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曝气对栅藻(Desmodesmus sp.CHX1)细胞生长和油脂生产的影响



全 文 :中国油料作物学报
Chinese Journal of Oil Crop Sciences
2014,36(6):808 - 814
doi:10. 7505 / j. issn. 1007 - 9084. 2014. 06. 018
曝气对栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)
细胞生长和油脂生产的影响
程海翔1,邵 瑜2,李建辉3,徐天有1,田光明2*
(1.衢州学院化学与材料工程学院,浙江 衢州,324000;2.浙江大学环境与资源学院,浙江 杭州,310057;
3.衢州市农业科学院,浙江 衢州,324000)
摘要:在自制生物反应器内,考察了曝气对培养于 BG - 11 培养液中的栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)细胞生
长、叶绿素积累和油脂生产的影响。结果表明:曝气能显著促进藻细胞生长、增加细胞内叶绿素(a + b)含量和油脂
产量,当曝气量为 160L /h时达到最大。培养 7d后,栅藻细胞的生物质浓度、叶绿素(a + b)含量和油脂产率分别达
到 7. 26g /L、60. 5mg /L和 128. 7mg /(L·d),显著高于不曝气对照的 0. 47g /L、2. 81mg /L、39. 9 mg /(L·d)。由此说
明在微藻培养过程中,曝气利于栅藻细胞生长、叶绿素积累和油脂生产,这为强化栅藻细胞生长和油脂生产提供了
一种途径。
关键词:曝气;栅藻(Desmodesmus sp. CHX1);生物反应器;生长;油脂生产
中图分类号:Q949. 93 文献标识码:A 文章编号:1007 - 9084(2014)06 - 0808 - 07
Effects of aeration on growth and lipid productivity of Desmodesmus sp. CHX1
CHENG Hai - xiang1,SHAO Yu2,LI Jian - hui3,XU Tian - you1,TIAN Guang - ming2*
(1. College of Chemistry and Materials Engineering of Quzhou University,Quzhou 324000,China;
2. College of Environmental & Resource Science of Zhejiang University,Hangzhou 310057,China;
3. Quzhou Academy of Agricultural Sciences,Quzhou 324000,China)
Abstract:To promote growth and lipid production of microalgae for biodiesel,aeration effect was studied on
growth of a microalga Desmodesmus sp. CHX1 cultured in BG -11 medium. Results showed that aeration could dra-
matically increase the algal biomass,chlorophyll (a + b)content and lipid productivity. After 7d cultivation with
the aeration 160L /h,the maximum biomass of CHX1 cell,chlorophyll (a + b)content and lipid productivity
reached 7. 26g /L,60. 5mg /L and 128. 7mg /(L·d)respectively,which were significantly higher than those of
control. Results suggested that aeration was favorable for the growth of microalgae and accumulation of valuable ad-
ditional materials during the cultivation of Desmodesmus sp. CHX1,and was also for enhancement of cell growth
and lipid production.
