全 文 ：doi:10． 16446 / j． cnki． 1001 － 1994． 2016． 05． 007
收稿日期:2015 － 11 － 23
作者简介:叶开(1995—)，男，专业方向为食品质量与安全。
通讯作者:张拥军(1971—)，女，教授，研究方向为农产品深加工。
项目资助:“十二五”农村领域国家科技计划(2013BAD10B02)。
葡萄藻对养殖水体净化及巴西龟品质
的作用研究
叶开 童文烽 杨益超 曾宁 徐乔琪 刘祖希 张拥军
(中国计量学院，浙江省海洋食品品质及危害物控制技术研究重点实验室，杭州 310018)
摘 要:为探究葡萄藻对养殖污水的净化作用，以及在净化水质的同时对养殖巴西龟的生长及其抗病性的
影响，采用悬浮葡萄藻和用海藻酸钠固定化处理的葡萄藻，比较了不同浓度(0． 05、0． 10、0． 20、0． 40 mg /L)
的 2 种藻对污水中 N、P的去除效果，并分析了不同浓度(0． 05、0． 10、0． 20 mg /L)的 2 种藻对巴西龟外观特
性、体质量和血清 AKP、ACP非特异性免疫指标的影响。试验结果表明，不同浓度的悬浮藻对 N、P的去除
效果均非常显著(P ＜ 0． 05);低浓度的固定化藻对 N、P 的去除效果好，但作用时间相对滞后。悬浮藻、固
定化藻在巴西龟养殖水体中，对 N的去除效果优于去除 P;2 种藻均可使巴西龟的成活率达 100%，且外观
各组织器官正常，无病变，无炎症，体质量增加显著;悬浮藻可显著提高巴西龟血清中 AKP、ACP的活性(P
＜ 0． 05)。
关键词:葡萄藻;养殖污水;水质净化;巴西龟;免疫指标
渔业资源过度开发和养殖业迅猛发展带来的
环境安全、水产养殖安全等问题越来越突出，长期
滥用药物产生的细菌耐药性增加、药物残留、环境
污染等弊端日益成为食品安全中的突出问
题［1 － 3］。水产养殖过程中水体污染严重，常用净
水剂多数效率低下且易造成二次污染。随着藻类
生物技术的发展，微藻在污水处理、水质净化［4 － 9］
和水产饲料［10 － 12］等领域被广泛应用。
微藻具有开发为污水深度净化技术的良好潜
力。在污水二 /三级处理中，常被用于处理富营养
化水体的藻种包括小球藻(Chlorella)、葡萄藻
(Botryococcus)、栅藻(Scenedesmus)和微绿球藻
(Nannochloris)等［13］。这些微藻能够在光合自养
条件下利用污水中的有机物生长，并将水体中的
有机化合物作为同化 C 源、N 源和 S 源来富集吸
收［14］。
有关微藻在污水净化方面的研究报道很多，
但关于微藻在巴西龟、甲鱼等具有高营养价值的
水产动物养殖过程中，对养殖污水的净化效果及
对养殖动物品质影响的研究鲜有报道。本文旨在
研究悬浮葡萄藻和固定化葡萄藻对污水的净化作
用，进而探究 2 种藻在净化养殖水体的同时，对巴
西龟外观、品质及其抗病性的影响。
1 材料和方法
1． 1 试验材料
试验用葡萄藻藻种由杭州市华丹农产品有限
公司提供。巴西龟购于杭州市吴山广场花鸟市
场。酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性
采用南京建成试剂盒检测。其它试剂均为分析
纯，购自阿拉丁试剂(上海)有限公司。
552水产科技情报 2016，43(5)
1． 2 试验方法
1． 2． 1 葡萄藻前处理
以 BG11 培养基为基础培养基，配制专属培
养基［15］。利用该培养基进行葡萄藻的周期性平
板划线，培养纯化后的葡萄藻。吸取一定量藻液，
4000 r /min离心 5 min，浓缩，弃上清液，用 ddH2O
复溶，洗涤，离心，重复 2 次，用 ddH2O调节 pH为
7，得到不同浓度的藻液。
将一半藻液用 4%海藻酸钠包埋，固定化处
理制成藻珠，另一半悬浮培养。
1． 2． 2 葡萄藻对人工污水的净化处理
制备人工污水［16］，共 8 组，每组 1 000 mL，分
别置于 2 L 的锥形瓶中。向其中 4 组分别加
入 0． 05、0． 10、0． 20、0． 40 mg的悬浮藻，另 4 组分
别加入等质量梯度的固定化藻，设空白组、空海
藻酸钠胶球组(以下简称空藻珠组)和阳性对照
