全 文 ：一测多评法测定新疆两种洋甘菊中 5 种化学成分含量*
李建光1，韩松林1，2，赵东升3，张海波1，耿晶1，李新霞1
(1．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830054;2．阿克苏职业技术学院，阿克苏 843000;3．新疆比尔兄弟生物技
术有限公司，乌鲁木齐 830011)
摘 要 目的 建立新疆两种洋甘菊中木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素的一测多
评含量测定方法。方法 采用超高效液相色谱法，以芹菜素为内标物，建立其与木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基
香豆素、木犀草素的相对校正因子，并进行含量测定，实现一测多评。同时采用外标法测定 11 批洋甘菊中木犀草苷、芹
苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素的含量，验证一测多评法的准确性。结果 外标测定法 5 种化学成
分在标准曲线范围内均呈良好线性关系(r ＞ 0． 999 3) ;平均加样回收率分别为:木犀草苷 99． 7%、芹苷元-7-葡萄糖苷
97． 5%、7-甲氧基香豆素 98． 8%、木犀草素 100． 9%、芹菜素 99． 1%，ＲSD 分别为 1． 8%，0． 6%，0． 5%，1． 8%，1． 9%。一
测多评法中芹苷元-7-葡萄糖苷、木犀草苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素相对芹菜素对照品的校正因子 f 分别为1． 441，2．
308，1． 117，1． 490，ＲSD分别为 0． 07%，0． 04%，0． 09%，0． 18%。采用一测多评法计算的含量值与外标法实测值之间无
显著差异。结论 在对照品缺乏、昂贵的情况下，以外标法测定芹菜素，利用相对校正因子实现对木犀草苷、芹苷元-7-葡
萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素的含量测定可行。
关键词 母菊;罗马洋甘菊;色谱法，超高效液相;一测多评法
中图分类号 Ｒ286;Ｒ927． 2 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2014)11 － 1491 － 05
Determination of Five Compounds from Two Species of Chamomiles from Xinjiang by
QAMS
LI Jian-guang1，HAN Song-lin1，2，ZHAO Dong-sheng3，ZHANG Hai-bo1，GENG Jing1，LI Xin-xia1 (1．
Pharmaceutical College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China;2． AKSu Vocational And Technical
College，AKSu 843000，China;3． Xinjiang Bill Brother Biotechnology Company．，LTD，Urumqi 830011，China)
ABSTＲACT Objective To establish a method of simultaneously quantitative analysis for multi-components by single
marker (QAMS)of galuteolin，apigenin-7-glucoside，7-methoxycoumarin，luteolin and apigenin in two species of Chamomiles from
Xinjiang． Methods By using apigenin as the internal standard，the relative correction factors (ＲCF)of galuteolin，apigenin-7-
glucoside，7-methoxycoumarin and luteolin were set and determined by UPLC． The contents of galuteolin，apigenin-7-glucoside，7-
methoxycoumarin，luteolin and apigenin in 11 samples of Chamomiles were authentically determined by the external standard
method，to verify the accuracy of QAMS． Ｒesults There is a good linear relationship within the range of standard curve for five
compounds by the external standard method (r ＞ 0． 999 3) ;the average recovery was 99． 7%，97． 5，98． 8%，100． 9%，99． 1%，
for galuteolin，apigenin-7-glucoside，7-methoxycoumarin，luteolin and apigenin，respectively，with ＲSD as 1． 8%，0． 6%，0． 5%，
1． 8% and 1． 9%，respectively． The ＲCF for pigenin-7-glucoside，galuteolin，7-methoxycoumarin and luteolin to apigenin was 1．
