全 文 :金钮扣醇提物中解热、镇痛有效部位的研究
黄庆芳1,冯承恩1,房志坚1,梅全喜2
( 1.广东药学院中山校区,广东 中山 528458; 2. 广州中医药大学附属中山中医院,广东 中山 528400)
摘要:目的 研究金钮扣醇提物中不同部位的解热镇痛作用。方法 提取金钮扣醇提物,按极性大小依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇萃取,按提取部位分为空白对照组、阳性组、金钮扣醇提组、石油醚萃取组、氯仿萃取组、乙酸乙酯萃取组、正丁醇萃取组和水层
组。用干酵母致热法观察其对发热大鼠的分时段解热作用,用热板法和扭体法观察其对小鼠外周性镇痛和中枢性镇痛作用。结果
金钮扣各组对干酵母引起的大鼠发热有一定的解热作用,P < 0. 05;作用强度依次为氯仿组 >乙酸乙酯组 >正丁醇组 >醇提组 >石油
醚组 >水层组;没有中枢性镇痛作用,有一定的外周性镇痛作用,P < 0. 05;作用强度依次为水层组 >醇提组、石油醚组、乙酸乙酯组 >
正丁醇组 >氯仿组。结论 金钮扣各提取部位有不同程度的解热作用和外周性镇痛作用。
关键词:金纽扣;解热;镇痛
中图分类号: R285 文献标志码: A 文章编号: 1673 - 4610( 2012) 08 - 0474 - 04
基金项目:中山市华南现代中药城 ( 健康医药产业基地) 专项发展基金( 编号: 2007J007)
作者简介:黄庆芳,中级实验师,主要从事药理学相关科研工作。
通讯作者:房志坚,副教授,硕士研究生导师,主要从事中药资源鉴定与中药质量标准的研究 ,E-mail : jian139@ tom. com
Effective Part of Radix et Caulis Solani Torvi ’s
Antipyretic,Analgesic Effect
HUANG Qing-fang1,FENG Chen-en1,FANG Zhi-jian1,MEI Quan-xi2
( 1. Guangdong Pharmaceutical College,Zhongshan,Guangdong 528458,China; 2. The Affiliated Zhongshan
Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine,zhongshan,Guangdong 528400,China)
Abstract: Objective To study the antipyretic and analgesic effects of different effective part of Radix et Caulis Solani
Torvi’s alcoholic extract. Methods The alcoholic extract was extracted from Radix et Caulis Solani Torvi. They were
divided into light petroleum,chloroform,acetic ether,n-butyl alcohol in turns of polarity. Meanwhile,they were also
divided into groups as blank control group,positive group,alcoholic extract group,light petrole-um group,chloroform
group,acetic ether group,n-butyl alcohol group,and water group in turns of extraction sites. The antipyretic effect in
different time to fever rats were determined by dry yeast induced thermal method,the peripheral analgesia and central
analgesia effect by hot plate method and writhing method. Results Each groups of Radix et Caulis Solani Torvi had certain
antipyretic effect to fever rats which induced by dry yeast,P < 0. 05; The effect of intensity in turns of chloroform group >
acetic ether group > n-butylalcohol group > alcoholic extract group > light petroleum group > water-soluble group; Have no
central analgesia effect,Have certain peripheral analgesia peripheral effect,P < 0. 05; The effect of intensity in turns of
water-soluble group > alcoholicextract group,light petroleum group,cetic ether group > n-butyl alcohol group > chloroforma
group. Conclusion The different effective part of Radix et Caulis Solani Torvi’s alcoholic extract have various degree of
antipyretic effect and peripheral analgesia effect.
