全 文 ：收稿日期:2014-10-21
基金项目:重庆市科委自然基金(CSTC，2011BA5034，2010BB5345);重庆市卫生局项目(2009-1-12)
作者简介:马鹏(1980-)，男，助理研究员，研究方向:中药材质量分析;Tel:023-89029062，E-mail:7215462@ qq. com。
* 通讯作者:彭锐，Tel:13883721375。
HPLC-DAD同时测定太白贝母中 9 种核苷类成分的含量
马 鹏1，2，王 丽1，孙年喜1，2，彭 锐1，2*
(1. 重庆市中药研究院，重庆 400065;2. 重庆市中药材良种选育与评价工程技术研究中心 /重庆市中药资
源学重点实验室，重庆 400065)
摘要 目的:建立同时测定太白贝母中尿嘧啶、胞苷、尿苷、胞腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷和腺苷 9 种核
苷类成分的 HPLC-DAD方法。方法:采用 Gemini C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm);流动相为水-甲醇，梯度洗
脱;DAD检测器检测波长 260 nm;流速 1. 0 mL /min;柱温 25℃。结果:尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、
鸟苷、胸苷、腺苷的线性范围分别为 35. 6 ～ 534 mg /mL、45. 2 ～ 678 mg /mL、62. 1 ～ 930 mg /mL、43. 2 ～ 648 mg /mL、
250. 2 ～ 750 mg /mL、105. 3 ～ 1 575 mg /mL、206. 6 ～ 3 099 mg /mL、211. 2 ～ 3 168 mg /mL、52. 6 ～ 789 mg /mL，平均加样
回收率为 97. 83% ～ 103. 62%，ＲSD为 0. 56% ～ 3. 22%。不同产地太白贝母样品的 9 种核苷类成分含量差异较大，
其中尿苷、鸟苷含量较高，含量分别为 1. 41 ～ 2. 92 mg /g和 2. 98 ～ 7. 11 mg /g。结论:该文所建立的方法操作简便，
重复性好，准确可靠，可用作太白贝母中 9 种核苷类成分的含量测定，为太白贝母药材的深度开发提供了研究基
础。
关键词 HPLC-DAD;太白贝母;核苷;含量测定
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)01-0124-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 01. 030
珍稀濒危药材太白贝母为百合科贝母属植物太
白贝母 Fritillaria taipaiensis P. Y. Li 的干燥鳞茎，
2010 年版中国药典收载太白贝母为川贝母基原植
物，具有化痰止咳、清热润肺、散结消痈的功能，主治
干咳少痰、咯痰带血、阴虚劳咳等症〔1〕。据文献可
知，太白贝母在湖北五峰、重庆巫溪、宁夏泾源、甘肃
彰县等地作为川贝母使用有着悠久的用药历史〔2〕。
大量的研究资料表明，太白贝母有效成分与川贝母
相近，临床治疗效果、药理实验结果相同〔3〕。但是，
太白贝母的基础研究依然很薄弱，相关研究较
少〔4，5〕。本文利用 HPLC-DAD建立同时测定太白贝
母中 9 种核苷类成分的方法，以期为太白贝母质量
标准的完善和深入开发利用提供一定的参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪:Agilent
G1312A二元泵，自动进样器，Agilent 1200 DAD 二
极管阵列检测器，Chemstation6. 01 色谱工作站，Agi-
lent 359001 数模转换器;AUW-220 型电子分析天平
(北京赛多利斯仪器系统有限公司);高速万能粉碎
机(天津市泰斯特仪器有限公司);DHG-9145A型电
热恒温鼓风干燥箱(上海一横科技有限公司)。超
纯水系统(美国 MILLIPOＲE)。
1. 2 材料 尿嘧啶(批号:100469-200702)、尿苷
(批号:887-200202)、腺苷(批号:110879-200202)、
腺嘌呤(批号:886-200002)、肌苷(批号:140669-
200702)对照品均购于中国食品药品检定研究院;
胸腺嘧啶(批号:T0376-5G)、胞苷(批号:C4651-
1G)、鸟苷(批号:G6752-1G)、胸苷(批号:T9250-
1G)对照品均购于 SIGMA 公司(质量分数均大于
99%)。
实验用 12 批太白贝母样品来源见表 1，经笔者
彭锐研究员鉴定为百合科贝母属植物太白贝母
Fritillaria taipaiensis P. Y. Li的干燥鳞茎。
表 1 12 批太白贝母样品来源
样品编号 采摘时间 产地
1 2009 年 5 月 重庆巫溪兰英 1
2 2009 年 7 月 重庆巫溪兰英 2
3 2010 年 7 月 重庆巫溪兰英 3
4 2010 年 7 月 重庆巫溪兰英 4
5 2010 年 7 月 重庆巫溪兰英 5
6 2010 年 7 月 重庆城口 1
7 2010 年 7 月 重庆城口 2
8 2010 年 7 月 重庆奉节
9 2011 年 8 月 重庆巫溪 1