组各 1，阳性对照为市售净水剂，每组设 2 个重
复。将11 组试样置于光照摇床中培养［28 ℃，光
强 65 μmol /(m2·s)，光照周期 14 h /d，转速 150
r /min］，每隔 5 d 分别采用钼锑分光光度法、N －
(1 －萘基)－乙二胺光度法检测污水中的 P、NO －2
－ N含量。
1． 2． 3 葡萄藻对巴西龟池水的净化处理
将巴西龟置于 40 L 的透明容器中适应性饲
养 7 d，每个容器 8 只，容器中放有晒台。饲养期
间，每天 10:00 ～ 16:00 将巴西龟置于阳光充裕
处，每天饲喂 3 次。将巴西龟随机分为 8 组，每组
8 只，平均体质量为 8． 09 g，组间无显著差异(P ＞
0． 05)。悬浮藻组、固定化藻组各设 3 组，加藻浓
度分别为 0． 05、0． 10、0． 20 mg /L，设空白组和阳
性对照组(市售净水剂)各 1。每组设 2 个重复。
每隔 5 d 对龟池水质进行检测，方法和指标同
1． 2． 2。
1． 2． 4 巴西龟生理生化指标的测定
定期测定巴西龟的体质量，养殖结束后，每组
取 6 只巴西龟断头取血，收集血清。采用南京建
成试剂盒测定各组血清中的 ACP、AKP 等非特异
性免疫指标。
1． 2． 5 数据统计
试验数据采用 SPSS 19． 0 软件统计分析，数
据以平均值 ±标准差表示，组间数据采用 t 检验，
设显著性水平为 0． 05。
2 结果和分析
2． 1 葡萄藻对人工污水的净化效果
不同浓度悬浮藻、固定化藻对污水中 N 的净
化效果见表 1。试验过程中，各悬浮藻组污水中
NO －2 － N的含量均明显下降，第 10 天开始，各悬
浮藻组的 NO －2 － N含量显著低于空白组、阳性对
照组(P ＜ 0． 05)，说明悬浮藻具有非常好的去除
NO －2 － N 的能力。第 20 天后，各固定化藻组的
NO －2 － N 含量均显著低于空白组、阳性对照组(P
＜ 0． 05)。试验表明，不同浓度的悬浮藻、固定化
藻对 NO －2 － N均有较好的去除效果，固定化藻去
N作用滞后于悬浮藻。
不同浓度的悬浮藻、固定化藻对污水中 P 的
净化效果见表 2。试验开始至第 10 天，各悬浮藻
组污水中的 P 含量均明显下降，显著低于空白
组、阳性对照组(P ＜ 0． 05);第 10 ～ 20 天，各试验
组的 P含量均呈先升后降的趋势;试验过程中，
低浓度组去 P 的效果更明显，显著低于空白组、
阳性对照组(P ＜ 0． 05)。第 20 天之前，固定化藻
组的净化效果缓慢，显著高于阳性对照组(P ＜
0． 05)，其中低浓度组显著低于空白组(P ＜
0． 05)，高浓度组没有效果。固定化藻去 P 效果
滞后于悬浮藻。自第 15 天，空藻珠组污水中的 P
含量明显下降，显著低于空白组(P ＜ 0． 05)。
2． 2 葡萄藻对巴西龟池水 N、P的净化效果
不同浓度悬浮藻、固定化藻对巴西龟池水中
NO －2 － N 的去除效果见表 3。各悬浮藻组对水中
的 NO －2 － N 均具有一定的去除效果，其中 0． 05
mg /L组的去除效果最好，从第 10 天至试验结束，
均显著低于空白组(P ＜ 0． 05)，说明悬浮藻对养
龟池水质的净化效果不存在剂量依赖关系。固定
化藻对水中 NO －2 － N 的去除效果则相对滞后，第
40 天后，低浓度固定化藻去除 NO －2 － N的效果优
于高浓度组，显著低于空白组(P ＜ 0． 05)，与阳性
对照组无显著差异(P ＞ 0． 05)。
不同浓度的悬浮藻、固定化藻对巴西龟池水
中 P的去除效果见表 4。由表 4 可见，高浓度悬
浮藻(0． 20 mg /L)对水中的 P具有较好的去除作
用，第 25 ～ 50 天，水中 P含量显著低于空白组、阳
性对照组(P ＜ 0． 05)。低浓度固定化藻在养殖前
652 水产科技情报 2016，43(5)
表 1 悬浮、固定化葡萄藻对人工污水中 NO －2 － N的净化效果
组别
亚硝酸氮含量 /(mg·L －1)
0 d 5 d 10 d 15 d 20 d 25 d 30 d
空白
0． 2320 ±