441，2． 308，1． 117，1． 490，respectively，with ＲSD as 0． 07%，0． 04%，0． 09% and 0． 18%，respectively． No significant difference
between the quantitative results by QAMS and external standard method was observed． Conclusion It is practical to determine
content of galuteolin，apigenin-7-glucoside，7-methoxycoumarin，luteolin with ＲCF and apigenin by using external standard
method，for the deficiency and expensive of the standard reference．
KEY WOＲDS Chamomile;Ｒoman chamomile;UPLC;Quantitative analysis of multi-components by single marker
新疆有两种常用洋甘菊，一种是德国洋甘菊，为一
年生草本植物，即母菊，学名:Matricaria chamomilla
L．，植物名:Matricaria recμtita［1］;一种是罗马洋甘菊，
一至多年生草本，学名:Anthemis nobile L．，植物名:
Chamaemelum nobile。两种洋甘菊都具有药用价
值［2-6］。洋甘菊有很悠久的使用历史，《德国药典》［7］、
《美国药典》［8］收载为母菊，《欧盟药典》［9］收载为罗马
洋甘菊。我国《国家药品标准维吾尔药分册》收载为
母菊，但只有显微鉴别，没有薄层鉴别和含量测定，现
已列为国家药品标准提高品种，本课题组拟建立母菊
的药材质量标准。
一 测 多 评 法 (quantitative analysis of multi-
components by single marker，QAMS)是一种用于多成
分质量控制的研究思路，用于解决中药质量控制中缺
乏对照品这一瓶颈问题［10］，并成功应用于中药中同类
型成分和不同类型成分的含量测定［11-15］。该方法已
被《中华人民共和国药典》2010 年版一部收录［16］。
笔者在本研究中首先建立两种洋甘菊的超高效液
相色谱(ultra performance liquid chromatography，UPLC)
测定条件，然后以芹菜素对照品为内标建立两种洋甘
·1941·医药导报 2014 年 11 月第 33 卷第 11 期
菊中 5 种化学成分含量测定的一测多评法。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 超高效液相色谱仪，Waters Acquity UPLC
System，BEH C18色谱柱(2． 1 mm × 50 mm，1． 7 μm)
Empower 色谱工作站;水浴锅(PAIＲSTIＲＲEＲ PS-
1000，50 Hz，0． 75 kV，TOKYO ＲIKAKIKAI CO．，LTD) ;
pH计(satＲorius PB-10) ;离心机(MULTIFUGE X3Ｒ) ;
分析天平(AB135-S)。
1． 2 试药 芹苷元-7-葡糖糖苷(成都普瑞科技有限
公司，纯度:99%，批号:A110222) ，芹菜素(成都普瑞
科技有限公司，纯度:99%，批号:A110605) ，7-甲氧基
香豆素(美国西格玛奥德里奇公司，SAFC，纯度:98%，
批号:11409PC) ，木犀草苷(中国食品药品检定研究
院，纯度:99． 3%，批号:111720-200905) ，木犀草素(成
都普瑞科技有限公司，纯度:99%，批号:L120321) ;乙
腈［Fisher Scientific，赛默飞世尔科技(中国)有限公
司，纯度:99． 9%，批号:20120112］，甲醇［Fisher
Scientific，赛默飞世尔科技(中国)有限公司，纯度:
99． 9%，批号:20120217］，甲醇(天津市富宇精细化工
有限公司，分析纯，批号:070911) ，N-N 二甲基甲酰胺
(天津市富宇精细化工有限公司，分析纯，批号:
110713) ;磷酸二氢钾(天津市光复精细化工研究所，
纯度:99． 5%，批号:20100517) ，氢氧化钠(天津市致
远化学试剂有限公司，纯度:96%，批号:20111120) ，盐
酸(北京化工厂，分析纯，批号:20111020) ，磷酸(天津
永晟精细化工有限公司，纯度:85%，批号:20120202)。
母菊、罗马洋甘菊均采自新疆各地区或购买于新疆各
市场。乌鲁木齐市场购样 1(批号:20120613) ，2(批
号:20120605) ，3 (批 号:20120608) ，4 (批 号:
20120625)于 2012 年 6 月分别采于新疆昌吉呼图壁
县、玛纳斯县、吉木萨尔县、奇台县。昌吉市场购样
(批号:20120706)于 2012 年 7 月采于昌吉市区。阜康
样、策勒样均采于 2012 年 5 月。阜康样(批号:
20120514)采于新疆昌吉阜康市;策勒第一批样(批
收稿日期 2013 － 10 － 25 修回日期 2013 － 12 － 02
基金项目 * 新疆维吾尔自治区科技厅高技术研究项目
(201316102) ;新疆医科大学 2011-2012 学年博士(后)科研启
动金配套资助项目
作者简介 李建光(1977 －) ，男，新疆乌鲁木齐人，副教
授，博士，主要从事药物分析与天然药物化学研究。电话:0991
－ 4361362，E-mail:L77117@ 163． com。
通讯作者 李新霞(1968 －) ，女，新疆乌鲁木齐人，教授，
