. Co llege o f L ife Science s, Fu jian Norm al Unive rsity, Fuzhou 350007, China;
3. Institu te o f Soil and Fertilizer, Fu jian Academy o f Ag ricu ltural Science s, Fuzhou 350013, China )
Abstract:Extracts iso la ted from P locam ium telfairae by four so lvents and polarw ere used to de te rm ine the inhibition aga inst fou r
fung i through g lass piecem ethod and slip me thod. The results show ed that ex trac ts o f e thanol and m ethano l∶to luene (3∶1)w ere active
againstAspergillus niger and Penicillium cyclopium , but extracts w ith four so lvents had no active againstTrichoderm a viride andNeurcs-
pora crassa and ex trac ts w ith e thy l aceta te and benzene did no t show any ac tivity aga inst four fung i tested. Anhydrous ethano l extract
w as separa ted w ith different po lar so lvents(petroleum e the r, benzene, e thano l) and their separationsw ere tested for antifunga l activ i-
ty. The result indicated that am ong th ree separa tion fractions, only po lar frac tion of ethano l show ed inhibito ry actions on the spore ger-
m ina tion of fou r fungi, and strong inh ibition we re found in the spo re germ ina tion ofAspergillus nige and Penicillium cyclopium at con-
centration o f 0. 05 m g /g and 0. 002 m g /g respec tively.
Key words:P locam ium telfairae;Edib le mushroom;Fung i;Ex trac t;Inhibition
　　食用菌生产已经成为农业生产的一个重要方面 ,是
广大农民致富的一条重要途径 ,但是在食用菌生产上始
终存在着污染的问题 ,由于污染导致食用菌减产甚至绝
收的事件时常发生 ,给菇农造成极大的经济损失。目前
食用菌生产上最常用的化学药物是多菌灵 ,其它还有克
菌灵、霉杀剂等 ,但长期用药会使病原微生物产生耐药
性 ,降低药效 ,同时还存在农药残留和污染环境问题 ,因
此寻求新的无污染的药剂是当今研究的热门问题 [ 1 , 2] 。
植物是生物活性物质的天然储藏库 ,其产生的次生代谢
产物大多具有杀虫或抗菌性 。因此 ,从自然界中获取具
有抑制各种植物病原菌或杀虫的天然产物 ,直接用于食
用菌病害的防治 ,越来越受到人们的关注 。
占地球总面积 71%的海洋 ,蕴藏着丰富的生物资
源 ,被誉为是生命的发源地 ,生物种类非常丰富。为解决
陆地资源不足的问题 ,以开发海洋资源为标志的 “蓝色
革命 ”正在世界范围内兴起 ,海洋资源的开发利用近年
来在国内也受到广泛的重视。在这广阔的海洋中 ,分布
着 3万余种含有丰富生理活性物质的海藻。海藻生物活
性物质已成为海洋科学研究的热点之一 [ 3, 4] 。海洋生物
由于特殊的生境能产生陆地生物所不具有的活性物质 ,
已得到科技界的公认 ,因此海洋生物是获取新的活性物
