全 文 ：第 4 卷 第 4 期
2008 年 4 月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T r aditional M edicine
Vo l.4 No.4
Apr.2008
收稿日期:2008 02 10
基金项目:贵州省科学技术基金项目(黔科合 J 字[ 2007] 2143 号)
作者简介:谢红(1980 ), 女 ,贵阳中医学院硕士研究生 ,主修中药化学。
HPLC-DAD测定不同来源滇白珠根中木脂素苷含量
谢　红1 , 2 ,杨　娟2 ,王道平2
(1.贵阳中医学院 , 贵州 贵阳 550002;2.中国科学院天然产物化学重点实验室 , 贵州 贵阳 550002)
摘　要:目的:测定不同来源滇白珠根中木脂素苷含量 , 进一步探讨滇白珠质量标准的制定。方法:HPLC-DAD联
用检测技术。色谱柱:Kromasil C18 , 流动相为甲醇-乙腈-0.1%TFA (25∶5∶70);检测波长 220nm , 流速 0.7
ml/ min ,柱温为 25℃,外标法定量。结果:进样量与峰面积线性关系良好(D2 、D3 均为 r=0.9999)。 D2 平均回收
率为 100.8%, RSD 2.4%。比较不同产地药材木脂素苷 D2 、D3 含量 ,遵义样品 D2 含量最高 , 而广西几乎不含 D2 ,
但 D3 含量最高。不同月份药材木脂素苷 D2 、D3 含量呈一定趋势变化 , 其中 10 月和 3 月的木脂素苷 D2 、D3 含量
较其他月份高。结论:此方法简便 、可靠 , 可以作为评价滇白珠质量的参考方法。
关键词:滇白珠;H PLC-DAD;木脂素苷;含量测定
中图分类号:R284.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2008)04-041-03
　　滇白珠〔Gaultheria leucocarpa Bl.var.crenulata
(Kurz)T.Z.Hsu〕为杜鹃花科植物滇白珠的全株或
根 ,广泛分布于我国西南地区和华南地区;《中药大辞
典》和《中国民族药志》均有记载。它具有祛风除湿 、活
血化瘀 、通络止痛 、清热解毒等功效 ,用于治疗风湿性
关节炎 、关节肿痛 、跌打损伤 、慢性气管炎和风寒感冒
等症[ 1 , 2] 。一般认为水杨酸甲酯是可能的有效成分 ,但
马小军等人通过建立和改进分析木脂素苷的高效液相
法[ 3 ,4] ,研究了滇白珠不同来源[ 4] 、不同季节 、不同地
区[ 5] 、不同白珠树属[ 6] 的木脂素苷含量 ,建议暂用滇白
珠木脂素苷含量作滇白珠的质量标准。近年来
HPLC-DAD联用检测技术因其具有高灵敏度和高选
择性 ,已被广泛运用于多组分定性 、定量和纯度检测。
本文记载了利用此技术测定的 7个不同地区 , 11个不
同月份滇白珠根的木脂素苷含量 ,进一步探讨了滇白
珠质量标准的制定。
1　仪器与试药
Agilent 1100 series高效液相色谱仪(真空脱气机 、
四元泵 、自动进样器 、柱温箱 、DAD二级管阵列检测
器 、HP 1100 3D化学工作站 ,美国安捷伦科技有限公
司);AG258电子天平(METTLE TOLEDO);KQ-250
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);四孔电
子恒温水浴锅(上海金桥科析仪厂)。木脂素苷(+)-
lyoniresinol-2α-O-α-L-arabinopyranoside (D1), (-)-5-
甲氧基异落叶松树脂醇-2α-O-β-D-吡喃木糖苷(D2),
(-)-异落叶松树脂-2α-O-β-D-吡喃木糖苷(D3)均为自
制 ,纯度>99%。
甲醇(色谱纯 , Merck公司)、乙腈(色谱纯 , Dima
公司)、三氟乙酸(TFA ,分析纯 , Schar tau chemie.S.
