全 文 ：收稿日期:2008-08-10;　修订日期:2008-10-10
基金项目:国家自然科学基金(No.30660238)
作者简介:肖　威(1978-),男(汉族),陕西西安人 ,现为石河子大学硕士
研究生 ,学士学位 ,主要从事药理学研究工作.
＊通讯作者简介:斯拉甫 ·艾白(1960-),男(维吾尔族), 新疆伊犁人 ,现
任新疆维吾尔自治区维吾尔医医院主任药师 ,硕士生导师 ,硕士学位 ,主
要从事抗炎免疫药理研究工作.
新疆一枝蒿抗炎作用研究
肖　威1 ,斯拉甫·艾白 2＊ ,李治建1
(1.石河子大学 药学院 ,新疆 石河子　832003;
2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所 ,新疆 乌鲁木齐　830049)
摘要:目的 采用不同类型的炎症动物模型评价一枝蒿(AR)提取物的抗炎作用。 方法 采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验 ,
角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验 、小鼠气囊肿实验 、棉球肉芽肿实验等。结果 一枝蒿提取物对急性 、慢性炎症及炎性渗出
均有明显的抑制作用 , 抑制炎症介质 PGE2的产生 , 并抑制白细胞游走。结论 AR提取物具有明显抗炎作用 , 其作用与抑
制炎症介质 PGE2产生有关。
关键词:一枝蒿;　抗炎;　前列腺素 E2
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-2836-02
StudyontheAnti-inflammatoryEffectoftheExtractofArtemisiarupestrisL.
XIAOWei1 , SirafilAibai2＊ , LIZhi-jian1
(1.PharmacologicalColegeofShiheziUniversity, XinjiangShihezi832000, China;2.XinjiangInstituteof
TraditionalUighurMedicine, XinJiangUrumqi830002, China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-inflammatoryeffectoftheextractofArtemisiarupestrisL.(ARE).MethodsFour
typicalinflammatorymodelswereadoptedtoinvestigatetheanti-inflammatoryefectofARE, namelydimethylbenzene-induced
earswelinginmice, carrageenan-inducedpawedema, carrageenan-inducedinflammatoryexudationinaircystofmiceand
cotonpeletgranuloma.ResultsAREcouldobviouslyreducetheedemaofearandpawinducedbydimethylbenzeneorcarrag-
eenanrespectively.Itcouldalsoinhibitthehyperplasiainducedbycotonpelet.AREcouldinhibitthegenerationofPGE2 andreducethenumberofWBCininflammatoryexudate.ConclusionAREefectivelysuppressesinflammatoryresponses.Themecha-
nismofitsanti-inflammatoryactionisrelevanttoreducingthegenerationofinflammationmediators, suchasPGE2.Keywords:ArtemisiarupestrisL.;　Anti-inflammation;　PGE2
　　新疆一枝蒿 ArtemisiarupestrisL.为菊科蒿属植物。新疆地
产药材 , 维吾尔药名 “孜伙爱密尼”。维吾尔医常用药 ,用于治疗
热性感冒 、发热 、头痛 、胃痛 、腹胀 、肝炎 、荨麻疹 、毒虫咬伤等 [ 1] 。
自 20世纪 80年代以来 ,多位国内学者对新疆一枝蒿的药理作用
做了研究 , 结果表明 ,新疆一枝蒿具有抗过敏 、抗氧化 、抗病毒 、保
肝降酶 、调节免疫及健胃促消化等多种作用 , 临床应用广泛。本
研究选择具有不同代表性的炎症动物模型 ,首次对新疆一枝蒿提
取物的抗炎作用作出评价 ,并对其作用机制进行初步探讨。
1　材料与仪器
1.1　药物与试剂 新疆一枝蒿(AR)提取物 , 新疆维吾尔自治区
