全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１３（０１）：１１４～１１６
第一作者简介：王前（１９８４－），女，博士，研究方向为民族生态学。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｑｉａｎ１２１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ．
责任作者：王俊丽（１９６４－），女，博士，教授，博士生导师，现主要从
事植物资源利用与植物细胞工程等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｕｎ－
ｌｉ２００８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ．
基金项目：国家“９８５”工程计划资助项目（ＭＵＣ９８５０４－１４，
ＭＵＣ９８５０７－０８）；高等学校学科创新引智计划资助项目（Ｂ０８０４４）。
收稿日期：２０１２－０８－２７
沙 米 染 色 体 核 型 分 析
王 　 前１，２，陈 海 魁３，王 俊 丽１
（１．中央民族大学 生命与环境科学学院，北京１０００８１；２．北京市八达岭林场，北京１０２１１２；
３．北方民族大学 生物科学与工程学院，宁夏 银川７５００２１）
　　摘　要：采用染色体常规制片法，结合显微摄影技术对沙米（Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ
（Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｑ．）染色体进行检测分析。结果表明：沙米为二倍体，体细胞染色体数目为１８；核型公
式为２ｎ＝２×＝１８＝１４ｍ＋４ｓｍ，染色体相对长度组成为１０Ｍ１＋８Ｍ２，全组染色体长为２４．０９μｍ，
核型不对称系数（ＡＳ．Ｋ％）为５８．８６％，属于１Ａ型；染色体总体积为８５．９５μｍ
３。
关键词：沙米；染色体；核型分析
中图分类号：Ｓ　６８１．９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１３）０１－０１１４－０３
　　沙米（Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ （Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｑ．）为藜
科（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ）沙蓬属（Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ）１ａ生草本植
物，又叫沙蓬，茎直立，植株高１４～６０ｃｍ，基部多分枝，幼
时全株密被分枝毛，后期部分脱落。叶无柄，互生，披针
形至条形，先端渐尖，具刺尖，基部渐狭，全缘。穗状花
序紧密，卵圆状或椭圆状，无总梗，常１～３枚腋生，苞片
宽卵形，先端急缩具小尖头，后期反折，背部密被分枝
毛，花被片１～３，膜质；雄蕊２～３；子房扁卵形。胞果卵
圆形或椭圆形，两面扁平或背部稍凸，上部边缘略具翅；
种子近圆形，光滑，有时有浅褐色斑点。花期８～１０
月［１］。沙米为耐寒、耐早的沙生植物，是亚洲大陆干旱、
半干旱地区沙地上的一个广布种，是流沙上的先锋植
物，主要分布于我国西北、华北、东北各省区的沙漠地区
以及河南、西藏等地区；蒙古、苏联西伯利亚和中亚地区
也有分布［２］。
目前，有关沙米的报道主要集中在生长特性、生理
生态机制和营养成分等方面的研究［３－５］，而对其染色体
的核型分析鲜见报道。该研究通过开展沙米染色体核
型分析的研究，了解沙米染色体数目、形态、核型及其它
相关信息，对探索物种遗传机制、亲缘关系与进化、远缘
杂种的鉴定等提供必要的细胞学资料。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试沙米（Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ （Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｑ．）
种子采自甘肃民勤县。
１．２　试验方法
沙米种子→浸泡３～５ｈ→２７℃恒温培养→取胚根
（０．３～０．５ｃｍ）→秋水仙素处理（０．０５％）→蒸馏水冲
洗→卡诺固定液固定→蒸馏水冲洗→１ｍｏｌ／Ｌ盐酸处理
１５ｍｉｎ（６０℃）→蒸馏水冲洗→改良苯酚品红染液染色
（４５％）→压片镜检。选择染色体分散较好、核相较好，符
合分析要求的片子，冰冻法揭片，干燥后用中性树胶封
片，然后显微摄影并进行染色体核型分析。
１．３　项目测定