质的重要资源 ,并将成为国内外研究的热点。由于海洋
所处的特殊地理位置 ,使海藻中存在着陆生植物中所没
有的特殊成分及药理成分 ,这些生物活性物质可以有效
地避免植物病原菌的抗药性、耐药性、农药残留毒性 、环
境污染等问题的产生。因此 ,从海藻中提取抗细菌、抗真
菌及抗病毒等的生物活性物质就显得非常必要。自 20
世纪 60年代中期发现海藻具有抗菌作用以来 ,国内外许
多专家发现不同海藻提取物对细菌的抑制作用是不相同
的。徐年军 、R izvi、Vairappan等陆续发现了海藻中含有
抑菌活性的物质[ 5～ 7] 。本文报道了海头红无水乙醇提取
物及极性分离物对食用菌竞争性杂菌的抑制作用。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　供试海藻　海头红样品采集于福建沿海海域 ,主
要包括石狮市黄金海岸、平潭县及永宁等 ,采回后用清水
洗去藻体表面杂质 ,然后用蒸馏水洗净烘干 ,粉碎后
备用。
1. 1. 2　菌种　黑曲霉 (Asperg illus n iger)、圆弧青霉(Pen-
icillium cyclopium)、绿色木霉 (Trichoderma viride)、红色
链孢霉(Neurcspora crassa)(由福建农林大学许文耀教授
提供)。
1. 2　方法
1. 2. 1　培养基的配方　马铃薯培养基 。
1. 2. 2　试剂　无水乙醇 ,乙酸乙酯 ,苯 ,甲醇∶甲苯 (3∶
1),乙醚 ,均为国产分析纯。
1. 2. 3　提取物的制备　取海头红阴干样品以不同的有
机溶剂在索氏抽提器上回流抽提 72 h,然后用旋转蒸发
器减压蒸去有机溶剂 ,获得脂类粗提物 ,恒温干燥 ,称重。
1. 2. 4　抑菌实验　采用纸片法。在 28 ℃下培养供试菌
种 ,定期观察结果并测量抑菌圈 , 5次重复 ,对平均值进
行统计分析。
1. 2. 5　孢子萌发抑制实验　采用玻片法。孢子悬浮液
的制备如下:将活化后的真菌转移至 PDA斜面 , 28 ℃下
培养至产孢;用无菌水洗下孢子 ,用 4层纱布过滤 ,以血
球记数板记数;并将孢子悬浮液稀释到 50000个 /mL,放
入 4 ℃冰箱备用 。
往干燥洁净的无菌凹玻片孔中滴加 100 μL海藻提
取液 ,在超净工作台上挥发至干 。然后每孔滴加 100 μL
配制好的孢子悬浮液 , 28℃恒温保湿培养 6 h,显微镜下
观察并记录孢子萌发情况 。以等量的乙醇为对照。每处
理重复 3次 ,按下面公式计算抑制孢子萌发率:
抑制孢子萌发率 (%)=(1 -处理萌发率 /对照萌发
率 )×100
2　结果与分析
2. 1　不同有机溶剂提取物的抗真菌活性　从表 1可以
看出 ,海头红的不同溶剂提取物对真菌的抑制程度是不
同的 ,其中海头红的无水乙醇和甲醇∶甲苯 (3∶1)提取物
(0. 1mg /g)对黑曲霉 (Asperg illus n iger)、圆弧青霉(Peni-
cillium cyclopium)的抑制作用明显 ,抑菌圈直径分别达到
16、9. 2 mm , 12. 3、5. 6 mm。而对绿色木霉 (Trichoderma
viride)和红色链孢霉 (Neurcspora crassa)没有抑制作用 。
海头红的乙酸乙酯和苯提取物对 4种真菌都没有抑制
作用。
2. 2　乙醇提取物不同极性组分的抗菌活性　从表 2可
以看出 ,海头红无水乙醇提取物 (0. 1 mg /g)的不同极性
的抗菌活性有着明显的差异。在 3种极性组分中 , 弱极
性的石油醚和中极性的苯组分无抗菌活性 ,只有强极性
的乙醇组分有抗菌活性 ,其对黑曲霉 (Asperg illus niger)
和圆弧青霉 (Penicillium cyclopium)的抑制效果较好 ,抑
菌圈直径分别达到 18. 2和 10. 2 mm。
表 1　海头红不同有机溶剂提取物对真菌的抑制作用
菌种 无水
乙醇
乙酸
乙酯
苯 甲醇∶甲苯
(3∶1)
黑曲霉(Aspergi llus n iger) 16. 0 0 0 12. 3
圆弧青霉(P enici llium
cyclopium)
9. 2 0 0 5. 6
　
绿色木霉(Trichoderm a viride) 0 0 0 0
红色链孢霉(Neurcspora crassa) 0 0 0 0
注:表中数字表示抑菌圈直径 ,单位 mm;0表示没有抑制作用。
下同。
表 2　海头红乙醇提取物不同极性组分的抗菌活性