10 2011 年 8 月 重庆巫溪 2
11 2011 年 8 月 重庆巫溪 3
12 2011 年 8 月 重庆巫溪 4
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 精密称取太白贝母样品
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粉末 2. 0 g，置 50 mL 锥形瓶中，精密加入纯水 20
mL，混匀，室温下超声(250 W，50 kHz)提取 60 min，
然后离心 10 min(4 000 r /min)，上清液用 0. 45 μm
微孔滤膜过滤，即得。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取尿嘧啶、
胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺
苷对照品适量，加水分别制成 0. 36、0. 45、0. 56、
0. 43、0. 25、1. 05、2. 06、2. 12、0. 53 mg /mL 的混合对
照品储备液。取上述混合对照品储备液，采用逐级
稀释法分别制备成系列浓度的混合对照品溶液，待
用。
2. 3 色谱条件 Gemini C18色谱柱(250 mm × 4. 6
mm，5 μm);流动相为甲醇(A)-水(B)，梯度洗脱(0
～15 min，35% ～55% A;15 ～ 30 min，55% ～ 72% A;
30 ～40 min，72% ～ 85% A;40 ～ 50 min，85% ～ 90%
A;50 ～55 min，90% ～ 35% A;55 ～ 60 min，35% A);
流速 1. 0 mL /min;进样量 50 μL;柱温 25℃;DAD检
测器检测波长 260 nm。色谱图见图 1。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察:精密吸取“2. 2”项下制备的
系列浓度混合对照品溶液，按“2. 3”项下色谱条件
进样测定，以进样浓度(mg /mL)(X)为横坐标，峰面
积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，分别计算回归方程
(表 2)，结果表明:尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺
嘌呤，肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷的各自浓度与峰面积呈
有良好的线性关系。
2. 4. 2 精密度试验:取相同浓度的混合对照品溶
液，按“2. 3”项下色谱条件进样测定，连续进样 6
次，测定尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌
苷、鸟苷、胸苷、腺苷的峰面积，计算各峰面积 ＲSD
分别为 0. 32%、0. 53%、0. 25%、0. 25%、0. 81%、
0. 35%、0. 35%、0. 56%、0. 42%，结果表明仪器精密
度良好。
2. 4. 3 重现性试验:称取同一批次太白贝母药材
粉末6份，精密称定，按“2. 1”项下方法制备供试品
图 1 混合对照品(A)和太白贝母
样品(B)的 HPLC图谱
1. 尿嘧啶 2. 胞苷 3. 尿苷 4. 胸腺嘧啶 5. 腺嘌呤
6. 肌苷 7. 鸟苷 8. 胸苷 9. 腺苷
溶液，每份进样 3 次，取其平均值，测定尿嘧啶、胞
苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷
的峰面积，计算各峰面积 ＲSD 分别为 4. 73%、
2. 32%、1. 89%、3. 76%、2. 45%、2. 02%、4. 75%、
3. 26%、3. 29%，结果表明试验重现性良好。
2. 4. 4 稳定性试验:取同一太白贝母供试品溶液，
分别于 0、5、10、15、20、24 h 进样 6 次，测定尿嘧啶、
胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺
苷的峰面积，计算各峰面积 ＲSD 分别为 4. 59%、
2. 74%、3. 04%、4. 07%、3. 48%、4. 02%、4. 16%、
2. 01%、1. 91%，结果表明供试品溶液在 24 h 内稳
定性良好。
2. 4. 5 加样回收率试验:取已知含量的太白贝母
样品粉末 1 g，平行 6 份，等量分别精密加入尿嘧啶、
胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺
苷对照品适量，按“2. 1”项下方法制备供试品溶液
并测定，计算9种化合物的加样回收率。结果9种
表 2 9 个核苷类成分的线性关系考察结果
对照品 线性方程 r 线性范围 /(mg /mL)
尿嘧啶 Y = 38438X + 317891 0. 9997 35. 6 ～ 534
胞苷 Y = 19170X － 38417 0. 9999 45. 2 ～ 678
尿苷 Y = 18575X － 22447 0. 9996 62. 1 ～ 930
胸腺嘧啶 Y = 34577X + 136748 0. 9998 43. 2 ～ 648