Key words:Aeration;Desmodesmus sp. CHX1;Bioreactor;Growth;Lipid production
收稿日期:2014-04-21
基金项目:国家水体污染控制与治理科技重大专项(2009ZX07317 - 008);浙江省自然科学基金(Y12E080084,LQ14E080012) ;中国博士后基金
(20110491792)
作者简介:程海翔(1983 -),男,博士,讲师,研究方向为微藻新能源及废弃物资源化利用,E - mail:haixiangcheng@ zju. edu. cn
* 通讯作者:田光明(1964 -) ,男,博士,教授,博士研究生导师,研究方向为植物营养及废弃物资源化利用,E - mail:gmtian@ zju. edu. cn
目前,大规模培养微藻生产生物柴油的研究备
受关注,有关影响微藻生长和油脂积累的重要理化
因子的研究也越来越多,但研究的目标多集中在光
照[1,2]、温度[3,4]、盐度[1,4]、碳源[5,6]、氮源[3,7]、磷
源[1,3,7]和培养液 pH[8]等。刘玉环等[9]指出为了提
高光能利用率以及将细胞周围未被搅动的液膜降到
最薄以促进气体交换和提高营养的有效性,高效的
微藻培养系统需要藻类处于搅动混合并维持悬浮状
态,而对藻培养液进行曝气是维持这种悬浮状态的
一种较常用方法。这主要是因为曝气能够改变水体
O2 和 CO2 的含量组成,同时也对水体进行了搅动,
从而改进了氧的传递和扩散,有助于微藻的生长,如
Park等[10]研究指出培养过程中适当曝气后,栅藻
(Scenedesmus sp.)的生物量产率显著提高。
此外,为降低微藻培养成本,废水应用于微藻培
养的研究越来越多,并因此而发展出一种新技
术———基于微藻培养的污水处理技术,将污水净化
与高价值生物质生产相耦合,可同时实现废水的无
害化处理、资源化利用和降低微藻培养成本,所获得
的微藻生物质可以用作生产生物柴油的原料。由于
氮磷是藻类生长所必需的营养元素,不少研究者对
利用污水培养微藻过程中藻细胞去除污水中的氮磷
进行了一系列研究,取得了较好的效果[11 ~ 14]。但单
纯利用污水培养微藻时,污水中营养物的去除仍存
在一个问题,即虽然藻细胞能高效利用污水中的氮
磷以供自身生长,但藻类对污水中碳源污染物的去
除能力普遍较低,这样就容易导致出水的化学需氧
量(COD)超标而限制污水在微藻培养中的应用。
因此,耦合微藻培养处理污水技术和其他生物处理
法(如活性污泥法)或其他活性菌就成为一种新的
趋势[15,16],而无论是常规的生物处理技术(如好氧
生物接触法、扬水曝气等) ,还是生态处理技术(如
氧化塘、人工湿地等) ,溶解氧都是整个反应系统中
最重要的控制条件之一,而溶解氧的控制往往通过
人工曝气来实现[17],而且曝气处理还有助于微藻去
除污染物。Park 等[10]利用栅藻(Scenedesmus sp.)
去除畜禽养殖废水的厌氧消化液时,增加曝气后
(曝气量为 0. 7L /min),氨氮的去除率从未曝气时的
6. 3mg /(L·d)提高到 18. 4mg /(L·d)。因此,利
用污水培养微藻过程中,考察曝气对微藻生长及油
脂积累的影响具有很重要的现实意义,为后续污水
培养微藻的工程应用及微藻生物质开发都具有现实
指导意义。栅藻(Demosdesmus sp. CHX1)是本实验
室筛选出的易培养、生长快、适应性强、油脂产率高
的藻种,具有应用于基于微藻培养的污水净化耦合
高价值生物质生产中的潜力[18]。为进一步掌握栅
藻(Demosdesmus sp. CHX1)的特性,本文以 CHX1 为
研究对象,培养 7d,初步考察了曝气及曝气量对
CHX1 生长及总脂含量的影响,为进一步研究曝气
应用于利用污水培养栅藻获取微藻生物质过程中的
可行性提供基础信息。
1 材料与方法
1. 1 栅藻及预培养
栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)是由本实验室从
养猪废水处理池内分离纯化所得,综合形态学观察
与分子生物学结果,确定该分离纯化所得微藻为栅
藻属,命名为栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)。纯化
藻株已提交至中国微生物菌种保藏管理委员会普通
微生物中心(保藏受理号 CGMCC No. 6649),相关测
序结果也已提交至 GenBank(登录号 JX255841)。
藻种保存于 BG - 11 培养液(表 1)内,培养条件是