细胞核型分析按我国１９８４年８月第一届全国植物
染色体学术讨论会上由李懋学等［６］所作的“关于植物核
型分析的标准化问题的标准”，对染色体进行计数、配
对、排列、测量、计算、列表、绘制核型模式图、核型公式、
核型分类等程序，并参照Ｌｅｖａｎ等［７］的方法根据染色体
臂比来确定着丝粒位置；参照Ｓｔｅｂｂｉｎｓ的核型分类方
法，按核型中最长染色体与最短染色体之比及臂比大于
２的染色体所占的比例来确定染色体核型对称与不对称
程度［８］；按Ａｒａｎｏ［９］方法计算核型不对称系数（ＡＳ．Ｋ），
按Ｋｕｏ等［１０］的方法确定染色体相对长度系数，染色体
体积采用Ｄｅ－ｖｅｓｃｏｖｉ等［１１］的方法计算：染色体体积计
算＝π×（１／２宽度）２×总长度。
２　结果与分析
２．１　沙米染色体数目及形态
选择３０个染色体数目清晰的分裂中期细胞对染色
体进行计数。其中有２７个细胞染色体数目为１８条（图１）
占计数细胞的９０％。可见沙米染色体数目为２ｎ＝１８。
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北方园艺２０１３（０１）：１１４～１１６ ·生物技术·
图１　沙米根尖细胞有丝分裂中期相（２ｎ＝１８）和核型图
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｍｉｔｏｔｉｃ　ｍｅｔａｐｈａｓｅ　ａｎｄ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ｍａｐｓ　ｏｆ
Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｑｕａｒｒｏｓｕｍ （２ｎ＝１８）
２．２　染色体长度组成
用ＯＬＹＭＰＵＳ显微镜对染色体和标有尺寸的镜台
测微尺在相同放大倍数下进行拍照，然后将染色体和镜
台测微尺（１０μｍ）的照片放大成相同的尺寸打印。随后
对染色体进行数据测量，即可测得染色体的绝对长度，
再根据绝对长度得出染色体其它参数（表１）。经测量分
析，沙米的１８条染色体可配为９对，为二倍体，具有２个
染色体组，染色体基数为ｎ＝９。沙米全部染色体绝对长
度总长为２４．０９μｍ，最长的染色体为２．９８μｍ，最短的染
色体长度为２．４５μｍ，平均长度为２．６８μｍ，染色体长度
组成为２ｎ＝１８＝１０Ｍ１＋８Ｍ２。
根据表１中沙米染色体的相对长度数据，绘制沙米
染色体核型模式图。绘制图形时，长臂在下，短臂在上，
结果见图２。
表１ 沙米染色体的核型分析
　　Ｔａｂｌｅ　１　Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ
序号
染色体长度／μｍ 相对长度／％
长臂 短臂 总长 长臂 短臂 总长
相对长
度系数
长度
类型
臂比 类型
１　 １．７８　 １．２０　 ２．９８　 ７．３９　 ４．９８　 １２．３７　 １．１１ Ｍ２　 １．４８ ｍ
２　 １．７５　 １．２２　 ２．９７　 ７．２６　 ５．０６　 １２．３３　 １．１１ Ｍ２　 １．４３ ｍ
３　 １．５７　 １．１６　 ２．７３　 ６．５２　 ４．８２　 １１．３３　 １．０２ Ｍ２　 １．３５ ｍ
４　 １．５３　 １．１８　 ２．７１　 ６．３５　 ４．９０　 １１．２５　 １．０１ Ｍ２　 １．３０ ｍ
５　 １．５１　 １．１２　 ２．６３　 ６．２７　 ４．６５　 １０．９２　 ０．９８ Ｍ１　 １．３５ ｍ
６　 １．３８　 １．２２　 ２．６０　 ５．７３　 ５．０６　 １０．７９　 ０．９７ Ｍ１　 １．１３ ｍ
７　 １．６２　 ０．９２　 ２．５４　 ６．７２　 ３．８２　 １０．５４　 ０．９５ Ｍ１　 １．７６ ｓｍ
８　 １．４２　 １．０６　 ２．４８　 ５．８９　 ４．４０　 １０．２９　 ０．９３ Ｍ１　 １．３４ ｍ
９　 １．６２　 ０．８３　 ２．４５　 ６．７２　 ３．４５　 １０．１７　 ０．９１ Ｍ１　 １．９５ ｓｍ
图２　沙米染色体核型模式图
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｉｄｅｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ
２．３　核型公式及分类
沙米染色体臂比的变化在１．１３～１．９５之间，核型公
式是２ｎ＝１８＝１４ｍ＋４ｓｍ，根据Ａｒａｎｏ的计算方法，核型
不对称系数（ＡＳ．Ｋ％）为５８．８６％。最长染色体与最短
染色体之比是１．２２，臂比大于２的染色体有０对。根据
Ｓｔｅｂｂｉｎｓ［８］的核型分类方法，沙米染色体核型类型为最
对称的１Ａ型。
２．４　染色体体积
根据Ｄｅ－ｖｅｓｃｏｖｉ等［１１］的染色体计算公式得出各对
染色体体积，全组染色体体积为８５．９５μｍ
３。
表２ 沙米染色体体积
