全 文 ：北方园艺２０１６（１８）：１０３～１０７ ·生物技术·
第一作者简介：陈东亮（１９８４－），男，河北邯郸人，博士，助理研究
员，研究方向为花卉分子育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｌｃｈｅｎ１９８４＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：黄丛林（１９６９－），男，四川仁寿人，博士，研究员，现主要
从事花卉育种与产业化关键技术等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｏｎｇｌｉｎｈｕａｎｇ
＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ．
基金项目：北 京 市 科 委 资 助 项 目 （Ｄ１６１１００００１９１６００４，
Ｚ１５１１００００１０１５００７）；北京市农林科学院创新资助基金资助项目
（ＫＪＣＸ２０１４０１０９，ＫＪＣＸ２０１４０２０２）；北京市农林科学院科技创新团队
基金资助项目（ＪＮＫＳＴ２０１６１０）。
收稿日期：２０１６－０５－０５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１８０２５
甘菊ＣｌＣＯＬ５ａ基因的克隆与表达分析
陈 东 亮１，２，罗 昌１，２，程 曦１，２，黄 丛 林１，２
（１．北京市农林科学院 北京农业生物技术研究中心，北京１０００９７；
２．农业基因资源与生物技术北京市重点实验室，北京１０００９７）
摘 要：以甘菊为试材，采用基因克隆及生物信息学方法，克隆了甘菊ＣｌＣＯＬ５ａ基因并对其
进行生物信息学分析及表达分析。结果表明：该基因共编码３４７个氨基酸，编码序列中含有２个
保守的Ｂ－Ｂｏｘ结构域和１个ＣＣＴ结构域，属于ＣＯ家族的Ｉ类基因。ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔｐ分析与进化树
分析均显示，该基因编码产物与拟南芥ＣＯ家族中ＡｔＣＯＬ５相似性最高，故将该基因命名为
ＣｌＣＯＬ５ａ。实时定量分析显示，ＣｌＣＯＬ５ａ为组成型表达，且在叶中表达量最高。在花芽膨大的过
程中，ＣｌＣＯＬ５ａ基因的表达逐渐升高，并在露色时达到最大值，之后逐渐降低，表明ＣｌＣＯＬ５ａ在甘
菊开花过程中可能发挥着重要功能。
关键词：菊花；Ｃｏｎｓｔａｎｓ ｌｉｋｅ基因；开花调控；表达分析
中图分类号：Ｓ ６８２．１＋１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１６）１８－０１０３－０５
菊花是我国传统的十大名花之一，也是当前世界四
大鲜切花之一。除具有极高的观赏价值，菊花还具有茶
用、食用、药用等经济价值。花是植物最复杂的器官，也
是菊花最主要的经济器官。植物开花是一个极其复杂
的过程，在模式植物拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）中的
研究表明，植物开花主要存在４种调控途径：光周期途
径（ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ ｐａｔｈｗａｙ）、春 化 途 径 （ｖｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ
ｐａｔｈｗａｙ）、赤霉素途径（ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ ｐａｔｈｗａｙ）和自主途径
（ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ ｐａｔｈｗａｙ）［１］，４种途径都涉及复杂的、相互
交错的基因表达和调控网络，其中光周期途径是最重要
也是机理研究最清楚的一条调控途径［２］。研究表明，在
光周期调控途径中，Ｃｏｎｓｔａｎｓ（ＣＯ）类基因发挥着非常重
要的作用，其能够接收节律钟信号，直接调控开花基因
ＦＬＯＷＥＲＩＮＧ ＬＯＣＵＳ Ｔ（ＦＴ）的表达，启动植物的开花
进程［３］。
ＣＯ家族为多基因家族，目前从模式植物拟南芥中
共分离到１７个ＣＯ家族基因，水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）中的
ＣＯ家族成员则共有１６个［４］。根据蛋白结构特征，
ＲＯＢＳＯＮ等［５］将ＣＯ家族蛋白分为３类，Ⅰ类蛋白含有２
个Ｂ－Ｂｏｘ结构域和１个ＣＣＴ结构域；Ⅱ类蛋白含有１个
Ｂ－Ｂｏｘ结构域和１个ＣＣＴ结构域，Ⅲ类蛋白则含有１个
Ｂ－Ｂｏｘ和１个高度异化的ＣＣＴ结构域，每个大类又可根
据差异进一步分为若干亚类。在众多的ＣＯ家族蛋白中，
只有少数的功能得到研究，大部分成员功能尚不清楚。
菊花是典型的短日照植物，光周期在菊花开花过程
中扮演着非常重要的调控作用。甘菊是栽培菊花的近
源野生种（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｌａｖａｎｄｕｌｉｆｏｌｉｕｍ），由于其二