摇床培养(150r /min) ,培养温度为 27 ± 2℃,由 H管
荧光灯管提供光照,光照强度为 100μmol /(m2·s)。
在试验前 7d,室温下将此微藻进行离心浓缩(5 000
r /min,10min) ,然后用无菌水重新悬浮藻细胞,再次
离心浓缩(5 000r /min,10min) ,如此重复 3 次,再将
离心浓缩的藻细胞转移至已装有 250mL 已灭菌的
上述 BG - 11 培养液的培养瓶内,上述同样条件下
预培养至对数生长期。将上述培养的藻细胞液作为
余下实验的接种液。
表 1 BG -11 培养基成分
Table 1 Ingredients of BG -11 medium
成分
Chemical
浓度
Concentration
/(mg /L)
成分
Chemical
浓度
Concentration
/(mg /L)
NaNO3 1 500 CaCl2·2H2O 36
K2HPO4·3H2O 40 Na2CO3 20
MgSO4·7H2O 75 Citric acid 6
Fe(NH4)3 C18H10O14 6 Na2 - EDTA 1
A5 solution 1mL
Note:A5:H3BO3 2. 86g,MnCl2·4H2O 1. 81g,ZnSO4·7H2O
0. 22g,CuSO4 ·5H2O 0. 079g,(NH4)6Mo7O24 · 4H2O 0. 39g,Co
(NO3)2·6H2O 0. 049g,ddH2O to 1 000 mL
1. 2 试验装置
试验装置为自制装置,主要包括充气、空气净
化、培养瓶、搅拌、气体流量控制和光源等部分(图
1)。利用空气压缩泵导入空气(压缩泵进气口设置
空气过滤器,膜孔径为 0. 2μm 且具备油水分离功
能),经导流管进入气体混合箱内,充分混合后沿分
流管至各处理瓶内,在分流管上安装玻璃转子流量
计以控制气体流量。藻类培养瓶为 2. 0L 的广口瓶
(带瓶塞) ,加入培养液并接种后,旋紧瓶塞,置于磁
力搅拌器上,随后一起置于自制光源架内的载物台
上;自制光源架为铁架结构,长 1. 0m ×宽 0. 5m ×高
1. 5m;在距地 1. 0m高处设置光照装置,由 8 盏 55W
H型荧光灯管组成;在距地 10cm 高处设置载物台,
载物台底板为银白色木板。培养瓶和磁力搅拌器放
置在载物台上后,气体混合箱安置在光源架左侧,此
时,培养瓶顶部距离上述光照装置为 40cm,为补充
两侧光照,在光源架左侧(距离培养瓶放置处
10cm)再安放两根 24W H 型荧光灯管。用照度计
(TES - 1330,金坛市科杰仪器厂,中国)测定培养装
908程海翔等:曝气对栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)细胞生长和油脂生产的影响
置周边光照强度分别为:底部(培养瓶底 1cm 处测
定) :3 980 ~ 4 500Lux,左侧:6 500 ~ 6 700Lux;右
侧:1 600 ~ 2 200Lux。
注:1:空气压缩泵;2:空气过滤器;3:气体混合箱;
4:荧光灯管;5:流量计;6:培养瓶;7:磁力搅拌器
Note:1:Air compresssor;2:Air filter;3:Air mixer;
4:Fluorescent lamps;5:Flow meter;6:Culture flask;7:Magnetic stirrer
图 1 曝气生物反应器试验装置示意图
Fig. 1 Schematic diagram of
experimental aeration bioreactor
1. 3 试验设计
向各培养瓶内加入 1L BG - 11 培养液,随后将
上述离心浓缩后藻种接种至各培养瓶中,使各处理
瓶培养液中的藻细胞初始 OD690测定值在 0. 2 左右,
旋紧瓶塞后,放置在上述装置上,开启磁力搅拌器
(100r /min)。以流量计控制进入各瓶的空气流速,
使气体流量分别达到 16L /h(约 0. 27L /min)、40L /h
(约 0. 67L /min)、80L /h(约 1. 33L /min)和 160L /h
(约 2. 67L /min) ,试验中对应处理名称分别为 T -
16、T - 40、T - 80 和 T - 160,同时设置不曝气处理
为对照(CK)。培养条件设定为温度为 27 ± 2℃,
24h光照,培养 7d。
1. 4 取样
每天取样一次,为避免曝气量不同可能带走的
水分影响培养液体积,进而影响测定的生物量浓度
值,在取样前,向培养瓶中加入已灭菌的去离子水至
