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假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌抑菌活性的测定



全 文 :热带作物学报 2012, 33(6): 1089-1095
Chinese Journal of Tropical Crops
收稿日期: 2012-03-02 修回日期: 2012-06-04
基金项目: 国家科技支撑计划项目(No. 2007BAD48B04-001); 教育部留学回国人员科研启动费项目; 海南大学 “211工程” 建设项目。
作者简介: 古 鑫(1985年—), 男, 硕士研究生。 研究方向: 植物病理学、 植物源杀菌剂。 * 通讯作者: 范志伟, E-mail: fanweed@163.com。
假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树
白粉病菌抑菌活性的测定
古 鑫 1,2, 范志伟2*, 沈奕德 2, 李晓霞 2, 黄乔乔 2, 程汉亭 2, 刘丽珍 2, 韩佳宇 3
1 海南大学环境与植物保护学院, 海南海口 570228
2
中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室
海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室
海南省热带作物病虫害生物防治工程技术研究中心
海南儋州 571737
3 广西大学农学院, 广西南宁 530000
摘 要 为筛选防治橡胶树白粉病安全有效的植物源杀菌剂, 采用孢子萌发抑制法测定 22 种植物甲醇提取液对
橡胶树白粉病菌孢子的抑菌活性。 结果表明, 假臭草和九里香提取液浓度在 0.1 g/mL 时, 对橡胶树白粉病菌孢
子的萌发抑制率分别为 43.98%和 47.62%, 极显著优于其它植物和对照。 进一步测定假臭草和九里香提取液的
EC50和 EC75值, 以及其盆栽试验的防治效果与橡胶树叶片丙二醛(MDA)、 过氧化氢酶(CAT)、 超氧化物歧化酶
(SOD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。 结果表明, 假臭草和九里香对病原菌孢子的 EC50值分别为 0.26 g/mL 和
0.20 g/mL, EC75 值分别为 1.12 g/mL 和 0.99 g/mL。 假臭草和九里香提取液浓度在 EC75 值时 , 防病效果分别为
20.00%和 18.67%, 显著高于对照。 假臭草和九里香提取液处理后, 橡胶树叶片的 MDA 含量极显著低于对照,
CAT、 SOD 和 PAL 活性则显著或极显著高于对照。 由此可见, 假臭草和九里香提取液不仅能抑制病原菌的萌发
和生长, 而且能提高橡胶树的抗病性。
关键词 植物源杀菌剂; 橡胶树白粉病; 抑菌活性; 防病机理
中图分类号 S432.4 文献标识码 A
The Bioassay of Methanol Extracts from Eupatorium catarium and
Murraya paniculata on Inhibition of Oidium heveae
GU Xin1,2, FAN Zhiwei2, SHEN Yide2, LI Xiaoxia2, HUANG Qiaoqiao2
CHENG Hanting2, LIU Lizhen2, HAN Jiayu3
1 Environment and Plant Protection College, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China
2 Environment and Plant Protection Institute, CATAS / Key Laboratory of Integrated Pest Management on Tropical Grops, Ministry
of Agriculture / Hainan Key Laboratory for Monitoring and Control of Tropical AgriculturalPests / Hainan Engineering Research
Center for Biological Control of Tropical Crops Diseases and Insect Pests, Danzhou, Hainan 571737, China
3 College of Agriculture, Guangxi University, Nanning, Guangxi 530000, China
Abstract Rubber tree powdery mildew disease, caused by Oidium heveae, is one of the significant leaf diseases
in rubber trees. To find the botanical fungicide that could effectively control the disease, the spore germinating
inhibition method was used to determine the effect of methanol extracts from 22 plant species on antifungal
activity in this test. The results showed that extracts from Eupatorium catarium and Murraya paniculata in a
concentration of 0.1 g/mL inhibited the germination of the spore by 43.98% and 47.62%, respectively, which were
significantly more effective than those from other plants and the control. The EC50 and EC75 of methanol extracts
from E. catarium and M. paniculata had control effect on potted plant materials and the activities of MDA, CAT,
SOD, and PAL in rubber leaves after controlling the disease were further measured. The results showed that the
EC50 of extracts from E. catarium and M. paniculata was 0.26 g/mL and 0.20 g/mL, respectively, and the EC75 1.12 g/mL
and 0.99 g/mL, respectively. The control effects in pot experiment of the extracts from E. catarium and M.