倍体特性，常被当做菊属植物研究的模式材料。该研究
从甘菊叶片中克隆得到１条ＣＯ家族Ｉ类基因，并利用
实时定量ＰＣＲ技术检测了其在甘菊不同组织和不同时
期花器官中的表达情况，以期为进一步揭示菊花花发育
调控的分子机理提供基础材料。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
以北京市农林科学院生物中心北郎中菊花种质资
源圃保存的甘菊（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｌａｖａｎｄｕｌｉｆｏｌｉｕｍ）无性
系为试材。２０１５年４、５月取甘菊脚芽进行扦插，生根后
栽植于直径２０ｃｍ塑料花盆中（基质蛭石∶草炭∶园土＝
１∶２∶１），每盆３株。于塑料大棚正常培养至自然开花，
３０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（１８）：１０３～１０７
将花芽至完全开花的花朵划分为５个阶段（图１），依次
为Ⅰ小花蕾期（花蕾较小，鳞状包片完全包裹）、Ⅱ大花蕾期
（花蕾较大，鳞状苞片顶部打开），Ⅲ花胎期（花蕾刚开始
露色）、Ⅳ半开期（舌状花开放，管状花刚开始或即将开始
散粉）、Ⅴ盛开期（管状花全部开放，花粉完全散尽），以及
甘菊处于盛花期的根、茎、叶、舌状花和管状花等共１０个
样本，每个样本设置３个生物学重复，液氮速冻后，保存
于－８０℃备用。
图１ 不同时期花与花蕾取样标准
Ｆｉｇ．１ Ｓａｍｐｌｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ ｂｕｄ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｅｒｉｏｄｓ
１．２ 试验方法
１．２．１ ＣｌＣＯＬ５ａ基因的克隆 利用ＴＩＡＮＧＥＮ新型植
物基因组提取试剂盒提取甘菊叶片ＤＮＡ。利用ＴａＫａＲａ
ｍｉｎｉ Ｋｉｔ试剂盒提取提不同样品的总ＲＮＡ，Ｐｒｏｍｅｇａ公
司反转录试剂盒制备ｃＤＮＡ。根据课题组转录组测序获
得的Ｃｏｎｓｔａｎｓ（ＣＯ）基因同源序列设计ＯＲＦ扩增引物，
上游引物为ＣＯＬ５－Ｆ：５′－ＡＴＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＡＣＴＧＡＴＧ －
３′，下游引物为ＣＯＬ５－Ｒ：５′－ＴＣＡＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＡＣＡＡ－
ＣＡ－３′。分别以甘菊ｃＤＮＡ和甘菊ＤＮＡ为模板，利
用ＰｒｉｍｅｒＳＴＡＲ ＨＳ高保真酶（ＴａＫａＲａ）进行ＰＣＲ扩
增，产物用１％琼脂糖凝胶电泳检测后，目的片段回收
并连接于克隆载体ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），热
击转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态（全式金），阳性克隆经
酶切检测后，送生工生物工程（上海）股份有限公司进
行测序。
１．２．２ 生物信息学分析 利用ＤＮＡＳＴＡＲ ５．０１软件对
序列进行简单分析。Ｍｏｔｉｆ Ｓｃａｎ在线软件分析蛋白功能
结构域。利用ＭＥＧＡ ４．０软件构建基于同源蛋白序列
的系统进化树。
１．２．３ 实时定量表达分析 根据基因序列设计实时定量
ＰＣＲ引物，ＣｌＣＯＬ５ａ－Ｆ：５′－ＴＣＣＡＧＴＴＡＴＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡ－３′，
ＣｌＣＯＬ５ａ－Ｒ：５′－ＴＧＴＴＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴＡＣＣＣＴ－３′。分别
以甘菊根、茎、叶以及不同时期的花蕾及花等ｃＤＮＡ为
模板，并以甘菊ＭＴＰ基因为内参［６］，利用ＡＢＩ７３００ＰＣＲ
仪和ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ（ＴａＫａＲａ）试剂盒进行实时
定量ＰＣＲ分析。ＰＣＲ扩增体系：２×ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ
Ｔａｑ １０μＬ，引物ＣｌＣＯＬ５ａ－Ｆ，ＣｌＣＯＬ５ａ－Ｒ各０．４μＬ
（１０μｍｏｌ·Ｌ
－１），模板ｃＤＮＡ ２μＬ用水补充至２０μＬ。
采用标准２步法反应程序：９５℃预变性３０ｓ；９５℃５ｓ，
６０℃３４ｓ，共４５个循环。每个样品设置３次重复，数据
采用２－ΔΔＣｔ法进行分析［７］。
２ 结果与分析
２．１ ＣｌＣＯＬ５ａ基因的克隆
以甘菊叶片ｃＤＮＡ为模板，利用引物ＣＯＬ５－Ｆ和
ＣＯＬ５－Ｒ扩增得到一个大小与预期一致的条带。经回收
测序，对测序结果分析显示，该序列与转录组拼接的模
板序列仅有２个碱基的差异，表明克隆到的序列为预期
的ＣＯ同源序列。该序列含有完整开放阅读框（ｏｐｅｎ