1L,以补充曝气可能带来的水分损失,使每瓶的培
养液体积相等。混合均匀后,每次取样 50mL,同时
补入等体积的灭菌 BG - 11 培养液。测定培养液
OD690,以考察 CHX1 在不同曝气处理下的生长和油
脂含量变化情况。
1. 5 藻体生物特征测定
1. 5. 1 生物量干重测定 取 5mL 培养液,在分光
光度计上测定各个处理 OD690。再根据 OD690与
CHX1 生物量干重之间的关系换算成生物量干重,
换算关系式如下:
生物量干重(g /L)= 0. 991 3OD690 - 0. 021 5,
R2 = 0. 994 2。
生物量产率[mg /(L·d) ]是 CHX1 培养结束
时生物量浓度与培养起始时生物量浓度的差值再除
以培养时间。
1. 5. 2 比生长率(GR)测定 CHX1 比生长率测定
时 OD690值的指数方程测定
[8]:
GR = (lnODt - lnOD0)/ t
式中:ODt 表示培养一段时间后的 OD690值;OD0
表示初始培养时的 OD690值;t表示培养时间,单位为 d。
1. 5. 3 藻体叶绿素含量测定 吸取 10mL 藻细胞
培养液,过 0. 45μm纤维滤膜进行真空过滤,将滤膜
放入 25mL离心管内,加入 10mL 无水乙醇浸泡,聚
四氟膜封口后,静置于 4℃冰箱内浸泡过夜,24h 后
取出离心管,离心(12 000r /min,5min),移出上清液
至新的离心管内,在波长 645nm、663nm处测定上清
液的吸光值,分别记作 A663、A645。根据下列公式计
算总叶绿素(Ca + b)、叶绿素 a(Ca)和叶绿素 b(Cb)
含量,具体公式如下:
Ca + b = 20. 2 × A645 + 8. 02 × A663;
Ca = 12. 21 × A663 - 2. 81 × A645;
Cb = 20. 13 × A645 - 5. 03 × A663。
1. 5. 4 藻体总脂含量测定 取一定量的藻细胞培
养液,离心浓缩(5 000r /min,30min),无菌水再悬浮
后,再次离心浓缩,如此重复 3 次,将获得浓缩藻细
胞放入冰箱内(- 20℃)速冻。随后,将速冻藻细胞
进行真空冷冻干燥,研磨成粉。总脂含量测定参照
文献[19]。称取 0. 1g 左右冷冻干燥藻粉,质量记为
M1,加入 10mL 2∶ 1 氯仿 -甲醇混合液,30℃水浴超
声 30min后,过滤至另一个带刻度的玻璃离心管中,
管内含 2mL 0. 9% NaCl 溶液,4℃下离心(1 000r /
min,10min)。待离心管内液体上下明确分层后,记
录下层液体体积,记为 V;吸取 3mL 下层液体,注入
已称重的 5mL玻璃管内,玻璃管质量记为 M0,氮吹
发仪上吹发至有机溶剂完全挥发,再放入干燥箱内,
60℃烘干至恒重,冷却至室温后称重,记为 M2。根
据下列公式计算藻细胞总脂含量(LW):
LW (g /g)=(M2 -M0) × V /(3 ×M1)。
总脂产率是藻细胞生物量产率[(mg /(L·d) ]
和藻细胞总脂含量(%)的乘积。
1. 6 培养液溶解氧(DO)含量、pH值测定
分别采用溶氧仪(HQ30d,HACH ,USA)和 pH
计(Start3C,OHAUS,USA)直接测定。
1. 7 数据分析
所有的试验数据结果均采用 3 次重复试验的平
均值,结果表示方法为:平均值 ±标准差。对测得数
018 中国油料作物学报 2014,36(6)
据进行方差分析及多重比较。所有统计均采用
SPSS 17. 0 软件,绘图通过 Origin 8. 0 完成。
2 结果与分析
2. 1 曝气对培养液中 DO和 pH值的影响
曝气影响 CHX1 生长过程中培养液的 DO 和
pH值。由图 2 可知,CHX1 培养液初始溶解氧
(DO)浓度为 7. 70mg /L 左右。CK 处理中,随培养
过程的进行、微藻生物量的增加,培养液中的 DO浓
度显著升高,培养 7d 后,培养液中 DO 浓度最高达
到 16. 8 mg /L,而在曝气各处理组中,培养液中 DO
浓度在培养初期略有增加,但随后的培养时间内基
本维持在 9. 0mg /L 左右,达到了培养液的饱和
浓度。
注:CK为对照,T - 16、T - 40、T - 80 和 T - 160 分别表示曝
气量为 16L /h、40L /h、80L /h和 160L /h处理。下同
Note:CK is the control. T - 16,T - 40,T - 80 and T - 160 are the
treatments with the aeration volumes of 16L /h,40L /h,
