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水翁花抗炎镇痛解热作用研究



全 文 :收稿日期:2012-07-31; 修订日期:2012-11-26
基金项目:广东省中医药管理局资助项目( No. 2009081) ;
广东省中山市科技立项资助( No. 20091A044)
作者简介:程少璋( 1971-) ,男( 汉族) ,广东中山人,现任广州中医药大学
附属中山医院主管药师,主要从事中药制剂工作.
水翁花抗炎镇痛解热作用研究
程少璋,罗 清,高玉桥,林 慧,胡 莹,张文霞
(广州中医药大学附属中山医院,广东 中山 528401)
摘要:目的 观察水翁花的抗炎镇痛解热作用,为临床应用提供可靠的实验依据。方法 采用酵母致发热大鼠模型,观察
水翁花解热作用; 采用扭体法和热板法,观察水翁花镇痛作用; 采用二甲苯致小鼠耳肿胀及冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管
通透性的影响观察水翁花的抗炎作用。结果 水翁花高、中剂量组能显著抑制酵母混悬液致大鼠发热反应,明显提高热
板的痛阈值和抑制冰醋酸所致扭体反应,亦能显著抑制腹腔毛细血管通透性的增高及二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度。结
论 水翁花具有较好的解热、抗炎、镇痛作用。
关键词:水翁花; 解热; 镇痛; 抗炎
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 02. 059
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0375-02
水翁花始载于《岭南采药录》,为桃金娘科水翁属植物水翁
Cleistocalyx rculatus(Roxb.)Merr. et Perry 的干燥幼嫩花蕾,又名
水雍花、大蛇药、水翁仔、水榕花、水翁、酒翁、水榕树、水香;性寒,
味苦,归脾、胃经;能清热解毒,去湿消滞;主用于夏天暑湿食滞所
致的发热,咽干,口渴腹胀或呕吐泄泻[1]。主产于广东、台湾、海
南、广西、云南等省区,越南、印度、马来西亚也有分布。干燥水翁
花久贮后色泽加深,苦味浓,清热作用大。水翁花在民间应用广
泛,疗效确切,属于广东地产药材,夏季常作凉茶以解暑,是“清
热凉茶”等中药的主要原料之一[2]。我院制剂悦康外感凉茶就
是以水翁花为主研制成的复方制剂,具有疏风解表,清热解毒之
功效,远销国内及香港、澳门等地区[3]。关于水翁花抗炎镇痛解
热的研究尚未见报道,本文对其抗炎、镇痛及解热作用进行了实
验研究。现报道如下。
1 材料与仪器
1. 1 药品与试剂 水翁花药材由广东广弘药材有限公司提供
(经中山市中医院药检室曾聪彦主任中药师鉴定为桃金娘科植
物水翁 Cleistocalyx rculatus(Roxb.)Merr. et Perry 的干燥幼嫩花
蕾)。制法:取水翁花 1. 0kg,加水煎煮 2 次,分别为 12 倍量水和
8 倍量水各煎煮 2h,合并滤液,静置过滤,浓缩至 1 000 ml(1ml相
当于原生药 1. 0g) ,临用时配成所需浓度。消炎痛(江苏亚邦爱
普森药业有限公司,批号:1003002) ;冰醋酸、二甲苯(均为分析
纯试剂,广州化学试剂厂生产) ;干酵母(深圳稻香村食品有限公
司,批号:20100916) ;用生理盐水配成 10%的混悬液。
1. 2 动物 SPF 级昆明小鼠,体质量 18 ~ 22g,180 只,雄性 120
只,雌性 60 只,由广东省实验动物中心提供,动物生产许可证号:
SCXK(粤)2008 - 0002。SPF 级 SD 大鼠,体质量 130 ~ 150g,50
只,雌雄各半。由广东省实验动物中心提供,动物生产许可证号:
SCXK(粤)2008 - 0020。
1. 3 仪器 UV -2550 型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)、
BS224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)、BS型电
热三用水浴箱(北京医疗设备厂)、肛温记(上海医药仪表厂)、离
心机(上海手术器械厂)、可调移液器(上海金林)、机械秒表(上
海钻石)。
2 方法与结果
2. 1 抗炎作用
2. 1. 1 小鼠腹腔毛细血管通透性试验 研究药物对小鼠腹腔毛
细血管通透性的影响[4](见表 1)。选用 18 ~ 22 g的昆明小鼠 50
只,雄性。称重,随机分为 5 组,每组 10 只。按体重计算其灌胃
量,即低剂量组 8 g生药 /kg,中剂量组 16 g生药 /kg,高剂量组 31
g生药 /kg,消炎痛组 0. 2 g /kg。连续灌胃给药 7d。末次给药后
1h,尾静脉注射 0. 5%伊文斯蓝生理盐水溶液 10 ml /kg,并同时腹