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），总长１ ０４４ｂｐ，共编码３４７个氨基
酸。经ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔｐ分析，其编码产物与其它植物的
ＣＯＬ５蛋白相似性最高，但与已经报道的甘菊ＣｌＣＯＬ５
（ＮＣＢＩ及原文献均未能获得相关序列信息）在长度上有
明显区别［８］，故将该试验获得的基因命名为ＣｌＣＯＬ５ａ。
ＣｌＣＯＬ５ａＯＲＦ 序列在 ＮＣＢＩ进行注册，收录号为
ＫＵ１８０１８８。ＣｌＣＯＬ５ａ基因序列及其推导的氨基酸序列
如图２所示。以ＤＮＡ为模板克隆获得了其对应的
ＤＮＡ序列，经与ｃＤＮＡ ＯＲＦ序列比对发现，其在编码
框中部含有一个１６２ｂｐ的内含子（图３），这与拟南芥
ＡｔＣＯＬ５基因的８８ｂｐ的内含子多了将近１倍。
２．２ 生物信息学分析
ＤＮＡＳＴＡＲ软件分析表明，ＣｌＣＯＬ５ａ蛋白预测的分
子量为３８．５６ｋＤａ，等电点为７．５０２，含有强碱性氨基酸
４２个，强酸性氨基酸４１个，疏水性氨基酸１１３个，极性
氨基酸９８个。Ｍｏｔｉｆ Ｓｃａｎ结构域分析显示，该蛋白含有
２个高度保守的Ｂ－Ｂｏｘ结构域和１个ＣＣＴ结构域（图２、
３），符合Ｉ类蛋白特征，进一步表明ＣｌＣＯＬ５ａ为ＣＯ家族
中的Ｉ类基因。
基于同源蛋白，构建了ＣｌＣＯＬ５ａ蛋白与其它植物中
ＣＯＬ５蛋白以及拟南芥１７个ＣＯ家族蛋白的系统进化
树。由图４可知，参与建树的所有其它植物ＣＯＬ５都最
先与拟南芥中的ＣＯＬ５聚合在一起，进一步证明该试验
获得的基因序列为ＣＯＬ５基因。在参与建树的ＣＯＬ５序
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北方园艺２０１６（１８）：１０３～１０７ ·生物技术·
注：下划线标注的是２个Ｂ－Ｂｏｘ结构域，双下划线标注的是ＣＣＴ结构域。
Ｎｏｔｅ：Ｔｗｏ Ｂ－Ｂｏｘ ｄｏｍａｉｎ ａｒｅ ｕｎｄｅｒｌｉｎｅｄ；ＣＣＴ ｄｏｍａｉｎ ｉｓ ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ．
图２ ＣｌＣＯＬ５ａ基因编码序列及推导的氨基酸序列
Ｆｉｇ．２ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＣｌＣＯＬ５ａ
图３ ＣｌＣＯＬ５ａＤＮＡ、ｍＲＮＡ及蛋白结构
Ｆｉｇ．３ ＤＮＡ，ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＣｌＣＯＬ５ａ
列中，甘菊与菊亚纲植物首先聚合在一起，再与十字花
科等其它植物聚在一起，这与分类学的描述基本一致，
表明ＣＯＬ５基因多态性可用于植物进化与分类学研究
的参考。
２．３ 表达分析
以甘菊ＭＴＰ为内参基因，对甘菊不同组织及不同
时期花芽和花中ＣｌＣＯＬ５ａ基因的表达进行了分析。由
图５可知，ＣｌＣＯＬ５ａ在叶片中的表达量最高，远远高于
其它组织，这与其它植物中的Ｉ类ＣＯ基因的表达模式
类似。同时，对不同发育时期花芽和花中ＣｌＣＯＬ５ａ的表
达进行了分析，随着花芽的膨大，ＣｌＣＯＬ５ａ表达逐渐增
加，在花苞开始露色时表达达到最高峰，之后随着花的
开放逐渐降低，这表明ＣｌＣＯＬ５ａ可能在甘菊开花过程中
的色素合成、花粉发育等某个生理过程中发挥着功能。
图４ 基于ＣＯ蛋白的系统进化树
Ｆｉｇ．４ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＯ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
５０１
·生物技术· 北方园艺２０１６（１８）：１０３～１０７
图５ ＣｌＣＯＬ５ａ在不同组织和不同时期花芽中的表达
Ｆｉｇ．５ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＣｌＣＯＬ５ａｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ，ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ ｂｕｄ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｅｒｉｏｄｓ
３ 结论与讨论
ＣＯ基因是高等植物中普遍存在的一类基因。大量
研究表明，ＣＯ类基因在感受节律钟变化、调控开花时间
的过程中发挥重要作用［９－１２］。除此之外，部分ＣＯ家族
基因还被证明参与了侧根形成、分枝特性、果实成熟等
发育进程［１３－１５］以及植物的非生物胁迫抗逆反应等［１６］。
菊花中ＣＯ家族基因的研究起步较晚。２０１１年，田
素波等［１７］首次从菊属植物中克隆得到一个ＣＯ家族Ｉ类
基因，该基因与其它植物Ｉ基因类似，受短日照诱导表
达。之后，ＦＵ等［８］从甘菊中克隆了１１条ＣＯ类基因，其
中Ｉ类ＣＯ基因５个，ＩＩ类４个，ＩＩＩ类２个。通过进一步
的表达分析和在模式植物拟南芥中的过表达，证明了甘
菊Ｉ类基因ＣｌＣＯＬ５在短日照下可以促进开花［８］。
