全 文 ：ＤＯＩ：１０．７６８３／ｘｘｙｘｙｘｂ．２０１４．１１．００６
收稿日期：２０１４－０８－０６
基金项目：河南省科技攻关项目（编号：１０２１０２３１０１４７）
作者简介：刘 平（１９６８－），女，河南新乡人，学士，主任医师，主要从事神经内科疾病的临床研究。
通信作者：刘红朝（１９６６－），男，湖北大悟人，博士，主任医师，硕士研究生导师，主要从事神经肿瘤与癫痫疾病的研究
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。
本文引用：刘平，刘红朝，王宝峰，等．ｃＪｕｎ氨基末端激酶抑制剂 ＳＰ６００１２５对杏仁核电点燃癫痫模型大鼠海马
ＣＡ１区神经元的保护作用［Ｊ］．新乡医学院学报，２０１４，３１（１１）：８８９８９１，８９５． 【基础研究】
ｃＪｕｎ氨基末端激酶抑制剂 ＳＰ６００１２５对杏仁核电点燃癫痫模型
大鼠海马 ＣＡ１区神经元的保护作用
刘 平１，刘红朝２，王宝峰３，谭一虎２，吴 俊３，陈 旭３，舒 凯３
（１．河南中医学院第一附属医院脑病二区，河南 郑州 ４５０００３；２．湖北省新华医院 湖北中医药大学附属新华医院
神经外科，湖北 武汉 ４３００１５；３．华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科，湖北 武汉 ４３００３０）
摘要： 目的 探讨ｃＪｕｎ氨基末端激酶（ＪＮＫ）抑制剂ＳＰ６００１２５对杏仁核电点燃大鼠海马ＣＡ１区神经元的保护
作用。方法 将３０只健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为点燃组、加药组及加药对照组，每组１０只。大鼠１０次癫痫发作
后灌注取脑，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＪＮＫ和磷酸化ＪＮＫ表达，进行胶原纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）和尼氏染色，并将各组进行
观察和比较。结果 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示加药组海马区ＪＮＫ磷酸化水平（０．３４７±０．０３３）较点燃组（０．５１０±０．０３９）和加
药对照组（０．４７６±０．０４５）显著降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），总 ＪＮＫ水平各组间比较差异无统计学意义（Ｐ＞
０．０５）；加药组ＧＦＡＰ阳性细胞计数（４２．２７±４．６３）较点燃组（６８．８２±５．３６）和加药对照组（６９．０６±４．６３）显著减少，
差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；尼氏染色正常神经元计数加药组（３７．８２±６．３０）较点燃组（１９．８７±３．５８）和加药对照
组（２０．１３±５．３７）显著增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 ＪＮＫ特异性抑制剂 ＳＰ６００１２５对大鼠杏仁核电点
燃癫痫模型ＣＡ１区海马神经元具有保护作用。通过 ＳＰ６００１２５抑制 ＪＮＫ的活性可能是治疗颞叶癫痫一种新的有效
策略。
关键词： ｃＪｕｎ氨基末端激酶；颞叶癫痫；海马硬化；ＳＰ６００１２５
中图分类号：Ｒ７４２．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４７２３９（２０１４）１１０８８９０４
ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｃｔｉｏｎｏｆＳＰ６００１２５，ａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅｏｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌＣＡ１ｎｅｕｒｏｎ
ｉｎａｍｙｇｄａｌａｋｉｎｄｌｅｄｅｐｉｌｅｐｓｙｒａｔｓ
ＬＩＵＰｉｎｇ１，ＬＩＵＨｏｎｇｃｈａｏ２，ＷＡＮＧＢａｏｆｅｎｇ３，ＴＡＮＹｉｈｕ２，ＷＵＪｕｎ３，ＣＨＥＮＸｕ３，ＳＨＵＫａｉ３
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
４５０００３，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｕｂｅｉＸｉｎｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌ；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，ＨｕｂｅｉＸｉｎｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＨｕ
ｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｗｕｈａｎ４３００１５，ＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉ
ａｔｅｄｔｏＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，ＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｃｔｉｏｎｏｆＳＰ６００１２５，ａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ（ＪＮＫ）ｏｎ
ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌＣＡ１ｎｅｕｒｏｎｉｎａｍｙｇｄａｌａｋｉｎｄｌｅｄｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｉｒｔｙｈｅａｌｔｈｍａｌｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｋｉｎ
ｄｌｉｎｇｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｅｎｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｆｔｅｒ
ｔｅｎｔｉｍｅｓｅｐｉｌｅｐｔｉｃｓｅｉｚｕｒｅ．ＷｅｓｔｅｍｂｌｏｔｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＪＮＫａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＪＮＫ（ｐＪＮＫ）．
Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＡＰ）ｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄＮｉｓｓｌｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄ
ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＪＮＫｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｉｎｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐ
（０３４７±０．０３３）ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｋｉｎｄｌｉｎｇｇｒｏｕｐ（０．５１０±０．０３９）ａｎｄｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ
（０４７６±０．０４５）（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｄｉｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｔｏｔａｌＪＮＫｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅｐｏｓｉ
ｔｉｖｅｃｅｌｓｏｆＧＦＡＰｉｎｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐ（４２．２７±４．６３）ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｋｉｎｄｌｉｎｇｇｒｏｕｐ（６８．８２±
５３６）ａｎｄｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（６９．０６±４．６３）（Ｐ＜０．０５）．Ｎｉｓｓｌｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｎｏｒｍａｌｎｅｕｒｏｎｉｎ
ｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐ（３７．８２±６．３０）ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｋｉｎｄｌｉｎｇｇｒｏｕｐ（１９．８７±３．５８）ａｎｄｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（２０１３±５．３７）（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＳＰ６００１２５，ａｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＪＮＫ，ｈａｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｎｎｅｕ
ｒｏｎｓｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌＣＡ１ｒｅｇｉｏｎｉｎａｍｙｇｄａｌａｋｉｎｄｌｅｄｍｏｄｅｌｒａｔｓ．ＳＰ６００１２５ｍａｙｂｅａｎｅｗａｎｄｅｆｅｃｔｉｖｅｓｔｒａｔｅｇｙｔｏｔｒｅａｔｔｅｍｐｏ
ｒａｌｌｏｂｅｅｐｉｌｅｐｓｙｂｙｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＪＮＫ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： ｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ；ｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂｅｅｐｉｌｅｐｓｙ；ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＳＰ６００１２５
·９８８·
第３１卷 第１１期
２０１４年１１月
新乡医学院学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．１１
Ｎｏｖ．２０１４
网络出版时间：2014-11-10 23:17
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1186.R.20141110.2317.028.html
颞叶癫痫（ｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂｅｅｐｉｌｅｐｓｙ，ＴＬＥ）是临床上
最常见的难治性癫痫，其发病机制迄今为止尚未完全
阐明。作者前期通过大鼠杏仁核电点燃癫痫模型研
究发现，ｃＪｕｎ氨基末端激酶（ｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，
ＪＮＫ）信号通路可能参与ＴＬＥ形成，表现为ＪＮＫ信号
通路的激活，ｐＪＮＫ水平升高［１］。因此，干预 ＪＮＫ信
号通路可能是控制ＴＬＥ发作的有效途径之一。本研
究旨在观察ＪＮＫ抑制剂ＳＰ６００１２５在大鼠杏仁核电刺
激癫痫模型中对ＣＡ１区神经元的保护作用。
１ 材料与方法
１．１ 实验动物与分组 无特定病原体（ｓｐｅｃｅｆｉｃ
ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ，ＳＰＦ）级雄性 Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只，体质量
２７０～３１０ｇ，由湖北省实验动物研究中心提供，许可证
号：ＳＣＸＫ（鄂）２００３０００５。所有实验大鼠在避强光、
２４ｈ昼夜循环、避噪音、单笼、自由饮食、温度 ８～
２５℃、相对湿度４０％～７０％条件下饲养。按抽签法
随机分为３组：点燃组１０只，安置电极和脑室留置套
针，每天刺激，不加药；加药组１０只，安置电极和脑室
留置套针，每天刺激，脑室内加药ＳＰ６００１２５；加药对照
组１０只，安置电极和脑室留置套针，每天刺激，脑室
内不加ＳＰ６００１２５，只加同等剂量的生理盐水和二甲基
亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）。
１．２ 仪器与试剂 大鼠脑立体定位仪、脑室套针
（深圳瑞沃德公司），微型磨钻（韩国Ｓａｅｓｈｉｎ公司），
ＢＬ４２０Ｆ生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公
司），自制５芯电极、铸模粉（上海九龙化工公司），
ＳＰ６００１２５（美国 Ｓｉｇｍａ公司），ＤＭＳＯ、甘油醛３磷酸
脱氢酶（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，
ＧＡＰＤＨ）基因（美国 ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司），一抗应激活
化蛋白激酶（ｓｔｒｅｓｓａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＳＡＰＫ）／
ＪＮＫ（５６Ｇ８）ＲａｂｂｉｔｍＡｂ、ＰｈｏｓｐｈｏＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｔｈｒｌ
８３／Ｔｙｒｌ８５）（８１Ｅ１１）ＲａｂｂｉｔｍＡｂ（美国 ＣｅｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ
公司），尼氏染色液、二氨基联苯胺（ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉ
ｄｉｎｅ，ＤＡＢ）辣根过氧化物酶显色试剂盒、牛血清白
蛋白（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ，ＢＳＡ）（武汉博士德生物
工程有限公司），磷酸盐缓冲液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｅｒｓｏ
ｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）（瑞士罗氏公司）。
１．３ 大鼠杏仁核电点燃模型建立 （１）大鼠麻醉：
大鼠测质量后按５ｍＬ·ｋｇ－１腹腔注射体积分数６％
水合氯醛。（２）颅骨钻孔：麻醉满意后固定于立体
定位仪上，颅骨上钻５孔（１孔为杏仁核电极，２孔
为额叶皮层电极，１孔为接地电极，１孔为脑室套
针）。（３）植入５芯电极：体积分数７５％乙醇消毒术
野，沿正中矢状线切开皮肤，充分暴露前后囟，按照
杏仁核定位数值（Ｗｉｓｔａｒ：前囟后 ２．２ｍｍ；旁开
４．８ｍｍ；深８．５ｍｍ），缓慢将杏仁核双螺旋电极降
至深８．５ｍｍ处（下降速度≤１．０ｍｍ·ｍｉｎ－１）。记
录与参考电极分别同定于左右前额和枕部。（４）植
入脑室套针：确定左侧脑室位点：前囟后１．０ｍｍ，中
线旁１．５ｍｍ，颅骨表面下３．７ｍｍ。（５）上述５芯
电极与脑室套针用铸模粉固定，术毕大鼠单养，每天
观察大鼠伤口、体质量与行为学变化。（６）电刺激
点燃大鼠：点燃组、加药组与加药对照组术后恢复１
周，予０．８ｍＡ强度（细电流、串刺激、波宽１ｍｓ，延
时１００ｍｓ、频率５０Ｈｚ，串长５０个，方波）刺激，每只
大鼠每天给予刺激 ５次，相邻 ２次的时间间隔为
１ｍｉｎ，直到有１０次癫痫大发作，发作强度按 Ｒａｃｉｎｅ
量表分级。（７）ＳＰ６００１２５治疗：ＳＰ６００１２５０．１ｍｇ
溶于１０ｍＬＤＭＳＯ中，加药组在给予刺激前３０ｍｉｎ
通过左侧的脑室套管加人１０μＬＳＰ６００１２５，５ｍｉｎ加
药完毕；同样方法加药对照组注入生理盐水和质量
分数１％ＤＭＳＯ１０μＬ。（８）有１０次大发作的大鼠
处死，各组将５只大鼠行４０ｇ·Ｌ－１多聚甲醛灌注、
取脑，制成连续冠状位行蜡切片，厚４μｍ，另外５只
取右侧海马组织进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析［２］。
１．４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析 检测海马组织 ＪＮＫ和 ｐ
ＪＮＫ蛋白表达，提取海马组织蛋白，进行十二烷基磺
酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，封闭后加一抗孵
育，加二抗，ＤＡＢ显色。
１．５ 胶原纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏ
ｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）检测 脱蜡、透明，用枸橼酸缓冲液行
抗原修复，ＢＳＡ封闭３０ｍｉｎ，加一抗，入湿盒，室温过
夜。ＰＢＳ漂洗后，加生物素标记二抗，３７℃ 孵育
１ｈ。ＰＢＳ漂洗后，加ＤＡＢ，流水洗２０ｍｉｎ。苏木精复
染，脱水、透明、封片。
１．６ 尼氏染色 石蜡切片进行二甲苯脱蜡，梯度乙
醇水化，水洗后，放入尼氏染色液中染色，在４００倍光
学显微镜下计数海马ＣＡ１区中段１００单位长度内末
端脱氧核苷酸转移酶介导的 ｄＵＴＰ缺口末端标记测
定 法 （ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｍｅｄｉａｔｅｄ
ｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ，ＴＵＮＥＬ）染色阳性细胞数目。
１．７ 统计学处理 应用ＳＰＳＳ１２．０统计学软件，数
据以均数 ±标准差（珋ｘ±ｓ）表示，采用 ｔ检验，Ｐ＜
００５为差异有统计学意义。
２ 结果
２．１ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测３组大鼠海马组织ＪＮＫ、ｐ
ＪＮＫ蛋白表达情况 结果见图１。点燃组、加药对
照组及加药组总 ＪＮＫ／ＧＡＰＤＨ均值分别为０．８９９±
·０９８· 新乡医学院学报 ｈｔｐ：／／ｗｗｗ．ｘｘｙｘｙｘｂ．ｃｏｍ ２０１４年 第３１卷
０．０５９、０．９１６±０．０７６和０．８６８±０．０４３，两两比较差
异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；点燃组、加药对照组