腺嘌呤 Y = 51743X + 99881 0. 9996 250. 2 ～ 750
肌苷 Y = 13788X － 42207 0. 9999 105. 3 ～ 1575
鸟苷 Y = 5021. 8X + 24284 0. 9999 206. 6 ～ 3099
胸苷 Y = 16694X + 367915 0. 9997 211. 2 ～ 3168
腺苷 Y = 29264X + 11530 0. 9999 52. 6 ～ 789
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化合物的加样回收率为 97. 83% ～ 103. 62%，ＲSD
为 0. 56% ～3. 22%，见表 3。
2. 5 样品测定结果 取 12 批太白贝母样品粉末，
分别按“2. 1”项下方法制备供试品溶液，按“2. 3”项
下色谱条件测定 9 个核苷类成分的峰面积，分别计
算 9 个成分的含量，结果见表 4。
表 3 加样回收率试验结果
成分 含量 /(mg /g) 加入量 /mg 测得量 /mg 加样回收率 /% ＲSD /%
尿嘧啶 0. 23 0. 23 0. 45 97. 83 0. 56
胞苷 0. 33 0. 36 0. 69 102. 85 2. 42
尿苷 3. 37 3. 35 6. 73 100. 41 0. 57
胸腺嘧啶 0. 06 0. 06 0. 11 98. 32 3. 22
腺嘌呤 0. 26 0. 25 0. 52 103. 62 1. 65
肌苷 0. 19 0. 21 0. 42 99. 56 2. 46
鸟苷 7. 45 7. 47 14. 88 99. 41 0. 87
胸苷 0. 61 0. 59 1. 19 103. 52 1. 32
腺苷 2. 16 2. 15 4. 35 102. 53 2. 63
表 4 12 批太白贝母样品中 9 种核苷类成分含量测定结果(n =3，mg/g)
样品编号 尿嘧啶 胞苷 尿苷 胸腺嘧啶 腺嘌呤 肌苷 鸟苷 胸苷 腺苷
1 0. 71 0. 34 2. 35 0. 05 0. 24 0. 28 7. 01 0. 55 1. 55
2 2. 17 0. 47 1. 86 0. 18 0. 31 0. 52 4. 38 0. 58 1. 38
3 0. 23 0. 17 2. 21 0. 06 0. 04 0. 69 4. 83 0. 17 0. 54
4 0. 17 0. 18 2. 33 0. 16 － 0. 89 3. 66 0. 39 －
5 0. 71 0. 25 1. 41 0. 16 0. 12 0. 66 5. 01 0. 19 1. 03
6 0. 06 0. 12 1. 52 － 0. 06 0. 09 2. 98 0. 03 1. 17
7 0. 08 0. 14 1. 69 － 0. 06 0. 12 3. 24 0. 15 1. 39
8 0. 25 0. 16 2. 92 0. 02 0. 21 0. 57 7. 11 0. 28 1. 49
9 － 0. 13 2. 61 0. 21 － 0. 28 3. 76 0. 43 1. 17
10 0. 02 0. 18 2. 69 0. 01 0. 01 0. 13 5. 72 0. 44 1. 56
11 0. 03 0. 16 2. 49 － 0. 08 0. 26 5. 45 0. 37 1. 31
12 0. 02 0. 18 2. 86 0. 04 0. 19 0. 49 4. 92 0. 39 1. 19
注:“ －”表示未检出
3 讨论
迄今为止，太白贝母化学成分的基础研究仍然
很少，本文在前人已发表文献的研究基础上，对太白
贝母中水溶性核苷类成分进行进一步研究，丰富了
水溶性核苷类的检测内容。本文通过 7 种色谱柱和
不同流动相的组合方案进行优选，得到了分离度较
好的梯度洗脱色谱条件，使 9 种目标成分得到了良
好的分离。
本文首次对长江三峡地区采集到的共 12 批野
生太白贝母样品中的 9 种水溶性核苷类成分进行分
析，发现其中胸腺嘧啶和尿嘧啶的含量处在同一水
平，肌苷和胸苷、胞苷等的含量处在同一水平。本文
所建立的方法操作简便，重复性好，准确可靠，可用
作太白贝母中核苷类成分的含量测定，也为其进一
步开发研究提供了依据。
参 考 文 献
［1］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］．一部 . 北
京:中国中医药出版社，2010:34-35.
［2］段宝忠，陈锡林，黄林芳，等 . 太白贝母资源学研究概况
［J］．中国现代中药，2010，12(4):12-14．
［3］严玉平，雷宇华，由会玲，等 . 川贝母及代用品种源与分
布初步研究［J］．河北中医药学报，2007，27(2):42-44．
［4］陈泽乃，陆阳，徐佩娟，等 . 中药贝母中水溶性成分的研
究［J］．中国中药杂志，1996，21(7):420-422，447.
［5］黄林芳，段宝忠，王丽芝，等 . 川贝母新资源太白贝母中
水溶性成分的含量测定［J］． 中国中药杂志，2011，36
(5):585-588.
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