0． 0006
0． 2233 ±
0． 0034
0． 2361 ±
0． 0116
0． 2351 ±
0． 0034
0． 2346 ±
0． 0033
0． 3039 ±
0． 0012
0． 2632 ±
0． 0099
阳性
0． 2352 ±
0． 0005
0． 3365 ±
0． 0059*
0． 3345 ±
0． 0029*
0． 2929 ±
0． 0037
0． 3322 ±
0． 0046*
0． 3006 ±
0． 0019
0． 3343 ±
0． 0121*
悬浮 0． 05 0． 2328 ±0． 0079
0． 1779 ±
0． 0015▲
0． 0118 ±
0． 0008＊▲
0． 0104 ±
0． 0006＊▲
0． 0126 ±
0． 0006＊▲
0． 0109 ±
0． 0002＊▲
0． 0105 ±
0． 000 2＊▲
悬浮 0． 10 0． 2305 ±0． 0003
0． 0750 ±
0． 0006＊▲
0． 0153 ±
0． 0014＊▲
0． 0102 ±
0． 0003＊▲
0． 0090 ±
0． 0002＊▲
0． 0103 ±
0． 0002＊▲
0． 0103 ±
0． 000 5＊▲
悬浮 0． 20 0． 2336 ±0． 0003
0． 0800 ±
0． 0034＊▲
0． 0246 ±
0． 0006＊▲
0． 0137 ±
0． 0006＊▲
0． 0094 ±
0． 0002＊▲
0． 0105 ±
0． 0002＊▲
0． 0104 ±
0． 000 3＊▲
悬浮 0． 40 0． 2343 ±0． 0008
0． 0666 ±
0． 0014＊▲
0． 0241 ±
0． 0011＊▲
0． 0142 ±
0． 0002＊▲
0． 0187 ±
0． 0003＊▲
0． 0103 ±
0． 0005＊▲
0． 0092 ±
0． 0017＊▲
固定 0． 05 0． 2336 ±0． 0006
0． 2887 ±
0． 0175▲
0． 2669 ±
0． 0173▲
0． 2854 ±
0． 0197
0． 0218 ±
0． 0006＊▲
0． 0881 ±
0． 0046＊▲
0． 0167 ±
0． 0015＊▲
固定 0． 10 0． 2414 ±0． 0008
0． 2463 ±
0． 0164▲
0． 2307 ±
0． 0077▲
0． 2107 ±
0． 0002▲
0． 0164 ±
0． 0002＊▲
0． 0103 ±
0． 0002＊▲
0． 0113 ±
0． 000 3＊▲
固定 0． 20 0． 2384 ±0． 0003
0． 2593 ±
0． 0033▲
0． 1746 ±
0． 0042▲
0． 1758 ±
0． 0028▲
0． 0262 ±
0． 0006＊▲
0． 0208 ±
0． 0008＊▲
0． 0108 ±
0． 000 3＊▲
固定 0． 40 0． 2403 ±0． 0014
0． 2053 ±
0． 0028▲
0． 1960 ±
0． 0017▲
0． 1737 ±
0． 0008▲
0． 0197 ±
0． 0002＊▲
0． 0118 ±
0． 0002＊▲
0． 0116 ±
0． 000 2＊▲
空藻珠
0． 2358 ±
0． 0003
0． 2651 ±
0． 0130
0． 2737 ±
0． 0025
0． 2531 ±
0． 0068
0． 2765 ±
0． 0068
0． 2015 ±
0． 0104＊▲
0． 2348 ±
0． 0054
注:* 表示与空白组差异显著(P ＜ 0． 05)，▲表示与阳性对照组差异显著(P ＜ 0． 05)
表 2 悬浮、固定化葡萄藻对人工污水中 P的净化效果
组别
磷含量 /(mg·L －1)
0 d 5 d 10 d 15 d 20 d 25 d 30 d
空白
0． 250 ±
0． 007
0． 295 ±
0． 015
0． 312 ±
0． 018
0． 355 ±
0． 013
0． 304 ±
0． 007
0． 255 ±
0． 016
