全 文 :作者简介:王 艳(1980-),女,讲师,硕士,研究方向:新疆地方药用植物的研究。
通信作者:阿依吐伦·斯马义,女(乌兹别克族),教授,硕士生导师,研究方向:药物分析和天然药物化学,E-mail:aytulunss@126.com。
维吾尔药核桃分心木不同提取物对
肾阳虚模型小鼠的实验研究
王 艳1,迪丽达尔·马合木提2,韩艳春1,阿依吐伦·斯马义1
(新疆医科大学1药学院药化/有机教研室,2附属肿瘤医院检验科,乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 探讨维吾尔药核桃分心木对肾阳虚小鼠模型作用的有效溶剂部位。方法 以大剂量氢化可的
松造成小鼠肾阳虚模型后,分别以分心木不同溶剂提取部位高、中、低剂量组给予干预,观察小鼠体质量增长率、各
相关脏器系数等指标变化以及下丘脑、肾脏的病理组织学变化。结果 (1)肾阳虚组小鼠出现大剂量皮质激素所
致的全身耗竭现象,分心木乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物组小鼠的全身耗竭现象出现不同程度的改善;
(2)在小鼠体质量变化和脏器系数方面,各提取部位组与空白组、肾阳虚组比较均在不同程度上表现出改善作用;
(3)正丁醇高剂量组、95%乙醇低剂量组降低肾小球毛细血管通透性,对毛细血管扩张起到拮抗作用;95%乙醇低
剂量组、水煎液中剂量组改善肾小管上皮细胞水肿现象;正丁醇高中低剂量组、水煎液高中剂量组对胶质细胞水肿
表现出改善作用。结论 核桃分心木95%乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物各剂量组均不同程度地改善
了小鼠模型肾阳虚症状。
关键词:肾阳虚;分心木;脏器指数;下丘脑;肾脏
中图分类号:R931.71 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2012)02-0153-05
Study of Uygur medicine diaphragma juglandis fructus on mice
model of kidney-yang deficiency
WANG Yan1,Dildar Mahmut2,HAN Yan-chun1,Aytulun Simayil 1
(1 Department of Pharmaceutical Chemistry and Organic Chemistry,School of Pharmaceutical Sciences,
2 Department of Clinical Laboratory,Affiliated Tumor Hospital,Xinjiang Medical University,
Urumqi 830011,China)
Abstrace:Objective To discuss the effective solvent extracts on mice model of kidney-yang deficiency.
Methods After mice model of kidney-yang deficiency prepared with the high dose Hydrocortisone,the
groups were treated with high,middle and low dose of different solvent extracts respectively,according to
the design.Weight growth rates,organ coefficients were observed,and evaluated the histopathological
changes of kidney and hypothalamus.Rusults (1)The systemic depletion induced by high dose cortical
第35卷 第2期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Vol.35 NO.2
2012年2月 Journal of Xinjiang Medical University Feb.2012
hormone was shown in kidney-yang deficiency group,but the three solvent extracts of Diaphragma Juglan-
dis Fructus,n-butanol extract group,distiled water solvent extract group could improve the depletion at
different degree;(2)In term of mice′s body weight and organ coefficients,each of the group show ED im-
proving effects at different degree compared to the control group and Kidney-yang Deficiency group;(3)
The high dose n-butanol extract group and low dose 95%ethanol group could decrease glomerular capilary
permeability,and could resist the capilary telangiectasis;low dose 95%ethanol group and middle dose
distiled water group could significantly improve the edema of renal tubular epithelial cels;n-butanol
group(high,middle and low)and distiled water solvent extract group(high,middle)could improve the
edema of glial cels.Conclution The 95%ethanol solvent extract,n-butanol solvent extract and distiled
water solvent extract of Diaphragma Juglandis Fructus can improve the mice′s symptoms of kidney-yang
deficiency at different degrees.