paniculata in the concentration of EC75 was 20.00% and 18.67%, respectively, significantly higher than that of the
control. After treatment with the extracts from E. catarium and M. paniculata, the MAD content in leaves was
significantly lower, while the CAT, SOD, PAL contents were higher than the control. These results suggested that
the methanol extracts from E. catarium and M. paniculata could not only inhibit the germination and growth of the
pathogen, but also elevate the host disease resistance.
Key words Botanical fungicide; Rubber tree powdery mildew; Anti-fungal activity; Mechanism of disease control
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2012.06.023
第 33 卷热 带 作 物 学 报
橡胶树的种植模式单一, 品种抗病性弱, 造成
一些病害大面积流行发生并逐年扩大, 发病趋势越
来越严重, 严重影响橡胶树生长和产量。 橡胶树白
粉病就是其中之一 [1]。 橡胶树白粉病是由橡胶树粉
孢属(Oidium heveae)真菌侵染引起的, 其菌丝体
发达表生, 为害橡胶树的嫩叶、 嫩芽、 嫩梢和花
序, 病重时对橡胶树的生长和产量均有显著影响,
造成较大的经济损失 [2]。 橡胶树白粉病的常规防治
方法是喷撒硫磺粉或粉锈宁烟雾剂, 但硫磺粉使用
受天气限制, 而粉锈宁使用易使病原菌产生抗药性
的缺点, 给防治造成了困难 [3]。 因此有必要研究开
发附着力强、 耐雨水冲刷、 高效、 安全的防治药剂。
植物提取物对橡胶树白粉病的抑菌防病作用还
未见报道。 但其他作物白粉病防除利用植物源农药
的研究发现, 其开发利用潜力无限。 如张珍等[4]运
用 0.5%小檗碱水剂对大棚西瓜白粉病进行防治,
效果达 76.7%; 金素心等[5]用 29种植物提取液对黄
瓜白粉病菌的抑菌效果进行了生物活性测定, 效果
最高达 91.28%; 杨宇红等[6]用大黄素甲醚防治黄瓜
白粉病来进行研究, 效果达 94%。 为此, 本试验
采用 22 种植物甲醇提取液对橡胶树白粉病菌进行
抑菌活性测定, 以期得到天然的杀菌活性成分, 为
橡胶树白粉病防治提供新的植物源药剂。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试植物 在海南省 6 市县野外进行植物
采集, 种类和采集地见表1。 将采回的植物自然晾
干, 并在 60 ℃烘箱中烘 3 d, 粉碎过 40 目筛(ó/ =
0.37 mm) 后密封, 置于 4℃冰箱中保存备用。
1.1.2 供试菌种来源 供试病原菌(Oidium heveae)
采自中国热带农业科学院试验场橡胶林自然发病橡
胶树叶片。 带回实验室, 接种于培养箱内(22℃)培
育的感病品系幼苗上, 活体保存待用。
1.2 方法
1.2.1 甲醇提取液的制备 参照方哲等[7]的提取方
法, 分别取粉碎后的植物样品各 200 g, 室温下用
甲醇作为提取溶剂, 用冷浸振荡提取 3次, 提取时
间分别为 3、 2、 1 d, 提取溶剂分别为 1 000、 600、
400 mL, 然后合并滤液, 浓缩至 200 mL, 即得质
量浓度为 1 g/mL 的母液, 移装于 500 mL 具塞刻度
三角瓶中, 加塞封口, 在 4℃冰箱中保存备用。
1.2.2 甲醇提取液对白粉病菌孢子萌发的测定
在 90 mL 煮熔的 1.5%琼脂中, 加入 10 mL 提取液
母液, 配成提取液浓度为 0.1 g/mL 的培养基, 对照
(CK) 加入 10 mL 甲醇。 用记号笔在干净载玻片背
面画直径为 1.5 cm 圆圈 3 个, 将培养基滴在圆圈
内, 3滴/圈, 凝固备用。