0． 253 ±
0． 022
阳性
0． 260 ±
0． 016
0． 162 ±
0． 013*
0． 080 ±
0． 006*
0． 270 ±
0． 026*
0． 187 ±
0． 003*
0． 158 ±
0． 006*
0． 223 ±
0． 009*
悬浮 0． 05 0． 255 ±0． 003
0． 055 ±
0． 033*
0． 031 ±
0． 002＊▲
0． 294 ±
0． 000*
0． 080 ±
0． 003＊▲
0． 077 ±
0． 038
0． 104 ±
0． 006＊▲
悬浮 0． 10 0． 245 ±0． 006
0． 045 ±
0． 021＊▲
0． 055 ±
0． 011＊▲
0． 192 ±
0． 013＊▲
0． 309 ±
0． 040▲
0． 182 ±
0． 013＊▲
0． 104 ±
0． 015＊▲
悬浮 0． 20 0． 253 ±0． 031
0． 109 ±
0． 045＊▲
0． 080 ±
0． 038*
0． 378 ±
0． 003▲
0． 285 ±
0． 023▲
0． 197 ±
0． 026＊▲
0． 212 ±
0． 003*
悬浮 0． 40 0． 257 ±0． 016
0． 129 ±
0． 028＊▲
0． 109 ±
0． 031＊▲
0． 290 ±
0． 010*
0． 353 ±
0． 020＊▲
0． 223 ±
0． 016＊▲
0． 156 ±
0． 011＊▲
固定 0． 05 0． 251 ±0． 047
0． 304 ±
0． 013＊▲
0． 270 ±
0． 010＊▲
0． 314 ±
0． 027＊▲
0． 148 ±
0． 013＊▲
0． 260 ±
0． 046▲
0． 260 ±
0． 046▲
固定 0． 10 0． 259 ±0． 030
0． 417 ±
0． 057＊▲
0． 206 ±
0． 045＊▲
0． 260 ±
0． 003*
0． 119 ±
0． 009＊▲
0． 114 ±
0． 012＊▲
0． 114 ±
0． 012＊▲
固定 0． 20 0． 278 ±0． 017
0． 626 ±
0． 030＊▲
0． 426 ±
0． 007＊▲
0． 723 ±
0． 007＊▲
0． 572 ±
0． 034＊▲
0． 560 ±
0． 017＊▲
0． 485 ±
0． 010＊▲
固定 0． 40 0． 273 ±0． 054
0． 456 ±
0． 037＊▲
0． 436 ±
0． 003＊▲
0． 519 ±
0． 034＊▲
0． 173 ±
0． 010*
0． 287 ±
0． 036＊▲
0． 060 ±
0． 006＊▲
空藻珠
0． 245 ±
0． 003
0． 489 ±
0． 034＊▲
0． 334 ±
0． 049▲
0． 402 ±
0． 010＊▲
0． 104 ±
0． 037＊▲
0． 080 ±
0． 030＊▲
0． 099 ±
0． 006＊▲
注:* 表示与空白组差异显著(P ＜ 0． 05)，▲表示与阳性对照组差异显著(P ＜ 0． 05)
752水产科技情报 2016，43(5)
表 3 悬浮、固定化葡萄藻对巴西龟池水中 NO －2 － N的净化效果
组别
亚硝酸氮含量 /(mg·L －1)
0 d 5 d 10 d 20 d 30 d 40 d 50 d
空白
0． 0808 ±
0． 0003
0． 0722 ±
0． 0006
0． 0630 ±
0． 0031
0． 0675 ±
0． 0010
0． 0434 ±
0． 0082
0． 0618 ±
0． 0003
0． 0286 ±
0． 0011
阳性
0． 0805 ±
0． 0004
0． 0228 ±
0． 0005*
0． 0152 ±
0． 0024*
0． 0230 ±
0． 0003*
0． 0216 ±
0． 0023*
0． 0154 ±
0． 0006*
0． 0157 ±
0． 0016
悬浮 0． 05 0． 0797 ±0． 0001
0． 0248 ±