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ　ｏｆ　Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ
编号 染色体长度／μｍ 染色体宽度／μｍ 染色体体积／μｍ３
１　 ２．９８　 １．５３　 １０．９５
２　 ２．９７　 １．３１　 ８．００
３　 ２．７３　 １．８３　 １４．３５
４　 ２．７１　 １．４６　 ９．０７
５　 ２．６３　 １．２９　 ６．８７
６　 ２．６０　 １．４７　 ８．８２
７　 ２．５４　 １．４９　 ８．８５
８　 ２．４８　 １．４６　 ８．３０
９　 ２．４５　 １．６７　 １０．７３
总计 ２０．４９　 １３．５１　 ８５．９５
３　结论
沙米染色体数为１８条，核型公式为２ｎ＝１８＝１４ｍ＋
４ｓｍ，全组染色体长为２４．０９μｍ，长臂总长为１４．１８μｍ，
核型不对称系数（ＡＳ．Ｋ％）为５８．８６％，对称程度较高，
属于较为对称类型。最长染色体与最短染色体之比为
１．２２，９对染色体臂比值均小于２，为１Ａ型，即最原始的类
型。总体积为８５．９５μｍ
３。通过染色体数目、形态和结构
差异的分析，可以从细胞学水平鉴别物种的差异，为研究
物种间的遗传距离、亲缘关系和进化提供客观的依据，同
时也为其进一步的开发和利用奠定一定的理论基础。
参考文献
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［３］　齐凯，安晓亮，叶世河．沙米生长特性调查［Ｊ］．内蒙古林业科技，
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Ｊａｐａｎ，ＩＸ．Ｔｈｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　Ｐｅｒｔｙａ
ａｎｄ　Ａｉｎｓｌｉａｃａ［Ｊ］．Ｂｏｔ　Ｍａｇ（Ｔｏｋｙｏ），１９６３，７６：３２－４０．
［１０］Ｋｕｏ　Ｓ　Ｒ，Ｗａｎｇ　Ｔ　Ｔ，Ｈｕａｎｇ　Ｔ　Ｃ．Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓｏｍｅ　Ｆｏｒｍｏｓａｎ
ｇｙｍｎｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．Ｔａｉｗａｎｉａ，１９７２，１７（１）：６６－８０．
［１１］Ｄｅ－ｖｅｓｃｏｖｉ　Ｍ　Ａ，Ｓｚｉｋｌａ　Ｏ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｄｏｕｇｌａｓ－ｆｉｒ
［Ｊ］．Ｓｉｌｖａｅ　Ｇｅｎｅｔ，１９７５，２４（２－３）：４－１２．
５１１
·生物技术· 北方园艺２０１３（０１）：１１６～１１８
第一作者简介：伍亚平（１９８６－），女，在读硕士，现主要从事植物遗
传育种工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｕｙａｐｉｎｇ８１２＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：唐道城（１９５４－），男，硕士，教授，博士生导师，现主要从
事高原花卉研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｄａｏｃｈｅｎｇ６３３３＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：农业部科技成果转化资助项目（２００９ＧＢ２Ｇ２００３９６）。
收稿日期：２０１２－０９－１９
万寿菊雄性不育系离体保存及快繁体系的建立
伍 亚 平，唐 道 城
（青海大学 高原花卉研究中心，青海 西宁８１００１６）
　　摘　要：以９个万寿菊雄性不育系植株的腋芽为外植体，进行诱导、继代和生根培养基配方
的优化研究。结果表明：适合万寿菊雄性不育系腋芽诱导丛生芽的培养基最佳配方是：ＭＳ＋
６－ＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ；适合丛生芽继代增殖培养的培养基最佳配方是：ＭＳ＋６－ＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ；适合生根的培养基最佳配方是：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ。初步建成
了万寿菊雄性不育系离体保存体系。
关键词：万寿菊；雄性不育系；腋芽；培养基配方；离体保存
中图分类号：Ｓ　６８１．９０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１３）０１－０１１６－０３