该研究中获得的ＣｌＣＯＬ５ａ基因的编码蛋白含有２
个Ｂ－Ｂｏｘ和１个ＣＣＴ结构域，属于ＣＯ家族Ｉ类基因。在
拟南芥１７个ＣＯ家族成员中，ＣｌＣＯＬ５ａ蛋白与ＡｔＣＯＬ５
相似性最高，而与报道的ＣｌＣＯＬ５差异明显，故将该基因
命名为ＣｌＣＯＬ５ａ。ＣｌＣＯＬ５ａ与ＦＵ等［８］报道的菊花ＣＯ
蛋白在氨基酸链长度和ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ的Ｅ－ｖａｌｕｅ值等特征
上都存在一定差异，遗憾的是由于无法从原论文或公共
数据库获得相关序列，因此无法将序列进行直接比较。
与其它Ｉ类ＣＯ基因类似，ＣｌＣＯＬ５ａ也为组成型
表达，并在叶片中表达量最高，表明其可能与拟南芥
ＡｔＣＯＬ５等具有类似的在叶中表达，诱导ＦＴ表达，进一
步引起开花的功能。该试验中，在甘菊开放初始，ＣＯ在
花中的表达是急剧增加的，并在露色时达到最大值，之
后随着花朵的开放，其表达逐渐降低，这表明ＣｌＣＯｌＬ５ａ
基因可能在甘菊开花过程中，对花瓣色素形成、花粉发
育等过程中发挥着一定的作用。
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ａｎ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｔｅｇｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌ，
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６０１
北方园艺２０１６（１８）：１０７～１１０ ·生物技术·
第一作者简介：宋婧（１９９５－），女，本科，研究方向为生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：
１３４４３６６０３５＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：周嘉裕（１９７６－），女，博士，副教授，研究方向为药用植物
分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｐｉｎｅｚｈｏｕ＠ｈｏｍｅ．ｓｗｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１３７１２３２，３１５００２７６）；成
都市科技技术研发资助项目（２０１５－ＨＭ０１－０００５１－ＳＦ）；国家级大学
生创新创业训练计划资助项目（２０１５１０６１３０６３）。
收稿日期：２０１６－０４－２２
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６１８０２６
川芎咖啡酸－３－Ｏ－甲基转移酶的原核表达与条件优化
宋 婧，朱 建 全，张 泉 宝，张 赶，周 嘉 裕
（西南交通大学 生命科学与工程学院，四川 成都６１００３１）
摘 要：以川芎咖啡酸－３－Ｏ－甲基转移酶基因（ＬＣＣＯＭＴ）为表达对象，将含有６＊Ｈｉｓ标签的
ＬＣＣＯＭＴ基因连接ｐＥＴ２８ａ表达载体后转化大肠杆菌ＢＬ２１，采用原核表达的方法，优化了
ＬＣＣＯＭＴ基因的表达条件。结果表明：当诱导时间为４ｈ，ＩＰＴＧ终浓度为２．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，诱导
温度为３７℃时，重组ＬＣＣＯＭＴ蛋白的表达量达到最大。溶解性检测结果表明，ＬＣＣＯＭＴ重组蛋
白以可溶性蛋白的形式存在，占总蛋白的９％，该试验可为ＬＣＣＯＭＴ的大规模表达纯化奠定基础。
关键词：川芎；咖啡酸－３－Ｏ－甲基转移酶；原核表达；条件优化
中图分类号：Ｑ ９４６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１６）１８－０１０７－０４
基于植物体内阿魏酸的合成途径，已获知咖啡酸－３－
Ｏ－甲基转移酶（ｃａｆｅｉｃ ａｃｉｄ ３－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，
ＣＯＭＴ）能够催化咖啡酸和以Ｓ－腺苷甲硫氨酸为底物合
成阿魏酸［１－３］。川芎（Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ Ｈｏｒｔ）是四
川省著名道地药材，其根茎是传统中药［４－６］。阿魏酸是
川芎的主要活性成分［７－８］。因其具有独特的药理作用和
生物活性，且毒性较低，在医药、保健品、化妆品原料和
食品添加剂等领域有极其广泛的应用前景。目前阿魏
酸可通过提取、化学合成、水解及微生物转化等４类方
法获得。提取法与化学合成法均会使用大量的化学溶
剂，污染环境；水解法需要首先提取获得阿魏酸酯，再利
用水解制备阿魏酸，也会使用大量的化学溶剂，污染环
境；微生物发酵法由于体系成分复杂因而分离纯化成本
高。与前几种方法相比较，酶转化法具有环境友好、成
本低、产品安全性高等特点。课题组在前期研究中，已
从川芎根茎中克隆获得了川芎ＣＯＭＴ基因的全长ｃＤＮＡ
