全 文 ：北方园艺２０１１（２３）：１１１～１１３ ·生物技术·
第一作者简介：郜旭芳（１９８２－），女，河南宝丰人，在读硕士，研究方
向为细胞工程。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｆａｎｇ６０１＠１６３．ｃｏｍ。
责任作者：孔祥生（１９５５－），男，河南鲁山人，硕士，教授，现主要从
事植物生理学和生物技术的教学与科研工作。
收稿日期：２０１１－０９－２１
勋章菊组培快繁技术研究
郜 旭 芳，孔 祥 生，张 妙 霞，朱 晓 娟
（河南科技大学 农学院，河南 洛阳４７１００３）
　　摘　要：以勋章菊无菌苗叶片为外植体，以 ＭＳ为基本培养基，添加不同浓度ＴＤＺ、２，４－Ｄ、
ＩＡＡ、ＩＢＡ，研究不同浓度激素及组合对丛生芽诱导、试管苗生根的影响，并进行试管苗练苗和移
栽。结果表明：最佳丛生芽诱导培养基为ＭＳ＋ＴＤＺ　０．８ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ（０．１～０．５）ｍｇ／Ｌ，诱导率达
到９０．０％以上。最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，生根率达到１００．
０％。勋章菊的叶片是外植体的较好选择，在短期内能获得大量组培苗，移栽成活率也达到９５％
以上。
关键词：勋章菊；无菌苗叶片；组织培养
中图分类号：Ｓ　６８２．１＋１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１１）２３－０１１１－０３
　　勋章菊（Ｃａｚａｎｉａ　ｒｉｇｅｎｓ　Ｌ．）属菊科勋章菊属多年
生草本植物［１］。又名勋章花，因其整个花序如勋章，故
名勋章菊。其花色艳丽，单花寿命长，抗逆性强，室内
可以四季现花，原产于南非，性喜温暖向阳，是很好的
园林花卉和插花材料，也是２０１０年上海世博会评选入
围装饰环境的花卉之一。目前勋章菊常用播种、分株、
扦插的方式进行繁殖［２］，这些方法需要大量的种子、外
植体等材料，受季节限制，繁殖速度慢，繁殖系数低，新
品种选育周期长，不利于勋章菊的规模化繁育和种植。
近几年来，菊科组织培养研究日趋深入，不少研究者探
索了菊科植物的外植体类型、大小、激素配比对组培成
苗、芽诱导、根诱导以及试管苗驯化移栽的影响［３－５］，并
取得可喜成果。该试验以勋章菊无菌苗叶片为材料，
探索了勋章菊组培快繁技术，旨在建立有效的快繁体
系，为组培苗的工厂化生产提供可靠的技术依据，以推
动勋章菊大规模栽培生产和新品种的研发。
１　材料与方法
１．１　试验材料
勋章菊种子，上海先胜园艺种子有限公司。
１．２　试验方法
１．２．１　无菌苗的获得　选用饱满、成熟度高的种子，
温水浸泡６ｈ后选取下沉种子，自来水冲洗后，放于超
净工作台上用７５％酒精表面处理３０ｓ，无菌水冲洗
３次，１０％次氯酸钠溶液处理１５ｍｉｎ后取出，无菌水振
荡冲洗５次，无菌滤纸吸干表面水分，接种于无任何激
素的ＭＳ培养基上。蔗糖３０ｇ／Ｌ，琼脂６ｇ／Ｌ，ｐＨ　５．８。
置于光照培养箱培养，培养温度（２５±２）℃，光照时间
１２ｈ／ｄ，光强１　５００～２　０００ｌｘ，获得无菌苗。
１．２．２　基本培养基的筛选　将培养２０ｄ左右的无菌
苗在无菌操作台内取出，将叶片切成０．５ｃｍ左右的块
状，接 种 于 添 加 了 相 同 激 素 水 平 （均 附 加 ＴＤＺ
０．５ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ）的３种基本培养基（以 ＭＳ、
１／２ＭＳ、Ｂ５）内。５０ｄ后观察叶片诱导情况。