　　万寿菊（Ｔａｇｅｔｅｓ　ｅｒｅｃｔａｌ）为菊科万寿菊属１ａ生草本
植物，又名蜂窝菊、臭芙蓉［１］。杂交种繁育常利用雄性
不育两用系的不育系作母本，与强优势的恢复系杂交，
配制Ｆ１杂交种用于生产［２］。万寿菊的雄性不育两用系
即不育株和可育株共存于同一群体中。不育株小花呈
丝状，只有雌蕾，无雄蕾和花瓣，为结构型雄性不育，自
交不能结实，即不育系；可育株为两性花，能自花结
实［２－３］。在杂种优势利用中，采用姊妹交保持其不育性，
即两用系，用不育系与恢复系杂交完成杂交种制种。万
寿菊雄性不育繁植株来之不易，如何保存万寿菊雄性不
育性状，为接下来的杂交制种利用及雄性不育遗传机理
方面的研究提供材料来源是一个极其重要的问题［４］。
　　　
目前，雄性不育的保存与繁殖主要采用“两用系”自交和
组织培养的方法保存。其中组织培养可以不受生长季
节限制，繁殖速度快、繁殖系数大，基本能保持原有品种
的优良性状等特点，所以建立万寿菊雄性不育系离体保
存及快繁体系，对育种和种子生产非常重要［５］。该试验
以青海大学高原花卉中心选育的９个万寿菊雄性不育
系的幼嫩腋芽为外植体，研究适宜的诱导、继代及生根
培养基配方，以期建立简单有效的离体保存及快繁体
系，为后续研究及种子生产奠定资源基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料均来自青海大学高原花卉中心试验田。
清晨于试验田内剪取９个万寿菊雄性不育系健壮无病
害植株的幼嫩腋芽，放入采样袋内并分别编号，然后置
于低温采样箱中保存。以 ＭＳ培养基为基本培养基，进
行组织培养。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体的灭菌　取出腋芽放入小烧杯中，先用洗
　　　
Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ
ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎ１，２，ＣＨＥＮ　Ｈａｉ－ｋｕｉ　３，ＷＡＮＧ　Ｊｕｎ－ｌｉ　１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｉｎｚｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８１；２．Ｂａｄａｌｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｆａｒｍ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２１１２；３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｅｉｆａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ，Ｎｉｎｇｘｉａ　７５００２１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｓｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ
ｍｉｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ｆｏｒｍｕｌａ　ｗａｓ　２ｎ＝２×＝１８＝１４ｍ＋４ｓｍ　ａｎｄ　ｂｅｌｏｎｇｓ　ｔｏ‘１Ａ’
ｔｙｐｅ　ｏｆ　Ｋａｒｙｏｔｙｐｉｃ．Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｆｏｒｍｕｌａ　ｗａｓ　１０Ｍ１＋８Ｍ２．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ
ａｌ　ｓｅｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　２４．０９μｍ，ｔｈｅ　ＡＳ．Ｋ　ｗａｓ　５８．８６％．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　８５．９５μｍ３．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｇｒｉｏｐｈｙｌｕｍ　ｓｑｕａｒｒｏｓｕｍ （Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｑ．；ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ；ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ
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