80L /h and 160L /h respectively. Same as below
图 2 不同曝气量处理下培养液中 DO浓度变化
Fig. 2 Changes of DO concentration in medium
under different cultivation conditions
图 3 不同曝气量处理下培养液 pH值变化
Fig. 3 Changes of medium pH under
different cultivation conditions
由图 3 可知,CK处理中,随培养过程的进行、微
藻生物量的增加,培养液中的 pH 值逐渐提高,培养
7d后,培养液中 pH 值维持在 11 左右,而在曝气各
处理组中,随培养时间延长,培养液中 pH 值变化呈
现低曝气量(T - 16 和 T - 40)稳步上升,而高曝气
量(T - 80 和 T - 160)处理组先降后升,这可能是因
为高曝气向培养液中引入一定浓度 CO2,降低了培
养液 pH值,但随后微藻进行快速生长,培养液 pH
值逐步升高。培养 7d后,培养液中的 pH 值稳定在
10. 5 ~ 11. 0 左右,各处理组间差异不显著(p <
0. 05)
2. 2 栅藻 CHX1 生长情况
曝气对 CHX1 生长的影响见图 4。由图 4 可
知,CHX1 培养液初始 OD690约为 0. 2 左右,培养 1d
后,曝气处理组和对照组藻细胞生物量浓度无显著
差异(p > 0. 05),但从第 2d 培养开始,各组间出现
生长差异,曝气处理组藻细胞生物量浓度要显著高
于对照组(p < 0. 05)。培养 7d 后,T - 16、T - 40、T
-80 和 T - 160 处理下,CHX1 的生物量浓度和生物
量产率分别为 2. 12、3. 77、5. 10、7. 26g /L 和 274. 5、
508. 3、695. 6 和 1 003. 6mg /(L·d),显著高于 CK
处理下的 0. 47g /L 和 39. 9 mg /(L·d)。这说明曝
气处理能显著促进 CHX1 的生长,提高生物量产率,
并且在所研究的曝气量范围内,随曝气量的增加,
CHX1 的生物质浓度和生物量产率,也随之显著提
高。
图 4 不同曝气量处理下栅藻
(Desmodesmus sp. CHX1)的生长情况
Fig. 4 Growth curves of Desmodesmus sp.
CHX1 under different cultivation conditions
2. 3 藻细胞 Chl(a + b)含量情况
曝气对 CHX1 细胞内 Chl(a + b)含量的影响见
图 5。由图 5 可知,与对照组相比,曝气处理显著增
加培养液中 Chl(a + b)含量,且随着曝气量的增加
而显著增加(p < 0. 05)。培养 7d 后,T - 16、T - 40、
T - 80 和 T - 160 各处理中,培养液中 Chl(a + b)浓
度分别达到 16. 2、29. 0、37. 3 和 60. 5mg /L,显著高
于 CK处理下的 2. 81mg /L(p < 0. 05)。对比观察培
118程海翔等:曝气对栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)细胞生长和油脂生产的影响
养液中 Chl(a + b)浓度变化和藻细胞生物量浓度变
化趋势,会发现二者之间具有很好的吻合性,相关分
析结果也表明培养液中 Chl(a + b)浓度与藻细胞生
物量浓度呈现显著的正相关关系,相关系数 R2 =
0. 996,这说明培养液中叶绿素浓度也能很好地反映
培养液中现存藻细胞密度,与之前的报道结果
一致[20]。
曝气处理不仅仅提高了培养液中 Chl(a + b)浓
度,更重要的是提高了单位藻细胞 Chl(a + b)产量,
曝气处理组藻细胞 Chl(a + b)平均产量为 7. 75mg /
g(范围是 7. 32 ~ 8. 36 mg /g),显著高于对照组的
5. 97mg /g(以藻细胞干重计) ,进一步说明曝气处理
能显著增加藻细胞体内叶绿素 Chl(a + b)含量,进
而增强藻细胞的光合作用强度和将无机营养物质转
变为有机物质的能力。藻细胞内 Chl(a + b)含量增
加可能是因为在光照条件下,曝气处理能带入一定
量的 CO2,而适当的提高培养液中 CO2 浓度可诱导
藻细胞光合色素(Chla)含量的升高[21]。
图 5 不同曝气量处理下栅藻(Desmodesmus sp.
