全 文 ：种子 S e e d 1 9 9 9年 第 2期 (总第 1 0 1期 )
2
.
2 R A P D 扩增结果 总 共只需 5分钟左右 , 批量提取一天可 以提取个 25 0 一 30 。 个
样 品 , 如果要对 1 0 。 粒种子进行检验 , 从 D N A 的提取 , 到 P C R
扩增只需要一天左右的时间就可以完成 , 它为 R A P D 技术在
玉米种质及纯度鉴定中的广泛应用提供了技术上的保证 。 另外
由于操作程序大大简化 , 任何一个人只需经过短期培训即可操
作 , 因此在生产上具有很高的使用价值和广阔的应用前景 。
图 2 用新方法提取的 D N A 扩增结果
将提取的每个自交系的 D N A 用紫外分光光度计定量 后 ,
模板 D N A 浓度统一采用 1 on g 扩增结果 见图 2 . 仅用一个引物
工 11 . 就将供试的 10 个 目交系全部区分开 . 如图中第 l 、 2 、 3 号
样品 ,是亲缘关系特别近的 自交 系 47 8 、 4 8 和 3 1 89 . 用 同工酶
电泳方法根本无法 区别 , 而用 R A P D 分子标记方法鉴别 , 差异
就非常明显 , 第 4 、 5 、 6 号样品分别是黄早四 、 吉 8 53 和 50 2 196 ,
同样也能用 R A P D 方法区分开 . 因此 R A P D 技术是进行玉米
种质鉴定非常有效的方法 。
按照 目前试剂和耗材价格 . 进行玉 米杂交种真伪鉴 定 . 每
个 品种需要各种费用 总 计 劝 元左右 . 纯度检测 ( 1。 。 粒种 子 )
需成本 10 元左 右 , 值得一提的是 . 利用本实验提供的 玉米单
粒种子 D N A 提取方法可以大大缩短提取时间 , 提取一个样品
参考文献
王玉 民等 . 玉米半粒种子 D N A 提取及 R A冲D 分析 . 玉米科
学 , 1 9 9 6 : 4 ( 3 ) 2 7一 2 8
石永冈等 . 玉米 S 组 CM S 育性恢复基因的分子标记定位 .
作物学报 , 1 9 9 7 : 2 3 ( l ) l ~ 1 9
傅骏哗等 . 玉米 R A P D 程序优化研究及其初步探讨 . 作物
学报 . 1 9 9 7 : 2 3 ( l ) 5 6一 6 2
余 四斌等 . 用 R A P D 技术鉴定水稻种子纯度初探 . 种子 ,
19 9 6
:
( 5 ) 5 6一 5 7
M
e
D
o n a ld
, 一
M B
.
e t a l
. ,
D N A
e x t r a e t i o n f r o m d r y s e e d s
f o r R A P D a n a l y
s i s in v a r ie t a l i d e n t i f ie a t io n s t u d i e s
.
S e e d
S e ie n e e a n d t e e h
n o
l
o g y
,
1 9 9 4 ; 2 2
:
1 7 1一 1 7 6
T h
o
m
a s
.
H
.
T a i e t a l
. ,
P l a n t M
o l e e u l a r B i o l o g y R e p o r t
.
1 9 9 0 ; 8 ( 4 )
:
2 9 7
向 日葵品种纯度检验的方法与技术
谢宗铭 陈福隆
(新疆农垦科学院作物所向日葵室 新疆石河子 8 3 2 0 0 0)
孙宝启
(中国农业大学种子科学系 北京 1 0 0 0 94)
摘 要
本文评 述 了向 日 葵品种纯度 鉴定的 几 种主要 方法 ,
重 点介 绍 了生化指纹技米和 D N A 指纹诊 断技米的原理
和发展与应 用潜力 , 从实用角度 出发 , 提 出 了传统方法 与
生化方法 以及 分子水平技术有机 结合的品种纯度 鉴定路
线 思想 。
关键词 向日葵 种子 纯度检验
优 良品种的优良种子在农业生产中占有首要的地位 ,是农
业生产上不可替代的最基本的生产资料 ,选用优良种子是提高
作物单位面积产量 , 不增加额外成本而能获得较高经济效益的
增产 措施 , 不论哪种农作物的优良品种 , 都必须依靠种子作为
基础 , 达到大量繁殖和 广泛传播的目的 , 因此种子又是作物扩
大再生产必不可少的物质基础 , 随着国际往来加强 , 种子商品
已成为世界贸易的不可轻视的组成部分 , 国际种子贸易协会的
统计表明 , 目前全球每年生产约 50 亿美元的种子 , 其中商品
占 3 / 5 , 我国的种子商品化发展较快 , 但是由于我国的种子经
营管理法制尚不健全 ,一些种子繁育单位片面追求产量而忽视
种子质量 , 一些不法经营者弄假 、掺假 . 坑农 、 害农现象屡屡发
生 , 影响了正常的农业生 产 . 致使广大农民和国家蒙受巨大损
失 , 现今世界上的农业先进 国家不论栽培水平和机械化程度怎
样 , 仍然将种子的 生产工作放在首要地位 . 对提 高种子品 质和
推广优质种子均予以高度重视 。 因此 我 国的种业要 健康发展 ,
·
3 8
·
一方面要加强种子管理法制的健全并切实执行 ,另一方面要建
立准确可靠 , 简便快速的种子真实性和种子纯度检验的方法 .