将新鲜的白粉病菌分生孢子撒在培养基薄层表
面, 孢子数量控制在 10×10倍显微镜下 30~60个/视
野(取 5~7个视野的平均值), 把玻片置于人工气候
箱内(22 ℃, RH88%, 黑暗)培养 12 h, 然后进行
检查: 先滴乳酚油固定, 1 滴/圈, 在 100倍显微镜
下记录孢子的萌发数(孢子萌发标准为芽管长度超
过孢子宽度), 每圈检查孢子总数 100 个左右(3~6
个视野)。 每处理 1 块玻片, 每个处理 5 次重复。
孢子萌发率和抑制率计算方法:
孢子萌发率=(孢子萌发数/总孢子数)×100%
孢子萌发抑制率=(对照孢子萌发数-处理孢子
萌发数)/对照孢子萌发数×100%
1.2.3 假臭草和九里香甲醇提取液对白粉病菌孢子
的 EC50和 EC75测定 为进一步研究初筛效果较好
的假臭草和九里香提取液对橡胶树白粉病菌孢子的
室内毒力, 把两种植物提取液的浓度梯度设置为
0.05、 0.075、 0.10、 0.25、 0.50 g/mL, 共 5 个处理。
提取液浓度对数作变量 x, 机率值做变量 y, 用回
归统计方法求毒力曲线方程 y=a+bx、 相关系数 R2、
EC50和 EC75。
1.2.4 假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树芽接幼
苗白粉病的防病效果测定 假臭草和九里香甲醇
提取液制备方法同上, 但分别浓缩至质量浓度为
10 g/mL 的母液, 移装于 100 mL 具塞刻度三角瓶
中, 加塞封口, 在 4℃冰箱中保存备用。
表 1 供体植物名录
科名 供体植物 采集地
马鞭草科(Verbenaceae)
马缨丹(Lantana camara) 临高
旋花科(Convolvulaceae)
五爪金龙(Ipomoea cairica) 儋州
菊科(Compositae)
三叶鬼针草(Bidens pilosa) 儋州
飞机草(Eupatorium odoratum) 儋州
假臭草(Eupatorium catarium) 儋州
小飞蓬(Conyza Canadensis) 儋州
银胶菊(Parthenium hysterophorus) 儋州
薇甘菊(Mikania micrantha) 五指山
苋科(Amaranthaceae) 刺苋(Amaranthus spinosus) 儋州
大戟科(Euphorbiaceae)
飞杨草(Euphorbia hirta) 儋州
唇形科(Lamiaceae) 丁香罗勒(Ocimum gratissimum) 琼中
夹竹桃科(Apocynaceae)黄蝉(Allemanda schottii) 儋州
豆科(Leguminosae)
翅荚决明(Cassia alata) 儋州
天南星科(Araceae) 海芋(Alocasia macrorrhizos) 儋州
芸香科(Rutaceae) 九里香(Murraya exotica) 儋州
假马鞭(Stachytarpheta jamaicensis) 海口
金钟藤(Merremia boisiana) 白沙
肿柄菊(Tithoniadiversifolia) 儋州
叶下珠(Phyllanthus urinaris) 儋州
锦葵科(Malvaceae) 朱槿(Hibiscus rosasinensis) 儋州
茄科(Solanaceae) 蔓陀罗(Datura stramonium) 琼中
巴西含羞草(Mimosa invisa) 儋州
1090- -
第 6 期
植物提取液
孢子萌发数
孢子平均萌发数 萌发抑制率/%
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
九里香 45 33 37 35 37 (37.40±4.56)i F 47.62
假臭草 37 44 39 39 41 (40.00±2.65)i F 43.98
曼陀罗 59 47 60 41 55 (52.40±8.17)h E 26.61
小飞蓬 55 65 59 47 50 (55.20±7.16)h DE 22.69
肿柄菊 55 42 68 61 52 (55.60±9.76)h DE 22.13
五色梅 52 58 61 55 59 (57.00±3.54)gh CDE 20.17
黄婵 59 41 62 78 51 (58.20±13.74)fgh BCDE 18.49
扶桑 55 48 56 71 66 (59.20±9.20)defgh ABCDE 17.09