博士，主要从事分析测试技术与新药研发工作。电话:0991 －
4365034，E-mail:lxx6668@ 163． com。
号:20120508)、策勒第 2 批样(批号:20120514)采于
和田策勒县。维吾尔医院样、和田样、伊犁样采收时间
均为 2012 年 7 月。维吾尔医院样(批号:20120703)来
源于昌吉木垒县，和田样(批号:20120710)采于和田
市区，伊犁样(批号:20120716)采于伊犁伊宁县。所
有样品均保存于新疆医科大学药学院分析测试中心。
按照《美国药典》对性状的描述，经新疆医科大学药学
院胡君萍教授对 11 个批次样品鉴定确认。其中阜康
样、策勒样为母菊;乌鲁木齐市场购样、昌吉市场购样、
维吾尔医院样、和田样、伊犁样为罗马洋甘菊。
2 方法与结果
2． 1 方法学考察
2． 1． 1 色谱条件 稀磷酸:取磷酸 5． 0 mL 置于含水
50 mL的 100 mL 量瓶中，加水至刻度，混匀。流动相
A:制备浓度为 0． 005 mol·L －1的磷酸二氢钾溶液，用
稀磷酸调节 pH 为 2． 55 ± 0． 05。流动相 B:制备乙腈
和甲醇的混合物(65∶35)。
色谱柱 BEHC18(2． 1 mm × 50 mm，1． 7 μm) ;流
速:0． 3 mL·min －1;检测波长:335 nm;温度为 37 ℃;
进样量 1． 5 μL;按照表 1 程序进行洗脱。典型色谱图
见图 1。
表 1 洗脱程序
Tab． 1 Elution program
t /min
流动相(A) 流动相(B)
%
洗脱
方法
0 ～ 0． 75 74 26 等度
～ 13 74→55 26→45 线性梯度
～ 14 55→74 45→26 线性梯度
～ 15 74 26 等度
2． 1． 2 对照品溶液的制备 取芹苷元-7-葡萄糖苷、
芹菜素、木犀草苷，精密称定后分别溶于适量 N-N 二
甲基甲酰胺后以甲醇稀释，使浓度分别为 1． 317，
1． 246，1． 085 mg·mL －1，取 7-甲氧基香豆素、木犀草
素精密称定后分别溶于甲醇，使浓度分别为 1． 042 和
1． 059 mg·mL －1。
2． 1． 3 供试品溶液的制备 取母菊 1． 0 g，精密称定
后置一装有回流冷凝器和搅拌器的烧瓶中，加甲醇
80 mL，搅拌下加热回流 1 h。冷至室温，滤过，收集滤
液于 100 mL 量瓶。用甲醇 3 mL 冲洗烧瓶，冲洗液过
滤后并入量瓶中，加甲醇至刻度，混匀并过滤。取上述
溶液 25． 0 mL置一装有回流冷凝器和搅拌器的圆底烧
瓶中，加氢氧化钠溶液 5． 0 mL (将氢氧化钠 0． 4 g 溶
于水 5． 0 mL制成) ，加热回流 25 min。冷却，用36% ～
·2941· Herald of Medicine Vol. 33 No. 11 November 2014
38%盐酸调节该溶液 pH至 5． 0 ～ 6． 2。定量转移此溶
液于50 mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，混匀并过滤，弃
去初滤液 10 mL，取续滤液作为供试品溶液。同法制
备罗马洋甘菊供试品溶液。
1．木犀草苷;2．芹苷元-7-葡萄糖苷;3． 7-甲氧基香豆素;4．
木犀草素;5．芹菜素
图 1 母菊(A)、罗马洋甘菊(B)、混标(C)UPLC 典型色
谱图
1． galuteolin;2． apigenin-7-glucoside;3． 7-methoxycoumarin;
4． luteolin;5． apigenin
Fig． 1 Typical UPLC chromatograms of Chamomile，
Ｒoman Chamomile，and mixed reference substance
2． 1． 4 线性范围、检出限和定量限 分别精密吸取不
同体积“2． 1． 2”项下(1． 085 mg·mL －1木犀草苷、
1． 317 mg·mL －1芹苷元-7-葡萄糖苷、1． 042 mg·mL －1
7-甲氧基香豆素、1． 059 mg·mL －1木犀草素、1． 246
mg·mL －1芹菜素)对照品贮备溶液，制成含木犀草苷、
芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜
素不同质量浓度的系列混合溶液。按上述色谱条件测
定，以对照品浓度(μg·mL －1)为横坐标(X) ，峰面积
为纵坐标(Y)计算标准曲线回归方程，得木犀草苷、芹
苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素
回归方程分别为:Y1 = 11 381X1 － 121． 98(r = 0． 999
9) ，线性范围 0． 054 ～ 10． 85 μg·mL －1;Y2 = 17 149X2
－ 422． 28(r = 0． 999 9) ，线性范围 0． 659 ～ 72． 44
μg·mL －1;Y3 = 25 628X3 + 607． 15(r = 0． 999 5) ，线性
范围 0． 010 ～ 10． 42 μg·mL －1;Y4 = 21 425X4 － 887． 50
(r = 0． 999 9) ，线性范围 0． 021 ～ 10． 59 μg·mL －1;Y5
= 28 342X5 － 2 552． 60(r = 0． 999 3)线性范围 0． 125
～ 12． 46 μg·mL －1。结果表明各成分在各自浓度范
围内线性关系良好。当信噪比为 3∶1 和 10∶1 时，测
得木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木
犀草素、芹菜素的检出限分别为0． 006，0． 067，0． 001，
0． 002，0． 013 μg·mL －1;测得木犀草苷、芹苷元-7-葡
萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素的定量限
分别为 0． 021，0． 214，0． 004，0． 007，0． 046 μg·mL －1。
2． 1． 5 精密度实验 取同一混合对照品溶液，在上述
色谱条件下连续进样 6 次，木犀草苷、芹苷元-7-葡萄
糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素含量的 ＲSD
分别为 1． 00%，0． 75%，0． 35%，1． 10%，0． 82%，表明
仪器精密度良好。
2． 1． 6 重复性实验 取同一批样品 1 g，6 份，按供试
品溶液的制备法制备并进样测定洋甘菊中 5 种化学成
分含量，ＲSD分别为 1． 10%，0． 44%，0． 37%，1． 20%，
1． 30%，表明本方法重复性良好。
2． 1． 7 稳定性实验 取“2． 1． 6”项下同一供试品溶
液在室温下 0，2，4，6，8，10，12 h 分别进样测定。结
果，12 h内洋甘菊中 5 种化学成分色谱峰面积无明显
变化，ＲSD 分别为 0． 96%，0． 25%，0． 76%，1． 10%，
0． 48%，表明被测样品在 12 h内稳定性良好。
2． 1． 8 加样回收率实验 精密称取已知含量的样品
约0． 5 g，共 9 份，分为 3 组，按低、中、高浓度分别加入
木犀草苷等 5 种对照品储备液，按“2． 1． 3”项方法制
备供试品溶液，进样测定，计算加样回收率，木犀草苷、
芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜
素的加样回收率分别为 99． 7%，97． 5%，98． 8%，
100． 9%，99． 1%，ＲSD 分别为 1． 8%，0． 6%，0． 5%，
1． 8%，1． 9%。
2． 2 校正因子测定及相对保留时间考察
2． 2． 1 校正因子的测定 将已知浓度的芹苷元-7-葡
萄糖苷、木犀草苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素
对照品混合溶液按低、中、高浓度 1，1． 5，2 μL(n = 3)
注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，以芹菜素色谱峰
为内标，计算相对响应值作为校正因子。结果表明:芹
苷元-7-葡萄糖苷、木犀草苷、7-甲氧基香豆素、木犀草
素对照品对芹菜素对照品的相对校正因子分别为
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1． 441，2． 308，1． 117，1． 490。结果见表 2。
表 2 校正因子测定
Tab． 2 Determination on correction factor
成分 浓度
校正
因子 f值
f
平均值
ＲSD /
%
芹苷元-7-葡萄糖苷 低 1． 440
中 1． 441 1． 441 0． 07
高 1． 442
木犀草苷 低 2． 308
中 2． 307 2． 308 0． 04
高 2． 309
7-甲氧基香豆素 低 1． 118
中 1． 116 1． 117 0． 09
高 1． 117
木犀草素 低 1． 489
中 1． 488 1． 490 0． 18
高 1． 493
2． 2． 2 相对保留时间的考察 本研究考察了 Waters
Acquity UPLC，Waters alliance HPLC液相色谱系统，使
用 Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2． 1 mm ×
50 mm，1． 7 μm) ，Agilent(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
Atlantic(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，Phenomenex
(4． 6 mm ×250 mm，5 μm)4 种不同品牌和型号的色
谱柱。取混合对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，以
芹菜素为内标物，计算木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、
7-甲氧基香豆素、木犀草素的校正因子和相对保留值，
结果见表 3。
2． 3 待测组分色谱峰的定位 本研究采用木犀草苷、
芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素与内标
物芹菜素的相对保留值作为色谱峰定位标准，并考察
了其在不同品牌仪器和不同规格色谱柱上的重复性。
结果表明相对保留值波动较小，木犀草苷、芹苷元-7-
葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素相对芹菜素的平
均值分别为 0． 257，0． 385，0． 684，0． 73，ＲSD 分别为
1． 2%，0． 3%，0． 19%，0． 07%。因此本研究选用相对
保留值作为目标色谱峰的定位指标比较合适。并且在
此色谱条件下各批洋甘菊样品的色谱峰相对简单，因
此在实际应用“一测多评”法时，可参考药材典型色谱
图，利用相对保留值定位，根据内标物芹菜素的保留时
间，通过相对保留值结合木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖
苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素色谱峰的紫外吸收特
征，能够正确判断目标峰的准确峰位置。
2． 4 一测多评法与外标法测定结果的比较 采用外