0． 0012*
0． 0172 ±
0． 0009*
0． 0227 ±
0． 000 6*
0． 0229 ±
0． 0018*
0． 0206 ±
0． 0003*
0． 0133 ±
0． 0003
悬浮 0． 10 0． 0803 ±0． 0025
0． 0306 ±
0． 0013*
0． 0699 ±
0． 007 8▲
0． 0519 ±
0． 000 5＊▲
0． 0592 ±
0． 001 6* ，▲
0． 0156 ±
0． 001 0*
0． 0221 ±
0． 0018
悬浮 0． 20 0． 0786 ±0． 0008
0． 0264 ±
0． 001 4*
0． 0429 ±
0． 002 8＊▲
0． 0350 ±
0． 001 0*
0． 0232 ±
0． 001 3* ，▲
0． 0126 ±
0． 0009*
0． 0214 ±
0． 0028
固定 0． 05 0． 0823 ±0． 0008
0． 0167 ±
0． 000 7*
0． 0718 ±
0． 001 4▲
0． 0609 ±
0． 000 9▲
0． 0770 ±
0． 000 6＊▲
0． 0171 ±
0． 0001*
0． 0146 ±
0． 0009
固定 0． 10 0． 0834 ±0． 0010
0． 0587 ±
0． 000 5＊▲
0． 0529 ±
0． 001 3▲
0． 0402 ±
0． 005 1＊▲
0． 0661 ±
0． 003 4＊▲
0． 0274 ±
0． 001 1＊▲
0． 0206 ±
0． 0005
固定 0． 20 0． 0817 ±0． 0003
0． 0291 ±
0． 0018*
0． 0851 ±
0． 006 0＊▲
0． 0944 ±
0． 000 9＊▲
0． 0539 ±
0． 0028▲
0． 0811 ±
0． 004 5＊▲
0． 0399 ±
0． 001 3▲
注:* 表示与空白组差异显著(P ＜ 0． 05)，▲表示与阳性对照组差异显著(P ＜ 0． 05)
表 4 悬浮、固定化葡萄藻对巴西龟池水中 P的净化效果
组别
磷含量 /(mg·L －1)
1 d 7 d 10 d 13 d 16 d 25 d 30 d 45 d 50 d
空白
0． 9088 ±
0． 0516
2． 2567 ±
0． 0923
3． 0779 ±
0． 0325
1． 1998 ±
0． 0360
0． 8470 ±
0． 0171
1． 2275 ±
0． 0489
1． 4454 ±
0． 0514
1． 0730 ±
0． 0197
1． 0519 ±
0． 0637
阳性
0． 9933 ±
0． 0739
2． 8356 ±
0． 2333
1． 7023 ±
0． 1062*
1． 1137 ±
0． 1208
1． 0828 ±
0． 0298
0． 9754 ±
0． 0474
1． 3446 ±
0． 0028
0． 8502 ±
0． 0293
0． 7543 ±
0． 0056
悬浮
0． 05
0． 8567 ±
0． 1293
1． 9820 ±
0． 109 0▲
1． 7234 ±
0． 0563*
1． 1120 ±
0． 0862
1． 3234 ±
0． 0129
3． 0210 ±
0． 217 3＊▲
2． 7088 ±
0． 078 0＊▲
0． 7023 ±
0． 0394
0． 7202 ±
0． 0171
悬浮
0． 10
0． 8470 ±
0． 1272
2． 2567 ±
0． 0185
1． 7185 ±
0． 1184*
1． 2649 ±
0． 0514
1． 1446 ±
0． 0157
2． 8307 ±
0． 226 1＊▲
3． 5283 ±
0． 090 3＊▲
1． 0519 ±
0． 0298
1． 1592 ±
0． 0149
悬浮
0． 20
1． 1072 ±
0． 0332
2． 2470 ±
0． 0366
1． 7185 ±
0． 1184*
1． 2795 ±
0． 0543
1． 2112 ±
0． 0320
0． 3039 ±
