全 文 ：收稿日期:2013-08-03; 修订日期:2014-02-09
基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金( No． 2012211A024)
作者简介:韩松林( 1984-) ，男( 汉族) ，新疆阿克苏人，阿克苏职业技术学
院讲师，硕士学位，主要从事分析测试技术与新药研发工作．
* 通讯作者简介:李新霞( 1968-) ，女( 汉族) ，新疆乌鲁木齐人，新疆医科
大学教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事分析测试技术与新药研
发工作．
新疆 2 种洋甘菊中 5 种化合物的微乳薄层色谱鉴别
韩松林1，2，李新霞1* ，赵东升1，3，何晓文1，杨 梅1，耿 晶1
(1．新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830054;
2．阿克苏职业技术学院，新疆 阿克苏 843000;
3．比尔兄弟生物技术有限公司，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 建立以聚酰胺薄膜为固定相，微乳液为展开剂，同时鉴别 2 种洋甘菊中 5 种化合物木犀草素、芹菜素、木犀草
素 － 7 －葡萄糖苷、芹苷元 － 7 －葡萄糖苷、7 －甲氧基香豆素的方法。方法 以 SDS －正丁醇 －正庚烷 －水微乳液为展开
剂，并配以甲酸为有机改性剂，以 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯、聚乙二醇 400 甲醇溶液为显色剂，考察了不同微乳液对两
种洋甘菊甲醇提取物分离度的影响，通过调节展开剂的组成，寻找出最佳的薄层分离条件并分离鉴别了母菊、罗马洋甘
菊。结果 微乳液 －甲酸( 9∶ 2) 为适宜的展开剂，其中微乳液 SDS －正丁醇 －正庚烷质量比为 0． 27∶ 0． 63∶ 0． 10、含水
量 75%。与硅胶薄层比较，分离效果明显提高。结论 建立了一种分离鉴别母菊、罗马洋甘菊中木犀草素、芹菜素、木犀
草素 － 7 －葡萄糖苷、芹甙元 － 7 －葡萄糖苷、7 －甲氧基香豆素 5 种化合物的方法。方法简便、快速和准确。
关键词:母菊; 罗马洋甘菊; 微乳薄层色谱; 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯; 聚乙二醇 400
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 07． 043
中图分类号:Ｒ282． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 07-1643-03
Separation and identification of five compounds from two Species of Chamomiles in Xin-
jiang by microemulsion TLC
HAN Song-lin1，2，LI Xin-xia1 * ，ZHAO Dong-sheng1，3，HE Xiao-wen1，YANG Mei1，GENG Jing1
( 1． Xinjiang Medical University，Xinjiang Urumqi 830054，China; 2． AKSu Vocational And Technical College，
AKSu Xinjiang 843000，China; 3． BILL BＲOTHEＲ Biotechnology Co．，Ltd，Xinjiang Urumqi 830011，China)
Abstract: Objective To investigate the application of microemulsion TLC to separation and identification of luteolin，apigenin，
galuteolin，apigenin － 7 － glucoside，7 － methoxycoumarin in two species of Chamomiles based on polyamide film as stationary
phase．Methods SDS － n － butyl alcohol － n － heptane － aqueous microemulsion as the development in combination with methyl
acid as the modifier and diphenylboric acid aminoethyl ester，macrogol 400 as spray reagent，the influence of the change in compo-
nents of microemulsion on the resolution was examined to search for the optimal separation condition of methanolic extracts from