维吾尔医药研究所提取纯化得到 , 按照《中国药典》 2000年版Ⅰ
部附录 VB分光光度法测定 , 总黄酮及总酮酸含量合计高于
50%以上。提取物以蒸馏水溶解稀释成相应浓度。角叉菜胶
(Carrageen), 为 Sigma产品;吲哚美辛 ,新疆华康药业有限责任公
司提供 , 批号:070802;地塞米松 , 地奥集团成都药业股份有限公
司提供 , 批号:070403。
1.2　仪器 GBC紫外分光光度计;数显卡尺(上海九量五金工具
有限公司);TGL-16G冷冻超速离心机。
1.3　动物 昆明种小鼠 , 18 ～ 22 g, ♂;Wistar大鼠 , 180 ～ 220 g,
♂;SD大鼠 , 150 ～ 180 g, ♂。新疆实验动物研究中心提供 , 许可
证号:SYXK(新)2003-0003。
2　方法
2.1　二甲苯致小鼠耳肿胀实验 [ 2] 昆明种小鼠 60只 , 体重 18 ～
22g, 随机分为 AR提取物高 、中 、低 3个剂量组(300, 200, 100 mg
· kg-1)、阳性对照地塞米松组(5mg· kg-1)和模型对照组。 AR
提取物各剂量组均灌胃给药 , 1次 /d, 共 3 d;地塞米松组在第 3
天灌胃给药 1次。各组末次给药后 1 h,乙醚麻醉 , 每只小鼠右耳
正背面以微量移液器滴涂致炎剂 -100%二甲苯 0.02 ml/只 , 左
耳不作处理。 1h后将小鼠断颈处死 , 沿耳廓基线剪下双耳 , 用 7
mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片 , 称重。每鼠的右耳
片减去左耳片的重量即为肿胀程度。计算各组肿胀度之均值 、标
准差与肿胀率。
肿胀度(%)=右耳片重量 -左耳片重量左耳片重量 ×100%
2.2　角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验 [ 3] SD大鼠 50只 , 体重 150
～ 180 g, 随机分为 AR提取物高 、中 、低(300, 200, 100 mg/kg)3
个剂量组 、阳性对照吲哚美辛组(7.5 mg/kg)和模型对照组。 分
别 ig给药 , 1次 /d, 共 7 d。给药前以数显卡尺测定各组右后足厚
度 , 给药后 0.5 h, 各鼠在右后足跖中部皮下注射 1%角叉菜胶
0.1 ml。致炎后 1, 2, 3, 4h测定右后足厚度 , 计算肿胀率。 4 h后
处死 , 将致炎足自踝关节上 0.5 cm处剪下 ,称重 , 剥皮后剪碎皮
肤及除骨骼以外的其它组织 , 置于装有 5 ml冰生理盐水离心管
中 , 浸泡(冰浴),不时振摇 , 1h后 4℃ 3 000 r/min离心浸泡液 15
min,上清液 -18℃冷冻备测。取上清液 0.3 ml,加 0.5 mol/L的
KOH甲醇溶液 2 ml, 50℃水浴异构化 20 min, 加甲醇 5 ml稀释。
紫外可见分光光度法于 278 nm处测定 A值 ,以每克组织相当 A
值表示 PGE
2
含量。
肿胀度(%)=致炎后足跖厚度 -致炎前足跖厚度致炎前足跖厚度 ×100%
2.3　小鼠气囊肿实验 [ 2] 昆明种小鼠 72只 ,体重 18 ～ 22 g, 随
机分为 AR提取物高 、中 、低 3个剂量组(300, 200, 100 mg/kg),
阳性对照吲哚美辛组 ,模型对照组及空白对照组。各鼠背部皮下
注射空气 5 ml(事先滤过无菌),分别于 3 d及 6d再次注入空气
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12
3 ml,维持气囊膨胀。首次注入空气当天 , 分别 ig给
药 , AR提取物高 、中 、低剂量组 , 1次 /d。吲哚美辛组
致炎前单次给药 1次 , 7.5 mg/kg。 第 6日 , 给药 2 h
后 , 每鼠气囊内注入 1%角叉菜胶 0.8 ml, 空白对照组
注入生理盐水 0.8ml。 6h后处死 , 气囊内注入冰生理
盐水(含肝素 50 U/ml)2.5 ml, 轻轻按压 , 吸出渗出液
约 2 ml, 1 600 r/min离心 20 min(4℃), 上清液分离备
用 , -80℃冷冻备测。取上清液 0.3 ml于一试管中 ,
加入 0.5 mol/L的 KOH甲醇溶液 1.0 ml, 50℃水浴 20
min异构化 ,加甲醇 2.5 ml,紫外分光光度法 , 波长 278
nm比色 , 以吸光度值表示 PGE2含量。沉淀以生理盐
水稀释 , 作白细胞计数。
2.4　大鼠棉球植入肉芽肿试验 [ 3] 选取雄性 Wistar
大鼠 50只 ,体重 180 ～ 220 g, 随机分为 AR提取物高 、
中 、低 3个剂量组(140, 70, 35 mg/kg), 模型对照组 , 阳
性对照地塞米松组(1.5mg/kg), ig给药 , 1次 /d, 连续
7 d。将已称重棉球 [ (50±1)mg] ,经高压灭菌 , 每个