此外 ,保护育种者的知识产权 . 也迫切需要对新品种 、 新品系 、
新种质进行鉴定 , 因此研究可靠实用的种子真实性和种子纯度
鉴定方法是一项需要农业科技工作者共同努力 , 亚待解决的关
系农业生产持续发展的重大课题 。
种子纯度检验技术已从形态学观察发展到了基因水平 , 不
同作物有其自身的生物学和遗传背景 , 因此对某些纯度检测方
法有特殊的要求 , 本文便以 向日葵品种的真实性及其纯度的检
验方法进行评述 。
1 形态学方法
形态学方法指检验人员根据作物的形态特征和农艺生理
特征鉴定特定的基因型 , 这虽是一种最原始的种子纯度检验方
法 , 但简单 、 直观 、 易观测记载 , 长期以来形态标记是鉴定向日
葵品种的主要指标 , 包括种子形态观察 、 幼苗形态鉴定和 田间
小区鉴定等 。
1
.
1 种子形态观察法
该方法根据籽粒大小 、 粒形 、 粒色 、 皮壳率进行检验 , 检验
时在平均样 品中抽取 2 份试样 , 经净度测定后 , 首先看籽粒的
大小 , 油 用 向 日葵一般小于食葵 ; 其次看种子颜色及条纹的有
无 向 日葵籽粒颜色有黑色 、 黑色具白条纹 、深灰色具白条纹 、
DOI : 10. 16590 /j . cnki . 1001 -4705. 1999. 02. 057
种子 S e e d 1 9 9 9年 第 2期 (总第 l () l期 )
灰色具白条纹 、 白色具灰条纹 、 白色 ; 再次看粒形 (长宽 比例 ) ;
最后看皮壳率 . 进行籽粒 比较 . 以本品种和 异品种的粒数计算
纯度 . 此法准确性较 差 . 尤其 是由二环 系统选育来的姊妹系及
细胞质不育 系与同型保持系及 其杂 交种很难从种子形 态特征
上得以鉴别 . 因此对待检样品的初步 了解后 , 需要进一步结合
其他方法检验 。
1
.
2 幼苗形态鉴定
根据幼苗若干性状可进行品种鉴定 . 如 . 子叶形状 . 大 小 、
薄厚 、 叶色 . 胚轴颜色等 . 向 日葵子叶有椭圆形 . 阔 卵形等 . 色深
肥厚 、 色浅绿薄 ; 胚茎颜色红 . 紫红 . 紫 .绿 、 浅绿等 . 睡次设标准
色为对照 。
在 品种纯度检验中 . 应用种 了形态鉴定 和幼苗特征 尚不能
或难 以完全鉴定 . 就利 川田 blI 小区进行 更多性状和特征的观察
比较 . 这也是最 为通用的方法 . 我 国一般是在异地种植鉴定 ( 如
海南岛 ) . 田间鉴定进 行三次 为宜 。 苗期 ,蕾期 、 开 花期 . 主要根
据株型 (塔型 、 裙型 、伞型 ) 、 叶 片数 、 叶色 、 叶缘缺刻 , 茸 毛的 多
少 . 苞叶形状 以及 舌状花 、价状花色 、 有无花粉等作出评判 . fl
这种方法受环境条件影响颇 大 . 加之 检验 人 员的经验积累不
同 , 鉴定结果也往往大相径庭 . 准确度较 差 。
2 向 日葵生化指纹的应用
旱期的向 日葵栽培 品 种是开放授粉的 . 自从法国抖学家
I
, e c
l
e r g ( 1 9 9 6 )从 1 1扩 l ; a , , , h ,` 、 户。 , 10 2`才 r i 、 中发现细 饱质雄性 不育
源之后 . 向口葵育种上 杂种优势的利川迅速发展 . 在 7{) 年代杂
交种在生 产上 已经推广 , 至 今已在向 口葵 生产上占统治地位 .