Key words: Radix et Caulis Solani Torvi; antipyretic; analgesic
金钮扣又名水茄、山颠茄、刺茄、鸭卡、金钮头、金
衫扣[1]。来源于茄科植物水茄(Solanum torvum Swar-
tz)的根及茎,为广东地产民间习用药材[2],该药具有散
瘀、通经、消肿、止痛、止咳之功效[3]。金钮扣还是药品
沙溪凉茶的主要组方之一,沙溪凉茶具有清热解毒,疏
风散热,宣肺止咳,化湿宽中的作用。沙溪凉茶中的药
效和临床应用可能是由于金钮扣的解热和镇痛作用所
引起[4]。为确定金钮扣在沙溪凉茶中的作用,本课题
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Pharmacy Today ·2012 08 Vol. 22 No. 8·
提取金钮扣醇提物并一步分离,对金钮扣起解热、镇痛
作用的有效成分进行初步的筛选。
1 材料与仪器
1. 1 药物、药品与试剂
金钮扣来源于广东益和堂,经广东药学院中山校
区实验中心田素英副教授鉴别为金钮扣的干燥茎,药
材打成粉,过标准检验二号筛得到粗粉。
1. 1. 1 金钮扣不同部位提取 先后以醇提法和萃取
法提取分离有效部位。
1. 1. 2 药品和试剂 罗通定片(成都市前江制药厂,
071005) ;阿司匹林肠溶片(Bayer Vital GmbH,批号:
BTATRC12008-06) ;高活性干酵母菌(安琪酵母股份有
限公司,批号:GB /T20886) ;冰醋酸(AR,天津市大茂化
学试剂厂,批号:20040420)。
1. 2 动物
KM种小白鼠,(20 ± 2)g,雌雄兼用,SD大鼠,(200
± 20)g,雄性,购自广东省实验动物中心,SPF 级,许可
证号为 SCXK(粤)2006 - 0015。由广州中医药大学中
山附属医院动物实验室饲养,室温控制在(20 ± 2)℃,
湿度控制在 60%。
1. 3 仪器
智能热板仪,型号:RB-200,成都泰盟科技有限公司;
电子温度计,型号:HRQ-A2,郑州豪润奇电子科技公司。
2 方法 [5]
2. 1 金钮扣不同部位提取方法
取药材粗粉与 95%乙醇先后以 1 ∶ 10、1 ∶ 8 的比例
于 75 ℃水浴下回流 2 次,每次 1 h,双层纱布过滤,合
并 2 次滤液,75 ℃水浴挥醇至得到醇提取物流浸膏。
用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次按极性大小萃
取,得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、
正丁醇萃取物、水层。
2. 2 金钮扣不同部位对酵母菌致热大鼠的解热作用
取 200 ~ 250 g 的雄性大鼠,禁食不禁水 12 h 后,
每天于平行时间点连续测量直肠温并记录数据,连续
测量 3 d,取温度变化(△T)< 0. 3 ℃的合格大鼠 80
只,按△T 随机分为 8 组,分别为:空白对照组、阿司匹
林组(0. 10 g /kg)、醇提组(17. 12 g 生药 /kg,以下同) ,
石油醚组(17. 12 g生药 /kg,以下同) ,氯仿组(17. 12 g
生药 /kg,以下同) ,乙酸乙酯组(17. 12 g 生药 /kg,以下
同) ,正丁醇组(17. 12 g 生药 /kg,以下同) ,水层组
(17. 12 g生药 /kg,以下同)。
每组 10 只,灌胃给药,给药容积为 1 ml /100 g,连
续给药 7 d。试验前禁食不禁水 12 h,测量大鼠直肠温
作为基础体温,每组按 1 ml /100 g 皮下注射致热剂
(18%酵母菌)致热,6 h 后体温平均升高 > 2 ℃,灌胃
给药,并测出药后 2、3、4、6、8 h 的温度,计算各时间点
与基础体温的△T。
2. 3 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用(热板法、扭
体法)
2. 3. 1 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用( 热板法)
取 18 ~ 22 g 雌性小鼠,置于(55 ± 0. 5)℃热板上,
记录小鼠的痛阈值(自放在热板上至出现舔后足所需
的时间) ,测 2 次取平均值作为该鼠给药前痛阈值。凡
痛阈值 < 5 s或者 > 30 s者弃之。取合格小鼠 80 只,按
药前痛阈值将小鼠随机分成 8 组,分别是空白对照组、
罗通定组(0. 06 g /kg)、醇提组、石油醚组、氯仿组、乙
