全 文 ：中国药房 2012年第23卷第15期 China Pharmacy 2012Vol.23No.15
中药材种类繁多，异物同名、一药多源现象（多基源）给中
药材标准制订和质量评价造成了极大的不便。随着中药药效
物质基础研究的深入，药材质量标准的提升，多基源品种标准
单列，一物一名是大势所趋。我国是中药材大国，为扩大药
源，满足制药工业等需要，《中国药典》全面取消多基源品种的
收载并不现实。但为了实现规范化、标准化，在科学研究的基
础上，对多源性品种进行逐步的限制很有必要。化学成分或
药理、药效差别甚远的多基源药材并列为一味药材并不合理，
这必然会导致品种混乱和临床安全的不可控。
狼毒是2010年版《中国药典》（一部）正式收载的一类多基
源中药材，其定义为大戟科植物月腺大戟（Euphorbia ebract-
edata）或狼毒大戟（Euphorbia fischeriana）的干燥根[1]。据文献
查询和本课题研究结果表明，月腺大戟和狼毒大戟在毒理和
药理、药效方面颇多不同，2010年版《中国药典》笼统将其收录
定义为同一药材似有不妥，以现代药理方法对其进行毒理和
药理、药效对比研究可以达到正本清源目的。据2010年版《中
国药典》记载，狼毒有散结的功效，结在中医泛指一切有形的
肿块或是气象不畅等证，有形的肿块有恶性肿瘤、良性肿瘤、
囊肿、淋巴结肿大、皮下结节、皮疹等。本文主要对月腺大戟
和狼毒大戟体外抗肿瘤活性进行对比研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Axiovert 40CFI型倒置显微镜（德国蔡氏公司）；Nu-
425-400E型生物安全柜、Nu-4750E型CO2培养箱（美国Nuaire
公司）；Versa Max型连续波长酶标仪（美国Molecular Devices
公司）；RE-301型旋转蒸发仪（上海予正仪器设备有限公司）。
1.2 试药
月腺大戟购于安徽省亳州药材市场，狼毒大戟由康臣药
业有限公司提供，均经广州市药品检验所中药室刘柏英主任
药师鉴定为真品；RPMI1640细胞培养基（美国Gibco公司）；
Δ广州市食品药品监督管理局科技计划项目（2010GZFDA011）
＊主管药师。研究方向：药理学、医疗器械与药品包装材料安全
性评价。电话：020-26262368-653。E-mail：hhh9690@163.com
#通讯作者：主任药师。研究方向：生化制药、医疗器械与药品包
装材料安全性评价。电话：020-26282368-658。E-mail:gz-liwei@tom.
com
月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响对比研究Δ
何华红1＊，王华倩2，严小红1，李 薇1#（1.广州市药品检验所，广州 510160；2.广东工业大学轻工化工学院，广
州 51006）
中图分类号 R285；R97 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2012）15-1359-03
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012. 5.06
摘 要 目的：对比研究月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响。方法：灌胃月腺大戟（0.097、0.485、0.242
5g·kg－1）、狼毒大戟（0.05、0.025、0.0125g·kg－1）混悬液，每天1次，连续3d，末次给药后自大鼠腹主动脉采血，以分离的血清加培
养液体外培养人肝癌细胞BEL-7402；MTT比色法测定生长抑制率；通过集落形成试验测定克隆形成率。结果：狼毒大戟对
BEL-7402细胞增殖和克隆形成率有明显的抑制或降低作用，且与给药剂量呈正相关；月腺大戟对BEL-7402细胞增殖和克隆形成
率无明显影响。结论：狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖抑制作用明显强于月腺大戟。
关键词 狼毒；月腺大戟；狼毒大戟；血清药理学；增殖
Contrastive Study on the Effects of Euphorbia ebracteolata vs. Euphorbia fischeriana on the Proliferation of
Human Hepatoma Carcinoma Cell BEL-7402
HE Hua-hong，YAN Xiao-hong，LI Wei（Guangzhou Institute for Drug Control，Guangzhou 510160，China）
WANG Hua-qian（School of Chemical Engineering and Light Industy，Guangdong University of Technology，
Guangzhou 510006，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To compare the effects of Euphorbia ebracteolata vs. Euphorbia fischeriana on the proliferation of hu-
man hepatoma carcinoma cell BEL-7402. METHODS：Rats were given E. ebracteolata（0.097，0.485，0.2425g·kg－1）and E. fische-
riana（0.05，0.025，0.0125g·kg－1）intragastrically once a day for consecutive 3days. Blood sample was collected from abdominal
aorta of rats after the last administration. Human hepatoma carcinoma cell BEL-7402was cultured in isolated serum and nutrient so-
lution in vitro. The growth inhibition rate was determined by MTT colorimetric assay and colony-forming test was used for the deter-
mination of formation rate of clone. RESULTS：E. fischeriana inhibited the proliferation of BEL-7402and the colone formation rate
significantly and its effect was positively correlated with drug dosage. E. ebracteolata had no significant effect on the proliferation
of BEL-7402and the colone formation rate. CONCLUSION：E. fischeriana has significant inhibition effect on the proliferation of
human hepatoma carcinoma cell BEL-7402and it is superior to E. ebracteolata.
