全 文 ：张迪，林勇，欧阳桐娇，等．海头红提取物的抑菌活性及其抗菌成分的初步分离研究 ［Ｊ］．福建农业学报，２０１３，２８ （９）：９１４－９１８．
ＺＨＡＮＧ　Ｄ，ＬＩＮ　Ｙ，ＯＵＹＡＮＧ　Ｔ－Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　Ｆｒａｃｔｉｏｎｉｎｇ　ｏｆ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ａｃｔｉｖｅ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３，２８ （９）：９１４－９１８．
海头红提取物的抑菌活性及其抗菌成分的初步分离研究
张　迪１，林　勇１，欧阳桐娇２，王宏雨１，毛方华１
（１．福建省农业科学院食用菌研究所，福建　福州　３５０００３；
２．福建省农业科学院生物技术究所，福建 　福州　３５０００３）
收稿日期：２０１３－０６－２０初稿；２０１３－０７－１７修改稿
作者简介：张迪 （１９８３－），男，硕士，研究实习员，主要从事食用菌天然产物研究 （Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｈｏｔｏｈｏｓｔ＠１２６．ｃｏｍ）
通讯作者：林勇 （１９７１－），男，硕士，副研究员，主要从事食用菌天然产物研究 （Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｆｏｒｅｓｔｙ＠１６３．ｃｏｍ）
基金项目：福建省自然科学基金项目 （２０１０Ｊ０１１００）
摘　要：以假单胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 、绿色木霉Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ为供试食用菌病原菌，评价海头红
提取物的抑菌活性，并采用生物活性追踪法对其中抑菌有效成分进行初步分离。结果表明，海头红乙醇提取物
经萃取分离得到的石油醚萃取相、氯仿萃取相、乙酸乙酯萃取相中，氯仿萃取相和乙酸乙酯萃取相对假单胞菌
具有较好的抑制作用，１００ｍｇ·ｍＬ－１浓度下抑菌圈直径分别为１４．３ｍｍ和８ｍｍ；石油醚和氯仿萃取相对绿色
木霉的菌丝生长的抑制作用较好，７２ｈ抑制率分别达５４．５７％和３６．５５％。对乙酸乙酯组分通过２次硅胶柱层析
分离，得到一个具有抑菌活性的组分Ｄ，其对假单胞菌的抑菌圈为１３ｍｍ （１００ｍｇ·ｍＬ－１），对绿色木霉的菌
丝生长７２ｈ抑制率为４８．５３％ （５０ｍｇ·ｍＬ－１）。对组分Ｄ进行ＧＣ－ＭＳ分析，初步判定其中抑菌有效成分为４－羟
基苯甲醛，有关其抑菌有效成分的纯化与鉴定有待进一步研究。
关键词：海头红；抗菌；假单胞菌；绿色木霉
中图分类号：Ｓ　４８２．２９２ 文献标识码：Ａ
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　Ｆｒａｃｔｉｏｎｉｎｇ　ｏｆ
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｃｔｉｖｅ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｄｉ　１，ＬＩＮ　Ｙｏｎｇ１，ＯＵＹＡＮＧ　Ｔｏｎｇ－ｊｉａｏ２，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ－ｙｕ１，ＭＡＯ　Ｆａｎｇ－ｈｕａ１
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５０００３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５０００３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　ｗｅｒｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｉｔｓ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｉｔｈ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｔｏ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ａｎｄ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｄｅｇｒｅｅｓ　ｗｅｒｅ
ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｚｏｎｅ　ｗｅｒｅ　１４．３ｍｍ　ａｎｄ　８ｍｍ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ａｔ
ｔｈｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　１００ｍｇ·ｍＬ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｓｈｏｗｅｄ
ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｔｏ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　５４．５７％ａｎｄ
３６．５５％ａｆｔｅｒ　７２ｈｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗａｓ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ
ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　ａｇａｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎｅｄ
ｔｗｉｃｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｉｌｉｃｏｎｅ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　Ｄ．Ｔｈｉｓ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ
ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｔｏ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ （１３ｍｍ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｗｉｔｈ　１００ｍｇ·ｍＬ－１）ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔ
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ　ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ（４８．５３％，ｗｉｔｈ　５０ｍｇ·ｍＬ－１）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ＧＣ－ＭＳ　ａｓｓａｙ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　Ｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｓ　４－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ．
Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　Ｄ　ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｔｈｅｉｒ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ；Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ
　　海头红Ｐｌｏｃａｍｉｕｍ　ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ．系红藻
门杉藻目海头红科海头红属海藻，多生长在低潮带
岩石上或石沼中，主要分布在太平洋西海岸，我国
的南北方沿海均有分布。日本学者 Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｋ［１］
福建农业学报２８（９）：９１４～９１８，２０１３
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
文章编号：１００８－０３８４ （２０１３）０９－９１４－０５
从海头红中分离出２种具有杀虫活性的卤代单萜；
韩国学者Ｋｉｍ　Ｊｕ－Ｙｏｕｎｇ等［２］对海头红的甲醇提取
物的抗肿瘤活性进行了研究，发现海头红的甲醇提
取物对 ＨＴ－２９人结肠癌细胞表现出细胞毒性，并
对其诱导 ＨＴ－２９人结肠癌细胞凋亡的机理进行了
研究；我国的苑辉卿等［３－４］也对青岛沿海海头红的
石油醚萃取相的抗肿瘤活性进行了分析，发现其在
１２５～５００ｍｇ·ｋｇ－１的剂量范围内对小鼠Ｓ１８０肉
瘤、Ｈ２２肝癌、艾氏腹水癌具有明显的抑制作用。
目前，对于海头红的抗菌成分的研究较少，本课题
组成员前期对海头提取物的抗菌活性进行了研究，