为 r 很快获得优 良的杂交种 . 育种家 往往利用为数不多的优 良
种质材料选育自交系 . 再以这些遗传基础狭窄的自交系选配杂
交组合 . 从而使形态鉴定中能利用的特征性状极为有限 . 加之
形态性状 又多为环境条件影响及数量性状基因有效性的影响 .
所以仅靠形态特征鉴定种子常常是困难的 . 随着生物化学的发
展 . 科学家便致力于探索一种有效的实验室 内的生理生 化技术
来鉴别种子 . R a y m a :记 ( 1 9 5 9) 首光将电泳技 术引入分析植物 蛋
白 . 目前 . 全世界已用电泳技术对二十多仲作物进行 了探讨 . 植
物种子的生化指纹 主要包括同工酶电泳指纹和 种子贮存蛋白
电泳指纹 。
生化指纹 ( ( ’ h e n : ie a l F ` r i g e r l〕 r . : 、 t s )是植物结构基因编码的
直接产物 . 基 因不变 . 作为其表现型的酶 i普, 蛋白 i普型一般 不受
环境的影响 , 作为基因的标记 比形态特征更直接地反映 了遗传
信息 .具有较高的可靠性和鉴别有效性 . 应 用最广泛 。
2
.
1 同工酶的研究
我国最 早利用同工酶 鉴别油用向 口葵 “ 三 系 ” 及杂交种的
是潘湘民等人 ( 198 2 ) . 初步认为结合醋酶 和过氧化物酶 〔p o x)
的酶谱可鉴别 “ 三系 ” 及其杂交种 . 张太平等 ( 1 9 9 6) 运 用聚丙烯
酸胺薄层等电聚焦电泳研究了贵州南部 山区的食 1lJ 型 向 口葵
品种的醋酶同工酶 . 表明酶带众多 ( 5() 条 ) , 品种间酶 i普变异丰
富 . 认为在地方 品种的整理中同 下酶的研 究应用是可行的 .
C a r r e r a 和 p o 、 , e r e n e ( 1 9 9 1 ) 对 西班牙商用 种 1 5 个 自交 系 . 2 2
个杂交种和 6 个开放授粉品种的 8 个同工酶研究表明同工酶
可作为向 日葵育种 . 种子生产及 贸易上的遗传标记 。 Q iu l 。 t 等
( 1 9 9 2) 研究 了地理起源 不同的 52 个向 日葵 自交系的 8 个同工
酶系统 . 表明 . 同时运 用 8 仲同工酶系统可鉴别出其中朽 个基
因 型 . 占总基囚 型数的 .81 % . H 、 l g h c s 等 ( 1 9 9 2) 运用醋酸纤维
素电泳研究 了 9 个向 日葵品 种的 1 4 种同工酶 . 后 又 筛选最具
多态性的 5 种酶用于鉴别另外 1 0 个品 种 . 鉴定效率达 I的 % .
但 是 M o s g e s 和 F r : e d t ( 19 9 4 ) 以 两对 近等荃 因 系 ( S 一 1 3 5 5 / s -
1 3 5 8一〕 1 2 ) · A s 一 1 10 一 p l Z z A s 一 1 1 0 及 其与 I I A 8 9 ( ( ’ M s ) 的杂交
种 , H A 8 9 ( 、 M s ) 和 其他同 型 保持 系为材料 . 研究 J’ `已们的
〔栖 · sE t · P g m 不种同工酶 . 结 果表明 . 既使结合这只种酶潜也
只能鉴别开 所有基 因的 8。 % . 现在法国 主要用 淀粉凝胶电泳
鉴定种子纯度 。
2
.