棉球再加氨苄青霉素 1 mg/0.1 ml, 50℃烘箱烘干。在
首次给予受试物后 1h,在乙醚浅麻醉无菌条件下作前
肢腋下切口 , 将棉球植入大鼠两侧腋窝部皮下。 第 8
天颈椎脱臼处死 , 取出棉球肉芽组织。 于 60℃烘箱内
干燥 1h称重 ,减去原棉球重量 , 即为肉芽肿净重。肉
芽肿重量以 mg(肉芽肿)/100g(体重)表示。
2.5　统计学处理 所有数据均用 x±s表示 , 应用
PEMS3.1统计软件处理 , 经方差齐性检验 , 如方差齐
性时用 t检验 ,方差不齐时用 t检验。
3　结果
3.1　对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 AR提取物的高 、
中 、低剂量均可抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀(P<
0.01或 P<0.05)。结果见表 1。
表 1　对小鼠耳肿胀的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
肿胀度
m/mg
肿胀率
(%)
模型对照 - 6.0±2.8 72.10±30.32
AR高剂量 300 1.5±1.8＊＊＊ 19.52±21.35＊＊＊
AR中剂量 200 2.3±1.9＊＊ 27.53±23.53＊＊
AR低剂量 100 3.2±1.9＊＊ 38.21±27.88＊＊
地塞米松 5 2.5±2.4＊＊ 31.11±27.10＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<
0.001;n=12
3.2　对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 AR提取物可
以抑制角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀 ,高 、中剂量组作
用明显(P<0.01), 并呈一定量效关系。同时 AR提取
物组 PGE2的产生明显减少 , 与模型对照组比较 P<
0.01。结果见图 1, 表 2 ～ 3。
图 1　AR提取物在不同时间对大鼠
足跖肿胀度影响(吲哚美辛 7.5mg/kg)
3.3　小鼠气囊肿实验 该动物模型是在角叉菜胶刺激
下主要以炎性渗出为主要表现的炎症模型。表现为炎
性细胞浸润和前列腺素样炎性介质增加。给予 AR提
取物可以有效抑制此种炎症反应 ,高 、中剂量组显著降
低炎性渗出液中 PGE2的含量(P<0.001), 同时明显减少气囊渗出液中白
细胞数目(P<0.05或 P<0.01)。结果见表 4。
表 2　AR提取物对大鼠足跖肿胀的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
致炎后不同时间足跖肿胀率(%)
1 h 2 h 3 h 4 h
模型对照 - 28.79±8.90 69.28±23.39 91.08±24.90 99.81±24.92AR高剂量 300 11.93±7.15＊＊ 29.41±16.56＊＊ 26.96±18.59＊＊ 31.69±24.30＊＊AR中剂量 200 26.59±8.49 35.73±17.27＊＊ 43.80±18.50＊＊ 42.86±20.10＊＊
AR低剂量 100 28.57±8.26 57.00±27.12 67.82±20.61＊ 82.02±27.02
吲哚美辛 7.5 14.03±7.87＊＊ 26.82±8.14＊＊ 42.97±18.87＊＊ 38.04±15.44＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
表 3　AR提取物对大鼠足跖 PGE2的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· kg-1 PGE2(A/g)
模型对照 - 0.283 8±0.003 7
AR高剂量 300 0.164 6±0.001 8＊＊
AR中剂量 200 0.234 1±0.003 2＊＊
AR低剂量 100 0.266 9±0.002 3＊＊
吲哚美辛 7.5 0.105 1±0.002 9＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊＊P<0.01;n=10
表 4　AR提取物对小鼠气囊肿渗出液 PGE2 及白细胞的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1 PGE2(A)
白细胞数
n/×109个· L-1
空白对照 - 0.002 3±0.001 1＊＊＊ 102.44±10.26＊＊＊
模型对照 - 0.703 5±0.102 2 288.66±24.57
AR高剂量 300 0.273 2±0.084 5＊＊＊ 200.24±16.79＊＊