发现海头红的无水乙醇提取物具有较好的抑菌活
性［５］，继续对其抗菌成分进行追踪分离，并对分离
到的具有抗菌组分进行ＧＣ－ＭＳ分析。
１　材料与方法
１．１　试验材料
１．１．１　供试材料　海头红Ｐ．ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ．采
集于福建石狮市永宁镇海岸岩滩，采回后用清水洗
去藻体表面杂质，再次用蒸馏水洗净。
１．１．２　 试剂 　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ公
司）；柱层析用２００～３００目硅胶 （国药试剂集团有
限公司）；ＧＦ２５４薄层层析硅胶板 （青岛海洋化工
厂）；其他常规药品、试剂为国产分析纯。
１．１．３　供试菌　本试验中用于指示抗菌活性的受
试菌包括１种细菌和１种真菌，细菌为假单胞菌
Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，真菌为绿色木霉Ｔｒｉｃｈｏ－
ｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ。
１．１．４　仪器　ＢＳ－１００Ｎ自动部分收集器 （上海沪
西分析仪器厂）；安捷伦６８９０／５９７３ｎ色谱－质谱联
用仪：英国安捷伦公司。
１．２　试验方法
１．２．１　海头红提取物的制备　将已经阴干的海头
红，于４５℃下烘干２４ｈ后用高速万能粉碎机粉碎
成粉末。取海头红藻粉２．５ｋｇ，用３倍体积量的
９５％乙醇浸提２次，每次浸提７２ｈ。将提取液过
滤、旋转蒸发仪减压浓缩后析出大量无机盐，过滤
取滤液继续浓缩得到黑褐色浸膏６０．２５ｇ。
１．２．２　海头红提取物的分离　将制得的海头红提
取物浸膏以７０％甲醇溶解分散，依次用石油醚、氯仿、
乙酸乙酯萃取，每种溶剂萃取３次，将萃取收集的各
部分溶剂用旋转蒸发仪蒸干获得各萃取部分。
氯仿萃取部分进行减压硅胶柱层析，２００～３００
目硅胶，干法上样，氯仿萃取相以石油醚－丙酮进行
梯度洗脱获得ＰｅＡ１－ＰｅＡ１３共１３个部分。ＰｅＡ５－
ＰｅＡ７部分继续通过硅减压胶柱层析以氯仿－甲醇梯
度洗脱，获得 ＰｅＡＣ１－ＰｅＡＣ２４共２４个流份，通过
ＧＦ２５４硅胶板薄层层析检测合并相同部分。
乙酸乙酯萃取部分通过硅胶柱层析，以石油醚－
乙酸乙酯进行梯度洗脱获得ＰｅＥ１－ＰｅＥ１１共１１个
流份；ＰｅＥ２－ＰｅＥ６部分继续通过硅胶层析以氯仿－甲
醇进行梯度洗脱，得ＰｅＥＣ１－ＰｅＥＣ３２共３２个流份，
其中ＰｅＥＣ５－ＰｅＥＣ７得到有抗菌活性的油状部分Ｄ。
１．２．３　细菌抑制活力的检测　采用圆形纸片扩散
法［６］。刮取供试菌菌苔于５ｍＬ无菌水中，摇匀菌悬
液（浓度约为１０６个·ｍＬ－１）中，倒入熔化并冷却至４０
～５０℃的培养基中，摇匀后，迅速分装于培养皿（Φ９０
ｍｍ）中，待凝固后备用。取已消毒过的双层圆形滤纸
片（Φ６ｍｍ）浸取一定浓度的药液（约２０ｕＬ），略干后
贴于培养基平板上，同时用溶剂做空白对照。置恒温
培养箱中培养培养（３６～３７℃，１２ｈ）后分别观察结
果，测量抑菌圈。以上步骤均在无菌条件下操作，每
个处理设３个平行样，结果取平均值。
１．２．４　真菌抑制活力的检测　采用菌丝生长速率
法［７］。
（１）菌饼制备：取保存的真菌菌种，接种于孟
加拉红培养基上，于２８℃下培养４ｄ至菌丝长满全
皿。用直径为８ｍｍ的打孔器制成若干菌饼备用。
（２）含药培养基平板制备：准确将０．５ｍＬ药
液涂布ＰＤＡ培养基上制成含药培养基平板，在对
照上则涂布相同体积的溶剂。
（３）抑制试验：在培养好的供试菌平板上，用
接种针挑取菌饼轻放于含药培养基平板中央（有菌丝
的一面向下），每培养皿放置１个菌饼。每处理重复３
次。２８℃下培养一段时间后检查各处理菌落的直径，
按以下公式计算不同处理对供试菌的菌丝生长抑制
率。菌丝生长抑制率（％）＝（对照菌落直径－处理菌
落直径）／（对照菌落直径－菌饼直径）×１００％。
１．２．５　海头红组分Ｄ的ＧＣ－ＭＳ分析　用ＧＣ－ＭＳ
仪对分离过程的部分组分进行分离和质谱分析，
ＧＣ－ＭＳ仪系安捷伦６８９０／５９７３ｎ色质联用仪，色谱
柱ＤＢ－５ＭＳ毛细管柱。气相色谱条件：进样口温
度：２３０℃；分流比：２０∶１；升温程序：１５０℃（５ｍｉｎ）
→（５℃·ｍｉｎ－１）→２８０℃（５ｍｉｎ）质谱条件：离子源：
ＥＩ；电离电压：７０ｅＶ；扫描范围：５０～５００ａｍｕ。
２　结果与分析
２．１　海头红乙醇提取物各萃取部分抑菌活力
以假单胞菌为指示菌检测海头红乙醇提物的各
萃取相的抑制细菌活性，结果 （表１）表明氯仿
５１９第９期 张　迪等：海头红提取物的抑菌活性及其抗菌成分的初步分离研究
相、乙酸乙酯相和石油醚相都具有一定的抑菌能
力，其中氯仿萃取相对假单胞杆菌的抑制活性最
高，抑菌圈直径可达１４ｍｍ。海头红乙醇提取物
的水相未检测到抑菌活性。
表１　海头红粗提物的抗细菌活性