Key words:kidney-yang deficiency;Diaphragma Juglandis Fructus;organ coeficients;kidney hypothalamus
核桃分心木(diaphragma juglandis fructus),别
名胡桃衣(《本草再新》)、胡桃夹(《现代实用中药》)、
胡桃隔(《山东中草药手册》),是胡桃科核桃属植物
核桃的果核内木质隔膜,体轻,质脆,易折断[1]。分
心木味苦、涩,性平;归脾、肾经。在维吾尔医学中,
分心木常用来补肾、驱寒,治疗遗精、滑精、遗尿、尿
血、带下、泻痢、多汗、口腔溃疡、牙龈出血等多种疾
病[2-3]。维吾尔医和中医基于不同的文化背景和理
论基础,对客观存在的同一种病有着不同的认识,但
这种不同的认识结果却不会因为不同的理论体系而
有所改变。遗精、滑精、遗尿从中医学的角度分析,
多与肾阳虚有着密切的联系。
本实验探讨维吾尔药核桃分心木对肾阳虚模型
小鼠作用的有效溶剂部位,主要通过观察肾阳虚小
鼠模型质量增长率、各相关脏器系数等指标变化以
及下丘脑、肾脏的病理组织学变化,旨在充分利用新
疆丰富的自然资源,发挥我国特别是民间传统医药
的优势,结合现代医学先进的理论与科学的技术手
段,开发研制出具有安全高效、高选择性、低副作用、
性质稳定、价廉等特点的肾阳虚症治疗药物。
1 材料与方法
1.1 材料 核桃分心木采自新疆和田地区,经鉴定
为胡桃科核桃属植物普通核桃(Juglans regia L.)的
变种薄皮核桃(var.orientalis Dode)的果核内木质
隔膜。普通级健康雄性昆明种小鼠180只,体质量
27~33g,由新疆医科大学实验动物中心提供。石
油醚,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇,95%的乙醇,甲醛(天
津市致远化学试剂有限公司,分析纯),生理盐水等,
氢化可的松(山西晋新双鹤药业有限责任公司提供,
生产批号200805211),金匮肾气丸(北京同仁堂科技
发展股份有限公司制药厂,生产批号8033363)等。
1.2 仪器 DK-S24型电热恒温水浴锅;EYELA
SB-1000型旋转蒸发仪;Edwards Pirani 1001冷冻
干燥器;DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱;DT-
200型多功能电子天平;AB104-N型电子天平;低温
超速离心机;SK2510HP超声波清洗仪等。
1.3 实验方法
1.3.1 药材的提取 称取分心木药材1kg,适当
进行粉碎,先以石油醚、氯仿、乙酸乙酯依次去除分
心木低极性成分,再用10倍体积的水饱和正丁醇、
95%乙醇和蒸馏水提取,得到其3个不同的溶剂部
位,减压回收溶剂,至浸膏状态,冷冻干燥至干粉,冷
藏备用,取水饱和正丁醇、95%乙醇和蒸馏水3个溶
剂部位提取物分别加吐温-80稀释至生药浓度
0.15g/mL,进行肾阳虚证的实验研究。
1.3.2 肾阳虚小鼠造模方法[4-5] 选择体质量为
451 新 疆 医 科 大 学 学 报 第35卷
27~33g的健康雄性小白鼠165只,以25mg/kg
的剂量腹腔注射氢化可的松,1次/d,连续给药7d。
1.3.3 样品的配制 取水饱和正丁醇、95%乙醇和
水煎液部分冷冻干燥后样品,称取其重量,计算各部
位的提取率。按照成人60kg体质量及生药与制剂
的比例折算,小鼠各溶剂部位低、中、高剂量组分别
是成人用药量的4.5倍、9倍、18倍,以蒸馏水配制
各个溶剂部位的高、中、低3个剂量组为所需浓度。
治疗对照组选用的金匮肾气丸配制方法同上[6-8]。
1.3.4 模型动物干预方法 分别设立对照组(包括
空白对照组、肾阳虚模型组、治疗对照组)、95%乙醇
组、水饱和正丁醇组、水煎液组,每个对照组包括高、
中、低3个剂量组,每组15只小鼠。第1~7d,除空
白对照组以25mg/kg腹腔注射生理盐水外,其余
各组均以25mg/kg的剂量腹腔注射氢化可的松:
第8~15d,除对照组(包括空白对照组、肾阳虚模型
组、治疗对照组)以10mL/kg的剂量蒸馏水灌胃
外,其余各组均以配制的相应药液灌胃给药,剂量为
10mL/kg。
1.3.5 实验记录及脏器的处理 每日腹腔注射或
灌胃前,记录每只小鼠体质量(g);观察小鼠体征变
化。给药7d后,将小鼠处死,分别摘取其肝脏、脾
脏、胸腺、肾上腺、前列腺、睾丸、下丘脑、垂体和肾
脏,并除净周围脂肪组织,置于Bouin′s固定液中
15min后取出用滤纸吸干Bouin′s固定液,于天平
上称其重量,按[脏器系数=脏器官重量(mg)/动物
体质量(g)×100%]计算并进行统计处理;将肾脏、
下丘脑标本置于体积分数为10%的甲醛溶液中保
存,固定,常规切片,苏木素伊红(HE)染色,光镜下