１．２．３　丛生芽的诱导与增殖　在无菌操作台内，将切
好的无菌苗叶片块接于添加了０．８ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ和不同
浓度２，４－Ｄ或ＩＡＡ或ＩＢＡ的培养基上进行培养。培
养温度（２４±１）℃，光照时间１２ｈ／ｄ，光照强度１　５００～
２　０００ｌｘ。５０ｄ后统计芽的诱导率。芽诱导率（％）＝
带芽的愈伤组织块数／接种叶片总块数×１００％。
１．２．４　芽的生根诱导　将丛生芽分成单株接种到生
根培养基中，培养生根的培养基以１／２ＭＳ为基本培养
基，附加ＮＡＡ和ＩＢＡ培养到３５ｄ，观察并统计试管苗
的生根情况。
１．２．５　试管苗的移栽　试管苗根长到２．０～５．０ｃｍ
时移栽。将生根试管苗的瓶口打开，练苗２～３ｄ，让小
苗逐渐适应外界环境。移栽时，将试管苗小心地取出，
用自来水洗净培养基后，迅速植入营养土∶蛭石＝１∶１
的育苗盘中，在温室内练苗１５～２５ｄ。练苗期间保持
室温２５～２８℃，湿度保持在８５％以上，光强１　５００～
２　０００ｌｘ。最后将生长健壮的幼苗移栽至花盆中。
以上试验每个处理接种５瓶，每瓶接种５个叶片
或小苗，３次重复。
２　结果与分析
２．１　基本培养基的筛选
切取勋章菊无菌苗叶片接种到 ＭＳ、１／２ＭＳ和Ｂ５
３种基本培养基上。各处理采用相同的激素水平。每
个处理接种５瓶，每瓶５个叶片块，３次重复。接种３ｄ
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·生物技术· 北方园艺２０１１（２３）：１１１～１１３
后，叶片块开始膨大，接种２周后，在叶片的两端切口
处长出愈伤组织，并不断的增多，接种４周后，愈伤组
织上分化出细小的芽点，芽点不断的生长，５０ｄ后观察
各个处理的丛生芽生长情况，由表１可知，３种培养基
对勋章菊丛生芽诱导方面有明显差异，接种于Ｂ５培养
基上的外植体出现了发黄和干枯等，诱导率仅为
６．７％；１／２ＭＳ培养基上愈伤组织较为疏松，虽然多数
愈伤块上分化出了芽，但是芽丛生得较少，芽体普遍黄
绿色，部分芽体上的叶片细瘦薄弱，生长也较缓慢；基
本培养基 ＭＳ上丛生芽诱导率最高，达到了８８．０％，芽
体嫩绿色，丛生芽较多，效果最佳。
表１　不同培养基对勋章菊叶片诱导丛生芽的影响
编号 培养基类型 接种数／个 分化数／个芽诱导率／％ 芽生长情况
１ ＭＳ　 ７５　 ６６　 ８８．０ 芽绿色，较多，生长旺盛
２　 １／２ＭＳ　 ７５　 ５４　 ７２．０ 芽黄绿色，较少，生长较慢
３ Ｂ５ ７５　 ５　 ６．７ 极少数出现芽，细弱，发黄
２．２　不同ＴＤＺ浓度对勋章菊丛生芽诱导的影响
植物生长调节剂苯基噻二唑基脲（ＴＤＺ）具有极强
的促进细胞分裂、生长、分化的作用，在组织培养中添
加适宜浓度的ＴＤＺ有利于丛生芽的诱导和增殖。由
表２可知，当ＴＤＺ浓度为０时，没有芽的分化，随着
ＴＤＺ浓度的增加，丛生芽的诱导率依次增加，并且平
均芽长增长，长势增强。在ＴＤＺ浓度为０．８ｍｇ／Ｌ时，
平均芽长为２．７３ｃｍ，产生的丛生芽嫩绿，生长旺盛，丛
生芽的诱导率为７６．０％，丛生芽数量也多。ＴＤＺ浓度
从０．８～２．０ｍｇ／Ｌ时，丛生芽诱导率依次降低，平均芽
长逐次变矮，芽长势也逐次变弱。在浓度为２．０ｍｇ／Ｌ
时，大部分的叶块停留在愈伤块阶段，芽分化最少，而
且愈伤发黄疏松，很容易衰老褐化，分化出的芽黄绿瘦
弱，部分植株叶片水渍状，玻璃化，也有部分植株叶片
变厚变宽，畸形，生长缓慢。
　　表２ 不同浓度ＴＤＺ对勋章菊叶片诱导丛生芽的影响
编号 ＴＤＺ浓度／ｍｇ·Ｌ－１ 接种数／个 芽诱导率／％ 平均芽长／ｃｍ 芽长势