KEY WORDS Euphorbiae Ebractedatae Radix；Euphorbia ebracteolata；Euphorbiae fischeriana；Serum-pharmacology；prolifera-
tion
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China Pharmacy 2012Vol.23No.15 中国药房 2012年第23卷第15期
胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号：
100226）；MTT（德国Sigma公司，批号：091206）；胰蛋白酶（广
州标迈生物科技有限公司，批号：201001）；注射用环磷酰胺
（CTX，山西普德药业股份有限公司，批号：20090902）；其余试
剂均为分析纯。
1.3 动物
SPF级SD大鼠40只，体重180～200g，♀♂兼半，由广东
省医学实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（粤）
2008- 003）。
1.4 细胞株
人肝癌细胞株BEL-7402（购于中科院上海生命科学研究
所细胞库），以RPMI1640培养液（含10％胎牛血清，100IU·
mL－1青霉素与100IU·mL－1链霉素），37℃、5％CO2、饱和湿度
常规培养，传代。
2 方法
2.1 受试物的制备
药材打粉，37℃烘干，称取适量药粉，乙醇超声提取（2次，
每次30min，滤液无色），定性滤纸过滤，收集滤液，经0.45µm
滤膜过滤，收集滤液，经旋转蒸发仪除去残留溶剂得浸膏，称
取适量浸膏，用适当浓度的吐温80制成混悬液，备用。
2.2 分组与含药血清制备[2～4]
实验分为9组，即空白对照（等容生理盐水，ig）、溶剂对照
（等容吐温80，ig）、CTX（100mg·kg－1，ip）和月腺大戟高、中、
低剂量（0.97、0.485、0.2425g·kg－1，ig）以及狼毒大戟高、中、低
剂量（0.05、0.025、0.0125g·kg－1，ig）组。实验前禁食12h，参考
笔者以前急性毒性实验数据，月腺大戟和狼毒大戟均以其半数
致死量（LD50）的1/5为高剂量（月腺大戟醇提浸膏为0.97g·kg－1；
狼毒大戟醇提浸膏为0.05g·kg－1），1∶0.5为剂间比。每天给药
1次，连续3d。于末次给药后1h在无菌条件下自腹主动脉采
血，4℃下静置过夜，3500r·min－1离心30min，分离血清，将各
组内大鼠血清等量混匀，56℃、30min灭活，0.22µm滤膜过滤
除菌，－20℃贮藏，备用。
2.3 MTT比色法测定生长抑制率（IR）[5]
BEL-7402细胞株常规培养，取生长旺盛对数生长期细胞
常规消化，用新鲜含血清培养液配制成1×104个/mL，96孔板各
孔加细胞悬液100μL，37℃、5％CO2、饱和湿度常规培养，24h
后换成无血清的培养基，加入受试血清（每孔10μL），各组均
设6个复孔，另设置正常无血清的培养液空白对照组6孔（每
孔100μL），调零孔6孔（每孔只加100μL无血清的培养液，不
加细胞），继续培养72h后，观察细胞形态。每孔加5mg·mL－1
的MTT溶液20μL，置培养箱内继续培养5h，弃去孔内液体，
每孔加入200μL二甲基亚砜（DMSO），慢速振荡10min ，于酶
标仪570nm波长处检测光密度（A）值，取6孔平均值。根据下
式计算细胞 IR：IR（％）＝（1－实验组A值/空白对照组A值）×
100％。
2.4 集落形成试验[6]
BEL-7402细胞株常规培养，取生长旺盛对数生长期细胞
常规消化，用新鲜含血清培养液分级稀释，配制成200个/mL
悬液，按每皿200个细胞接种于培养皿中，十字方向轻轻晃动
培养皿，均匀分散细胞，37℃、5％CO2、饱和湿度常规培养24
h，弃去培养液，换成无血清的培养液，加入受试血清（每皿20μL），
各组均设3个复皿，常规培养2周，至肉眼可见克隆，终止培
养，弃去培养液，用PBS小心浸洗2次，每皿加纯甲醇5mL固
定15min，弃去固定液，加适量姬姆萨应用液染色15min，流水
缓慢洗去染色液，空气干燥，肉眼数克隆数，当不能分辨时在
倒置显微镜下观察，以＞50个细胞计数为1个克隆。按下式计
算克隆形成率：克隆形成率（％）＝克隆数/接种细胞数×100％。
2.5 统计学方法
SPSS13.0统计软件分析，MTT比色法检测采用双侧 t检验，
集落形成试验采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 含药血清对肿瘤细胞形态学的影响
倒置显微镜下观察可见，空白对照组与溶剂对照组细胞
形态正常，密度大，细胞呈梭形，边缘清晰、光滑，贴壁性好；
CTX组细胞贴壁差，细胞变圆，漂浮较多；狼毒大戟低剂量组