丁香罗勒 59 65 70 56 47 (59.40±8.79)defgh ABCDE 16.81
五爪金龙 49 61 65 58 67 (60.00±7.07)cdefgh ABCDE 15.97
翅荚决明 58 61 46 70 66 (60.20±9.17)cdefgh ABCDE 15.69
海芋 63 60 65 58 59 (61.00±2.91)bcdefgh ABCDE 14.57
表 3 22 种植物甲醇提取液对橡胶树白粉病病菌孢子萌发的抑制效果
在橡胶芽接幼苗(古铜期, 盆栽)叶片上均匀撒
下橡胶树白粉病分生孢子, 保湿 7 d。 将提取液母
液+吐温配成其 EC50和 EC75浓度值的药液, 对照使
用蒸馏水+甲醇+吐温溶液, 在发病后 7 d 均匀喷雾
于发病植株叶片上, 隔 2 d喷雾 1次, 连续喷 2次,
每次 30 mL。 1 株幼苗做为 1 个重复, 每个处理 3
次重复。 最后 1 次喷药后 7 d 观察其发病情况并记
录叶片病级(每株幼苗随机调查 10 片叶子)。 橡胶
树叶片白粉病分级标准参照 《橡胶树栽培技术规程
实施细则》[8](表 2)。
根据各级别的叶数, 按照下列公式计算病情指数。
病情指数= Σ[(各级病叶数×相应级值)]
调查总叶数×发病最高级的代表值 ×100
调查所得数据以小区为单位统计防治效果, 计
算方法如下:
防治效果=
空白对照区的平均病情
×100%
1.2.5 假臭草和九里香提取液防治橡胶树白粉病后,
橡胶树叶片丙二醛和相关酶活性测定 上述防病
试验喷雾后 5 d, 随机采集植株叶片, 每个处理取
1~1.5 g 样品, 重复 3 次。 然后进行丙二醛(MDA)、
过氧化氢酶(CAT)、 超氧化物歧化酶(SOD)和苯丙
氨酸解氨酶(PAL)的测定, 对照为不接菌不施药的
植株叶片。 测定方法见《植物生理生化实验原理和
技术》[9]。
1.2.6 数据统计分析 试验结果采用 DPS7.55 软
件进行统计分析, Duncan新复极差法进行多重比较。
(空白对照的平均 _ 处理的平均
病情指数 病情指数)
2 结果与分析
2.1 22 种植物提取液对橡胶树白粉病菌的孢子萌
发抑制效果
从表 3 可见, 黄婵、 肿柄菊、 小飞蓬、 九里
香、 曼陀罗、 五色梅、 假臭草 7种植物提取液对橡
胶树白粉病菌的孢子萌发抑制效果与对照间的差异
达到极显著水平, 特别是九里香和假臭草的效果极
显著优于其余植物, 萌发抑制率分别达 47.62%和
43.98%; 丁香罗勒、 五爪金龙、 扶桑、 海芋、 翅
荚决明 5种植物提取液对橡胶树白粉病菌的孢子萌
发抑制效果与对照间的差异达到显著水平。 其他
10种与对照间无显著性差异(表 3)。
古 鑫等: 假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌抑菌活性的测定
表 2 橡胶树白粉病叶片分级标准
病害级别 叶片上的病情
0 整张叶片无病状
1 叶片上病斑面积占叶片总面积的十六分之一
3 叶片上病斑面积占叶片总面积的八分之一
5 叶片上病斑面积占叶片总面积的四分之一、 或叶片因病而轻度皱缩
7 叶片上病斑面积占叶片总面积的二分之一、 或叶片因病而中度皱缩
9 叶片上病斑面积占叶片总面积的四分之三、 或叶片因病而严重皱缩
说明: 叶片病斑双面重叠只计一面。
1091- -
第 33 卷热 带 作 物 学 报
2.3 九里香提取液不同浓度对橡胶树白粉病菌孢
子萌发的抑制效果
从表 5可见, 九里香提取液不同浓度对橡胶树
白粉病菌孢子萌发的抑制效果都极显著高于对照,
并随着提取液浓度的增加, 抑制效果加强。 提取液
浓度 0.25 g/mL与 0.50 g/mL的抑制率分别达 58.28%
和 62.79%, 极显著高于其余各处理。
2.4 假臭草和九里香提取液不同浓度对橡胶树白
粉病菌孢子萌发的毒力分析
从表 6可见, 毒力回归方程表现出正相关, 相
关系数 R2值为 0.98(假臭草)和0.99(九里香), 即
随着质量浓度不断增加, 提取液对供试病原菌孢子
萌发抑制活性增强。 九里香对病原菌孢子萌发的抑
制活性较强, EC50=0.20 g/mL、 EC75=0.99 g/mL; 假
2.2 假臭草提取液不同浓度对橡胶树白粉病菌孢
子萌发的抑制效果
从表 4可见, 假臭草提取液不同浓度对橡胶树
白粉病菌孢子萌发的抑制效果都极显著高于对照,
并随着提取液浓度的增加, 抑制效果加强。 浓度
0.25 g/mL 与 0.50 g/mL 处理间没有显著差异, 抑制