ＣＫ　 ０　 ７５　 ０　 ０ 无芽产生
１　 ０．１　 ７５　 ３７．３　 ０．５６ 芽体嫩绿，生长缓慢
２　 ０．５　 ７５　 ５２．０　 １．２１ 芽体嫩绿，丛生芽较少
３　 ０．８　 ７５　 ７６．０　 ２．７３ 芽体嫩绿，丛生芽多，生长旺盛
４　 １．０　 ７５　 ５７．３　 ２．０４ 芽体嫩绿，细瘦
５　 ２．０　 ７５　 ２２．７　 １．０９ 芽体黄绿瘦弱，出现玻璃化，畸形
２．３　不同激素组合对丛生芽诱导的影响
选用ＴＤＺ的最适浓度０．８ｍｇ／Ｌ，配合使用不同
浓度的２，４－Ｄ、ＩＡＡ和ＩＢＡ进行丛生芽的诱导试验。
由表３可知，２，４－Ｄ对丛生芽的诱导作用最差，各个浓
度的２，４－Ｄ对勋章菊叶片的诱导率为２．７％～１７．３％，
长出的丛生芽也普遍较矮。ＩＢＡ各个浓度梯度的试管
苗均比同浓度梯度的其它２种生长调节剂好，有较好
的效果，其中０．１～０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的效果最好，诱导率
达到了９０％以上，诱导芽数均在２０个以上，丛生芽健
壮，生长迅速。随着ＩＢＡ浓度的增加，丛生芽的诱导率
呈递减趋势，到１．５ｍｇ／Ｌ时，诱导率仅为４９．３％，多
停留在愈伤块阶段，而且诱导出的芽中出现了少量的
玻璃化苗。因此确定勋章菊叶片丛生芽诱导最佳培养
基为添加０．８ｍｇ／Ｌ的ＴＤＺ和０．１～０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的
ＭＳ培养基。
　　表３ ＴＤＺ和不同生长调节剂配比对勋章菊叶片诱导丛生芽的影响
编号 ＴＤＺ浓度／ｍｇ·Ｌ－１ 生长素浓度／ｍｇ·Ｌ－１ 接种数／个 芽诱导率／％ 平均芽长／ｃｍ
１　 ０．８　 ２，４－Ｄ　０．５　 ７５　 １２．０　 １．９５
２　 ０．８　 ２，４－Ｄ　０．１　 ７５　 １７．３　 ２．３１
３　 ０．８　 ２，４－Ｄ　０．５　 ７５　 １４．７　 ２．１７
４　 ０．８　 ２，４－Ｄ　１．０　 ７５　 ９．３　 １．５５
５　 ０．８　 ２，４－Ｄ　１．５　 ７５　 ２．７　 ０．５７
６　 ０．８ ＩＡＡ　０．０５　 ７５　 １８．７　 １．４１
７　 ０．８ ＩＡＡ　０．１　 ７５　 ２９．３　 ２．４５
８　 ０．８ ＩＡＡ　０．５　 ７５　 ７４．７　 ３．８１
９　 ０．８ ＩＡＡ　１．０　 ７５　 ６４．０　 ３．４３
１０　 ０．８ ＩＡＡ　１．５　 ７５　 １７．３　 ２．１６
１１　 ０．８ ＩＢＡ　０．０５　 ７５　 ３４．７　 ２．９０
１２　 ０．８ ＩＢＡ　０．１　 ７５　 ９３．３　 ４．４３
１３　 ０．８ ＩＢＡ　０．５　 ７５　 ９０．６　 ４．５１
１４　 ０．８ ＩＢＡ　１．０　 ７５　 ７７．３　 ３．０７
１５　 ０．８ ＩＢＡ　１．５　 ７５　 ４９．３　 ２．９６
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北方园艺２０１１（２３）：１１１～１１３ ·生物技术·
２．４　不同生长调节剂配比对试管苗生根的影响
将苗高３ｃｍ以上，生长健壮的丛生芽单个切开，
转入不同的生根培养基中，经过１５～２０ｄ培养，苗基
部长出许多白色辐射状的根。由表４可知，生根的最
佳培养基是１／２ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ
ＩＢＡ，生根率达到１００．０％，平均生根３～８条，主侧根
明显，主根发达，生长健壮，小苗叶片嫩绿，长势很好。
表４　不同生长调节剂配比对试管苗生根的影响
编号
ＮＡＡ浓度
／ｍｇ·Ｌ－１
ＩＢＡ浓度
