全 文 ：　　　收稿日期:2004-07-30
作者简介:孟　娜(1977-),女 ,硕士 ,主要从事植物分类和生物农药研究。
通信作者:周守标 ,男 ,教授 ,硕士生导师 , E-mail:zhoushoubiao@vip.163.com。
基金项目:安徽省自然科学基金项目(00042415)
月腺大戟(Euphorbia ebracteolata)根部提取物
抑菌作用的测定
孟　娜1 ,周守标1 ,蒋继宏2
(1安徽师范大学生命科学学院 ,芜湖 241000;2江苏省药用植物技术重点实验室 ,徐州 221116)
摘要:以小麦赤霉病病菌(Fusarium graminerum)、油菜菌核病病菌(Sclerotinia scleotiorum)、棉花黄萎病病菌(Verticillium dahli-
ae)、苹果炭疽病病菌(Glomarella cingulata)、甜瓜蔓枯病病菌(Mycosphaerella melonis)为供试病原菌 , 采用琼胶平板法对月腺
大戟根部丙酮提取物进行了离体抑菌活性测定;月腺大戟根部提取物样品供试质量浓度分别设为 0.05g/mL , 0.1g/mL ,
0.2g/ mL , 0.4g/mL四个梯度。测定结果表明:不同浓度月腺大戟根部丙酮提取物对 5 种供试病原菌均表现为很强的抑菌
作用 ,该研究为月腺大戟根部进一步开发植物性农药提供理论依据。
关键词:月腺大戟;根提取物;抑菌作用
中图分类号:Q946.887 文献标识码:A 文章编号:1008-9632(2005)04-0016-02
　　在植物中寻找生物活性物质或直接开发植物性农
药 ,是当今农药研究领域的热点之一[ 1] 。目前对楝科 、
豆科和卫矛科等植物的杀虫作用研究较多 ,对植物性
抑菌物质的研究近年来也已有一些报道[ 2-3] ;冯俊涛
等对西北地区植物的抑菌活性进行研究 ,测定了200余
种植物提取物样品对植物病原菌的抑制作用[ 4 , 5]
月腺大戟(Euphorbia ebracteolata)为大戟科(Euphor-
biaceae)大戟属(Euphorbia)植物 ,俗称狼毒 。分布于安
徽 、江苏 、浙江 ,山东等省 ,生于山坡 、草地或林下 ,资源
极为丰富。该植物的根纺缍形至圆锥形 ,外皮黄褐色 ,
栓皮灰褐色 ,易剥落而显淡灰黄色 ,切面有黄白相间的
筋脉条纹 ,黄色部分常为凝着的分泌物;根有较高的药
用价值 ,有毒 ,能下气行水 ,杀虫 ,煎水外用 ,可洗疥疮 ,
可作农药 ,防治病虫害[ 6] 。对月腺大戟根的化学成分
研究较多[ 7 ,8] ,但对根部提取物的抑菌作用仍末见报
道。本研究用琼胶平板法测定月腺大戟根部不同浓度
的丙酮提取物样品对 5 种供试植物病原菌的抑制作
用 ,旨在为月腺大戟根部的进一步开发植物性农药提
供理论依据。
1　材料与方法
1.1　供试样品
1.1.1　植物样品　供试植物样品月腺大戟采自安徽
省滁州琅琊山
1.1.2　样品处理 　样品采回后将根洗净 ,阴凉处晾
干 ,放干燥箱中 60℃烘干 ,粉碎后过 40目筛(孔径 0.