率分别达 51.45%和 57.85%, 但都显著或极显著高
于其余各浓度处理。
提取液浓度/(g/mL)
孢子萌发数
孢子平均萌发数 萌发抑制率/%
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
0.50 30 30 27 33 25 (29.00±3.08)e D 57.85
0.25 32 33 39 30 33 (33.40±3.36)e CD 51.45
0.10 38 45 39 40 42 (40.80±2.77)d C 40.68
0.075 45 44 53 55 49 (49.20±4.82)c B 28.49
0.05 57 61 50 55 61 (56.80±4.60)b B 17.44
0 68 64 68 65 79 (68.80±5.97)a A 0.00
表 4 不同浓度假臭草甲醇提取液对橡胶树白粉病菌孢子萌发的抑制效果
提取液浓度/(g/mL)
孢子萌发数
孢子平均萌发数 萌发抑制率/%
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
0.5 28 32 21 22 25 (25.60±4.51)e D 62.79
0.25 30 29 27 35 36 (31.40±3.91)d D 58.28
0.10 36 41 41 40 39 (39.40±2.07)c C 42.73
0.075 40 44 49 41 47 (44.20±3.83)c C 35.76
0.05 51 53 50 51 58 (52.60±3.21)b B 23.55
0 68 64 68 65 79 (68.80±5.97)a A 0
表 5 不同浓度九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌孢子萌发的抑制效果
植物提取液
孢子萌发数
孢子平均萌发数 萌发抑制率/%
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
飞机草 69 62 65 67 65 (65.60±2.61)abcdefg ABCD 8.12
叶下珠 67 63 68 70 69 (67.40±2.70)abcdef ABCD 5.60
假马鞭 70 65 68 72 67 (68.40±2.70)abcde ABC 4.20
含羞草 56 70 75 69 73 (68.60±7.43)abcd ABC 3.92
刺苋 59 73 72 65 74 (68.60±6.43)abcd ABC 3.92
薇甘菊 71 69 66 69 71 (69.20±2.05)abc ABC 3.08
鬼针草 65 69 67 72 74 (69.40±3.65)abc ABC 2.80
银胶菊 74 70 67 72 69 (70.40±2.70)ab AB 1.40
飞杨草 75 69 65 73 70 (70.40±3.84)ab AB 1.40
金钟藤 66 74 74 69 72 (71.00±3.46)a A 0.56
CK 67 74 72 75 69 (71.40±3.36)a A 0
续表 3 22 种植物甲醇提取液对橡胶树白粉病病菌孢子萌发的抑制效果
说明: 表中同列数据后不同小写字母表示差异显著(p=0.05), 不同大写字母表示差异极显著(p=0.01)。 下同。
1092- -
第 6 期
2.6 橡胶树叶片丙二醛含量和相关酶活性变化
2.6.1 丙二醛(MDA)含量 从图 1 可见, 假臭
草和九里香提取液防治橡胶树白粉病后, 橡胶树叶
片 MDA 含量均极显著低于对照, 其不同浓度值间
达到显著差异。 MDA 含量表现为: 假臭草 EC75<假
臭草 EC502.6.2 过氧化氢酶(CAT)活性 从图 2 可见, 假
臭草和九里香 EC75 处理的 CAT 活性都与各自的
EC50处理达到显著性差异, 与对照处理达到极显著
性差异。 CAT 活性表现为: 假臭草 EC75>假臭草
EC50>CK, 九里香 EC75>九里香 EC50>CK(图 2)。
2.6.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性 从图 3 可见,
假臭草和九里香 EC75处理的 SOD 活性都与各自的
臭草的 EC50=0.26 g/mL、 EC75=1.12 g/mL(表 6)。