AR中剂量 200 0.454 8±0.087 7＊＊＊ 228.09±12.58＊AR低剂量 100 0.672 3±0.100 4 246.33±19.83
吲哚美辛 7.5 0.102 6±0.010 5＊＊＊ 144.32±12.33＊＊＊
　　与模型对照组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05, ＊＊＊P<0.001;n=12
3.4　对大鼠棉球肉芽肿的影响 AR提取物可以抑制大鼠棉球肉芽肿肉芽
组织增生 ,在相对较低的剂量下 ,仍然显示出较好的抑制炎性增生的作用
(P<0.05)。结果见表 5。
表 5　AR提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响( x±s)
药物 剂量C/mg· kg-1
肉芽肿重量
C/mg· (100g)-1
抑制率
(%)
模型对照 - 93.51±17.73 -
AR高剂量 140 71.23±8.40＊ 23.83
AR中剂量 70 78.78±6.75＊ 15.75
AR低剂量 35 88.52±6.23 5.34
地塞米松 1.5 38.43±14.94＊＊＊ 58.90
　　与模型对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001;n=10
4　讨论
炎症是机体对各种损害的防御性反应 , 炎症过程中的细胞组织损伤对
机体也可造成损害 , 现代医药中抗炎药物的研究非常重要。急性炎症主要
以渗出 、肿胀为特征 ,亚急性期主要以白细胞和吞噬细胞的浸润为特征 , 慢
性炎症以组织变性和纤维化为特征。而 PGs具有广泛的生物活性 , 参与了
炎症 、血栓形成和速发型过敏反应等多种病理过程 , 其中 PGE
2
可致血管扩
张 ,诱发炎症。本实验根据炎症发展不同阶段选取不同动物模型 , 并围绕
AR提取物对 PGs的影响 , 首次对一枝蒿提取物的抗炎作用及作用机制进
行探讨研究。
首先采用小鼠耳肿胀实验对抗炎作用进行常规筛选 , 结果表明 , AR提
取物对该种急性炎症具有明显的抑制作用 , 差异显著。在经典的角叉菜胶
致大鼠足跖肿胀实验中 ,其对急性炎症的抑制作用再次得到证实 ,并且研究
结果表明在致炎后 3h时其抗炎作用最强。炎性渗出是炎症最具特征性的
变化 ,角叉菜胶刺激的小鼠气囊肿实验结果表明 ,一枝蒿提取物对白细胞游
走具有抑制作用。足跖渗出液及气囊肿渗出液中 PGE2测定的结果可以得
出 ,一枝蒿的抗炎作用与抑制炎症介质 PGs的生成有关。大鼠棉球肉芽肿
实验是以炎性增生为特征的慢性炎症动物模型 ,研究结果表明一枝蒿提取
物在相对较低的剂量可以抑制炎性增生。综合以上研究结果 ,表明一枝蒿
提取物具有明显的抗炎作用 , 且其抗炎作用机制与抑制炎性介质 PGs生成
有关。
在研究过程中 , 对影响实验结果的关键环节进行了比较考察研究。小
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12 时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期
鼠耳肿胀实验 , 二甲苯造模效果在 1 ～ 2 h持续稳定 , 造模后 0.5
～ 1 h测量肿胀度较为适宜 , 4 h后可能造成假阳性。且采用微
量移液器滴涂鼠耳 , 剂量准确 , 操作迅速 ,模型均一。大鼠足跖肿
胀实验 , 采用周长法费时 , 且结果不准确;容积法 ,鼠足浸入深度
控制是关键。采用自制容积测定仪 , 鼠足的标记不当及浸泡液的
损耗都会造成误差 , 故不采用专业容积检测仪 , 结果并不理想;厚
度法采用螺旋测微器存在耗时 ,测量跨度长 , 在炎症发展过程中 ,
时间的一致性较难保证 , 采用数显卡尺 , 测量鼠足同一部位 ,迅速
而准确 ,相较而言可行而简便。阳性对照药的选择上 , 吲哚美辛
抗炎作用强大 ,但是 10mg/kg小鼠持续 ig给药 ,小鼠出现死亡情
况 , 在文献报道中 ,有大鼠吲哚美辛 9 mg/kg给药 , 死亡严重 , 不
能完成实验的情况 [ 4] , 故而采用末次单次给药避免该问题。本
研究基于预实验的结果 ,确定给药剂量及实验采用方案 , 以取得
可靠的实验结果。
本实验研究结果表明一枝蒿提取物对急性 、慢性炎症均有明
显抑制作用 ,并且作用机制与抑制 PGs生成有关。 这对解释一
枝蒿的多方面临床应用具有重要意义 ,其抗炎作用的机制还有待
进一步深入研究。
参考文献:
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拉 ,等.中国医学百科全书维吾尔医学 [ M] .上海:上海科学技术出
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节炎关节软骨胶原代谢的影响 [ J] .中国老年学杂志 , 2007, 27
(21):2070.