2 种子贮存蛋白
向日 葵籽实贮存蛋白主要有两类 , 一类是 水溶性的 2 5 清
蛋 自 , 一类是 盐溶性的 1 1 5 球蛋 自 . A n i s i n l o 、 · a 等 ( 1 9 9 5 ) 研 究
了向 口葵清蛋 白的 基 因型 间 差异 和 多 态 性 . 清 蛋 白 的 SI ) S -
P八 G E 可显示 s 一 1 0 条带 . 而采用 R P 一 H P I , C 技术可获得 1 1一
13 个组分 .研究表明 . 清蛋白各组分间 的 比例 , 以及 显示 与不
显 示 在 不同基 因 型 问有差 异 . R ay m ol 记 等 ( 1 9 91) 采用 S D s -
P (A ; E 和等电聚焦双向电泳技术 . 在种 子蛋白提取液中分加还
原剂琉幕 乙醉与不加两种情况 . 给出 了球蛋白组分的精确描述
和命名 . 但发现品种间 的球 蛋 白组成 十分 相似 . 不同品 种间表
现为相同的 异质性 . 对 千编码贮存蛋 白的质 量 . 性状基因的表
达 .育种方案或环境对其无影响或极小 . 基 于此 , 认为用球蛋自
电泳图谱来鉴别表 型相似的向日葵品种存在一定难度 . IA 飞15 1-
n 飞o v a ( 1 9 8 9 )对 5 3 个向口葵品种的球蛋白电泳图进行了比较 ,
表明球蛋白多态性丰富 . 多达 3 种组成 . 可用 于品种 、 自交系
同质性和遗传纯度的鉴定 。 八 :、 15 1: , 10 、二 (一9 9 1 . 19 9 3 ) (t9 研究均表
明球蛋 白存在旅因型 间差 异 . 杂交种具有双亲的全部组分 , 为
共显性遗传 . 发现 品种内存在次要组分的数 目和强度差异 ;远
缘杂交组合的球 蛋 白不是共显性 遗传 . v ar ie r 等 ( 1 9 92) 应用
S D S
一
P A G F 技术研究了 吐 个杂交种 及其亲本自交系的球蛋白
电泳图 i普. 总共检测到 了 27 条带 . 除三条共有带外 . 其它带的
有无决定了基因型的不同 。
3 D N A 指纹诊断技术
D N 八 分子指纹诊断技术基 千旬[究 D N 八 分子 由于缺 失 .
插 入 , 易位 、倒位 、 重排或 由干存在长短 一与排列不 一的重复序列
机 制 而 产 生 的 多 态 性 ( p o ly : n o r 一〕 I、 t s : ,` · d ` v e r s i t y
f i n g e r p r i : 飞t s ) . D N A 分子标记 ( D N A ,: i o le e u l a r n i a r k e r s )或称
遗传标 记 ( gc r、 ict : lf r k e r s )是 由基 因组 D N A 经限制性内切酶
切割 . 或 /和 P C R 扩增 . 或了和分子杂交后在电泳胶板和杂交膜
七检测到的 , 本质上是能反映生物 个体或种群问幕因组 中某种
差异特征的 D N A 片段 。 在向 日葵品种鉴定中应用的有 R F卜P
技术 、 R A P D 技术 、 D N A 指纹技 术 、 R A P D J ) C G E 、 八lF .P 技
术 。
3
.
1 R FI P 技术
l之F x P ( z之e s t r ic 一; o , 1 F r a g ,、、 。 : 飞t I e , l g t l飞 P o l y , , i o r p王飞15: 、 、 )是 由
( ; r o d
z ie k
e : ( 1 9 7 一)五乏早 它,1立的 , I之F I P 是利 用限制性内切酶 消
化个体的 D N A . 通过特异性克隆或合成的探针进行分子杂交 .
从而显示与探针同源的酶切片段在长度上的多态性 。 G e : , t : i)[ t -
et l等 ( 1 9 9 4) 用 18 1 个核 D N 八 探针 . 用 4 种不同的限制性酶检
测 了 17 个自交 系 . 探 测了 3 31 个探针 一 同工酶组合 . 分析 了
1 8 1 个克隆 . 73 个探针具有 多态性 . B c r r y 等 ( 1 9 9 4) 获得 了 2 4
种子 S e e d 1 9 9 9年 第 2期 (总第 1 0 1期 )
个核 D N A 的克隆 ,其中 70 个具有多态性 , 用了 4 种限制性内
切酶 , 以 57 个探针在 24 个自交系 中检测到 了 18 5 个 R E L P 差
异 。
R F L P 的优点是多态稳定 、 容易重复 , 既能探索品 种间核
D N A 的差异 , 又能提示母体细胞质基因的影响 ,还可检测杂合
基因位点 , 但其缺点也是 明显的 , 即程序繁多 , 周期长 ,费用较
高 ,多态有限 ,对材料需求量大且有放射性同位素的潜在污染
和危害 。
3
·
2 R A P D 技术
R A P D ( R a n d o m ly a m p l if ie d p o l y m o r p h ie D N A )
(W i ll i
a m s 1 9 9 o ) 和 A P一 P C R ( A r b i t r a r i ly p r i nr e d P C R ) ( w e ls h
和 M c lC e l an d , 1 9 90) 实质上是相同的一种分子标记技术 ,均是
以 P C R 技术为基础 ,利用 9一 l o b p 随机引物对基因组 D N A 进
行扩增 ,再经过脂糖凝胶电泳或聚丙烯酞胺凝胶电泳经澳化 乙
锭或银染得到多态性的 D N A 谱带 , R A P D 技术主要特点是反
应灵敏 ,多态性强 ,具有简便 ,快速的优点 , 既有大量的随机引
物可供筛选使用 ,又不受到种属的限制 , 因而被广泛用于多种
作物的种子鉴定 . L a w s o n 等 ( 1 9 9 4) 用 R A P D 技术研究了向日
葵的遗传多态性 , 栽培向 日葵多态性标记占总扩增标记的
5 3%
,
M o
s g e r 和 F r ie d t ( 1 9 9 4 )研究 T 二对近等基因系和 H A s g
c( m s )及其杂交种能及同型保持系 H A 89 的 R A P D 多态性 ,结
果表明 , 由于 R A P D 产物的重复性不好和对反应条件过分敏
感 ,其变异水平同工酶相似 ,虽可鉴别所有基因型 ,但不能够获
得重复 . R A P D 是显性标记 ,不能鉴定杂合子 ,在种子纯度鉴定
中具有局限性 。
3
.