细胞形态变化不大，贴壁性好，边缘清晰、光滑；狼毒大戟中剂
量组细胞形态不规则，细胞边缘不齐；狼毒大戟高剂量组细胞
贴壁更差，细胞变圆较多，漂浮细胞多见；月腺大戟各组细胞
基本无明显变化。
3.2 含药血清对BEL-7402细胞增殖的影响
高、中剂量狼毒大戟能显著抑制 BEL-7402细胞体外增
殖，且其抑制效应呈剂量正相关；月腺大戟对BEL-7402细胞
体外增殖无明显抑制作用。高、中剂量狼毒大戟能显著抑制
BEL-7402细胞体外增殖，降低克隆形成率且其抑制效应呈剂
量正相关；月腺大戟对BEL-7402细胞体外增殖和克隆形成率
无明显抑制或降低作用。A与 IR测定结果见表1；克隆数与克
隆形成率测定结果见表2。
表1 A与 IR测定结果（x±s，n＝6）
Tab 1 Determination of A and IR（x±s，n＝6）
组别
空白对照组
溶剂对照组
CTX组
狼毒大戟高剂量组
狼毒大戟中剂量组
狼毒大戟低剂量组
月腺大戟高剂量组
月腺大戟中剂量组
月腺大戟低剂量组
剂量/g·d－1·kg－1
-
-
0.100 0
0.050 0
0.025 0
0.012 5
0.970 0
0.485 0
0.242 5
A
0.835±0.032
0.796±0.036
0.263±0.037＊
0.241±0.015＊
0.583±0.060＊
0.810±0.026
0.805±0.037
0.813±0.024
0.851±0.015
IR/％
-
5
70＊
72＊
32＊
4
4
4
3
与空白对照组比较：＊P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.01
表2 克隆数与克隆形成率测定结果（x±s，n＝3）
Tab 2 Determination of amount and formation rate of clone
（x±s，n＝3）
组别
空白对照组
溶剂对照组
CTX组
狼毒大戟高剂量组
狼毒大戟中剂量组
狼毒大戟低剂量组
月腺大戟高剂量组
月腺大戟中剂量组
月腺大戟低剂量组
剂量/g·d－1·kg－1
-
-
0.100 0
0.050 0
0.025 0
0.012 5
0.970 0
0.485 0
0.242 5
克隆数
103.67±3.52
110.00±2.26
20.34±3.15＊
31.34±5.01＊
48.50±4.11＊
95.68±6.10
91.26±3.51
96.55±5.20
106.33±2.80
克隆形成率/％
51.8
55.0
10.2＊
15.7＊
24.2＊
47.8
45.6
48.3
53.2
与空白对照组比较：＊P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.01
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中国药房 2012年第23卷第15期 China Pharmacy 2012Vol.23No.15
4 讨论
狼毒体外抗肿瘤药效研究颇多，但存在几个问题：一是没
有系统对比狼毒大戟和月腺大戟的体外抗肿瘤活性；二是多
采用动物瘤株进行研究，存在人和动物的种属差异问题；三是
多采用粗提物直接外加于体外培养细胞，这样一些非生理环
境如中药粗制剂的杂质、电解质或鞣质所引起的培养液渗透
压和pH等的改变会影响细胞的生长，导致一些假阳性的结果
出现[2]。
采用血清药理学方法，取含药血清作用于体外培养人肿
瘤细胞株可以克服以上的一些不足，较好地反映出狼毒体外
抗肿瘤药理活性。通过系统对比狼毒大戟和月腺大戟的体外
抗肿瘤活性，可以看出其不同点，为中药狼毒药材标准制订提
供参考。
研究结果表明，狼毒大戟与月腺大戟对于人肝癌细胞
BEL-7402体外增殖抑制活性有很大区别，狼毒大戟作用活性
明显强于月腺大戟。2010年版《中国药典》笼统将其收录定义
为同一药材似有不妥，对其进行系统对比研究很有必要，能达
到正本清源，为标准制订提供实验依据的目的。
血清药理学方法也存在诸多待解决的问题，如无确定的
最佳给药方案、最佳的采血时间，无法做到体外培养体系内药
物浓度与血药浓度相等而又不影响细胞生长等。这些都有可
能对实验结果造成影响，从而出现假阴性结果[7]。但在同样实
验条件下，两种含药血清所得的结果对于对比其药理活性的
不同是有参考价值的。
参考文献
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年版.北京：中国医药科技出版社，2010：269.
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Japanese and Chinese traditional herbal medicinal mixture