37mm)后密封 ,置-30℃保存备用 。
1.1.3　样品制备　取粉碎的植物样品 ,室温下用丙酮
(分析纯 ,下同)进行 48h ,24h ,12h 3次浸渍提取 ,合并 3
次滤液后浓缩至少量转入刻度试管中 ,用丙酮分别定
容至 4g/mL(即 lmL 提取液相当于 4g 植物干样品 ,下
同),2g/mL ,1g/mL ,0.5g/mL ,密封 ,0 ～ 4℃保存备用。
1.2　供试菌种　试验所用的5种植物病原菌分别为小
麦赤霉病病菌(Fusarium graminerum)、油菜菌核病病菌
(Sclerotinia scleotiorum)、棉花黄萎病病菌(Verticillium
dahliae)、苹果炭疽病病菌(Glomerella cingulata)、甜瓜蔓
枯病病菌(Mycosphaerella melonis),皆由江苏省药用植物
生物技术重点实验室提供。
1.3　实验方法　用琼胶平板法测定植物样品的抑菌
活性 ,在无菌条件下 ,分别取 lmL 不同浓度提取液至
20mL刻度试管 ,对照组加入等量丙酮 ,再倒入融化的
PDA培养基至 lOmL ,摇匀 ,趁热倒入 9cm 培养皿中制成
平板 ,用直径为 5mm的打孔器在 PDA 平板上打取菌丝
块 ,倒扣在已凝固的 PDA平板中央 ,每皿接 1个菌饼 ,
每处理重复 3次 ,25 ～ 27℃培养至对照菌丝生长至 7cm
左右观察结果 ,用十字交叉法测量供试病原菌菌丝生
长直径 ,用下述公式计算抑制率[ 5 ,9] :
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菌落直径(mm)=测量菌落直径平均值-5.0
相对抑制率=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径 ×100%
2　结果与分析
由图 1可知 ,与空白对照比较不同浓度月腺大戟
根丙酮提取物对 5种供试病原菌的生长皆有明显的抑
制作用;除在 0.5g/mL 浓度时对棉花黄萎病病菌相对
抑制率为 48.5%外 ,其它的抑制率皆大于 50%,其中对
油菜菌核病病菌的抑制明显高于其它病原菌 ,甚至在
浓度为4g/mL 时相对抑制率高达 100%;对棉花黄萎病
菌的抑制低于其它病原菌;而对小麦赤霉病病菌和苹
果炭疽病病菌的相对抑制率较为接近 ,在大于 1g/mL
浓度时对病原菌生长的抑制率大小表现为油菜菌核病
病菌>小麦赤霉病病菌≈苹果炭疽病病菌>甜瓜蔓枯
病病菌>棉花黄萎病病菌 。
由图 1可知 ,不同浓度的月腺大戟根部丙酮提取
物对同种植物病原菌的抑制活性差异较大 ,相同浓度
的月腺大戟根部丙酮提取物对不同种植物病原菌的抑
制作用亦有明显差异 ,且随浓度的增加相对抑制率也
增加 。
图 1　不同浓度月腺大戟根部提取物对 5种植物病原菌的抑制率
Fig:1 Inhibi tory effect on 5 kindsof fungus by root extracts on Euphorbia
ebracteolata with different concentration
3　讨论
植物源杀菌剂的研究前景广阔[ 5] 。通过实验结果
得出不同浓度的月腺大戟根部丙酮提取物对 5种植物
病原菌均表现出较强的抑菌活性 ,具有较为广阔的应
用前景;在实验中考虑到溶剂抑菌作用小的要求及操
作方便 ,在植物样品的提取 、定容及生物测定中选用丙
酮为溶剂 ,这样不一定能将极性和非极性较强的物质
抽提出来;与杀虫剂不同 ,对杀菌剂而言有许多成份如
乙膦铝 、三环唑 、噻瘟唑等在离体条件下没有活性 ,在
活体植物上则表现出极强的抑菌活性[ 10] ,而本实验仅
初步进行了离体试验 ,其作用方式和作用机制及在活
体植物上的抑菌活性 ,均有待进一步研究和探讨 。
参考文献:
[ 1] 于平儒 , 蒋继宏.28 种植物样品提取物离体抑菌作用测定
[ J] .徐州师范大学学报(自然科学版), 2003 , 21(4):43 ～ 45.
[ 2] 苏美灵.数种红树植物抗菌之活性试验[ J] .植物病理学报 ,
1991 , 21(1):80.
[ 3] 赵纯森 ,黄俊斌等.厚朴叶抑菌活性成份鉴别与其防病效果
[ J] .华中农业大学学报 , 1984 , 1 3(4):373 ～ 377.
[ 4] 冯俊涛 , 祝木金 , 于平儒等.西北地区植物源杀菌剂初步筛
选.西北农林科技大学学报[ J] , 2002 , 30(6):129.
[ 5] 于平儒 , 邵红军等.62 种植物样品对菌丝活性的测定[ J] .西
北农林科技大学学报 , 2001 , 29(6):65～ 69.
[ 6] 钱啸虎.安徽植物志(第三卷)[ M] .北京:中国展望出版 ,
1988 , 256 ～ 257.
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药科大学学报 , 2003 , 34(4):377～ 379.
[ 8] 王文祥 , 丁杏苞.月腺大戟根中的乙酰间苯三酚类衍生物
[ J] .药学学报 , 1999 , 34 (7):514 ～ 517.
[ 9] 孟昭礼 , 罗　兰等.人工模拟杀菌剂银泰对 10种植物病原菌
的室内生物测定.莱阳农学院学报 , 1999 , 16(2):124 ～ 126.