腔注射 0. 7%醋酸溶液 10 ml /kg,20min 后处死小鼠,剪开腹腔,
用 6ml生理盐水冲洗,定容至 10 ml,3 000 r /min 离心 15 min,取
上清液,在 UV - 2550 分光光度计 590 nm 处测定吸收度 OD 值,
结果见表 1。
表 1 水翁花对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(珋x ± s)
组别 腹腔渗出液 OD值
空白对照 1. 159 ± 0. 396
消炎痛 0. 703 ± 0. 470*
水翁花高剂量 0. 731 ± 0. 349*
水翁花中剂量 0. 796 ± 0. 191
水翁花低剂量 0. 967 ± 0. 492
与空白组比较,* P < 0. 05;n = 10
2. 1. 2 二甲苯致小鼠耳肿胀试验 研究药物对二甲苯致小鼠耳
肿胀的影响[4](见表 2)。选用体质量 18 ~ 22g 的昆明小鼠 60
只,雄性。选出 10 只做预试验,观察二甲苯致炎效果。将余下的
小鼠 50 只称重,随机分为 5 组,每组 10 只。按体重计算其灌胃
量(低剂量组 8g 生药 /kg,中剂量组 16g 生药 /kg,高剂量组 31g
生药 /kg,消炎痛组 0. 2 g /kg)。各给药组小鼠连续灌胃 7 d。第 7
天灌胃后 1h,用 100%二甲苯涂于右耳正反两面,左耳作空白对
照,每鼠 50μl。40min 后,将小鼠断颈处死,沿耳廓基线剪下两
耳,用 8 mm 直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,用电子天
平称定其重量,计算各组肿胀率差,比较组间差异。肿胀率(% )
= (致炎后重量 -致炎前重量) ÷致炎前重量 × 100%。
表 1 水翁花对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(珋x ± s)
组别 两耳肿胀率差(Δmg)
空白对照 0. 065 ± 0. 014
消炎痛 0. 015 ± 0. 008*
水翁花高剂量 0. 015 ± 0. 010*
水翁花中剂量 0. 023 ± 0. 010*
水翁花低剂量 0. 034 ± 0. 020*
与空白组比较,P < 0. 05,P < 0. 01;n = 10
2. 2 镇痛作用
2. 2. 1 冰醋酸致小鼠扭体实验 研究药物对冰醋酸致小鼠扭体
的影响[4](见表 3)。选用 18 ~ 22g的昆明小鼠 60 只,雌雄各半。
选出 10 只做预试验,观察冰醋酸致小鼠扭体时间段。将余下的
昆明种小鼠 50 只称重,随机分为 5 组,每组 10 只。按体重计算
其灌胃量(低剂量组 8 g生药 /kg,中剂量组 16 g生药 /kg,高剂量
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 2 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期
组 31 g生药 /kg,消炎痛组 0. 2 g /kg)。各组小鼠连续灌胃 7 d。
第 7 天灌胃后 1h,腹腔注射 0. 7 %冰醋酸 0. 1 ml /10g,记录 20
min内的各鼠扭体的次数,计算药物镇痛百分率,比较组间差异。
镇痛百分率(%) = (对照组平均扭体次数 -给药组平均扭体次
数) ÷对照组平均扭体次数 × 100%。
表 3 水翁花对冰醋酸致小鼠扭体的影响(珋x ± s)
组别 扭体次数
空白对照 47. 2 ± 14. 3
消炎痛 13. 5 ± 10. 0
水翁花高剂量 26. 0 ± 15. 7**
水翁花中剂量 29. 3 ± 17. 2*
水翁花低剂量 29. 2 ± 21. 8*
与空白组比较,P < 0. 05,P < 0. 01;n = 10
2. 2. 2 小鼠热板法实验 研究药物对物理刺激的影响[4,5],(见
表 4)。选用体质量 18 ~ 22g的昆明小鼠 60 只,雌性。称重,用秒
表记录小鼠自投入至出现舔足的时间(s)做为该小鼠的痛阈值。
凡小于 5 s出现或大于 30 s (一般为 10 ~ 25 s)不出现舔后足或
跳跃的小鼠,弃之不用。依次测定各小鼠的痛阈值,取预选合格
雌性小鼠 50 只,间隔 5min 再重新测定痛阈值一次,将两次痛阈
值的平均值作为该鼠的给药前痛阈值。(痛阈值超过 60s,即停
止测试按 60s记)。随机分为 5 组,每组 10 只。按体重计算其灌
胃量(低剂量组 8g生药 /kg,中剂量组 16g生药 /kg,高剂量组 31g
生药 /kg,消炎痛组 0. 2g /kg)。各组小鼠连续灌胃 7 d。第 7 天灌
胃后测其 0. 5,1,1. 5,2,2. 5 h的痛阈值。
表 4 水翁花对小鼠热板法痛阈值的影响(珋x ± s)
组别
痛阈值(s)
给药前 给药后 0. 5h 给药后 1h 给药后 1. 5h 给药后 2h 给药后 2. 5h