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armacological testing method [J]. J Ethnopharmacol，
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版社，2006：50.
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斑蝥胶囊对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响 [J].中
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B16细胞的抑制作用[J].中国药学，2009，44（2）：103.
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[J].中国中西医结合杂志，2004，24（8）：741.
（收稿日期：2011-05-12修回日期：2011-12-08）
Δ广州市科技三项项目（2006Z3-E4121）
＊硕士研究生。研究方向：药物新剂型。电话：020-83595032-
3056。E-mail：huzeli871001@163.com
# 通讯作者：主任药师，教授。研究方向：临床药学，药物新剂
型。电话：020-83595032-3 57。E-mail：ghcheng661203@126.com
汉防己甲素聚乳酸微球的安全性评价Δ
胡泽丽＊，程国华 #，庞廷媛，陈 娟，汪小乐（广州医学院附属肿瘤医院药剂科，广州 510095）
中图分类号 R965.3 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2012）15-1361-03
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012. 5.07
摘 要 目的：评价汉防己甲素聚乳酸微球（TET-MC）的安全性。方法：采用液中干燥法制备TET-MC，对TET-MC进行急性毒
性、血管刺激性、肌肉刺激性、过敏性试验。结果：小鼠静脉注射TET-MC的半数致死量为158.9mg·kg－1；未观察到TET-MC对实
验动物有血管刺激性、过敏性，但有轻微的肌肉刺激性。结论：汉防己甲素微球化后毒性降低，应用于受试动物安全性较好。
关键词 汉防己甲素；微球；急性毒性；安全性
Safety Evaluation of Tetrandrine Polylactic Acid Microspheres
HU Ze-li，CHENG Guo-hua，PANG Ting-yuan，CHEN Juan，WANG Xiao-le（Dept. of Pharmacy，The Affiliat-
ed Tumor Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510095，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To evaluate the safety of Polylactic acid microspheres（TET-MC）. METHODS：The in-liquid drying
was used to prepare TET-MC. The acute toxicity LD50test，venous and muscular stimulation test，allergic test in vitro were conduct-
ed. RESULTS：The value of LD50for mice with intravenous injection was 158.9mg·kg－1. There was slight muscle stimulating，but
no veins stimulating，allergic reactions. CONCLUSION：Toxicity of TET is decreased by microsphere and TET-MC is basically
safe.
KEY WORDS Tetrandrin；Microspheres；Acute toxicity；Safety
􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋
汉防己甲素（Tetrandine ，TET）是从防己科植物的干燥块
根中提取出来的一种双苄基异喹啉类生物碱，有抗心肌缺血、
抑制血小板聚集、解痉、镇痛、镇静、抗炎、抗溃疡等药理作
用。临床上TET对矽肺、风湿痛有一定疗效，常与低剂量放射
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