酸乙酯组、正丁醇组、水层组。每组 10 只。灌胃给药,
给药容积 0. 2 ml /10 g,除阳性组仅末次给药,其他组连
续给药 7 d,末次给药后分别于 30、60、90、120 min测小
鼠药后不同时间下的痛阈值。
2. 3. 2 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用( 扭体法)
取 18 ~ 22 g小鼠 80 只,雌雄各半,分组及给药同
“2. 3. 1”项下。末次给药后 1 h,腹腔注射 0. 7%冰醋酸
0. 2 ml /只。观察小鼠出现首次扭体反应的时间及 15
min内扭体的次数,并计算各组镇痛百分率。
2. 4 统计学处理
采用统计软件 SPSS version 17. 0 进行方差分析 F,
q及 t检验。
3 结果
3. 1 金钮扣不同部位提取结果
醇提取物流浸膏的提取率为 5. 99%。石油醚萃取
物的提取率为 0. 52%、氯仿萃取物的提取率为 0. 78%、
乙酸乙酯萃取物的提取率为 0. 28%、正丁醇萃取物的
提取率为 0. 72%、水层的提取率为 0. 94%。
3. 2 金钮扣不同部位对酵母菌致热大鼠的解热作用
从表 1 可以看出,注射酵母菌后 6 h,各组体温均
有升高,平均升高 2. 02 ℃,且各组体温升高均匀。药
后在同一时间点平行比较,各药物组均有不同程度的
退热效果,与空白对照组相比有显著性差异。药后 2 h
醇提组、石油醚组、氯仿组、正丁醇组 P < 0. 001,乙酸乙
酯组和水层组 P < 0. 05;药后 3 h 氯仿组、正丁醇组 P
< 0. 001,其他组 P < 0. 05;药后 4 h、6 h 氯仿组 P <
0. 001,其他组 P < 0. 05;药后 8 h 石油醚组、氯仿组、乙
酸乙酯组 P < 0. 05,其余组停止表现其退热作用。
3. 3 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用(热板法、扭
体法)
3. 3. 1 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用( 热板法)
从表 2 可以看出,与空白组相比,各给药组痛阈值
基本上没有显著性差异。
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表 1 金钮扣不同部位对酵母菌致热大鼠的解热作用(n =10,珔x ± s)
组别 剂量(g /kg) 6 h发热△t℃ 药后 2 h△t℃ 药后 3 h△t℃ 药后 4 h△t℃ 药后 6 h△t℃ 药后 8 h△t℃
空白对照组 — 2. 34 ± 0. 56 3. 47 ± 0. 35 3. 05 ± 0. 45 3. 03 ± 0. 53 2. 92 ± 0. 53 2. 20 ± 0. 50
阿司匹林组 0. 10 1. 72 ± 1. 02 2. 04 ± 0. 40*** 1. 64 ± 0. 46*** 1. 52 ± 0. 36*** 1. 96 ± 0. 59** 2. 23 ± 0. 64
醇提组 17. 12 2. 03 ± 0. 56 2. 27 ± 0. 57*** 2. 43 ± 0. 34** 2. 06 ± 0. 61** 2. 36 ± 0. 54* 1. 96 ± 0. 36
石油醚组 17. 12 2. 40 ± 0. 57 2. 40 ± 0. 60*** 2. 33 ± 0. 87* 2. 41 ± 0. 59* 2. 19 ± 0. 76* 1. 46 ± 0. 68*
氯仿组 17. 12 1. 37 ± 0. 62 2. 38 ± 0. 46*** 1. 67 ± 0. 65*** 1. 86 ± 0. 64*** 1. 70 ± 0. 62*** 1. 52 ± 0. 68*
乙酸乙酯组 17. 12 2. 48 ± 0. 57 3. 00 ± 0. 36** 2. 14 ± 0. 65** 2. 33 ± 0. 36** 2. 22 ± 0. 58* 1. 63 ± 0. 54*
正丁醇组 17. 12 1. 60 ± 0. 61 1. 82 ± 0. 42*** 1. 73 ± 0. 58*** 2. 27 ± 0. 51** 2. 15 ± 0. 66* 1. 95 ± 0. 44
水层组 17. 12 2. 19 ± 0. 78 2. 84 ± 0. 79* 2. 55 ± 0. 55* 2. 20 ± 0. 82* 2. 41 ± 0. 44* 2. 08 ± 0. 12