3 R A P D
一
D G G E ( R A P D
一
D e n a t u r in g g r a d i
a n t g e l
e
l
e e -
t r o P h o r e s is )
R A P o 工减〕G E 技术由 M y e r s ( 1 9 5 7 )首先应用 。 该技术可以
分辩出相同或相似大小片段差异性 , 甚至可检测出 D N A 片段
的单碱基差异 。 D . B r u n e l ( 1 9 9 4 )选用 2 8 个法国向日葵杂交种 ,
15 个遗传差异显著的品 系和 2 个俄国品种 , 1 个埃及品种和 1
个法国品种 ,进行了 D N A 变性梯度凝胶 电泳和 P C R 扩增产
物直接测序 (D G G E ) , 以向日葵的清蛋白序列 H A G S为对照评
价 D G G E 所检测的多态性程度 ,成功地鉴别了所有的试验材
料 ,该方法提供了一项对大批样品进行快速一步测定遗传多态
性的技术 , 比现行的蛋白质电泳技术鉴定效率高 ,且能检测单
碱基的变化 ,对一些亲缘关系密切的品种鉴定结果会更准确 ,
全部测定程序只需一昼夜 (P C R I 夜 , D G G E I 天 )故可用于纯
度检验的常规分析 。
.3 4 D N A 指纹分析技术
D N A 指纹分析是 R F L P 分析的特殊类型 , 尚无明确的定
义 ,指纹图谱分析所用的探针 ,为高拷贝的小微星探针 ,微卫星
探针或人工合成的简单重复序列 , 如 : ( G A T 4 ) 4 等 ,真核生物
的基因组中散布大量的小卫星和微卫星序列 , 并具有高度的多
态性 ( T a u t Z , 1 9 8 9 , T a u t z 和 R e n z , 1 9 8 4 ) , 小卫星由串联重复的
短序列 (核心序列 )组成 ,通常多为 15 一 3 6 b p 长 ,微卫星由更短
的重复单位串联成 ,重复单位一般长 2~ 4 b p , 不同个体或基因
型的基因组 D N A 经酶切电泳和 S o ut h e m 转移后 ,以小卫星序
或简单重复序列为探针可以分别同时检测到众多的具共同核
心序列或简单重复序列的小卫星或微卫星位点 , 得到许多高度
多态性条带 ,具个体或基因型特异性 ,所以可进行品种鉴定 .
·
4 0
·
M
o s g e s 和 F r ie d r ( 1 9 9 4 ) 以 三 种 人 工 合 成 随 机 重复 序 列
[ ( G A C A )4
、
( G A T A ) 4
、
( G G A T ) 4 ]为探针 , 用 了六 种限制性
内切酶对 两对近等基因系 S 一 1 3 58,/ 5一 1 3 5 8一 p 1 2、 A s 一 1 1 0一 p 1 2 /
A s
一
n o
、
H A 89 ( C M S )及其 杂交 种 , H A 89 的同 型保持系的
D N A 指纹进行了研究 , 表 明 : 限制性内切酶 D r al 或 iH nf l 和
( G A T A )4 探针的单一指纹就可鉴别全部杂交种和近等基 因
系 , 因此其在品种鉴定上比同工酶和 P C R 技术更高效 ,但该技
术程序繁琐 ,费用较高 ,在种子纯度检验上虽具潜力 , 在 目前尚
不能普及 。
.3 5 A F L P 技术
A F L P ( A m p z if i e d F r a g nr e n r l e n g t h r
, o ly m o r p h is rn )扩增片
断长度多态性 ,实质是 R F L P 和 R A P D 两项技术的结合 , 由荷
兰科学家 Z ab ae n 等人发明的一项专利技术 。 该技术设计了对
某种限制性内切酶的通用接头 ( A d aP t e r )及与接头序列的限制
性酶切位点配对的专用引物 , 为有选择的扩增某些限制性片
段 , 专用引物在酶切位点序列的 3 端还添加 1一 10 个长 目不等
的随机脱氧核昔酸 ,由此可调节 A F L P 产物条带的特异性和
数量 ,该技术具较好的重复性 , 但操作复杂 , 步骤多 ,对实验技
能和仅器精度要求均很高 , 难以在作物 品种纯度鉴定上普及 .
v
.