A 公司)、水为乐百氏纯净水 ,用时经 0.45μm 微孔滤
膜过滤。
不同地区和不同时间的滇白珠药材均为当地采
集或当地药材市场购买 ,由贵阳中医学院孙庆文老师
鉴定 , 其中广西样品为 Gaultheria leucocarpa B l.
var.cumingiana(Vidal.)T .Z.Hsu 的根 ,其余 16
个样品均为 Gaultheria leucocarpa Bl .var.crenu-
lata(Kurz)T .Z.Hsu 的根。17 个样品标本存于中
国科学院天然产物化学重点实验室(位于贵州省)。
2　方法
(1)色谱条件 。色谱柱:Kromasi l C18(0.46cm×
25cm , 5μm),流动相为甲醇 -乙腈 -0.1% TFA
(25∶5∶70);检测波长 220nm ,流速 0.7m l/min ,柱温
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为 25℃,外标法定量。
(2)对照品溶液的制备。精密称取对照品 D1
5.01mg ,D 2 4.97mg , D3 5.03mg 放于 5ml的量瓶中 ,
加 3ml甲醇加热溶解 ,待冷却 ,用甲醇定容至刻度。
取混合对照品 1ml 定容于 10m l 容量瓶中 , 得约
0.1mg/ml混合对照品液 。
(3)供试品溶液的制备。精密称取粉碎后经过 40
目筛的干燥样品0.5g ,加入30%甲醇25ml ,称重 ,90℃水
浴回流 2h ,冷却至室温 ,补足减轻的重量 ,离心 ,取上清
液过 0.45μm微孔滤膜 ,得供试品溶液。按上述色谱条
件吸取样品 20μl进样 ,按峰面积计算含量。
(4)标准曲线绘制 。吸取约 0.1mg/ml浓度的
D2 ,D 3 和 D1 混合对照液 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 , 5.0 ,
6.0 ,8.0和 10.0μl ,按上述色谱条件测峰面积 。以混
合标准液进样量(μg)为横座标(X),峰面积为纵座标
(Y),峰面积对浓度进行回归计算 。D2 , D3 , D1 的回
归方程分别为 Y 2 =5326.6X-24.497 , Y3 =5414.9X
-56.376 , Y 1 =3351.3X +50.364;r 值分别为
0.9999 ,0.9999 ,0.9999;线形范围分别为 0.0994 ～
0.994μg ,0.1006 ～ 0.6036μg ,0.1002 ～ 0.6012μg 。
(5)精密度试验。取约 0.1mg/ml混合对照品溶
液 ,连续进样6次;D2 ,D3和 D1 峰面积的 RSD值分别为
1.79%,1.08%,1.65%,结果表明方法精密度良好。
(6)重现性试验 。取贵阳 2007 年 3 月样品 ,按
2.3项方法 ,分别制备 6份供试品溶液 ,测定木脂素苷
成分 D2 , D 3 的峰面积 ,其 RSD 值分别为 0.83%,
4.3%,结果表明方法重现性良好。
(7)稳定性试验 。精密吸取重现性试验中第二份
样品溶液 ,于 0h ,1h ,2h ,4h , 8h ,12h测定木脂素苷成
分 D2 , D3 的峰面积 , 其 RSD 值分别为 1.03%,
3.69%,结果表明样品在 12h内稳定 。
(8)加样回收率 。取贵阳 2007年 3月样品 6份 ,
每份约 0.5g , 精密称定 , 分别精密加入浓度为
0.5486mg/ml的 D2 对照品溶液 1m l ,按“2.3”项下方
法 ,制备供试品溶液 ,测定 D2 的含量 ,并计算加样回
收率(表 1)。
表 1　滇白珠根中木脂素苷 D2 的回收率实验(n=6)
测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1.1060 97.55
1.1126 98.70
1.1287 101.53 100.8 2.4
1.1236 100.62
1.1436 104.13