0． 059 9＊▲
2． 7413 ±
0． 289 0＊▲
2． 4177 ±
0． 064 4＊▲
1． 8259 ±
0． 014 6＊▲
固定
0． 05
1． 1332 ±
0． 0640
2． 1413 ±
0． 244 2▲
1． 6161 ±
0． 0447*
0． 8454 ±
0． 0660
0． 6974 ±
0． 0286
1． 9104 ±
0． 0988
2． 3820 ±
0． 1326
0． 9250 ±
0． 0314
0． 6161 ±
0． 0224
固定
0． 10
1． 2633 ±
0． 0618
4． 6307 ±
0． 096 1＊▲
2． 2307 ±
0． 0911*
1． 6535 ±
0． 1151
1． 3348 ±
0． 0028
1． 9836 ±
0． 0808
1． 6031 ±
0． 1102
1． 3576 ±
0． 0305
1． 2665 ±
0． 0102
固定
0． 20
1． 5072 ±
0． 0317
2． 9820 ±
0． 3938*
1． 8649 ±
0． 0660*
1． 2340 ±
0． 0610
1． 0063 ±
0． 0757
2． 0210 ±
0． 0855
1． 0925 ±
0． 0141
0． 7088 ±
0． 0258
0． 7007 ±
0． 0171
注:* 表示与空白组差异显著(P ＜ 0． 05)，▲表示与阳性对照组差异显著(P ＜ 0． 05)
半期对 P 有一定的去除效果，水中 P 含量显著低
于空白组、阳性对照组(P ＜ 0． 05)，高浓度固定化
藻去除 P的效果不明显。在巴西龟养殖水体中，
悬浮藻、固定化藻去除 N的效果均优于去除 P 的
效果。
2． 3 葡萄藻对巴西龟生理生化指标的影响
2． 3． 1 葡萄藻对巴西龟体质量的影响
由表 5 可见，一定浓度的悬浮藻、固定化藻均
可以显著增加巴西龟的体质量。养殖 10 d 后，
0． 05、0． 10 mg /L 固定化藻组巴西龟的体质量均
显著高于空白组、阳性对照组(P ＜ 0． 05);第 30 ～
65 天，0． 05、0． 20 mg /L悬浮藻组巴西龟的体质量
均显著高于空白组、阳性对照组(P ＜ 0． 05)。试
验结果说明，葡萄藻可以促进巴西龟的生长。
2． 3． 2 巴西龟的外观特性
试验组中巴西龟的存活率均为 100%。养殖
30 d以后，空白组有 1 只龟尾破损、1 只龟眼睛发
炎;阳性对照组有3只龟尾破损、1只龟断尾;悬
852 水产科技情报 2016，43(5)
表 5 悬浮、固定化葡萄藻对巴西龟体质量的影响
组别
巴西龟体质量变化 / g
1 d 10 d 20 d 30 d 40 d 50 d 63 d
空白
8． 11 ±
0． 0081
8． 49 ±
0． 0064
9． 26 ±
0． 0265
9． 56 ±
0． 037 9
10． 85 ±
0． 0351
11． 03 ±
0． 0321
11． 16 ±
0． 0306
阳性
8． 07 ±
0． 0040
8． 46 ±
0． 0040
9． 56 ±
0． 0252
9． 53 ±
0． 050 3
9． 60 ±
0． 0252
9． 72 ±
0． 052 9
9． 96 ±
0． 0361
悬浮 0． 05 8． 10 ±0． 0015
8． 37 ±
0． 0025
10． 22 ±
0． 020 0▲
11． 02 ±
0． 1662＊▲
11． 31 ±
0． 0351▲
12． 34 ±
0． 0208＊▲
13． 43 ±
0． 0252＊▲
悬浮 0． 10 8． 12 ±0． 0061
7． 77 ±
0． 0021
9． 14 ±
0． 0306
9． 72 ±
0． 0252
9． 93 ±
0． 0361
10． 35 ±
0． 0361
11． 03 ±
0． 0351
悬浮 0． 20 8． 12 ±0． 0025
9． 64 ±
0． 0056＊▲
9． 51 ±
0． 0351
10． 74 ±
0． 0404＊▲
11． 14 ±
0． 0416▲
12． 04 ±