H
o
ng t ar k ul 等 ( 1 9 9 7 )首次采用 A F L P 技术研究了油用向日
葵自交系孤遗传多样性 ,采用 6 个 A F L P 引物组合 , 对 24 个公
开 自交系进行了指纹 , 共获得了 3 59 个 R F L P 标记 ,其中约有
一半 ( 4 7 . 9% )的 R F L P 片段至少在一对品系间显示多态性 。
4 结语
综上所述 , 向日葵种子纯度检验从传统的形态鉴别发展到
分子水平和基因水平 , 其方法是由简单到复杂而精确 , 但是每
一种方法总还是或多或少有各自的不足或缺点 ,这也正是至今
尚无标准且公认的鉴定方法的 “ 瓶颈 ”所在 , 人们期望 ,秒子纯
度检验方法快速 、简便 、 准确 、 经济 、 但并非同等重要 , 关键还是
要准确 , 因此 ,在方法的选择应视具体情况而有所侧重 ,并使之
标准化 , 增强对 比研究 , 只要能准确进行品种鉴定的方法就是
好的方法 ,传统的形态鉴定方法并非过时 , 笔者认为将各种方
法进行组合 ,灵活地应用于种子纯度检验 ,也许能达到准确 、 经
济 、快速的目的 。 比如 :种子形态学鉴定与直接以种子为材料的
生化和分子标记技术相结合 ;幼苗形态鉴定与以幼苗组织为对
象的生化和分子标记技术组合 , 基于种子纯度检验的特殊性
— 逐粒和逐株鉴定 , 因此 , 可期望减少检测工作量 , 相对快捷而准确 ,经济实用 , 许多生化技术和分子生物学技术本身就需
要深入研究而改进和 完善 . 我们相信 , 随着科学技术的发展 , 人
们终归会获得一个完善的公认的标准的鉴定技术 。
参考文献
1 毕辛华 ,戴心维 . 种子学 . 北京 : 中国农业出版社 , 1 9 9 3
2 潘湘民等 . 向日葵 “ 三系 ” 的同工酶分析 . 中国油料 , 1 9 8 2 ;
( 1 ) 6 6一 7 5
3 孙致良 , 杨国枝 . 实用种子检验技术 . 北京 : 中国农业出版
社 , 1 9 9 3
4 叶常平 ,戴心维 . 种子学 . 北京 : 中国农业出版社 , 1 9 9 4 : 2~ 5
5 张太平等 . 贵州省南部 山区向 日葵地方品种酷酶同工酶研
究 . 中国油料作物科学技术新进展 : 1 9 9 6 油料作物学术年
会论文集 , 北京 : 中国农业科技出版社 , 1 9 9 6
种子 S e e d 1 9 9 9年 第 2期 (总 第 1 0 1期 )
6 郑成超 , 温孚江 . D N A 分子标记技术与作物种子纯度鉴定 .
种子工 程与农业发展 , 北京 : 中国农业出版社 . 1 9 9 7
7 A
n is i m
o 二 a , I
.
N
. ,
G a v r i ly
u e k
,
I
.
P
. ,
H
e t e r o g e n e it y a n d
P o ly m
o r p h y
z s
m
o
f t h
e l l s G l o b
u
li
n o
f S
u n
f l
o w e r S e e d
s
.
1 9 8 9
.
G E N E T I C S ( IN R U S S I A N )
,
2 5
:
1 2 4 8一 1 2 5 5 .
8 A n is znr
o 、 · a , I
.
N 二 I . P . G a v r il y u e k , V . G . K o n a r e v . l d e n t i f i-
e a t io n o f S
u n f lo w e r L i n e s a n d v a r z e t ie s b y h
e
l i
a n t h i
n in e l
e e -
t r o P h
o r e s l s
,
P l
一
A N T (二A R I E T I E S a n d s e e d s , 1 9 9 1 ; 4 : 1 3 3 一
1 4 1
9 A n 一s lm o 、
·
a , I
.
N
.
,
F
.