Chamomile and Ｒoman chamomile in Xinjiang． Ｒesults The best mobile phase was the microemulsion containing SDS － n － butyl
alcohol － n － heptane( 0． 27∶ 0． 63∶ 0． 1) ，75% water － methyl acid ( 9∶ 2) ． As compared with conventional TLC，resolution of
microemulsion TLC improved markedly． Conclusion Microemulsion TLC is an efficient，simple and new method for separating and
identifying luteolin，apigenin，galuteolin，apigenin － 7 － glucoside，7 － methoxycoumarin in two Species of Chamomiles．
Key words: Chamomile; Ｒoman chamomile; Microemulsion TLC; Diphenylboric acid aminoethyl ester; Macrogol 400
新疆有两种常用洋甘菊，一种是德国洋甘菊，即母菊，学名:
Matricaria chamomilla L．［1］;一种是罗马洋甘菊，学名:Anthemis
nobile L． 。两种洋甘菊都具有药用价值，母菊具有消炎，抑制真
菌、解痉等作用［2］;罗马洋甘菊具有抑制恶心、呕吐、消化不良、
食欲不振等作用［3］。在欧洲洋甘菊有很悠久的使用历史，1882
年母菊就收入德国药典［4］。美国药典收载的品种为母菊，包括
薄层鉴别，HPLC法、GC法含量测定。但欧盟药典收载的品种是
罗马洋甘菊，仅包括薄层鉴别。母菊在维吾尔医中是常用药材，
虽然国家药品标准维吾尔药分册收载了母菊，但只有显微鉴别，
没有薄层鉴别和含量测定，现已被列为国家药品标准提高品种。
国内外同时研究两种洋甘菊的化学成分比较少。本课题组在前
期研究中对两种洋甘菊的黄酮提取物、挥发油提取物的抗氧化活
性进行了研究［5］，且两种洋甘菊微乳薄层色谱方面的研究尚未
见报道。本实验应用微乳展开系统对 2 种洋甘菊中 5 种化合物
进行了薄层色谱研究，探讨了其微乳薄层色谱行为。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 半自动点样仪(CAMAG LINOMAT 5)，薄层色谱数码
成像系统(CAMAG ＲEPＲOSTAＲ 3)，薄层板加热仪(CAMAG TLC
PLATEHEATEＲⅢ)，100μl微量进样针;超声波清洗仪(500 W，40
KHz，昆山市超声仪器有限公司);双槽展开缸(20cm × 10cm)，分
析天平(Mettler － Teledo，AB135 － S，d = 0． 01 /0． 1mg);聚酰胺薄
膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)。
1． 2 试药 木犀草素(成都普瑞科技有限公司，L120321)，芹菜
素(成都普瑞科技有限公司，A110605)，木犀草素 － 7 －葡萄糖苷
(中国药品生物制品检定所，批号:111720 － 200905)，芹苷元 － 7
－葡萄糖苷(成都普瑞科技有限公司，A110222)，7 －甲氧基香豆
素(SAFC，批号:11409PC);十二烷基硫酸钠(SDS，纯度 ＞
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期
99． 0%，BIO BASIC INC)，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB，天津市
福晨化学试剂厂，批号 20100322)，氯化铝(上海金山县兴塔化工
厂)，2 － 氨基乙基联苯基硼酸酯(SIGMA － ALDＲICH，批号:
BCBF5015V)，聚乙二醇 400(天津市百世化工有限公司);正庚烷
(天津福晨化学试剂厂)，正丁醇(天津市富宇精细化工有限公
司)，正辛烷(天津市福晨化学试剂厂)，正己烷(天津市致远化学
试剂有限公司)，乙酸乙酯(天津市富宇精细化工有限公司)，冰
乙酸(天津福晨化学试剂厂)，甲酸(天津市登科化学试剂有限公
司)，无水乙醇(天津市富宇精细化工有限公司)，甲醇(天津市盛
奥化学试剂有限公司)，均为分析纯。
母菊，采于新疆策勒;罗马洋甘菊，采于新疆伊犁。
2 方法与结果
2． 1 显色剂溶液的制备［6］ 取 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯、聚乙
二醇 400，分别加甲醇制成每毫升含 10mg的 2 －氨基乙基联苯基
硼酸酯甲醇溶液，每毫升含 50mg的聚乙二醇 400 甲醇溶液。
2． 2 对照品溶液的制备 取木犀草素对照品、芹菜素对照品、木
