全 文 ：· 实验研究·
HPGFC-ELSD法测定商陆多糖的重均相对分子质量
徐从立 ,陈海生 ,谭兴起 ,柳润辉 ,宣伟东
(第二军医大学药学院天然药物化学教研室 ,上海 200433)
[摘要 ]　目的:测定商陆多糖的重均相对分子质量。 方法:将商陆多糖分离纯化 ,采用 HPGFC-ELSD法测定重均相对分子
质量分布。测定条件为 TSK柱 ( G 2000 SW , 7. 5 mm× 300 mm );水为流动相 ,流速 1. 0 ml /min;漂移管温度 40℃ ;气体 ( N2 )压
力 2. 0× 105 Pa。结果:多糖重均相对分子质量的线性范围为 10 000～ 170 000( r= 0. 973) ,测得商陆多糖重均相对分子质量约
为 76 896. 4。结论: 该法为多糖重均相对分子质量测定提供了简便实用的分析方法。
[关键词 ]　商陆多糖 ;高效凝胶过滤色谱法 ;蒸发光散射检测器 ;重均相对分子质量
[中图分类号 ]　 R 917　　　 [文献标识码 ]　 B　　　 [文章编号 ]　 0258-879X ( 2004) 01-0116-02
Determination of weight average molecular weight of Phytolacca acinosa Roxb. polysaccharide by HPGFC-
ELSD method
XU Cong-Li, CHEN Hai-Sheng , TAN Xing-Qi, L IU Run-Hui, XU AN Wei-Dong ( Depar tment of Natur al Medicina l Chem-
istr y, School of Pha rmacy , Second Milita ry Medical Univ ersity, Shanghai 200433, China)
[ABSTRACT]　 Objective: T o determine the distribution of w eight av er age mo lecula r w eigh t in the Phy tolacca acinosa Roxb.
polysaccha ride. Methods: Phytolacca acinosa Roxb. polysaccha ride w as iso la ted and purified by high perfo rmance gel filtr a-
tion chr oma tog raphy ( HPGFC) with evapo rativ e light scatte ring detecto r ( ELSD ). De termina tion conditions w ere as follow s:
colum: TSK ( G 2000 SW 7. 5 mm× 300 mm) ; mobile phase: w ater; flow rate: 1. 0 ml /min; drift tube tempera ture: 40℃ ; nebu-
lize r ga s ( N2 ) pressur e: 2. 0× 105 Pa. Results: Th e linear range o f weight av e rage mo lecula r weight of polysaccha ride was
10 000-170 000 ( r = - 0. 973) . The w eight av er age mo lecula r weight of Phy tolacca acinosa Roxb. po lysaccha ride was
76 896. 4. Conclusion: HPGFC-ELSD is a prac tical, reliable meth od fo r the determina tion o f the po ly saccharide w eight av er-
age mo lecular w eight.
[KEY WORDS ]　 Phytolacca acinosa Roxb. polysaccha ride; high perfo rmance gel filtra tion chr oma to g raphy; ev apo rativ e
ligh t scat tering de tec to r; w eigh t av er age mo lecular w eight
[ Acad J Sec Mil Med Univ , 2004, 25( 1): 116,封三 ]

　 商陆 (Phytolacca acinosa Roxb. )又名夜呼、野萝卜 ,为商陆
科植物商陆和垂序商陆的根。近年研究发现商陆所含多糖成分
具有增强免疫、抗肿瘤和保护造血功能的作用 [1]。 多糖的性质
往往与其重均相对分子质量 (Mw )大小有关 ,例如: 多糖溶液的
黏度不但随浓度的增大而增大 ,而且与多糖的重均相对分子质
量大小有关。 在生物学研究中 ,发现某些多糖由于重均相对分
子质量的不同所产生的效应差异较大 [2]。 因此测定多糖重均相
对分子质量对研究其的性质具有重要意义。为了进一步研究商
陆多糖的重均相对分子质量与生物学活性之间的组效关系 ,本