收稿日期:2008-03-21;　修订日期:2008-09-25
基金项目:国家自然科学基金(No.30371656)
作者简介:戈宏焱(1980-),女(汉族),吉林双辽人 ,现任吉林大学第一医
院医师 , 在读博士研究生 , 硕士学位 ,主要从事中西医结合治疗消化系统
疾病的研究工作.
＊通讯作者简介:赵树华(1952-), 男(汉族),吉林桦甸人 , 现任吉林大学
中日联谊医院教授 ,硕士生导师 ,学士学位 ,主要从事中西医结合治疗消
化及肾病方面的研究工作.
制半夏抑制基质金属蛋白酶活性
及抗肿瘤机理的实验研究
戈宏焱 1 , 杨金刚2 , 房学讯 2 , 赵树华3＊ , 李有田 1
(1.吉林大学第一医院 ,吉林 长春　130021;
2.吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室 ,吉林 长春　130021;
3.吉林大学中日联谊医院 ,吉林 长春　130021)
摘要:目的 研究制半夏对基质金属蛋白酶 -16(MMP-16)活性的抑制作用。方法 根据抑制 MMPs活性后底物降解速
率降低的原理 , 通过检测底物降解速率 ,测定中药制半夏对 MMP-16的抑制作用。结果 与空白对照组及阳性对照组相
比 , 制半夏具有较强的抑制 MMP-16活性的作用 , 其抑制活性 IC50 =23μg/ml。结论 半夏水煎剂在体外具有抑制 MMP-16活性的作用 , 其抑制活性较强 ,且存在剂量依赖关系。
关键词:制半夏;　基质金属蛋白酶;　酶活性分析;　抗肿瘤
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-2838-02
ExperimentalStudyontheInhibitoryActivityofPineliaetuberCaulisonMatrixMetal-
loproteinaseanditsAntitumorMechanism
GEHong-yan1 , YANGJin-gang2 , FANGXue-xun2 , ZHAOShu-hua3＊ , LIYou-tian1(1.DepartmentofTraditionalChineseMedicine, TheFirstHospitalofJilinUniversity;2.KeyLaboratoryofMo-
lecularEnzymologyandEnzymeEngineeringofEducationalMinistry, JilinUniversity, Changchun;3.Depart-
mentofTraditionalChineseMedicine, China-JapanUnionHospitalofJilinUniversity, Changchun, 130021,
P.R.China)
Abstract:ObjectiveTostudytheinhibitoryactionofpineliaetuberonmatrixmetaloproteinase-16 (MMP-16).MethodsThedecreasingofthedegraderateofsubstrateisassociatedwiththeinhibitionofmatrixmetaloproteinase-16.We
studiedtheinhibitoryactivityofpineliaetuberonMMPbyobservingthedegraderateofsubstrate.ResultsPineliaetuberstrong-
lyinhibitedtheactivityofMMP-16, andtheIC50 was23μg/ml.ConclusionTheapozemofpinelliaetuberhasinhibitoryactivi-tyonMMP-16 inadose-dependentmannerinvivo.
Keywords:Pinelliaetuber;　Matrixmetalloproteinase;　Methodsfortheanalysisofenzymaticactivity
　　我国传统中药半夏 Pineliaetuber具有燥湿化痰 、降逆止呕 、消
痞散结的功效。长期的临床实践表明半夏具有确切的疗效。半夏
生品有小毒, 临床上内服必须经过炮制或与生姜配伍以减轻毒性,
故本实验所用半夏均为临床应用广泛的炮制半夏。基质金属蛋白
酶(MMPs)是一类锌离子依赖的蛋白水解酶家族, 能够降解细胞外
基质成分 ,参与众多重要的生理和病理过程 [ 1]。根据报道, MMPs
活性的抑制对肿瘤细胞的行为有重要的影响 [ 2 ～4] 。本实验研究制
半夏体外抑制基质金属蛋白酶 -16活性的作用及抗肿瘤机理 , 从
而为从分子水平上研究半夏的治病机理奠定基础 , 也为进一步从
半夏中提取基质金属蛋白酶抑制剂提供实验依据。
1　器材
1.1　材料 制半夏(吉林大学中日联谊医院中药房提供的道地
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12