犀草素 － 7 －葡萄糖苷对照品、芹苷元 － 7 －葡萄糖苷对照品、7 －
甲氧基香豆素对照品，加甲醇制成浓度分别为 0． 05 mg·ml －1，
0． 25 mg·ml －1，0． 01 mg·ml －1，0． 25 mg·ml －1，0． 05 mg·ml －1
的混合溶液，作为对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 取 2 种洋甘菊花粗粉各 0． 5g，分别置具
塞锥形瓶中，加甲醇 10ml，超声处理 5min(60℃水浴)，放至室温，
滤过，取滤液作为供试品溶液。
2． 4 微乳展开体系的选择
2． 4． 1 微乳液中含水量的考察与结果 在 SDS －正丁醇 －正庚
烷质量比为 0． 27∶ 0． 63∶ 0． 10 保持不变的条件下［7］，改变水量，
配制系列微乳液，搅拌溶解，混匀，放置 24 h即可。6 种微乳液的
成分配比及结构见表 1。以上述各微乳液 －甲酸(9∶ 2)为展开
剂，考察含水量对 2 种洋甘菊中 5 种化合物展开效果的影响。不
同含水量微乳液的薄层展开结果见表 2。
表 1 微乳液的成分配比
含水量
十二烷基
硫酸钠
(表面活性剂)/g
正丁醇
(助表面
活性剂)/g
正庚烷
(油)/g
水 /g 微乳结构
15% 5． 4 12． 6 2． 0 3． 6 W/O型
30% 5． 4 12． 6 2． 0 8． 6 W/O型
45% 5． 4 12． 6 2． 0 16． 4 W/O － O /W型
60% 5． 4 12． 6 2． 0 30． 0 W/O － O /W型
75% 5． 4 12． 6 2． 0 60． 0 O /W型
90% 2． 7 6． 3 1． 0 90． 0 O /W型
表 2 不同含水量微乳液薄层展开结果
含水量
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
15% 7 8 模糊、拖尾 模糊、拖尾
30% 7 8 模糊、拖尾 模糊、拖尾
45% 7 8 模糊、拖尾 模糊、拖尾
60% 8 8 清晰、拖尾 清晰、拖尾
75% 10 8 清晰 清晰
90% 7 6 模糊、严重拖尾 模糊、严重拖尾
根据表 2 各斑点数目、斑点清晰度，选择含水量 75%的 O/W
型微乳液作为展开剂。
2． 4． 2 微乳液中阳离子、阴离子表面活性剂的考察与结果 以
“2． 4． 1”项含水量 75%微乳液 －甲酸(9∶ 2)为展开剂，将阴离子
表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)替换为阳离子表面活性剂十
六烷基三甲基溴化铵(CATB)，考察表面活性剂对 2 种洋甘菊中
5 种化合物展开效果的影响。不同表面活性剂微乳液的薄层展
开结果见表 3。
表 3 不同表面活性剂微乳液薄层展开结果
表明活性剂
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
阳离子表面
活性剂 CTAB 8 8 清晰、稍微拖尾 清晰、稍微拖尾
阴离子表面
活性剂 SDS 10 8 清晰 清晰
根据表 3 各斑点数目、斑点清晰度，选择阴离子表面活性剂
SDS微乳液作为展开剂。
2． 4． 3 微乳液中不同油相的考察与结果 以“2． 4． 1”项含水量
75%微乳液 －甲酸(9 ∶ 2)为展开剂，分别考察乙酸乙酯、正庚
烷、正己烷、正辛烷 4 种油相对 2 种洋甘菊中 5 种化合物展开效
果的影响。不同油相微乳液的薄层展开结果见表 4。
表 4 不同油相微乳液薄层展开结果
油相
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
乙酸乙酯 10 7 清晰，稍微模糊 清晰，稍微模糊
正庚烷 10 8 清晰 清晰
正己烷 10 8 清晰，稍微模糊 清晰，稍微模糊
正辛烷 10 8 清晰，稍微模糊 清晰，稍微模糊
根据图表 4 各斑点数目、斑点清晰度，选择正庚烷微乳液作为
展开剂。
2． 4． 4 微乳液中 SDS 用量的考察与结果 以 2． 4． 1项含水量
75%微乳液 －甲酸(9∶ 2)为展开剂，分别取不同量的十二烷基
硫酸钠 (SDS)进行微乳薄层层析，测定不同 SDS 量对 2 种洋甘
菊中 5 种化合物展开效果的影响。不同 SDS 量微乳液的薄层展
开结果见表 5。
表 5 不同 SDS量微乳液薄层展开结果
SDS量 / s
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
3 9 7 模糊、拖尾 模糊、拖尾
4 10 7 模糊、拖尾 模糊、拖尾
5 9 6 模糊、拖尾 模糊、拖尾
5． 4 10 8 比较清晰 比较清晰
6 9 6 模糊、拖尾 模糊、拖尾
7 6 6 模糊、拖尾 模糊、拖尾
根据表 5 各斑点数目、斑点清晰度，选择 SDS 量 5． 4g 微乳液
作为展开剂。
2． 4． 5 微乳液中助表面活性剂种类的考察与结果 以“2． 4． 1”
项含水量 75%微乳液 －甲酸(9∶ 2)为展开剂，考察助表面活性
剂甲醇、乙醇、正丁醇对 2 种洋甘菊中 5 种化合物展开效果的影