研究对商陆粗多糖进行了纯化 ,并采用高效凝胶过滤色谱法
( HPGFC) ,以蒸发光散射检测器 ( ELSD)作为检测手段 ,建立
测定商陆多糖重均相对分子质量的分析方法。
1　方法和结果
1. 1　仪器与试剂　高效液相泵 ( LC-10A,日本岛津 ) ; ELSD
( SEDEX 55,法国 ) ;冰冻干燥机 ( V ir tis,美国 ); SR色谱数据
工作站 (三锐科技有限公司 ) ; Sephadex G -25( Pharmacia,瑞
典 ) ;葡聚糖标准品 Dex t ran T 10、 T 40、 T 70、 T 90、 T 170
( Pharmacia,瑞典 ) ;双蒸水 ;苯酚 (重蒸 )、浓硫酸、三氯乙酸、
正丁醇、乙醇、氯仿均为分析纯 ;商陆粗多糖从陕西麟游产商
陆中提取。
1. 2　色谱条件　高效凝胶过滤柱 TSK , G 2000 SW , 7. 5
mm× 300 mm ( LKB-Prodokter AB, Brom ma ,瑞士 );柱温
25℃ ;流动相为重蒸水 ;流速 1 ml /min; ELSD漂移管温度
40℃ ;气体 ( N2 ) 压力 2. 0× 105 Pa。
1. 3　标准品溶液的制备　精密称取葡聚糖标准品各 1. 0
mg置于 1 ml容量瓶 ,加水至刻度 ,制成 1. 0 mg /ml的标准
溶液。
1. 4　供试样品的制备　称取 5 g商陆粗多糖 ,加水 10 ml溶
解 ,以 Saveg法除去蛋白 ,室温离心 ( 3 000 r /min) ,弃去不溶
物 ,水溶液加入无水乙醇 40 ml,得沉淀 ,沉淀加水溶解 , 70℃
减压回收至无醇味 ,加水稀释至 10 ml,进行 Sephadex G-25
柱层析 ,以水洗脱 ,每份收集 20 m l,以苯酚 -硫酸法比色检
测 ,收集含糖流分 ,浓缩后 ,冰冻干燥得商陆多糖 ,称取该多
糖 1. 0 mg置于 1 ml容量瓶 ,加水至刻度 ,以该溶液 20μl进
·116· 第 二 军 医 大 学 学 报Acad J Sec Mil Med Univ　 2004 Jan; 25( 1)
[作者简介 ]　徐从立 ( 1970-) ,男 (汉族 ) ,硕士 ,讲师 .
E-mail: conglix u@ 163. com
样 ,经 HPGFC-ELSD检测为单一峰 (tR= 5. 473 min)。
1. 5　线性关系考察　分别取 Dex tran T 10、 T 40、 T 70、 T
90、 T 170标准溶液 20μl进样 ,色谱峰保留时间 t R分别为
8. 22、 5. 86、 5. 67、 5. 64、 4. 31min。 以色谱峰的保留时间对标
准品 M w 的对数值进行回归 ,回归方程为: tR= 20. 03-
2. 981 lgM w ,r= - 0. 973。 Mw线性范围 10 000～ 170 000。
1. 6　精密度和稳定性试验　取 Dex tran T 70的标准品溶
液连续进样 ,记录色谱峰保留时间 ,计算相对标准偏差
RSD= 0. 82% (n= 5) ;取同一供试品溶液日内每隔 2 h进样
1次 ,日内 RSD= 0. 98% (n= 6) ,连续 3 d进样重复进样 ,日
间 RSD= 1. 53% ( n= 4)。结果显示标准品溶液在 72 h内稳
定 ,以 1 d内测定最佳。
1. 7　重现性试验　取 1. 4项下制备的多糖样品 ,按供试样
品溶液制备方法制成质量浓度为 1. 0 mg /ml的溶液 ,依法
测定商陆多糖的 M w,结果 RSD= 1. 84% (n= 6)。
1. 8　样品测定　精密量取对照品溶液 ( Dex t ran T 70)和样
品溶液各 20μl,进样 , 结果保留时间 tR = 5. 47 min (n= 3) ,
代入回归方程求得商陆多糖重均相对分子质量 M w=
76 896. 4。
2　讨　论
蒸发光散射检测器是一种通用检测器 ,其原理是:柱洗
脱液进入雾化器针管 ,在针的末端 ,洗脱液和 N2混合形成液
滴 ,液滴流经加热的漂移管将溶剂挥发 ,样品在溶剂蒸气中
形成小颗粒。被分析检测的物质颗粒通过一束狭窄的散射光
由光电倍增管收集。 ELSD的响应取决于被分析颗粒的数量
和大小 [3]。由于样品测定过程中排除了用 UV检测器时的溶
剂干扰 ,大大改善了分析效果 ,该方法尤其适合于紫外吸收
较弱的样品的测定。由于本实验所用的葡聚糖标准品无紫外
吸收 ,又无专属性很好的显色剂 ,因此本研究首次采用了以
ELSD为检测器 ,对商陆多糖的 Mw进行了测定 ,结果表明 ,
ELSD检测器对无紫外吸收的多糖的测定具有良好的稳定
性、较高的灵敏度和重现性 ,所选用的色谱条件对商陆多糖
具有较高的分离度。
流动相离子强度对多糖的保留时间有一定影响 ,商澎
等 [4 ]报道了不同离子强度的流动相对葡聚糖保留时间的影
响 ,指出离子强度越低 Mw与 t R回归方程的线性越差。由于
本实验采用 ELSD为检测器 ,一定离子强度的溶液含对该检
测器存在较大影响 ,故本实验以双蒸水为流动相 ,结果回归
方程的线性亦较好。
[参 考 文 献 ]
[ 1 ]　谢学建 ,张俊慧 ,马爱华 .商陆多糖研究进展 [ J] .时珍国医国
药 , 1999, 10 ( 1): 68-70.