0． 0351＊▲
12． 84 ±
0． 0153＊▲
固定 0． 05 8． 09 ±0． 0031
9． 18 ±
0． 004 2＊▲
9． 95 ±
0． 0361
11． 44 ±
0． 041 6＊▲
11． 71 ±
0． 051 3＊▲
12． 59 ±
0． 040 4＊▲
13． 66 ±
0． 041 6＊▲
固定 0． 10 8． 11 ±0． 0015
9． 37 ±
0． 003 5▲
10． 12 ±
0． 026 5＊▲
11． 34 ±
0． 045 8＊▲
11． 63 ±
0． 036 1＊▲
12． 63 ±
0． 026 5＊▲
13． 63 ±
0． 036 1＊▲
固定 0． 20 8． 08 ±0． 0047
8． 78 ±
0． 0035
8． 46 ±
0． 0300*
9． 91 ±
0． 0451
10． 36 ±
0． 0404▲
11． 05 ±
0． 0416▲
11． 84 ±
0． 0208▲
注:* 表示与空白组差异显著(P ＜ 0． 05)，▲表示与阳性对照组差异显著(P ＜ 0． 05)
浮藻、固定化藻组的龟，试验全程外观均无异常，
色泽光亮，无异味，肌肉有弹性，这可能是因为悬
浮藻、固定化藻对巴西龟养殖水体均具有较好的
净化效果，可以有效防止龟的异常和病变。
2． 3． 3 葡萄藻对巴西龟血清 ACP、AKP 活性的
影响
葡萄藻对巴西龟免疫指标的影响见图 1。与
空白组、阳性对照组相比，一定浓度(0． 05、0． 20
mg /L)的悬浮藻可显著增加巴西龟血清中 ACP、
AKP的活性(P ＜ 0． 05);固定化藻对 ACP、AKP
的活性则影响不大，与空白组、阳性对照组无显著
差异(P ＞ 0． 05)。试验结果表明，悬浮藻具有提
高龟非特异性免疫能力的效果。
3 讨论
水质净化一直是水产养殖领域关注的重点之
一。葡萄藻不仅自身含有丰富的蛋白质、不饱和
脂肪酸和维生素等多种营养物质，还可以吸收利
用养殖水体中的 N、P 等营养元素，从而净化水
质。与传统的化学净水剂相比，葡萄藻还具有安
全性高、净水效果好等特点。
本试验比较了不同浓度的悬浮葡萄藻、固定
化葡萄藻对污水中 N、P 的去除效果。试验显示，
低浓度悬浮藻在整个培养过程中对 N、P 的去除
效果均非常显著(P ＜ 0． 05);低浓度固定化藻组
水体中的 N、P浓度在培养初期升高，后期呈下降
952水产科技情报 2016，43(5)
趋势，且效果显著(P ＜ 0． 05)。这与 Moreno －
Garrido［17］的报道一致，原因可能是葡萄藻通过海
藻酸钠固定化后生长有滞后期，不同藻类的滞后
时间不同，一般为 4 ～ 6 d［18］。空藻珠组对 P的净
化效果优于空白组，原因可能是海藻酸钠能选择
性地吸附污水中的 P［19］。试验结果表明，一定浓
度的悬浮、固定化葡萄藻对巴西龟养殖水体中的
NO －2 － N、P均有显著的去除效果，对葡萄藻的 2
种处理方式不会影响葡萄藻对水质的净化效果。
龟类血液中含有多种免疫细胞和物质，其中
一些生化指标的变化可以反映龟体的免疫状况。
免疫体系中的 ACP、AKP 能催化磷酸单酯水解，
在酸性或碱性条件下水解磷酸苯二钠，释出酚和
磷酸，在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，是
衡量机体免疫机能和健康状况的重要指标［20］。
试验发现，0． 05、0． 20 mg /L 悬浮藻组的巴西龟，
其血清 ACP、AKP 的活性显著高于对照组和阳性
组(P ＜ 0． 05)，说明通过葡萄藻的水质净化作用，
可显著提高巴西龟的机体免疫力，增强对细胞生
理代谢过程中产生的活性氧的清除作用，从而提
高机体的解毒免疫功能和防病抗病能力。此外，
各悬浮藻组巴西龟的成活率均达 100%(以一定
时间内的最终成活率衡量龟类的机体免疫力，成
活率越高，其疾病抵抗能力越强)，外观各组织器
官正常，无病变，无炎症，体质量增加显著高于空
白组。试验结果表明，悬浮藻可以净化养殖水体，
从而增强养殖动物的抗病性，提高其机体免疫力，
促进其快速生长。