观察其病理组织学改变。
1.4 统计学处理 根据收集的小鼠体重以及脏器
系数,分别用统计学软件 SPSS16.0的 One-way
ANOVA法及Dunnett法进行数据分析,计算组间
差异,检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 对肾阳虚小鼠模型的影响 氢化可的松模型
是较为经典的肾阳虚症动物模型。肾阳虚组小鼠出
现大剂量皮质激素所致的全身耗竭现象,主要表现
有消瘦、毛发失去光泽、拱背蜷缩、肢尾冷、反应迟
钝、倦怠、精神萎靡、饮食减少、大便清稀、畏寒喜暖。
分心木不同溶剂部位组小鼠的全身耗竭现象出现不
同程度的改善。
2.2 对小鼠体质量增长率的影响 造模后,肾阳虚
组、水提取部位、95%乙醇提取部位以及正丁醇提取
部位与空白组相比,小鼠体质量增长率明显降低 (P
<0.05~0.01),说明造模成功。给药后,治疗组、
95%乙醇提取部位以及正丁醇提取部位与肾阳虚组
相比,小鼠体质量增长率明显升高;上述各组与肾阳
虚组比较体质量增长率差别无统计学意义,见表1。
表1 分心木各溶剂部位对体质量的影响(g,珔x±s,n=15)
组别 造模前体质量 造模后体质量 增长值 增长率1 给药后体质量 增长值 增长率2
空白组 32.02±1.86 35.71±2.22 +3.69 11.53 38.15±1.99 +2.45 6.85
肾阳虚组 31.31±3.33 32.64±2.63▲ +1.33 4.25 35.26±2.71△ +2.62 8.03
治疗组 30.36±2.70 32.35±2.28▲● +1.99 6.56 35.85±2.41▲ +3.50 10.81
水高组 30.11±1.73 33.15±2.03▲★ +3.03 10.07 35.11±2.22▲ +1.96 5.92
水中组 30.86±2.11 32.53±2.16▲ +1.67 5.42 35.11±2.28▲ +2.58 7.92
水低组 30.91±3.43 31.84±2.98▲○ +0.93 3.02 34.44±2.91▲★ +2.60 8.16
醇高 31.14±1.75 32.19±2.49▲ +1.04 3.35 35.04±3.33△ +2.85 8.87
醇中 30.77±1.84 32.26±1.70▲ +1.49 4.86 35.42±2.45▲ +3.15 9.78
醇低 31.18±2.52 32.72±1.99▲ +1.54 4.93 37.10±2.31 +4.39 13.56
正高 30.34±2.58 31.30±2.15▲ +0.96 3.15 34.96±2.62 +3.66 11.69
正中 30.79±2.92 31.79±2.60▲ +1.01 3.27 35.03±2.37 +3.23 10.17
正低 31.34±2.40 32.12±2.51△ +0.78 2.50 35.83±2.60 +3.71 11.55
注:与空白组比较,△P<0.05,▲P<0.01;与肾阳虚组比较,○P<0.05,●P<0.01;与治疗组比较,★P<0.01。
551 第2期 王 艳等:维吾尔药核桃分心木不同提取物对肾阳虚模型小鼠的实验研究
2.3 对小鼠相关脏器系数的影响 治疗组、水提取
部位、95%乙醇提取部位、正丁醇提取部位与肾阳虚
组小鼠脾脏脏器系数相比有所降低,差别均无统计
意义;治疗组、95%乙醇低剂量组、正丁醇中、低剂量
组与肾阳虚小鼠胸腺脏器系数相比有所升高,差别
无统计意义;水提取部位、95%乙醇提取部位、正丁
醇提取部位与肾阳虚组小鼠肾上腺脏器系数相比有
所降低,差别无统计学意义;治疗组、水提取部位、正
丁醇提取部位与肾阳虚小鼠前列腺脏器系数相比有
所升高,差别无统计意义,95%乙醇提取部位与肾
阳虚小鼠前列腺脏器系数相比显著升高 (P <
0.01);治疗组、水提取部位、95%乙醇提取部位、正
丁醇提取部位与肾阳虚小鼠垂体脏器系数相比有所
升高,差别无统计意义;95%乙醇高、低剂量组、正丁
醇高、中剂量组与肾阳虚小鼠双肾脏器系数相比有
所升高,差别无统计意义;水煎液高、中剂量组与肾
阳虚小鼠睾丸脏器系数相比有所升高,差别无统计
学意义,见表2。
表2 各溶剂部位对各种脏器系数的影响 (mg·g-1,珔x±s,n=15)
组别 脾脏 胸腺 肾上腺 前列腺 垂体 双肾 睾丸
空白组 3.75±0.04 2.85±0.02 0.20±0.24 0.88±1.04 0.05±0.79 13.33±0.16 6.93±0.04
肾阳虚组 3.88±0.03 2.49±0.02 0.18±0.40 0.83±0.81 0.04±0.61 14.31±0.05 7.62±0.06