[2 ]　张惟杰 主编 .糖复合物生化研究技术 [M ].第 2版 .杭州:浙江
大学出版社 , 1999. 97-98.
[3 ]　冯埃生 ,邹汉法 ,汪海林 ,等 .影响高效液相色谱 /挥发激光散射
检测器检测性能基本因素的考察 [ J] .药物分析杂志 , 1996, 16
( 6): 414-416.
[ 4]　商　澎 ,梅其炳 ,曹之宪 ,等 .当归多糖组分的高效液相色谱分
析 [ J] .中国药学杂志 , 2000, 35( 5): 332-335.
Sh ang P, M ei QB, Chao ZX, et al . Analysis of Angelica
polysaccharides const ituents by high-perfo rmance liquid ch ro-
matography [ J ] . Zhongguo Yaoxue Zazhi (Ch in Pha rm J ) ,
2000, 35( 5): 332-335.
[收稿日期 ]　 2003-05-10　　 [修回日期 ]　 2003-12-03
[本文编辑 ]　曹　静 ,尹　茶
Apoptosis is involved in the cardiac damage induced by singaortic denervation in rats
TAO Xia, ZHAN G Sh u-Hui, CHU Zheng-Xu, SU Ding-Feng ( Depar tment o f Pharmacolog y , Ba sic Medical Colleg e, Second
M ilitary Medical Univ er sity , Shanghai, China)
[ SUMMARY]　 The a rterial ba ro reflex plays an impo r tant r ole in the maintenance o f the stability o f blood pressure. Sinoaor-
tic denerva tion ( S AD) produces sever e or gan damage in rats. Th e present study was designed to investiga te w hether apopto-
sis, which is a ubiquitous ph ysio log ical mode of cell dea th distinc t from cell mor tality induced by injury and nec rosis, is in-
vo lv ed in SAD-induced cardiac damage. Male Sprague-Daw ley r ats ( 10 w eeks old) we re used. Rats unde rw ent SAD (n= 9) o r
sham operation (n= 10) . Six teen w eeks af ter opera tion, the hear t tissues w ere taken for investig ations including electron mi-
cro scopy , immunohistochemistry , termina l deoxynucleo tidyl transferase ( Td T ) -media ted dU TP nick-end labelling ( TUNEL )
and reve rse transcriptionpolymerase chain reaction ( RT-PCR) . Cardiac hyper trophy and fibr osis w as found in SAD ra ts. The
numbe r apopto tic ca rdiom yocy tes w as increased in SAD ra ts compared with sham-opera ted r ats. The expression of Bcl-2 m R-
NA and pro tein ( an inhibitor y facto r o f apoptosis) in ca rdiomyocy tes w as decr eased in SAD ra ts. In contra st, the expression
o f Bax , Fas and Fas ligand mRN A and pro teins ( promo ter s o f apopto sis) in cardiomyocytes was significantly incr ea sed in SAD
ra ts. In conclusion, th e present st udy reveals a high lev el o f apopto sis in ca rdiomyocy tes in SAD rats. It is propo sed that
apopto sis is inv o lv ed in SAD-induced cardiac damage.
[Clin Exp Pharmacol Phy siol, 2003, 30: 362-368 ]
第 1期 . 徐从立 ,等 . HPGFC-ELSD法测定商陆多糖的重均相对分子质量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　· 封三·