注:与空白对照组比较,***P < 0. 001,**P < 0. 01,* P < 0. 05
表 2 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用(热板法)(n =10,珔x ± s)
组别
剂量
(g /kg)
药后 30 min
痛阈值
药后 60 min
痛阈值
药后 90 min
痛阈值
药后 120 min
痛阈值
空白对照组 — 18. 46 ± 7. 34 15. 69 ± 4. 66 14. 82 ± 5. 74 20. 44 ± 10. 86
罗通定组 0. 06 60. 00 ± 0. 00*** 60. 00 ± 0. 00*** 60. 00 ± 0. 00*** 60. 00 ± 0. 00***
醇提组 17. 12 11. 89 ± 4. 26 11. 94 ± 2. 26 11. 18 ± 3. 80 12. 88 ± 3. 21
石油醚组 17. 12 26. 89 ± 10. 98 24. 76 ± 10. 66 17. 97 ± 6. 53 19. 49 ± 10. 36
氯仿组 17. 12 14. 11 ± 3. 44 21. 10 ± 9. 61 17. 72 ± 6. 05 19. 69 ± 7. 40
乙酸乙酯组 17. 12 15. 23 ± 2. 13 20. 19 ± 7. 42 19. 97 ± 8. 80 12. 97 ± 4. 85
正丁醇组 17. 12 15. 61 ± 4. 14 13. 96 ± 6. 35 20. 80 ± 6. 49* 19. 27 ± 8. 46
水层组 17. 12 14. 49 ± 4. 65 19. 30 ± 8. 21 15. 77 ± 6. 96 17. 02 ± 9. 54
注:与空白对照组比较,***P < 0. 001,**P < 0. 01,* P < 0. 05
3. 3. 2 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用( 扭体法)
由表 3可以看出,各给药组均能不同程度推迟初次
扭体出现时间,减少 15 min 内扭体次数,与空白对照组
相比,初次扭体时间在醇提组、石油醚组、乙酸乙酯组、水
层组 P < 0. 001,氯仿组、正丁醇组 P < 0. 05;15 min 内
扭体次数在水层组 P < 0. 001,其余组 P < 0. 05。
表 3 金钮扣不同部位对小鼠的镇痛作用(扭体法)(n =10,珔x ± s)
组别 剂量(g /kg) 初次扭体时间(s) 15 min内扭体次数 镇痛百分率(%)
空白对照组 — 219. 00 ± 31. 79 38. 50 ± 7. 40 —
罗通定组 0. 06 301. 80 ± 51. 30*** 24. 10 ± 6. 52*** 37. 40
醇提组 17. 12 300. 50 ± 36. 04*** 30. 00 ± 8. 00* 22. 08
石油醚组 17. 12 318. 30 ± 55. 12*** 25. 33 ± 14. 73* 34. 20
氯仿组 17. 12 264. 60 ± 37. 14** 28. 20 ± 11. 31* 26. 75
乙酸乙酯组 17. 12 314. 80 ± 44. 55*** 28. 00 ± 9. 22* 27. 27
正丁醇组 17. 12 265. 00 ± 42. 09* 27. 20 ± 9. 03** 29. 35
水层组 17. 12 370. 50 ± 49. 28*** 24. 10 ± 5. 65*** 37. 40
注:与空白对照组比较,***P < 0. 001,**P < 0. 01,* P < 0. 05
4 讨论
机体处在病理状态下,由于各种原因导致产热增
加或散热减少,则出现发热。常用酵母菌皮下注射作
用于机体,激活内源性致热源(endogenous pyrogen,EP)
细胞产生和释放 EP,后者作用于体温调节中枢,引起
体温中枢介质的释放,继而引起调定点的改变,引起炎
症发热[6]。从解热试验结果可以看出,各药物组均有
不同程度的退热效果,其中氯仿组 >乙酸乙酯组 >正
丁醇组 >醇提组 >石油醚组 >水层组。因此醇提取物
当中起解热作用的主要成分可能来自于氯仿、乙酸乙
酯、正丁醇部位。
热板法属于中枢性镇痛模型,而醋酸扭体法则为
外周镇痛模型,因此经常以此两种方法搭配使用判断
药物主要作用部位[5]。从镇痛试验结果可以看出,金
钮扣基本没有中枢性镇痛作用。可见金钮扣属于外周