及加药组 ｐＪＮＫ／ＧＡＰＤＨ均值分别为 ０．５１０±
００３９、０．４７６±０．０４５和０．３４７±０．０３３，加药组较点
燃组和加药对照组 ｐＪＮＫ低，差异有统计学意义
（Ｐ＜０．０５），点燃组与加药对照组比较差异无统计
学意义（Ｐ＞０．０５）。
图１ 各组海马区ＪＮＫ和ｐＪＮＫ蛋白表达
Ｆｉｇ．１ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＪＮＫａｎｄｐＪＮＫｐｒｏｔｅｉｎｉｎｈｉｐｐｏｃａｍ
ｐｕｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ
２．２ ＧＦＡＰ检测结果 点燃组、加药对照组及加药
组右侧 ＣＡ１区 ＧＦＡＰ染色阳性细胞计数分别为
６８８２±５．３６、６９．０６±４．６３和４２．２７±４．６３，点燃
组与加药对照组ＧＦＡＰ阳性细胞计数比较差异无统
计学意义（Ｐ＞０．０５），而加药组显著少于点燃组和
加药对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
２．３ 尼氏染色结果 点燃组、加药对照组及加药组
右侧ＣＡ１区正常神经元计数（每个视野）分别为
１９８７±３．５８、２０．１３±５．３７和３７．８２±６．３０，点燃组
与加药对照组正常神经元计数比较差异无统计学意
义（Ｐ＞０．０５），而加药组正常神经元计数明显多于
点燃组和加药对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜
００５）。
３ 讨论
本实验采用慢性电刺激点燃建立小鼠内侧ＴＬＥ
模型，前期研究经病理观察亦显示，ＣＡ３和 ＣＡ１区
神经元明显丢失，存在有明显海马硬化现象［２］。进
一步研究显示，ＪＮＫ通路反复激活与海马硬化发生
过程相似，ＪＮＫ信号通路可能参与了 ＴＬＥ的形成，
表现为ＪＮＫ信号通路的激活，ｐＪＮＫ水平升高［１］，这
有助于了解ＴＬＥ发病的分子机制，并寻找有效控制
ＴＬＥ发作的途径。
ＪＮＫ家族是促分裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ
ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）超家族成员之一，属
于进化上保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。有研究
表明，ＪＮＫ信号通路是细胞生理和病理状态之间的
重要调节靶点，参与神经退行性疾病的细胞凋
亡［３４］。ＪＮＫ在转录因子活化、ｍＲＮＡ稳定性、细胞
凋亡进展和细胞增殖方面发挥重要作用［５］。
ＳＰ６００１２５是常用的 ＪＮＫ高选择性抑制剂和可
逆的三磷酸腺苷环化酶竞争性抑制剂，对 ＪＮＫ各亚
型能高选择性抑制，其相对分子质量为 ２２０，通常在
５０倍的显微镜下可见 ＳＰ６００１２５为细小的针状沉淀
物，难溶于水，其实验溶液常需使用 ＤＭＳＯ制备［５］。
本实验所用ＳＰ６００１２５溶于ＤＭＳＯ中所获得，而且实
验结果显示 ＤＭＳＯ对 ＳＰ６００１２５实验结果无明显影
响，表明ＤＭＳＯ是一种可靠的溶媒。
前期研究结果提示慢性电刺激点燃建立小鼠内
侧ＴＬＥ模型点燃后 Ｗｉｓｔａｒ大鼠海马 ＣＡ１区正常神
经元的数目减少，海马神经元凋亡增加，ＣＡ１区胶质
细胞增生明显，ｐＪＮＫ水平明显升高［１２］。本研究结
果提示ＪＮＫ抑制剂 ＳＰ６００１２５降低了点燃 Ｗｉｓｔａｒ大
鼠海马组织中ｐＪＮＫ水平，减少了ＣＡ１区胶质细胞
增生，增加了正常神经元数目，减少了海马神经元凋
亡，起到了保护神经元的作用。这些结果与既往的
文献报道基本一致［６７］。
转录因子 ｃＪｕｎ是 ＪＮＫ激酶的底物，ＳＰ６００１２５
可能是通过作用于ｃＪｕｎ氨基末端活性区特异磷酸
化位点Ｓｅｒ６３与 Ｓｅｒ７３来抑制ｃＪｕｎ的表达与激活，
从而促进了细胞的凋亡。有研究结果显示，ＳＰ
６００１２５通过抑制 ＪＮＫ激活，降低磷酸化 ｃＪｕｎ的表
达水平，并阻止其进入核内，进一步抑制 ｂｃｌ２的激
活，从而抑制凋亡程序的启动，使神经元免于损伤，
ＳＰ６００１２５可降低ｐＪＮＫ水平，并可抑制神经元的凋
亡［８１０］。ＳＰ６００１２５具有 ＪＮＫ小分子抑制剂的特点，
同时ＳＰ６００１２５显著地表现出酶和细胞分析选择性，
细胞内ＳＰ６００１２５水平达到抑制 ｃＪｕｎ磷酸化时，其
也能抑制环氧化酶２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ２，ＣＯＸ２），
白细胞介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２，ＩＬ２），干扰素γ（ｉｎｔｅｒ
ｆｅｒｏｎγ，ＩＦＮγ），肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃ
ｔｏｒα，ＴＮＦα），ＩＬ１０和基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔ
ａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰ）基因表达［５］，但是ＳＰ６００１２５抑
制ＪＮＫ激活、降低磷酸化 ｃＪｕｎ水平的具体机制有
待进一步研究。
本研究结果表明，ＪＮＫ的特异性抑制剂
ＳＰ６００１２５减少了电点燃癫痫模型大鼠杏仁核 ＣＡ１
区胶质细胞增生，增加了正常神经元的数目，减少了
海马神经元凋亡，抑制 ＪＮＫ信号通路，可能对致痫
后海马神经元具有保护作用。因此，通过 ＳＰ６００１２５
抑制ＪＮＫ的活性可能是治疗ＴＬＥ的一种新的策略。
（下转第８９５页）
·１９８·第１１期 刘 平，等：ｃＪｕｎ氨基末端激酶抑制剂ＳＰ６００１２５对杏仁核电点燃癫痫模型大鼠海马ＣＡ１区神经元的保护作用
验用不同浓度的ＬＭＷＨ作用于ＨｅｐＧ２细胞株，结果
显示，随着 ＬＭＷＨ浓度的增加及作用时间的延长，
ＨｅｐＧ２细胞的迁移率和黏附率都有所下降。证明了
ＬＭＷＨ确实可以抑制肝癌细胞的迁移及黏附能力。
综上所述，ＬＭＷＨ在抑制肿瘤转移中起到非常
重要的作用。本研究给人们的启示是，能否从 ＬＭ
ＷＨ中提炼出抑制肝癌转移的核心成分，从而在抑
制肿瘤转移的同时尽可能地减少大量应用 ＬＭＷＨ
所出现的不良反应。同时，本实验有利于更深入地
认识肿瘤的生物学行为，以此为依据开发新药物，为
肿瘤的临床治疗奠定基础。
参考文献：
［１］ ＲｉｃｈａｒｄＳＦ，ＪｏｒｄｉＢ．Ａｊｏｕｒｎａｌｆｏｒａｌｓｔａｋｅｈｏｌｄｅｒｓｉｎｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒ
ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＨｅｐａｔｉｃＯｎｃｏｌ，２０１４，１（１）：１５．
［２］ ＳａｔｏｕＳ，ＩｓｈｉｚａｗａＴ，ＭａｓｕｄａＫ，ｅｔａｌ．Ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
ｉｍａｇｉｎｇｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒ
ｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１３，４８（１０）：１１３６１１４３．
［３］ 刘志磊，孙薇，贺福初，等．肝细胞癌的微环境研究进展［Ｊ］．生
物化学与生物物理进展，２０１２，３９（５）：４１６４２２．
［４］ ＷａｎｇＲＡ，ＬｉＺＳ，ＹａｎＱＧ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏａｐｏｐｔｏｓｉｓｓｈｏｕｌｄ
ｎｏｔｂｅｔａｋｅｎａｓａｈａｌｍａｒｋｏｆｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＣａｎｃｅｒ，２０１４，３３
（２）：４７５０．
［５］ ＳｈａｙａｎＲ，ＩｎｄｅｒＲ，ＫａｍｅｚｉｓＴ，ｅｔａｌ．Ｔｕｍｏｒｌｏｃａｔｉｏｎａｎｄｎａｔｕｒｅｏｆ
ｌｙｍｐｈａｔｉｃｖｅｓｓｅｌｓａｒｅｋｅｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｏｆｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．
ＣｌｉｎＥｘｐＭｅｔａｓｔａｓｉｓ，２０１３，３０（３）：３４５３５６．
［６］ 董淳强，杨体泉，董昆，等．缺氧诱导因子１α、促血管生成素２
在小儿肾母细胞瘤中的表达［Ｊ］．中华实用儿科临床杂志，
２０１３，２８（１５）：１１９１１１９４．
［７］ 王军保．低分子肝素在中老年人腹部肿瘤围手术期的应用研
究［Ｊ］．中国现代药物应用，２０１３，７（１８）：１１９１２０．
［８］ 张洁，邸立军，宋国红，等．低分子肝素治疗恶性肿瘤并发深静
脉血栓剂量及疗效的初步研究［Ｊ］．实用肿瘤杂志，２０１２，２７
（３）：２６７２７０．
［９］ 罗文婷，孙大卫．角膜、结膜、脉络膜及视网膜淋巴管和新生淋
巴管的研究进展［Ｊ］．眼科新进展，２０１３，３３（６）：５８４５８７，５９６．
［１０］ ＰａｒｋＫ，ＫｉｍＹＳ，ＬｅｅＧＹ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｅｆｅｃｔｏｆｂｉｌｅ
ａｃｉｄａｃｙｌａｔｅｄｈｅｐａｒｉｎｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ［Ｊ］．ＰｈａｒｍＲｅｓ，２００７，２４（１）：
１７６１８５．