2.5 假臭草和九里香提取液对橡胶树芽接幼苗白
粉病的防病效果
从表 7 可见, 假臭草和九里香提取液对橡胶树
芽接幼苗白粉病的防治效果趋势相同, 浓度增大防
治效果越好。 假臭草和九里香提取液浓度值为 EC75
值时, 对橡胶树芽接幼苗白粉病的防治效果分别达
20%和 18.67%, 两者间没有显著差异, 但显著优
于对照。 假臭草提取液浓度值在 EC50 和 EC75 时,
防治效果为 13.33%和 20.00%; 九里香提取液浓度值
在 EC50和 EC75时, 防治效果为 11.56%和 18.67%,
均没有显著差异(表 7)。
植物提取液 毒力回归方程 相关系数(R2) EC50/(g/mL) EC75/(g/mL)
假臭草 y=1.067 9x+5.623 3 0.980 3 0.26 1.12
九里香 y=0.975 7x+5.678 1 0.990 3 0.20 0.99
表 6 假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌孢子萌发的毒力
植物提取液 浓度值/(g/mL) 重复
不同病级叶片数
病情指数 相对防效/% 平均防效/%
0 级 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级
EC50(0.26)
Ⅰ 0 1 1 4 2 2 0.62 17.33
(13.33±6.93)ab AⅡ 0 0 2 4 3 1 0.62 17.33
EC75(1.12)
Ⅰ 0 0 1 4 2 2 0.61 18.67
(20.00±10.07)a AⅡ 0 1 1 3 2 3 0.67 10.67
九里香
EC50(0.20)
Ⅰ 1 1 2 1 3 2 0.57 24.00
(11.56±12.67)ab AⅡ 0 1 1 2 4 2 0.66 12.00
EC75(0.99)
Ⅰ 0 2 2 0 3 3 0.62 17.33
(18.67±1.34)a AⅡ 1 1 2 0 3 3 0.61 18.67
CK 0
Ⅰ 0 0 1 3 2 4 0.76 0
(0±0)b AⅡ 0 0 2 2 3 3 0.71 0
Ⅲ 0 0 1 3 2 4 0.79 0
Ⅲ 1 1 1 4 2 1 0.52 30.67
Ⅲ 0 2 2 1 2 3 0.60 20.00
假臭草
Ⅲ 0 0 0 5 3 2 0.71 5.33
Ⅲ 0 1 0 2 3 4 0.76 -1.33
表 7 假臭草和九里香提取液对橡胶树盆栽苗白粉病的防病效果
图中数柱上方的 “*” 表示与对照间达到差异显著(p=0.05),
“**” 表示与对照间达到差异极显著(p=0.01)。 下同。
图 1 丙二醛(MDA)含量
9
8
7
6
5
4
3
2
1
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CK 假臭草 0.26 假臭草 1.12 九里香 0.20 九里香 0.99
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提取液浓度/(g/mL)
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古 鑫等: 假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌抑菌活性的测定 1093- -
第 33 卷热 带 作 物 学 报
CK 假臭草 0.26 假臭草 1.12 九里香 0.20 九里香 0.99
提取液浓度/(g/mL)
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SO
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图 3 超氧化物歧化酶(SOD)活性
70
60
50
40
30
20
10
0
图 2 过氧化氢酶(CAT)活性
CK 假臭草 0.26 假臭草 1.12 九里香 0.20 九里香 0.99
提取液浓度/(g/mL)
70
60
50
40
30
20
10
0
CA
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g
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EC50处理达到显著性差异, 与对照处理达到极显著