试验结果显示，低浓度的固定化藻也可以较
好地去除巴西龟养殖水体中的 NO －2 － N 和 P，且
该组的巴西龟成活率也为 100%，外观正常，无病
变，无炎症，体质量显著增加，说明固定化藻同样
可以增强龟对疾病的抵抗力。但是，该组龟血清
ACP、AKP的活性与空白组无显著差异，可能是由
于选择的非特异性免疫指标较少，代表性不足，也
可能是由于养殖时间较短，确切原因有待于进一
步试验验证。
参考文献
［1］石建高，毕士川．我国水产养殖业的现状及发展对策［J］． 现
代渔业信息，2004，19(3):21 － 23．
［2］王玉堂．我国水产养殖业的现状问题及发展对策［J］．河北渔
业，2000(1):8 － 10．
［3］王武．我国水产养殖业的现状与发展趋势［J］． 渔业致富指
南，2009(7):12 － 18．
［4］张继平，郭照良．小球藻对降低南美白对虾养殖水体中亚硝酸
盐氮含量的研究［J］．水产科学，2006，25(10):517 － 519．
［5］张振华，韩士群，严少华，等．虾池接种小球藻对浮游生物及水
化学环境的影响［J］．水产科技情报，2000，27(2):67 － 69．
［6］邱华玲，方桂友，冯玉兰． 小球藻在污水处理上的研究进展
［J］．福建畜牧兽医，2007，29(6):73 － 75．
［7］黄美玲，何庆，黄夏子，等．小球藻处理养殖污水及其资源化利
用研究［J］．中山大学学报，2010，49(1):89 － 93．
［8］葛亚明．葡萄藻在废弃物中培养的适应性及调控研究［D］．浙
江大学，2012．
［9］CHＲISTENSON L，SIMS Ｒ． Production and harvesting of microal-
gae for wastewater treatment，biofuels，and bioproducts［J］． Bio-
technology Advances，2011，29(6):686 － 702．
［10］王冉，孙展兵，商庆凯．小球藻粉作为饲料添加剂的营养价值
及安全性研究［J］．饲料博览，2005(4):4 － 7．
［11］梁燕茹，李文权． 小球藻饵料的研究进展［J］． 福建农业学
报，2005，20(S1):70 － 74．
［12］周蔚，樊磊，李保金，等． 小球藻在水产饲料上应用的研究
［J］．科学养鱼，2006(3):65．
［13］胡沅胜，刘斌，郝晓地，等．微藻处理污水中的絮凝分离 /采收
研究现状与展望［J］．环境科学学报，2015，35(1):12 － 29．
［14］OGBONNA J C，YOSHIZAWA H，TANAKA H． Treatment of
high strength organic wastewater by a mixed culture of photosyn-
thetic microorganisms［J］． Applied Phycology，2000，12(3) :277
－ 284．
［15］苏东洋．高产多糖葡萄藻的培养优化及其体内抑菌与体外水
质净化作用研究［D］．中国计量学院，2015．
［16］国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会． 水和
废水监测分析方法［M］．北京:中国环境科学出版社，2002．
［17］MOＲENO － GAＲＲIDO I． Microalgae immobilization:Current
techniques and uses［J］． Bioresource Technology，2008，99
(10):3949 － 3964．
［18］许丹妮．固定化小球藻净化市政污水的初步研究［J］． 北方
环境，2004，29(2):15 － 16．
［19］林永波，张丹，孙少晨，等．海藻酸钠凝胶球对水中无机磷的
吸附性能［J］．东北林业大学学报，2007，35(8):68 － 70．
［20］刘树青，江晓路，牟海津，等．免疫多糖对中国对虾血清溶菌
酶、磷酸酶和过氧化物酶的作用． 海洋与湖沼［J］． 1999，30
(3):278 － 283．
062 水产科技情报 2016，43(5)