［１１］ ＭａｒａｖｅｙａｓＡ，ＪｏｈｎｓｏｎＭＪ，ＸｉａｏＹＰ，ｅｔａｌ．Ｍａｌｉｇｎａｎｔｍｅｌａｎｏｍａ
ａｓａｔａｒｇｅｔｍａｌｉｇｎａｎｃｙｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐｒｏｐｅｒ
ｔｉｅｓｏｆｔｈｅｈｅｐａｒｉｎｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｖ，２０１０，２９（４）：
７７７７８４．
［１２］ ＬｅｅＤＹ，ＰａｒｋＫ，ＫｉｍＳＫ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃｅｆｅｃｔｏｆａｎｏｒａｌｙ
ａｃｔｉｖｅｈｅｐａｒｉｎｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｙｉｎｄｕｃｅｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
［Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００８，１４（９）：２８４１２８４９．
［１３］ ＮａｐｉｅｒＳＬ，ＨｅａｌｙＺＲ，ＳｃｈｎａａｒＲＬ，ｅｔａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｎｌｉｇａｎｄｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｖａｓｃｕｌａｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｏｆｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａ
ｃｅｌｓ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００７，２８２（６）：３４３３３４４１．
［１４］ ＣａｓｕＢ，ＶｌｏｄａｖｓｋｙＩ，ＳａｎｄｅｒｓｏｎＲＤ．Ｎｏｎａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｈｅｐａｒｉｎｓ
ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌＨａｅｍｏｓｔＴｈｒｏｍｂ，
２００８，３６（３／４）：１９５２０３．
［１５］ ＧａｖｅｎＢｅｔａｌＳ，ＳｅｔｙＢＮ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅｐｏｓｉｔｉｖｅｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ
ｂｉｎｄｔｏｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ１ｖｉａｉｔｓｈｅｐａｒｉｎ
ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｌＲｅｓ，２００８，１５２（４）：１６５１７７．
［１６］ ＧｒｉｔｅｒｓＭ，ＢｏｒｇｄｏｒｆＰ，ＧｒｏｏｔｅｍａｎＭＰ，ｅｔａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｈａｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ：ＬＭＷＨａｓａｍａｊｏｒｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｔｏｂｉｏｉｎ
ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＮｅｐｈｒｏｌＤｉａｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００８，２３（９）：２９１１
２９１７．
［１７］ 刘金花，徐吟亚，付波，等．低分子肝素钙对慢性阻塞性肺疾
病急性加重期患者血栓前状态的影响［Ｊ］．新乡医学院学报，
２０１２，２９（９）：６８０６８２．
［１８］ 刘开祥，李浩，俸军林，等．低分子肝素对鼠脑缺血再灌注损
伤Ｐ选择素和Ｌ选择素表达的影响［Ｊ］．广东医学，２００８，２９
（１０）：１６２８１６３０．
［１９］ ＥｖａｎｉＳＪ，ＰｒａｂｈｕＲＧ，ＧｎａｎａｒｕｂａｎＶ，ｅｔａｌ．Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓｍｅｄｉａｔｅ
ｍｅｔａｓｔａｔｉｃｂｒｅａｓｔｔｕｍｏｒｃｅｌａｄｈｅｓｉｏｎｔｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍｕｎｄｅｒｆｌｏｗ
［Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ，２０１３，２７（８）：３０１７３０２９．
（本文编辑：孟 月 英文编辑：孟 月）
（上接第８９１页）
参考文献：
［１］ 刘平，刘红朝，李学慧，等．ｃＪｕｎ氨基末端激酶信号通路在大
鼠杏仁核电点燃癫痫模型的发病机制中的作用［Ｊ］．医药论坛
杂志，２０１４，３５（５）：７９．
［２］ 刘平，刘红朝，舒凯，等．大鼠杏仁核电点燃癫痫模型的建立及
海马病理变化的初步研究［Ｊ］．中医学报，２０１１，２６（４）：４４５
４４７．
［３］ ＳａｂａｐａｔｈｙＫ．ＲｏｌｅｏｆｔｈｅＪＮＫｐａｔｈｗａｙｉｎｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ
ＭｏｌＢｉｏｌＴｒａｎｓｌＳｃｉ，２０１２，１０６（２）：１４５１６９．
［４］ ＷｅｓｔｏｎＣＲ，ＤａｖｉｓＲＪ．ＴｈｅＪＮＫｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．
ＣｕｒＯｐｉｎＣｅｌＢｉｏｌ，２００７，１９（２）：１４２１４９．
［５］ ＢｅｎｎｅｔＢＬ，ＳａｓａｋｉＤＴ，ＭｕｒａｙＢＷ．ＳＰ６００１２５，ａｎａｎｔｈｒａｐｙｒａｚｏｌｏ
ｎｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，
２００１，９８（２４）：１３６８１１３６８６．
［６］ ＣｈｅｎＸ，ＷｕＪ，ＨｕａＤ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ＳＰ６００１２５ｉｓｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｎａｍｙｇｄａｌａｋｉｎｄｌｅｄｒａｔｓ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ
Ｒｅｓ，２０１０，１３５７（２１）：１０４１１４．
［７］ 吴俊，陈旭，舒凯，等．ｃＪｕｎ氨基末端激酶信号通路及其抑制
剂ＳＰ６００１２５在大鼠杏仁核电刺激癫痫模型中的作用［Ｊ］．中
华实验外科杂志，２０１２，２９（７）：１３５２１３５４．
［８］ ＡｎａｎｄＳＳ，ＭａｒｕｔｈｉＭ，ＢａｂｕＰＰ．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅＪＮＫｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒＳＰ６００１２５ｉｍｐｒｏｖｅｓｓｕｒｖｉｖａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｔｅｎｕａｔｅｓｎｅｕｒｏｎａｌ
ｃｅｌｄｅａｔｈｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｅｒｅｂｒａｌｍａｌａｒｉａ（ＥＣＭ）［Ｊ］．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ
Ｒｅｓ，２０１３，１１２（５）：１９５９１９６６．
［９］ ＲａｈｍａｎＭ，ＺｈａｎｇＺ，ＭｏｄｙＡＡ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆ
ＪＮＫｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒＳＰ６００１２５ｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｅｓｅｎｉ
ｌｉｎ１ａｎｄＮｏｔｃｈｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｍｏｕｓｅｂｒａｉｎｗｉｔｈｏｕｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐ
ｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．ＢｒａｉｎＲｅｓ，２０１２，１４４８：１１７１２８．
［１０］ ＫａｎｇＭＫ，ＫａｎｇＮＪ，ＪａｎｇＹＪ，ｅｔａｌ．Ｇａｌｉｃａｃｉｄｉｎｄｕｃｅｓｎｅｕｒｏｎａｌ
ｃｅｌｄｅａｔｈｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅａｎｄ
ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＢｃｌ２［Ｊ］．ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃｉ，２００９，１１７１（８）：
５１４５２０．
（本文编辑：徐刚珍 英文编辑：孟 月）
·５９８·第１１期 崔 灿，等：低分子肝素对肝癌细胞株ＨｅｐＧ２迁移率及黏附率的影响