性差异。 SOD 活性表现为: 假臭草 EC75>假臭草
EC50>CK, 九里香 EC75>九里香 EC50>CK(图 3)。
2.6.4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性 从图 4 可见,
九里香 EC75处理的 PAL 活性极显著高于其余处理
和对照, 与对照间达到极显著性差异; 九里香 EC50
处理和假臭草 EC75处理的 PAL活性也极显著高于对
照。 PAL 活性表现为: 假臭草 EC75>假臭草 EC50>
CK, 九里香 EC75>九里香 EC50>CK(图 4)。
3 讨论与结论
对 22 种植物甲醇提取液进行室内生测试验和
室外盆栽试验, 筛选出抑制橡胶树白粉病菌孢子萌
发效果较好的两种植物: 假臭草和九里香。 但相对
于化学药剂防除, 效果有所不及。 如杨意伯等 [10]用
26 种杀菌剂对橡胶粉孢进行了毒力测定, 筛选出
14 种药剂效果比较明显, 抑菌效果在 90%以上。
本试验提取液的浓度 1 g/mL和 10 g/mL 母液, 是以
植物样品重量为单位, 而没有以最终有效提取物重
量为单位, 造成有效浓度偏低, 因此试验效果也偏
低。 如植物样品 200 g, 用甲醇提取 , 按回收率
10%计算, 提取液浓度 1 g/mL 和 10 g/mL 母液, 相
当于有效浓度 0.1 g/mL 和 1 g/mL 母液。 所以, 本
试验假臭草和九里香提取液浓度为 0.1 g/mL, 相当
于有效浓度 0.01 g/mL。 虽然试验效果上不是特别
明显, 但由于供试植物均为野外常见,
同时其中一些也具有医用抗菌活性, 对人体无
害且开发成本低, 因此值得对其粗提物成分进行进
一步的分离研究。
九里香属芸香科九里香属植物。 该属植物在药
理上具有抗菌、 抗炎、 镇痛及局部麻醉等作用 [11],
农用活性方面也有抗菌杀虫方面的研究, 喻大昭 [12]
和骆焱平等 [13]发现九里香提取物有较强的抑菌效
果, 抑菌率均能达到 90%以上。 卢远倩[14]研究了九
里香精油的抑菌活性能达到 45%以上, 其主要活
性成分为 n-棕榈酸(28.76%)、 1-(1, 5-二甲基-
4-己烯基)-4-甲苯 (22.38%)、 N-(1-甲基-3-氧-
亚丁基)-4-甲氧基苯胺(20.11%)。 李会新等 [15]研
究了九里香精油对四纹豆象有较好的防效, 防蛀率
为 100%。 假臭草属菊科泽兰属一年生草本植物,
原产南美。 其挥发油的主要成份中, 萜类物质超过
95%, 而萜类(特别是高挥发性的单萜类)化合物是
植物中主要的一类化感物质, 是植物自身有效的防
御武器 [16], 可以对昆虫和真菌产生忌避或抑制作
用。 近年来也有许多报道提到假臭草具有较强的化
感作用。 李光义等[17]发现假臭草对萝卜和白菜具有
较强的化感作用。 戴进用等[18]用假臭草水浸液对受
体植物 SOD 和 POD 活性及 MDA 含量的影响做了
研究, 发现在低浓度药液作用下这 3项指标都有先
降低后升高的趋势。
试验中的酶活性测定反应出药剂在杀菌的作用
下还表现出一个效果: 施药处理与对照间的丙二醛
含量和各项酶活性存在差异性。 药剂浓度的升高,
各项酶的活性也有相应的升高。 因此这两种植物在
诱导抗病性这方面也有着一定的潜力, 在今后的工
提取液浓度/(g/mL)
**
**
**
CK 假臭草 0.26 假臭草 1.12 九里香 0.20 九里香 0.99
265
260
255
250
245
240
235
230
225
PA
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图 4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性
1094- -
第 6 期
作中也是一个研究方向。
本试验中假臭草和九里香提取液在室内生测试
验中表现出来的抑菌效果较高, 但盆栽试验防病效
果不是特别明显, 可能是活性物质的含量还不够
高。 此外, 供试植物所采集的生长时期, 部位都有
不同, 从而造成活性高低有所差异。 进一步研究可
以采用活性追踪法, 分离提纯活性物质, 用于病害
防治。 实验中发现各植物提取物对病原菌的抑菌效
果有很大的差异, 通过对植物资源的筛选为今后研
发新的天然植物源杀菌剂提供了依据。
参考文献
[1] 刘 静 . 橡胶树白粉病的研究进展[J]. 热带农业科技, 2010,
33(3): 1-5.