CHX1)细胞培养液内叶绿素(a + b)含量
Fig. 5 Chlorophyll (a + b)concentration of
medium for cultivation Desmodesmus sp.
CHX1 under different cultivation conditions
2. 4 藻细胞油脂含量和产率情况
曝气对 CHX1 体内油脂含量和油脂产率的影响
见图 6。由图 6 可知,曝气处理显著增加 CHX1 体
内油脂含量,随曝气量增加,藻细胞体内油脂含量呈
先降后升趋势。培养 7d后,T - 16、T - 40、T - 80 和
T - 160 各处理下,CHX1 细胞内油脂含量分别为
11. 9%、9. 44%、11. 4%和 12. 8%,均显著高于 CK
处理下的 8. 54%(p < 0. 05),但曝气处理间无明显
规律变化。与油脂含量变化趋势不同,随曝气量的
增加,CHX1 油脂产率随之显著增加,培养 7d 后,T
- 16、T - 40、T - 80 和 T - 160 各处理下,CHX1 细
胞的油脂产率分别为 32. 7、48. 0、79. 0 和 128. 7mg /
(L·d) ,显著高于对照组的 3. 33mg /(L·d) (p <
0. 05)。
图 6 不同曝气量处理下栅藻(Desmodesmus sp.
CHX1)细胞的油脂含量和产率
Fig. 6 Lipid content and lipid productivity of Desmodesmus
sp. CHX1 under different cultivation conditions
3 讨论
曝气是常规的生物处理技术和生态处理技术中
控制溶解氧的常用手段,而耦合微藻培养处理污水
技术和其他生物处理法(如活性污泥法或其他活性
菌)成为新趋势[15,16]。利用污水培养微藻过程中,
考察曝气对微藻生长及油脂积累的影响具有很重要
的现实指导意义。本文的研究结果与 Park 等[10]的
结果一致,认为曝气显著促进栅藻生物量产率。其
原因可能与曝气处理能增强培养液中溶解氧(DO)
的去除有关。一般而言,微藻能利用光合作用产生
氧气,但过高的溶解氧浓度又会反馈抑制微藻的光
合作用过程。Park[10]指出在单独分离试验中,培养
液起始 DO浓度为 0. 76mg /L,未曝气光照培养条件
下,培养栅藻(Scenedesmus sp.)18 min 后,培养液
DO 浓度迅速升高至 6. 2mg /L,35min 后升高至
10mg /L,60min后升高至 15. 5 mg /L,生物量产率为
66. 8mg /(L·d);而在曝气光照培养条件下,栅藻
(Scenedesmus sp.)培养液中 DO浓度一直稳定在6. 2
mg /L左右,生物量产率为 118 mg /(L·d)。因此,
研究者指出适当的曝气有助于降低培养液中 DO 浓
度,提高微藻的产量。类似现象在本研究中也观察
到了。
叶绿素含量的高低是描述微藻将无机营养物质
转变为有机物质能力的一个重要指标,更能反映微
藻对培养液中有机物等营养元素的利用程度[22]。
而且很多研究以微藻体内叶绿素含量高低作为衡量
微藻生长情况的重要指标,尤其是叶绿素 a 是所有
藻类都含有的叶绿素类型,其含量多用于表征浮游
植物的现存量[23,24]。有研究指出适当的提高培养
218 中国油料作物学报 2014,36(6)
液中 CO2 浓度可诱导藻细胞光合色素(Chla)含量
的升高[21]。曝气能向培养液中带入一定浓度的