响。不同助表面活性剂微乳液的薄层展开结果见表 6。
表 6 不同助表面活性剂微乳液薄层展开结果
助表面
活性剂
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
甲醇 7 8 模糊、拖尾 模糊、拖尾
乙醇 9 8 清晰 清晰
正丁醇 10 8 清晰 清晰
根据表 6 各斑点数目、斑点清晰度，选择助表面活性剂正丁醇
微乳液作为展开剂。
2． 4． 6 微乳液中正丁醇量的考察与结果 以“2． 4． 1”项含水量
75%微乳液 －甲酸(9∶ 2)为展开剂，考察不同量的正丁醇，对 2
种洋甘菊中 5 种化合物展开效果的影响。不同正丁醇量微乳液
的薄层展开结果见表 7。
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7
表 7 不同正丁醇量微乳液薄层展开结果
正丁醇量
/g
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
8 7 7 模糊、拖尾 模糊、拖尾
12． 6 10 8 清晰 清晰
16 9 6 模糊、拖尾 模糊、拖尾
20 8 7 模糊、拖尾 模糊、拖尾
根据表 7 各斑点数目、斑点清晰度，选择正丁醇量 12． 6g微乳
液作为展开剂。
2． 4． 7 微乳展开剂中甲酸量的考察与结果 分别以“2． 4． 1”项
含水量 75%O/W微乳 －甲酸 9∶ 0，9∶ 1，9∶ 2，9∶ 3 为展开剂，
考察不同甲酸量对 2 种洋甘菊中 5 种化合物展开效果的影响(图
1)。不同甲酸量微乳液的薄层展开结果见表 8。
图 1 最优展开条件的两种洋甘菊薄层色谱图
表 8 不同甲酸量微乳液薄层展开结果
甲酸量
斑点数目
母菊 罗马洋甘菊
清晰度
母菊 罗马洋甘菊
含水量 75%微乳:
甲酸 =9:0 6 8 模糊、分离度差 模糊、分离度差
含水量 75%微乳:
甲酸 =9∶ 1 9 8 清晰 清晰
含水量 75%微乳:
甲酸 =9∶ 2 10 8 清晰 清晰
含水量 75%微乳:
甲酸 =9∶ 3 10 8 清晰、拖尾 清晰、拖尾
根据图 1，表 8 各斑点数目、斑点清晰度和拖尾情况确定 75%
含水量 O/W微乳 －甲酸 9∶ 2 的展开条件优于 9∶ 0，9∶ 1 和 9∶
3，故选择 75%含水量 O/W微乳 －甲酸 = 9∶ 2 微乳液作为最优
展开条件。
3 讨论
两种洋甘菊甲醇提取物在微乳展开系统 75%含水量 O/W
微乳 －甲酸(9∶ 2)条件下，可使母菊、罗马洋甘菊甲醇提取物较
好分离，在该薄层色谱条件下斑点数目多，斑点清晰，拖尾少。微
乳薄层色谱法从母菊中分离得到 10 个斑点，从罗马洋甘菊中分
离得到 8 个斑点，与现有的对照品对照发现 2 种洋甘菊中均含有
木犀草素、芹菜素、木犀草素 － 7 －葡萄糖苷、芹甙元 － 7 －葡萄糖
苷、7 －甲氧基香豆素 5 种化合物。对斑点大小、斑点颜色深浅比
较发现，罗马洋甘菊中木犀草素、芹菜素斑点颜色较母菊深，2 种
洋甘菊中木犀草素 － 7 －葡萄糖苷斑点颜色深浅相似，母菊中芹
甙元 － 7 －葡萄糖苷、7 －甲氧基香豆素斑点颜色明显深于罗马洋
甘菊。其它化学成分有待进一步鉴定。
本实验在分析 2 种洋甘菊甲醇提取物薄层色谱过程中，考察
了欧洲药典中冰醋酸 －水 －正丁醇(17∶ 17∶ 66)展开系统［6］，
但 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯，聚乙二醇 400 显色后供试品中斑
点模糊，存在拖尾现象，分离度差;而采用微乳展开系统 75%含
水量 O/W微乳 －甲酸(9∶ 2)优化后，斑点清晰，分离效果较好。
本实验在分析 2 种洋甘菊甲醇提取物薄层色谱过程中，考察
了不同显色剂的影响，考察了国内常用黄酮显色剂氯化铝，以及
国外欧、美药典常用黄酮类显色剂 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯、
聚乙二醇 400 甲醇溶液，后者显色斑点数目多，斑点清晰。本实
验薄层色谱显色时，2 －氨基乙基联苯基硼酸酯、聚乙二醇 400 甲
醇溶液需现配现用，2 －氨基乙基联苯基硼酸酯对照品应储存在
零下 20℃冰箱中避免失效。在喷显色剂 2 －氨基乙基联苯基硼
酸酯、聚乙二醇 400 甲醇溶液时，先喷 2 －氨基乙基联苯基硼酸
酯甲醇溶液，至整个聚酰胺薄膜完全浸透后，晾 1min 左右，再喷
聚乙二醇 400 甲醇溶液，至整个聚酰胺薄膜再次浸透后，在薄层
板加热仪 100 ～ 105℃烘烤 2min 后再在紫外灯下检视，图像较清
晰。本研究中 2 －氨基乙基联苯基硼酸酯、聚乙二醇 400 甲醇溶
液显色剂对黄酮斑点的荧光有增强作用，检测灵敏度显著提高，
可检出的斑点数增多。
本实验在分析 2 种洋甘菊甲醇提取物薄层色谱过程中，发现
加甲酸后能明显改善 5 种化合物的分离度，但要注意微乳液在酸
性条件下不稳定，故甲酸须在展开时才加入到微乳液中。
参考文献:
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