[2] 华南热带作物学院. 热带作物病虫害防治学[M]. 2版. 北京: 农
业出版社, 1993: 66-70.
[3] 范会雄, 谭象生. 橡胶树白粉病流行规律与防治技术[J]. 植物保
护, 1997, 23(3): 28-30.
[4] 张 珍, 周小军, 陈礼威,等. 0.5%小檗碱水剂对大棚西瓜白
粉病的防治效果[J]. 长江蔬菜, 2011(1): 47-48.
[5] 金素心, 顾振芳, 代光辉, 等. 植物提取液对黄瓜白粉病的抑
菌活性筛选研究[J]. 上海交通大学学报, 2006, 24(1): 48-53.
[6] 杨宇红, 龚惠之, 杨翠荣. 植物源杀菌剂大黄素甲醚防治黄瓜
白粉病研究[J]. 中国蔬菜, 2009(20): 23-28.
[7] 方 哲, 周如军, 傅俊范 . 64 种药用植物提取液对 3 种药用
植物病原菌抑菌活性影响 [J]. 沈阳农业大学学报 , 2008, 39
(1): 24-27.
[8] 肖春云 . 橡胶树白粉病综合防治试验比较[J]. 中国热带农业,
2010(6): 56-58.
[9] 王学奎. 植物生理生化实验原理和技术[M]. 北京: 高等教育出
版社, 2006: 5.
[10] 杨意伯, 张荣意, 郑服丛. 26种杀菌剂对橡胶粉孢的毒力测定[J].
农药, 2010, 49(8): 604-606.
[11] 梅全喜. 现代中药药理与临床应用手册[M]. 北京: 中国中医药
出版社, 2008: 400-401.
[12] 喻大昭, 杨小军, 杨立军, 等. 植物提取物对植物病原真菌的
抑菌活性研究[J]. 湖北农业科学, 2001(5): 49-51.
[13] 骆焱平, 郑服丛, 杨 叶. 128 种南药植物提取物对 6 种病原
菌的生长抑制作用[J]. 热带作物学报, 2004, 25(4): 106-111.
[14] 卢远倩, 王兰英, 骆焱平. 九里香精油的抑菌活性及成分分析[J].
农药, 2011, 50(6): 443-448.
[15] 李会新, 魏木山, 易平炎, 等. 25 种植物精油对四纹豆象的防
治效果[J]. 粮食储藏, 2001, 30(6): 7-9.
[16] 彭少麟, 南 蓬, 钟扬. 高等植物中的萜类化合物及其在生态
系统中的作用[J]. 生态学杂志, 2002, 21(3): 33-38.
[17] 李光义, 喻 龙, 邓 晓. 假臭草化感作用研究[J]. 杂草科学,
2006 (4): 19-20, 49.
[18] 戴进用, 朱朝华, 王兰英, 等. 假臭草水浸液对受体植物 SOD
和 POD 活性及 MDA 含量的影响[J]. 安徽农业科学, 2010, 38
(4): 1 788-1 790, 1 795.
责任编辑: 沈德发
古 鑫等: 假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌抑菌活性的测定 1095- -