序列（ＬＣＣＯＭＴ，ＧｅｎＢａｎｋ登录号Ｎｏ．ＫＲ１０６２０６），构建
了重组表达载体ｐＥＴ２８ａ－ＬＣＣＯＭＴ。为提高ｐＥＴ２８ａ－
ＬＣＣＯＭＴ在大肠杆菌ＢＬ２１的表达水平，该研究参考有
关文献，研究了诱导温度、起始ＯＤ６００值、ＩＰＴＧ诱导浓度
Ｃｌｏｎｅ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣｌＣＯＬ５ａｉｎ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｌａｖａｎｄｕｌｉｆｏｌｉｕｍ
ＣＨＥＮ Ｄｏｎｇｌｉａｎｇ１，２，ＬＵＯ Ｃｈａｎｇ１，２，ＣＨＥＮＧ Ｘｉ １，２，ＨＵＡＮＧ Ｃｏｎｇｌｉｎ１，２
（１．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｇｒｏ－ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７；２．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋｅｙ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍａｓ ｔｅｓｔ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ＣｌＣＯＬ５ａｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ
ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ３４７ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｗｏ Ｂ－Ｂｏｘ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ ｏｎｅ ＣＣＴ ｄｏｍａｉｎ，ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ
ｉｔ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ＣＯ ｆａｍｉｌｙ ｇｒｏｕｐ Ｉ．Ｂｏｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔｐ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＯ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｉｔ ｗａｓ ｍｏｓｔｌｙ ｃｌｏｓｅｄ ｔｏ ＡｔＣＯＬ５ ｇｅｎｅ ｔｈａｎ ｏｔｈｅｒ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｍｉｌｙ，ｓｏ ｉｔ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ａｓ ＣｌＣＯＬ５ａ．Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ
ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＣｌＣＯＬ５ａｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅｓ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｌｅａｆ．Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ
ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣｌＣＯＬ５ａｇｅｎｅ ｗａｓ ｇｒａｄｕａｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｌｅｖｅｌ ａｔ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｓｔａｇｅ，
ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｇｒａｄｕａｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＣｌＣＯＬ５ａｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｆｌｏｗｅｒ ｉｎ
Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ；Ｃｏｎｓｔａｎｓ ｌｉｋｅ ｇｅｎｅ；ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ；ｅｘｐｒｅｓｓ ａｎａｌｙｓｉｓ
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