G e o r g 一e v a 一 T o d o r o v a . R . V a s s il e v a ,
V a r ia b i li t y o fH
e
li
a n t h i
n in
, t h
e m a一o r s e e d g lo b u l in in g e n u s
H e li
a n t h
u s 1
. ,
H e li
a , 1 9 9 3 ; 1 6 ( 1 8 )
:
4 9 一 5 8
1 0 A n i s im
o v a , 1
.
N
. ,
R o g e r
,
J
.
F id o
, e t a l
,
G e n e t ie V a r i a t io n
a n d p o ly m o r p h is rn o f 25 A lb u m in s o f S u n f lo w e r
.
E u p h y t i
-
e a , 1 9 9 5 ; 8 3
:
1 5一 2 3 .
1 1 eB
r r y , 5
.
T
. ,
R
.
J
.
A ll
e n , e t a l
,
M
o
l
e e u
l
e r m a r k e r a n a ly s i s
o f H E L IA N T H U S A N N V V S 1
.
1
.
R
e s t r ie t io n F
r a g m
e n t
l e n g t h p o l y m o r p h y s im b e t w e e n i n b r e d li n e s o f e u lt iv a t i e d
s u n f lo w e r
,
T h
e o r , A p ll
.
G
e n e t
. ,
1 9 9 4 ; 8 9
:
4 3 5一 4 1 1
12 B
r u n , 1
.
D
. ,
D
e n a t u r i n g g r a d i
e n t g e l e le e t r o p h o r e s i s
( D G G E ) a n d d i r e e t s e q e n e in g o f P C R a m p li f ie d g e n o m i e
D N A
:
R a P i d a n d r e lia b l e id e n t if ie a t i o n o f h e li a n t h u s a n
-
n u u s L
.
G
u lt i v a r s
,
S e e e d S e i阶 e e h n o l . , 1 9 9 4 ; 2 2 : 18 5 一
1 9 4
1 3 G a r r e r a
,
A
. ,
P o v e r e n e
,
M
. ,
G e n e t i e v a r ia t i o n in s u n f l
o w
-
e r a s s e s e d b y is o e n z y m a t ie m a r k e r s
,
( a b s t r a e t ) IN P la n t
B
r e e
d i n g A b s t a e t
,
1 9 9 4 ; 6 4 ( 2 )
:
2 6 8
1 4 G
e n t z ib it t
e
l
,
1
. ,
Y 一 x , Zh a n g , e t a l , R F L P s t u d ie s o f g e -
n e t i e r e l
a t io n s h ip
s a m o n g in b r e d li n e s o f t h e e u l t iv a t e d
s u n f l
o
w
e r ,
H
e
li
a n t h
u s a n n u u s L
. : e v id
e n e e f
o r d is t i n e t r e
-
l 5
l 6
l 7
l 8
l 9
2 0
2 l
5 t o r e r
.
a n d m a in t a i n e r g e r m p l a s m p o o ls
,
T h e o r
.
A p p l
.
G e n e t
. ,
1 9 9 4
,
8 9
:
4 1 9
H
o n g t r a k u l
, v
. ,
G
.
M
.
H
u e s t is
,
5
.
J
. ,
K n a p p
,
A F L P a s a
t o o l f
o r D N A f in g
e r p r i n t in g s u n f lo w e r g e m r p l a s m
:
g e n e t ie
d i
v e r s i t y a m o n g 0 11 s e e d in b r e d li n e s
,
T h
e o r
.
A p p l
.
G
e n e t
. ,
1 9 9 7 ; 9 5
:
4 0 0 一 4 0 7
H
u g h e s
,
J
.
M
. ,
M
a t h e r
,
P
.
B二 M e d o n a ld , J . , D l f fe r e n t l o n
b
e t w e e n s u n f l
o w e r a n d s o r g h u m e u lt i v e a r s u s in g e e ll u lo s e
a e e t a t e e l
e e t r o p h
o r e s is
,
S e e d S
e i
. 邑 T e e h o n o l二 1 9 9 2 ; 2 0 :
1 5 一 2 2
I
矛 o w s o n
,
W
.
R
. ,
R
.
J
.
H e n r y
, e t a l
,
G e n e t ie d iv e r s : t y , n
s u n f l o w e r H e l ia n t h u s a n n u u s L
.
a s r e v e a l e d b y R A P D
a n a l y
s i s
,
A u s t r a l i
a n
1
.
o
f A g
r ie u l t
u r a
l R
e s e a r e
h
,
1 9 9 4 ; 4 5
:
1 3 1 9一 2 7
M
o s g e s
,
G
. ,
W
.