1.1323 102.16
注:样品含量 0.5714mg ,对照品加入量为 0.5486mg
3　样品分析
(1)三个木脂素苷波长的选择。通过 DAD检测
器全扫描 ,并同时观察其 UV 图谱(如图 1)。
D2 对照品
D3 对照品
D1 对照品
图 1　对照品 UV图谱
可以得出三个木脂素苷的最大吸收峰在 206nm
左右并且 275nm 处有一宽峰 ,因 206nm 靠近末端吸
收 ,而 275nm 处是一宽峰且峰面积较小 ,故选定峰面
积较大且受末端吸收影响较小的 220nm 作为测定波
长。
(2)样品分析 。取贵阳(2007年 3 月)、遵义 、兴
义 、都匀 、安顺 、云南 、广西 7个地区和贵阳地区 11个
月份样品 ,按“2.3供试品溶液的制备”制备供试品溶
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液 ,精密吸取供试品溶液 20μl , 注入高效液相色谱
仪 ,按“2.1色谱条件”测定样品 ,按峰面积计算木脂
素苷 D2 、D3 含量 。从图 2中可看出 , D1 在样品中含
量很低。
对照品
　
贵阳样品(2007 年 3 月)
图 2　对照品和样品 HPLC色谱图
(3)11个不同月份木脂素苷 D 2 、D3 含量比较。
由图 3显示 ,2006 年 10月和 2007年 3 月的木脂素
苷 D2 、D 3含量高于其他月份 ,这与植物的生长周期
相符 。
图 3　不同月份木脂素苷 D2 、D3 含量
注:1 ～ 5 表示贵阳样品采集的时间依次为 2006 年 8 ～
12 月 , 6 ～ 9表示时间为 2007 年 1～ 4 月 , 13 ～ 14 表示时间为
2007 年 8 月 、9 月。
(4)7个不同地区木脂素苷 D2 、D3 含量比较(图
4)。图4显示:遵义样品D2 含量最高 ,而广西几乎不
含 D2 ,但 D3含量最高 。
图 4　不同地区木脂素苷 D2 、D3 含量　
4　讨论
(1)提取条件的选择 。文献曾报道用 30%甲醇
作为提取溶剂 ,本试验比较了甲醇 ,75%乙醇 ,30%甲
醇三种溶剂 ,证实 30%甲醇较前两者提取效率高。
本试验还比较了超声 30min 与水浴回流 2h 两种提
取方法 ,得出水浴回流优于超声提取。
(2)分离条件的选择。本试验选择了 Kromasil
C18(0.46cm ×25cm , 5μm , E25864), Hypersil C18
(0.4cm ×25cm , 5μm , 2104268), Ag lient Hype rsil
ODS (0.46cm×25cm , 5μm , lot 4814)三种色谱柱 ,
及 0.4%醋酸 、0.1%磷酸 、0.1%TFA 三种酸以及各
种比例作流动相进行等度洗脱和梯度洗脱试验 ,结果
表明 Kromasi l C18 (0.46cm×25cm , 5μm),流动相
为甲醇-乙腈-0.1% TFA (25:5:70);检测波长
220nm ,流速 0.7ml/min ,柱温为 25℃,能使 D1 、D2 、
D3 完全达到基线分离 。
(3)文献曾报道 D1 、D2 、D4 易获得并测定了上述
三种对照品含量 ,但作者从贵阳 2006 年 8 月滇白珠
根茎中仅分离得到 D 1 、D2 、D3 ,并且发现 17个样品中
D1 含量都极少 ,难于定量 ,故在重现性试验及稳定性
试验中未涉及 。
(4)本试验比较了贵阳 2007年 3 月样品的根 ,
茎 、叶三部分木脂素苷 D2 、D3 含量 ,发现根与茎的含
量相当 ,但叶含量几乎没有。
参考文献:
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生出版社 , 1977:1879.
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(责任编辑:王尚勇)
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