CO2,且随曝气量的增加带入 CO2 量也随之增加,进
而诱导 CHX1 细胞内 Chla含量的增加,而 Chla 作为
栅藻 CHX1 细胞内叶绿素的主要成分,其含量增加
必定伴随增加藻细胞体内 Chl(a + b)含量。当然,
藻细胞 Chla 含量还受到其他环境因子的影响,如吴
阿娜等[24]研究指出 Chla 含量与水体中温度、溶解
氧、pH值等呈正相关。而在本研究中,培养体系温
度设定为 27 ± 2℃,在培养期间,培养液温度通过磁
力搅拌器维持恒温,这一影响因素可以排除。而培
养液 DO、pH 值变化也与叶绿素 a 含量变化不符。
因此,藻细胞内 Chl(a + b)含量的增加可能原因就
是曝气向培养液中带入了一定量的 CO2,光照条件
下诱导了 Chla 的合成,且随着曝气量增加,带入培
养液中的 CO2 量会增加,此时,藻细胞体内 Chla 含
量也随之增加。这说明 Chla 含量与培养液中 CO2
浓度之间存在一定的正相关关系,为强化 CHX1 生
长和物质积累的研究提供了一个方向,即可以通过
提高培养液中 CO2 浓度来提高微藻生长和体内物
质积累,这还需要进一步验证。
利用微藻生产生物柴油是目前微藻能源化利用
研究的热点,而油脂产率是评价微藻是否适合作为
生产生物柴油的原料的一个重要指标[26],油脂产率
受藻细胞油脂含量和藻细胞生物量产率的双重作
用,可能受生物量产率的影响更大,这是因为较高的
微藻生物产量可以弥补其低油脂含量的缺陷,用生
物产量来衡量微藻生产能源更经济可行[23]。本研
究中相关分析结果也表明,栅藻 CHX1 的油脂产率
与藻细胞生物产量之间呈显著正相关性,相关系数
R2 = 0. 989,所以说,CHX1 在高曝气量下获得较高
的油脂产率可能是因为其在此条件下生物产量较
高。高曝气量条件下,CHX1 的生物量产率1 003. 6
mg /(L·d)和油脂产率 128. 7mg /(L·d) ,显著高
于可作为能源原料的小球藻在通入 1% CO2 时培养
而获得的油脂产率(40mg /(L·d) )[21],这进一步说
明 CHX1 具备作为生产生物柴油原料的潜力。Hu
等[27]研究指出添加 5% CO2 比添加 1% CO2 更能
促进微藻(Auxenochlorella protothecoides)的生物量和
油脂积累。因此,如果改用一定浓度的 CO2 而不是
纯空气曝气,CHX1 的油脂产率会如何变化,值得进
一步研究。
4 小结
曝气能显著增加栅藻(Desmodesmus sp. CHX1)
细胞的生物量、Chl(a + b)含量和油脂产量,且在所
研究的范围内(16 - 160L /h) ,随曝气量的增加均显
著增加,培养 7 天后,在曝气量为 160 L /h 时,CHX1
细胞的生物量浓度、Chl(a + b)含量和油脂产率分
别达到 7. 26g /L、60. 5mg /L 和 128. 7mg /(L·d),
这说明在 CHX1 培养过程中,曝气利于微藻生长和
高价值附加物质的积累。曝气向培养液中带入一定
量的 CO2 可能是诱导 CHX1 光合作用增强和细胞
内物质积累的主要原因,而空气中较低的 CO2 浓度
可能未满足 CHX1 生长所需,因此,如果改用含一定
浓度 CO2 而非全部空气进行曝气处理,可能是强化
栅藻生长和油脂生产的新研究方向。
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(责任编辑:郭学兰)
418 中国油料作物学报 2014,36(6)