治疗组 3.77±0.05 2.70±0.03 0.20±0.69 0.95±0.01 0.05±0.41 13.16±0.08 7.29±0.04
水高组 3.47±0.01 2.34±0.03 0.14±0.13 1.11±0.02 0.05±0.50 13.60±0.05 7.73±0.03
水中组 3.41±0.03 2.34±0.03 0.15±0.12 1.70±0.09 0.06±0.93 12.71±0.06 7.84±0.06
水低组 3.12±0.03 2.31±0.03 0.15±0.18 0.99±0.01 0.06±0.37 14.21±0.06 7.41±0.05
醇高 3.39±0.25 2.62±0.06 0.12±0.13 1.21±0.02● 0.05±0.40 14.99±0.05 7.32±0.06
醇中 3.05±0.03 2.61±0.03 0.14±0.13 1.00±0.01● 0.06±0.69 13.19±0.05 7.37±0.05
醇低 3.59±0.04 3.15±0.03 0.16±0.17 1.06±0.01● 0.05±0.48 14.89±0.06 7.66±0.04
正高 2.59±0.02 2.63±0.03 0.13±0.17 1.09±0.01 0.05±0.26 14.35±0.08 7.35±0.06
正中 2.90±0.02 3.24±0.04 0.14±0.43 1.06±0.01 0.05±0.52 15.01±0.05 6.45±0.05
正低 3.49±0.03 3.20±0.02 0.14±0.22 1.00±0.01 0.06±0.88 13.72±0.03 7.46±0.06
注:与肾阳虚组比较,●P<0.01。
2.4 肾脏病理组织学改变
2.4.1 肾小球病变 主要病变部位在毛细血管,肾
阳虚组小鼠表现为毛细血管扩张,其次,肾小球表现
出大细胞型硬化。在各个治疗组中,正丁醇高剂量
组、95%乙醇低剂量组显示出对毛细血管扩张的拮
抗作用;正丁醇高剂量组、正丁醇低剂量组、95%乙
醇中剂量组、以及水煎液高、中、低剂量组显示出对
大细胞型硬化的治疗作用,95%乙醇高剂量组显示
出对大细胞型硬化的缓解作用。
2.4.2 肾小管病变 肾阳虚组小鼠肾小管上皮细
胞水肿明显,95%乙醇低剂量组、水煎液中剂量组表
现出明显的改善作用。
2.4.3 肾间质病变 肾阳虚小鼠肾间质有明显的
出血症状,正丁醇中、低剂量组,95%乙醇高剂量组,
水煎液中、低剂量组表现出明显的改善作用。
2.5 下丘脑病理组织学改变 {STBZ〗神经胶质细
胞病变:肾阳虚组小鼠表现为胶质细胞水肿,正丁醇
高中低剂量组、水煎液高中剂量组对胶质细胞水肿
表现出改善作用。
3 讨论
肾阳虚是困扰男性的一大疾病,严重影响着人
们的生活质量。现代研究亦证明,肾阳虚可以引起
遗精遗尿、泻痢、多汗、口腔溃疡等多种疾病。肾阳
虚证的主要发病环节可能在下丘脑[9-11],其主要表
现为下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺轴、甲状腺轴、
性腺轴)不同部位、不同程度的功能紊乱。
651 新 疆 医 科 大 学 学 报 第35卷
临床上多使用中药复方治疗肾阳虚所致遗精遗
尿等相关病症,常使用的药物有覆盆子、桑螵蛸、海
螵蛸、山茱萸、五味子、莲子心、莲须、芡实、金樱子、
禹余粮、肉豆蔻、石榴皮、罂粟壳等,其中桑螵蛸、山
茱萸等单味药使用亦有较好的疗效。维吾尔医学用
药核桃分心木治疗肾阳虚所致相关疾病有悠久的历
史。维吾尔医用12g分心木煮沸代茶饮治疗肾虚
遗精疗效显著[2-3]。
本实验中肾阳虚组小鼠出现大剂量皮质激素所
致的全身耗竭现象,主要表现有消瘦、毛发失去光
泽、拱背蜷缩、肢尾冷、反应迟钝、倦怠、精神萎靡、饮
食减少、大便清稀、畏寒喜暖,而分心木不同溶剂部
位组小鼠的全身耗竭现象出现不同程度上的改善。
肾阳虚小鼠造模过程中,体重相对于空白组增长缓
慢;给药后,治疗组、95%乙醇提取部位以及正丁醇
提取部位肾阳虚组相比,小鼠体质量增长率明显升
高。实验中摘取与下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺轴、
甲状腺轴、性腺轴)相关的脏器,计算其脏器系数,结
果表明不同组别的给药组对肾阳虚小鼠症状具有拮
抗作用。本实验进一步通过对肾脏、下丘脑做病理
组织切片来验证实验结果,表明核桃分心木95%乙
醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物各剂量组均
可不同程度地改善小鼠模型肾阳虚症状。本研究结
果为进一步筛选核桃分心木作用于肾阳虚的物质基
础提供一定的实验依据。
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