性镇痛药,镇痛作用与组分极性可能成正相关,极性大
的组分即正丁醇、水溶性组分的镇痛作用较强,而极性
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Pharmacy Today ·2012 08 Vol. 22 No. 8·
较小的组分,如石油醚组、氯仿组、乙酸乙酯组的镇痛
作用较弱。
本课题组已从金钮扣中分离出生物碱、挥发油、黄
酮类及三萜类等[7]。另有研究从金钮扣地上全草的
95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离出 11 种成分,包
括酰胺类、甾体皂苷类、黄酮类、有机酸类成分[8]。最
近,陆园园在金钮扣中发现甾体、生物碱、皂苷、芦丁、
山柰酚和槲皮素等[9]。生物碱成分具有一定解热作
用[10],金纽扣的解热作用可能是由于其中所含的生物
碱成分引起;金钮扣的外周镇痛作用可能是由于黄酮
类和槲皮素具有镇痛作用引起[11,12]。其具体机制还有
待进一步研究。
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( 收稿日期: 2011 - 09 - 01
)
2013 全国药物流行病学学术年会征文通知
“2013 全国药物流行病学学术年会(National Meeting for Pharmacoepidemiology - 2013 China)”将于 2013 年 6 月在广东省广州市召
开。本届学术年会由中国药学会药物流行病学专业委员会主办,广东省药学会承办,是本专委会第 17 次全国性学术会议。会议主题
为“开展上市后药品再评价,促进临床合理用药”。本届年会重点关注中药注射剂评价和真实世界研究问题。会议将邀请药物流行
病学等相关专业的国内外著名专家学者及药政管理有关领导,就推进药物流行病学学科发展、促进临床合理用药作精彩的学术演讲。
欢迎广大药学、医学工作者与临床药理学、流行病学、药事管理学、制药企业研究人员等积极参会,共同探讨国内外药物流行病学的理
论与实践,研究药物警戒与药品风险管理,交流药物临床应用与合理用药的研究进展和经验体会。现面向全国医药卫生工作者征集
学术论文,参会论文经专家审理,优秀者将在《药物流行病学杂志》或《中国药师》正刊发表。
一、征文内容:
1. 国家药物政策与药品监督管理;2. 真实世界研究案例及其方法学探讨;3. 药物警戒、药品风险管理及其方法研究;4. 上
市后药品的有效性和安全性再评价研究;5. 中成药、中药及其注射剂的再评价与风险管理;6. 抗感染药物的临床合理应用与风
险管理;7. 循证医学、循证药学与合理用药;8. 高风险药物安全监管措施的应对与决策;9.特殊人群合理用药;10.药物流行病
学研究方法的进展;11.各种临床用药的疗效观察与评价;12. 药学服务与临床药师实践;13. 药物利用与药物经济学研究及其进
展;14. 药品不良反应监测与药源性疾病研究;15. 与会议主题相关的其他内容
二、征文要求
(1)来稿全文或摘要均可,全文应未在公开发行的期刊上发表过,字数不超过 5000 字,并附中(300 字以内)、英 (500 单词以内)
文结构式摘要,主题突出、文字精练、条理清楚、图表清晰、数据准确、标点符号正确;(2)稿件格式参照《药物流行病学杂志》稿约要
求,请见杂志 2012 第 1 期或登录杂志网站 http:/ /www. cnjpe. org查询。稿件用 Word文档格式,通过 E-mail(cnjpetg@ 163. com)或直
接登录杂志网站发送稿件电子版,请在文题后括号加注“征文”二字;(3)稿件中的作者处请加注作者姓名、职称、单位、地址、邮编、联
系电话、E - mail地址等;(4)征文截止时间:2013 年 4 月 30 日。
三、其他事项
1.会议论文经审核后收载入大会论文集,优秀论文将推荐到《药物流行病学杂志》或《中国药师》杂志正刊发表,同时也欢迎提交
论文摘要或无论文者参会,所有参会者可获Ⅰ类和Ⅱ类学分。
2 .本次会议是一次全面深入探讨药物合理应用与药物流行病学的全国性学术研讨会,欢迎药品生产、经营单位参与协办会议。征
文联系人:杨燕,芦德梅,027-82835077,82778580;会务联系人:梅全喜,电话:0760-89980306,13802668925;陈民喜,电话:020-37886320。
中国药学会药物流行病学专业委员会
二 O一二年八月十五日
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