[ 10] 林孔勋.杀菌剂毒理学[ M] .北京:中国农业出版社 , 1995 , 68
～ 74.
A preliminary study on anti-fungal activities of roots extracts
on Euphorbia ebracteolata
MENG Na
1 ,ZHOU Shou-biao1 , JIANG Ji-hong2
(1 ,College of Life Science ,Anhui Normal University ,Wuhu 241000 ,China;2 ,Key Laboratory
of Medicine Plant and Biotechnology ,Xuzhou 221116 ,China)
Abstract:The anti-fungal activities of root extracts on Euphorbia ebracteolata were tested with Fusarium graminerum ,
(下转 53页)
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酸降解 ,水解液中含有大量的 H+ ,即溶液显酸性 ,得到
的是嘌呤酸性溶液 ,在酸性条件下 ,嘌呤银配离子是不
会产生沉淀的 。必须加入大量的碱去中和溶液中的
H+ ,所以要加入氨水中和。另外 ,加入过量氨水是防
止硝酸银过量 ,若硝酸银过量 ,则 Ag+在碱性条件下会
生成氢氧化银沉淀 ,并且此沉淀立即分解生成棕黑色
的氧化银沉淀 ,这就是有的学生看到了棕黑色氧化银
的出现 。若加入过量的氨水则氨水与过量的Ag+发生
络合反应 ,生成无色的银氨络离子[Ag(NH3)2] +溶液 ,
从而有效的防止生成氧化银棕黑色沉淀 ,使实验现象
得以观察 。
3.2　鉴定组分磷酸的实验效果与分析　按 2.2.2鉴定
方法蓝色钼蓝生成不明显。此鉴定方法化学反应机理
是:在硫酸存在下 ,定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式和
无机磷反应 ,产生磷钼酸 。磷钼酸被维生素 C(Vc)还
原 ,产生蓝色复合物钼蓝 。而维生素 C 在室温下 ,极易
被空气氧化失去还原作用 ,从而导致实验失败 。
4　改进方法
4.1　在嘌呤碱组分鉴定时 ,先加入AgNO3 ,再一次性加
入过量氨水。
4.2　在无机磷酸鉴定时 ,可用鉴定无机磷酸的特效方
法———磷钼酸铵法[ 2]取滤液 lmL ,加入 5滴(6mol/L)浓
硝酸 ,再加入 lmL 钼酸铵试剂[ 3]微热有黄色的磷钼酸
铵沉淀生成。反应式为:
PO4
3-+12MoO72-+3NH4++24H+ (NH4)3PO4·
12MoO3·6H2O↑+6H2O
改进后的实验操作简单 ,方便易行 ,现象明显 ,尤
其是定磷试剂的改进 ,避免了实验教师重复配置试剂
的工作 ,既节省化学试剂 ,又节省了时间 ,确实为一种
好的方法。
[ 注] :钼酸铵试剂配制方法:将 100克市售钼酸铵溶解在 1L 水中 ,然
后将所得溶液倒入 1L6M 硝酸中(切勿将硝酸往溶液中倒)。这时 ,最初
生成钼酸的白色沉淀 ,然后再溶解 ,将溶液放置 48小时 ,最后从沉淀(如
生成沉淀)倾倒出溶液。
参考文献:
[ 1] 王秀奇 , 秦淑媛.基础生物化学实验(第二版)[ M] .北京:高等
教育出版社 , 2002.
[ 2] 李炳焕.无机化学实验[M] .北京:冶金工业出版社 , 1994.
[ 3] 华中师范大学等编.分析化学实验(第三版)[ M] .北京:高等
教育出版社 , 2001.
Improving of experiment on yeast
ribonucleic acid component identificatioan
HOU Zhi min ,LIUYu jie
(Department of Biology ,College of Teachers Langfang ,Hebei Langfang 065000 China)
Abstract:Existent problem on experimental textbook of basal biochemistry about yeast ribonucleic acid component identity
was analysed.A proposal suggestion was put forward.
Key words:experiment;analyse;proposal
(上接 17页)
Sclerotinia sclerotiorum , Verticillium dahliae , Glomerella cingulata , Myphaerella melonis.The concentrations of sample for test
extracted from acetone were 0.05g/mL ,0.1 g/mL ,0.2 g/mL ,0.4 g/mL.The result showed that the root extracts from Euphor-
bia ebracteolata had strong antifungal activities , and the experiment evidence was provided for developing vegetable pesticide on
the root of Euphorbia ebracteolata.
Key words:Euphorbia ebracteolata;root extract;anti-fungal activities
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