菌种 石油醚 苯 乙醇
黑曲霉(Aspergi llus n iger) 0 0 18. 0
圆弧青霉(Penici llium cyclopium) 0 0 10. 2
绿色木霉(Trichoderm a viride) 0 0 0
红色链孢霉(Neurcspora crassa) 0 0 0
2. 3　极性组分不同质量浓度的抗菌活性　从表 3可以
看出 ,随着海头红无水乙醇提取物极性组分浓度的变化 ,
对 4种真菌病菌的抑制情况也随着相应的变化 。浓度为
0. 05 mg /g时对黑曲霉 、圆弧青霉的抑制活性最强 ,其余
各种浓度的抑制作用大致相当(图 1)。各种浓度对黑曲
霉、圆弧青霉都有抑制作用 ,对绿色木霉和红色链孢霉均
没有抑制作用。
表 3　海头红无水乙醇提取物极性组分不同
质量浓度的抗菌活性
菌种 极性组分浓度(m g /g)
0. 1 0. 05 0. 01 0. 002
黑曲霉(Asperg i llus n iger) 18. 0 22. 2 18. 5 15. 0
圆弧青霉(P en icil lium cyclop ium) 10. 2 18. 3 10. 8 12. 8
绿色木霉(Trichoderma viride) 0 0 0 0
红色链孢霉(Neurcspora cra ssa) 0 0 0 0
左上 0. 1m g /g,左下 0. 05m g /g,右上 0. 01 mg /g,右下 0. 002m g /g
A:圆弧青霉;B:黑曲霉
图 1　海头红无水乙醇提取物极性组分不同质量
浓度的抗菌活性
2. 4　极性组分不同质量浓度对孢子萌发的抑制作用　
表 4的结果表明:海头红的无水乙醇提取物极性组分浓
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度为 0. 05 mg /g和 0. 002 mg /g时对黑曲霉孢子萌发具
有很强的抑制作用 ,抑制率达到了 93%以上 。浓度为
0. 002 mg /g时对圆弧青霉孢子萌发具有很强的抑制作
用 ,抑制率达到了 90%以上。其余浓度对 4种真菌孢子
萌发的抑制作用也较明显 ,抑制率达到了 56%以上 ,只
有在浓度为 0. 1mg /g时对红色链孢霉孢子萌发的抑制
作用相对较弱 ,不到 45%。
表 4　海头红的无水乙醇提取物极性组分对真菌
　　　　　　　　孢子萌发的抑制率 %
菌种 极性组分浓度(mg /g)
0. 1 0. 05 0. 01 0. 002
黑曲霉(Asperg illus nig er) 76. 3 95. 2 85. 2 93. 2
圆弧青霉(P en icillium cyclopium) 67. 4 86. 3 82. 5 90. 1
绿色木霉(Trichod erma viride) 56. 3 67. 2 73. 7 80. 5
红色链孢霉(Neurcspora cra ssa) 44. 3 56. 2 65. 3 71. 2
3　讨论
海藻抗菌活性的筛选与各种因素有关 ,如地理因
素 、环境因素 、季节因素以及溶剂因素等等。青岛的马锦
文等报道了海藻甲醇∶甲苯 (3∶1)提取物的抗菌活性[ 8] ,
徐年军等报道了海藻的无水乙醇提取物的抗菌活性[ 5] ,
均取得了明显的效果。而本文通过对海头红 4种有机溶
剂提取物的抗食用菌竞争性杂菌的筛选 ,发现无水乙醇
和甲醇∶甲苯(3∶1)提取物的抗菌活性明显强于乙酸乙
酯和苯的提取物 ,与以上研究结果相似。
本研究进一步对海头红无水乙醇粗提物的不同极
性组分进行分离发现 ,强极性组分粗提物有更强的抗菌
活性 ,而低极性组分无抗菌活性 ,但苑辉卿等报道了海头
红 (P locam ium telfa irae)提取物的抑瘤活性并从石油醚
组分中分离到部分化合物 [ 9] ,表现出低极性组分中也有
抗菌成分 ,可能是由于我们所选取的抗菌材料不一样 ,受
到地理和生境的影响 ,或对试验肿瘤细胞和食用菌竞争
性杂菌的抑制机理不同。今后有待于继续经过柱层层析
和薄层层析分离 ,再通过高相液相分离、质谱分析 、核磁
共振 ,确定海头红提取物中活性物质的结构 。总之 ,辽阔
的海洋为我们提供了丰富的海藻资源 ,我们期待着海藻
中结构新颖 、活性独特的天然成分能被发现 ,为新药的研
究开发提供新的思路 。
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