标法和一测多评法，以“2． 1． 1”项色谱条件对 11 批洋
甘菊中 5 种化学成分木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-
甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素进行含量测定。结果
见表 4。结果显示，两种方法所得含量值差异无统计
学意义。说明一测多评法可用于洋甘菊的多成分质量
评价研究。
3 讨论
本实验在对照品溶液的制备过程中发现，芹苷元-
7-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草苷对照品不易溶于甲醇，
故在制备过程中先溶于适量 N-N 二甲基甲酰胺后再
用甲醇稀释。
一测多评法与外标法测定结果的相对偏差
＜ 0． 5%，表明上述两种方法差异无统计学意义，说明
本实验中建立的以芹菜素对照品为内标的一测多评法
具有可行性，只需用芹菜素对照品，即可进行多指标同
步测定，可替代外标测定法用于两种洋甘菊的质量分
析。本实验中尤其木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷价格
昂贵，以两种洋甘菊中均含成分、价格相对便宜的芹菜
素为内标，同时测定木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-
甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素的含量，从而实现以
一种对照品对多个成分进行质量控制，在质量评价中，
能较大降低测定成本。本实验选用 UPLC 色谱系统一
测多评法同时分析 5 种成分，分离效果较 HPLC 更好，
分离时间更短。
表 3 相对保留时间考察
Tab． 3 Test on relative retention time
色谱柱
木犀草苷 /
芹菜素
芹苷元-7-
葡萄糖苷 /芹菜素
7-甲氧基
香豆素 /芹菜素
木犀草素 /
芹菜素
BEHC18(2． 1 mm × 50 mm) 0． 259 0． 384 0． 685 0． 731
Agilent(4． 6 mm × 250 mm) 0． 260 0． 383 0． 682 0． 730
Atlantic(4． 6 mm × 250 mm) 0． 254 0． 385 0． 683 0． 730
Phenomenex(4． 6 mm × 250 mm) 0． 254 0． 386 0． 684 0． 730
平均值 0． 257 0． 385 0． 684 0． 730
ＲSD /% 1． 200 0． 300 0． 190 0． 070
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表 4 外标法和 QAMS 测定洋甘菊中木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木犀草素、芹菜素的含量
Tab． 4 Content determination on galuteolin，apigenin-7-glucoside，7-methoxycoumarin，luteolin and apigenin in Chamomiles
by external standard method and QAMS mg·g －1，n = 2
产地
芹菜素
外标法
木犀草苷
外标法 QAMS
芹苷元-7-葡萄糖苷
外标法 QAMS
7-甲氧基香豆素
外标法 QAMS
木犀草素
外标法 QAMS
乌鲁木齐市场购样 1 0． 270 0． 072 0． 073 0． 438 0． 436 0． 003 0． 004 0． 008 0． 007
乌鲁木齐市场购样 2 1． 064 … … 3． 633 3． 634 0． 708 0． 710 … …
乌鲁木齐市场购样 3 0． 280 … … 0． 678 0． 680 … … … …
乌鲁木齐市场购样 4 0． 055 0． 091 0． 092 0． 564 0． 566 … … … …
阜康样 0． 465 0． 054 0． 055 6． 209 6． 211 1． 258 1． 257 … …
策勒第一批样 0． 091 0． 025 0． 026 5． 188 5． 189 0． 094 0． 095 0． 022 0． 021
策勒第二批样 0． 182 0． 063 0． 064 5． 856 5． 858 0． 551 0． 550 0． 012 0． 013
昌吉市场购样 0． 278 0． 023 0． 024 0． 261 0． 262 … … … …
维吾尔医院样 0． 210 0． 019 0． 018 0． 217 0． 219 … … … …
和田样 0． 048 0． 035 0． 037 1． 670 1． 672 0． 007 0． 008 0． 015 0． 014
伊犁样 1． 372 0． 012 0． 013 3． 209 3． 21 0． 011 0． 012 0． 097 0． 098
…表示未检出
…means were not detected in the samples
《美国药典》中测定芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，同
时规定 7-甲氧基香豆素，芹菜素，顺式螺醚、反式螺醚
的相对保留时间。本实验中以芹菜素为对照，同时测
定木犀草苷、芹苷元-7-葡萄糖苷、7-甲氧基香豆素、木
犀草素的含量，更适用于中药材的质量控制。
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·5941·医药导报 2014 年 11 月第 33 卷第 11 期