Ｔａｂｌｅ　１　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ
Ｐ．ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
水相 乙酸乙酯相 氯仿相 石油醚相
抑菌圈 ０．０　 ８　 １４．３　 ７．３
活性 － ＋ ＋＋ ＋
注：“＋＋”抑菌圈宽度＞１０ｍｍ；“＋”１０ｍｍ＞抑菌圈宽度＞６ｍｍ；
“－”无抑菌圈；药液浓度１００ｍｇ·ｍＬ－１。
以绿色木霉为指示菌检测海头红乙醇提取物的
各萃取相对真菌菌丝生长的抑制作用，通过检测结
果 （表２）可知，其氯仿萃取相和石油醚萃取相的
对绿色木霉菌丝生长的抑制能力较强，而乙酸乙酯
萃取相抑制力则较弱。在细菌抑制活性检测中未表
现出抑制活性的水相对绿色木霉的菌丝生长却具有
一定的抑制作用。
表２　海头红粗提物对真菌菌丝生长的抑制作用
Ｔａｂｌｅ　２　Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ
Ｐ．ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
处理
抑制率／％
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
水相 ２５．６７　 ２０．２０　 １９．８１
乙酸乙酯萃取相 ２３．７８　 １８．６２　 １９．３７
氯仿萃取相 ５２．００　 ５１．７２　 ５４．５７
石油醚萃取相 ３４．３７　 ３５．００　 ３６．５５
注：药液浓度为１００ｍｇ·ｍＬ－１。
２．２　海头红提取物氯仿萃取相层析流份的抑菌活
性检测
氯仿萃取相以石油醚－丙酮梯度洗脱得到
ＰｅＡ１－ＰｅＡ１２和丙酮清柱部分，合计１３个部分，
以假单胞菌为指示菌通过圆形纸片扩散法对各个流
份的抑菌活性进行检测，抑菌试验结果 （表３）显
示ＰｅＡ５－ＰｅＡ７即石油醚∶丙酮＝３∶１～１∶１洗脱
部分表现出较强的抑菌活性，因而将其合并后进一
步追踪分离。
２．３　海头红提取物乙酸乙酯萃取相层析流份的抑
菌活性检测
乙酸乙酯萃取相以石油醚－乙酸乙酯梯度洗脱
得到ＰｅＥ１－ＰｅＥ１０和乙酸乙酯清柱部分，合计１１
个部分，以假单胞菌为指示对各个流份的抑菌活性
进行检测，抑菌试验结果 （表４）显示ＰｅＥ２－ＰｅＥ６
洗脱部分的抑菌活力较好，且抑制活性较分离前提
高明显，回收的抗菌活性流份总质量较氯仿萃取相
多，因而将其合并后进一步重点追踪分离。
　表３　氯仿萃取相柱层析组分对假单胞杆菌的抑制活性
Ｔａｂｌｅ　３　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ
Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
处理
抑菌圈直径
／ｍｍ
处理
抑菌圈直径
／ｍｍ
ＰｅＡ１ － ＰｅＡ８ －
ＰｅＡ２ － ＰｅＡ９ －
ＰｅＡ３　 ６ ＰｅＡ１０ －
ＰｅＡ４　 ６ ＰｅＡ１１ －
ＰｅＡ５　 ２３ ＰｅＡ１２ －
ＰｅＡ６　 １４．７ ＰｅＡ１３　 ７．７
ＰｅＡ７　 １０．３ － －
注：药液浓度１００ｍｇ·ｍＬ－１；“－”表示无抑菌圈。
表４　乙酸乙酯萃取相柱层析组分对假单胞杆菌的抑制活性
Ｔａｂｌｅ　４　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ
ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
处理
抑菌圈直径
／ｍｍ
处理
抑菌圈直径
／ｍｍ
ＰｅＥ１ － ＰｅＥ２　 １１．３
ＰｅＥ３　 １７．７ ＰｅＥ４　 １８
ＰｅＥ５　 １２ ＰｅＥ６　 １２．３
ＰｅＥ７　 ８ ＰｅＥ８ －
ＰｅＥ９　 ６ ＰｅＥ１０ －
ＰｅＥ１１ －
注：药液浓度１００ｍｇ·ｍＬ－１；“－”表示无抑菌圈。
２．４　海头红ＰｅＡ５－ＰｅＡ７与ＰｅＥ２－ＰｅＥ６部分层析
流份的抑菌活性检测
ＰｅＡ５－ＰｅＡ７部分继续通过硅减压胶柱层析以
氯仿－甲醇梯度洗脱，获得２４个流份，通过ＧＦ２５４
硅胶板薄层层析检测合并相同部分，对收集到的流
份检测其对假单胞菌的抑制活性，检测结果显示除
一些流份含量太少无法进行检测外，收集到的流份
均未检测出明显的抗菌活性。
从乙酸乙酯萃取相中分离到的ＰｅＥ２－ＰｅＥ６部
分继续通过硅胶层析以氯仿－甲醇进行梯度洗脱，
获得３２个流份。以假单胞杆菌为指示菌对各流份
进行抗菌活性检测，仅ＰｅＥＣ５－ＰｅＥＣ７中的黄色油
状组分Ｄ具有抗菌活性。
６１９ 福建农业学报 第２８卷
表５　组分Ｄ对假单胞菌杆菌的抑制作用
Ｔａｂｌｅ　５ 　 Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ　ａｇａｉｎｓｔ
Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１） 抑菌圈直径／ｍｍ
１００　 １３
５０　 １１
２５　 ８
１２．５　 ７．３
注：“－”表示无抑菌圈。
表６　组分Ｄ对绿色木霉菌丝生长的抑制作用
Ｔａｂｌｅ　６ 　 Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ　ａｇａｉｎｓｔ
Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
浓度／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
时间／抑制率／％
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
５０　 ６０．１６　 ５４．８２　 ４８．５３
２５　 ５８．５９　 ５４．３１　 ３９．７１
１２．５　 ４５．３１　 ２９．４４　 １２．１３
通过圆形纸片扩散法和菌丝生长速率法测定了
组分Ｄ对假单胞菌和绿色木霉的抑菌活性，结果
显示组分Ｄ在１００ｍｇ·ｍＬ－１对假单胞菌的抑菌圈
为１３ｍｍ，在５０ｍｇ·ｍＬ－１的浓度下对绿色木霉
的菌丝生长７２ｈ抑制率为４８．５３％。
２．５　海头红组分Ｄ的ＧＣ－ＭＳ分析
对从海头红提取物乙酸乙酯萃取相中分离出的
组分Ｄ进行ＧＣ－ＭＳ分析，分析结果 （图３）显示
其中除了含有大量的长链烷烃、脂肪酸及其脂类外
还含 有 较 丰 富 的 ４－羟 基 苯 甲 醛 （Ｔｒ：１０．１８，
Ａｒｅａ％：８．２６％）。４－羟基苯甲醛又称为对羟基苯
甲醛，是一种合成抗菌类化合物，于生产抗菌增效
剂ＴＭＰ （甲氧苄氨嘧啶）、羟氨苄青霉素等。初步
推测该化合物有可能是组分 Ｄ的抗菌活性来源，
但还需要进一步分离纯化和活性检测加以验证。
图１　５０ｍｇ·ｍＬ－１的组分Ｄ对绿色木霉菌丝生长的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ（５０　ｍｇ·ｍＬ－１）ｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｉｎ　ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｅｄｅ
注：时间为２４～７２ｈ。
图２　不同浓度的组分Ｄ对假单胞菌杆菌的抑制作用
Ｆｉｇ．２　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｐｓｅｕｄｏｍｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
图３　海头红乙酸乙酯萃取相中分离到的Ｄ组分的总离子流图
Ｆｉｇ．３　Ｔｏｔａｌ　ｉｏｎ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｄ　ｆｒｏｍ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ．ｔｅｌｆａｉｒｉａｅ　Ｈａｒｖ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
７１９第９期 张　迪等：海头红提取物的抑菌活性及其抗菌成分的初步分离研究
３　讨　论
研究过程中发现通过不同极性的溶剂萃取之后
抑菌成分主要存在与中弱极性的氯仿相和乙酸乙
酯，强极性的水相则未检出抗菌活性，这与前文报
道的抗菌成分集中在极性较强的乙醇相中结果不
同［５］，分析其原因应当是萃取操作过程中所选择的
溶剂分配体系不同造成的。在对抗菌活性追踪分离
过程中发现通过一次硅胶柱层析初步分离后不论是
氯仿萃取相还是乙酸乙酯萃取相所得到的抗菌流份
的抑菌活性都提高了１倍左右，但这些抗菌流份再
次通过硅胶柱层析进一步分离后所得到的流份的抗
菌活性却大大降低甚至消失。初步分离后其抗菌活
性增强的现象可能与其中的抗菌成分在流份中的浓
度被提高有关，亦有可能与Ｒｏｂｌｅｓ　ａｎｄ　Ｂａｌａｎｔｉｎｅ
所提到的拮抗作用有关［８］。对于进一步分离后出现
的活性丢失有可能源于某些抗菌成分的稳定性较
差，在失去了一些具有稳定和协同作用的杂质后其
功能结构被破坏而造成的，具体的原因有待进一步
通过试验论证。
对从乙酸乙酯萃取相中分离到的抗菌组分 Ｄ
的ＧＣ－ＭＳ分析结果显示其含有相当含量的抗菌化
合物４－羟基苯甲醛，２００１年苑辉卿等在对海头红
化学成分研究过程中也分离到了该化合物单体［４］，
可见该成分在海头红体内含量是较高的，推测４－
羟基苯甲醛有可能是海头红提取物抗菌活性的来源
之一。在抗菌活性成分追踪分离过程中同时分离到
了数种化合物，有关的分析鉴定内容另文报道。
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（责任编辑：柯文辉）
８１９ 福建农业学报 第２８卷