／ｍｇ·Ｌ－１
接种芽数
／个
生根率
／％
根的生长情况
ＣＫ　 ０　 ０　 ７５　 ０ 无根
１　 ０．２　 ０．１　 ７５　 ８１．３ 细毛状，多
２　 ０．２　 ０．５　 ７５　 １００．０ 主根发达，根粗壮
３　 ０．２　 １．０　 ７５　 １００．０ 细毛状，根长，较多
４　 ０．２　 １．５　 ７５　 ７０．７ 细毛状，根长，较少
２．５　练苗与移栽
在生根培养基上培养１５～２０ｄ后，根长达到２～
５ｃｍ，将培养生根试管苗的三角瓶口打开，放置温室
里，在自然光线下练苗１～２ｄ，让试管苗逐渐适应外界
环境。移栽时，小心取出试管苗，用自来水冲洗干净根
上的培养基，植入营养土和蛭石比例为１∶１的育苗盘
中，在温室内练苗１０～１５ｄ，练苗期间保持室温２５～
２８℃，湿度保持在８５％以上，每天光照１２～１４ｈ。移栽
苗成活后，移入花盆中栽培。移栽最好选择在阴天，不
仅可以提高幼苗成活率，而且对幼苗健壮生长也很有
利，２周后统计成活率，在９５％以上。
３　讨论与结论
勋章菊的离体培养过程中，分别选取无菌苗的下
胚轴、子叶、茎段、叶片作为外植体试验，发现下胚轴能
最快的产生大量的愈伤和丛生芽，丛生芽也容易生根，
效果最好，但是无菌苗的下胚轴很短，随着植株的生长
逐渐变为更短的茎，取材很有限，对于发展商品化种
植，意义不大。以勋章菊无菌苗叶片为外植体，不仅取
材量广，不受时间限制，无需表面灭菌，而且增殖效果
显著。在无菌苗的种植过程中，勋章菊的种子对
ＨｇＣｌ２很敏感，用ＨｇＣｌ２各浓度梯度和不同处理时间浸
泡种子后接种，种子发芽率为０，这与张强等［６］对除虫
菊的种子消毒方法研究的结果一致。在愈伤诱导和分
化阶段，发现各个处理均能较容易产生愈伤组织，关键
是芽的分化，没有分化出芽的处理大多停留在愈伤组
织阶段，而且愈伤很容易老化和褐化，这与袁志成等［７］
对菊花的愈伤分化诱导试验结果相一致，所以如何提
高芽的分化率，避免愈伤组织的老化褐化，才是该试验
的重点。该试验通过对培养基激素组合进行筛选，得
出芽诱导以０．８ｍｇ／Ｌ　ＴＤＺ＋（０．１～０．５）ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的
ＭＳ培养基效果最佳，诱导率达到了９０％以上；生根以
０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基效
果最好，生根率达到了１００．０％，移栽成活率也达到了
９５％以上。勋章菊作为主要的园林装饰花卉和鲜切花
材料，越来越被人们关注和喜爱。通过建立完善的勋
章菊组培快繁技术，发展规模化繁育和种植，为培育更
多的色彩新奇的勋章菊奠定基础。
参考文献
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化的影响［Ｊ］．北方园艺，２０１０（１）：１６２－１６４．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｒａｐｉｄ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｚａｎｉａ　ｒｉｇｅｎｓ　Ｌ．
ＧＡＯ　Ｘｕ－ｆａｎｇ，ＫＯＮＧ　Ｘｉａｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｍｉａｏ－ｘｉａ，ＺＨＵ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ　４７１００３）
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