F
r i e d t
,
G
e n e t ie f i
n g e r p r in t in g o f
s u n -
fl o w e r li n e s a n d F l h y b r id s u s l n g e n z y m e s
.
s im p l
e
r e P e t iv e s e q e n e e s a s h y b r y d iz a t io n p r o b e s a n d r a n d o m s
f
o r
P C R
,
P l a n t B r e e d i n g
,
1 9 9 4 ; 1 1 3
:
1 1 4 一 1 2 4
Q
u
ill
e t , M
.
C
. ,
F
.
V
e a r , 9
.
B r a n r a r d
, t h
e u s e o
f i
s o z y m e
P o l y m o r Ph is m f o r id e n t if i e a t i o n o f s u n f lo w e r in b r e d l in e s
,
J
.
o f G e n e t ie s & B
r e e d in g
,
1 9 9 2 ; 4 6 ( 4 ) 2 9 5一 3 0 4
R a y m o n d
,
J
. ,
V
.
I n q u e l lo
,
J
.
L
.
A z a n z a
,
T h e s e e d P r o t e i n s
o f s u n f l o w e r
: e o m p a r a t iv e s t u d ie s o f e u lt iv e r s
,
P h y t o
-
e
h
e m is t r y
,
1 9 9 1 ; 3 0 ( 9 )
:
2 6 4 9一 5 6
T a u t z
,
D
. ,
M
.
R e n z
,
S im p l e s e q u e n e e s a r e u b iq u i t o u s
r e p e t iv e e o m p
o n e n t s o f
e u k e r y o t ie g e n o m e s
,
N
u e l
.
A
e i d s
R e s
. ,
19 9 4 ; 1 2
:
4 1 2 7一 5 6
V
a r e r ,
A
. ,
M
.
D
a
d l
a n i
,
R
.
J
. ,
C
o o k e
,
I d
e n t if i
e a t i o n o f
s u洲 o w e r h y b r i d s a n d i n b r e d s b y S D S 一 P A G E o f s e e d
P r o t e in
s , S e e d R
e s e a r e h
,
2 0 ( 2 )
:
1 3 8一 1 4 1
2
卜 . 品种介绍 ·
蚕豆 I庙蚕 4 号
赵登程
(甘肃省种子管理总站 7 3 0 0 2 0)
品种来源 : 该品种系甘肃省临夏州农科所 1 9 8 6 年从张掖农校提供的加拿大 32 1 蚕豆中选择获得的稳定变异群体 。 原代号加拿
大 3 2 1一 1 。 1 9 9 8 年 n 月经甘肃省农作物品种审定委员会第 15 次全委扩大会议审定通过 。
特征特性 :幼苗直立 , 茎紫色 。 叶片浅绿 , 长卵型 。 株型 紧凑 , 有效分枝 1 . 7 个左右 , 茎粗 0 . gc m , 株高 56 一 1 3 c0 m 。 花浅紫色 , 始
英高度 2 0c m 左右 .英形长弯 、 株荚数 9 个左右 , 英长 l lc m ,英粒数 3一 4 数 。 大粒型 ,色鲜白 , 种脐黑色 。 百粒重 1 5 09 . 鼓粒速度快 . 淀
粉含量 48 . 18 % ,粗蛋白 2 6 . 04 % , 粗脂肪 1 . 36 % , 赖氨酸 2 . 04 % , 灰粉 3 . 08 % 。 生育期 110 天 , 抗旱 、 抗倒 、 不裂荚 。 经对照临夏马牙
(发病率 9% 、 50 % 、 48 % )表现抗病 、 抗锈病及赤斑病 。
产量水平 : 1 9 9 4 年省区试 6 6 7 m 2 产 1 3 6~ 2 7 5 . 7k g , 平均 25 5 . 5 4 k g , 较对照增产 5 . 2% ; 一9 9 5年省区试 6 6 7 m 2 产 1 3 2一 1 5 6 . s k g .
1 9 9 6 年生产试验 , 6 6 7m 2 产 2 6 5 k g , 较对照增产 1 1 . 16% 。
栽培技术要点 :宜密植 . 667 m 2 保苗 1 . 4 万株 (播种量 20k g 左右 ) ,宽窄行种植 。 适期早播 ,与春小麦同期播种 , 一般 3 月中 、 上旬
为宜 。 农家肥 6 6 7m 2 施 魂 。0 一 5 5 0呱 g , 嗜施磷肥 (施过磷酸钙 25 k g 以上 ) 。 宜与甜菜 、 洋芋 、 地膜玉米等间套带复合种植 。 生长期及
时防治鼠害和蚜虫 。
适宜范围 : 适宜 于海拔 2 0 (0J 一 2 4。。m 的高寒阴湿地区种植 ,在川源灌区可作间套带种植的当家品种 , 也可作为早上市的蔬菜
品种应用 。
.
4 1
·