空白对照 17. 2 ± 3. 1 15. 4 ± 4. 6 13. 2 ± 3. 3 13. 0 ± 5. 6 16. 5 ± 4. 1 19. 7 ± 6. 0
消炎痛 18. 8 ± 2. 5 16. 4 ± 3. 2* 21. 6 ± 4. 5* 22. 1 ± 5. 2 19. 8 ± 7. 2 20. 5 ± 6. 2
水翁花高剂量 16. 2 ± 3. 8 18. 0 ± 5. 4 17. 7 ± 6. 1 31. 3 ± 4. 2* 36. 7 ± 5. 1* 29. 0 ± 5. 5*
水翁花中剂量 16. 7 ± 3. 2 14. 9 ± 4. 0 18. 4 ± 2. 7 28. 4 ± 6. 3* 34. 5 ± 3. 9* 28. 9 ± 6. 2*
水翁花低剂量 17. 5 ± 2. 7 19. 6 ± 7. 0 18. 8 ± 6. 9 23. 0 ± 3. 4* 31. 2 ± 5. 9* 28. 8 ± 6. 0*
与同一时间空白对照组比,P < 0. 05,P < 0. 01;n = 10
2. 3 解热作用 研究药物对酵母引起大鼠发热的影响[5,6],(见
表 5)。选用体质量 180 ~ 220g的 SD大鼠 60 只,雌雄各半,测量
其基础肛温,选出 10 只做预试验,观察酵母混悬液致大鼠发热时
间段以及选择酵母的剂量。将余下的 SD大鼠 50 只称重,随机分
为 5 组,每组 10 只。按体重计算其灌胃量(低剂量组 5. 4g生药 /
kg,中剂量组 10. 8g生药 /kg,高剂量组 21. 6g 生药 /kg,消炎痛组
3. 4g /kg)。各给药组大鼠连续灌胃 7 d。第 7 天灌胃后,立即背
部皮下注射 10%酵母混悬液 1ml /100g。测定其注射酵母混悬液
后 2,4,5,6,7,8,9h的肛温。记录体温变化,比较组间差异。
表 5 水翁花对酵母致大鼠发热的影响(珋x ± s)
组别
注射酵母后不同时间大鼠体温变化(Δ℃)
4 h 5 h 6 h 7 h 8 h 9 h
空白对照 36. 85 ± 0. 70 37. 54 ± 0. 65 38. 00 ± 0. 36 38. 01 ± 0. 50 38. 15 ± 0. 28 37. 54 ± 0. 49
消炎痛 36. 20 ± 0. 42* 36. 90 ± 0. 49* 37. 35 ± 0. 67* 37. 46 ± 0. 61* 37. 43 ± 0. 46** 37. 32 ± 0. 65
水翁花高剂量 36. 56 ± 0. 84* 36. 93 ± 1. 21 37. 38 ± 0. 85 37. 53 ± 0. 88 37. 60 ± 0. 77 37. 24 ± 0. 92
水翁花中剂量 36. 64 ± 0. 51* 36. 92 ± 0. 66* 37. 32 ± 0. 81* 37. 57 ± 0. 89 37. 49 ± 0. 59** 37. 44 ± 0. 58
水翁花低剂量 36. 87 ± 0. 53 37. 67 ± 0. 51 37. 89 ± 0. 44 38. 07 ± 0. 57 37. 77 ± 0. 68 37. 27 ± 0. 59
与同一时间空白对照组比,P < 0. 05,P < 0. 01;n = 10
2. 4 统计方法 采用 SPSS19. 0for Windows 软件处理,数据用 珋x
± s表示,采用单因素方差分析,进行 Dunnet - t检验。
3 讨论
我院以水翁花为主要原料研制成悦康外感凉茶,具有疏风解
表、清热解毒的功效,经多年临床验证,其对外感风热感冒,发热
头痛,咽喉肿痛,上呼吸道炎,扁桃体炎有较好的疗效。本实验研
究表明水翁花对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,
能抑制冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性,表明水翁花有一定
的抗炎作用。同时水翁花能明显提高热板致小鼠的痛阈值和抑
制冰醋酸所致小鼠扭体反应,表明本品对物理性疼痛和对炎性刺
激或化学性刺激产生疼痛均有较好的镇痛作用。解热实验是用
20%酵母液皮下注射大鼠体内,通过机体生成及释放内致热原
(EP) ,最终导致体温调节中枢的体温调节点上移,从而使机体产
热加强,散热降低,体温升高。在解热实验的预试验中发现,大鼠
皮下注射酵母混悬液后,体温是先降后升,约在第 4 h 后,出现较
明显的体温升高现象,于第 8 小时时间段达到发热模型体温的最
大值,而之后动物体温曲线平缓并逐渐落回流至正常,故本实验
选取 4 ~ 9h作为观察大鼠体温变化的时间段。并通过实验表明,
水翁花能显著抑制酵母混悬液致大鼠发热反应,有较好的解热作
用。由此提示水翁花具有较好的解热、镇痛、抗炎作用。
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