全 文 ：收稿日期:2011-06-08; 修订日期:2011-10-25
基金项目:广东省科技计划项目(No． 2007B031400001) ;
广东省省部产学研结合项目(No． 2008B090500028)
作者简介:张华林(1979-) ，男(汉族) ，广东罗定人，现任广东环球制药有
限公司工程师，博士学位，主要从事中药新药开发研究工作．
* 通讯作者简介:郭 静(1973-) ，女(汉族) ，青海西宁人，现任广东环球
制药有限公司高级工程师，学士学位，主要从事药物分析研究工作．
三七叶抗抑郁活性组分
与其它来源人参皂苷提取物的成分比较
张华林1，2，郭 静2* ，袁春平2，杨春光1，项 辉1
(1．中山大学，广东 广州 510006;2．广东环球制药有限公司，广东 佛山 528305)
摘要:目的 比较三七叶抗抑郁活性组分 PnGL与其它不同来源的人参皂苷提取物成分上的差异，为基于 PnGL开发抗抑
郁新药提供依据。方法 采用 HPLC法测定 PnGL中人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rb3 的含量，并与不同来源的人参皂苷提取物
作比较。结果 PnGL中 4 种成分的含量达到 30%以上，其中 Rb3、Rc为主要成分，含量分别为 17． 66%、9． 32%。而三七
(根)总皂苷、人参茎叶总皂苷、人参(根)总皂苷均不含 Rb3，且 Rc的含量最高不超过 3%。结论 PnGL 与其它人参皂苷
提取物存在明显的成分差异。
关键词:抑郁; 三七叶; 人参皂苷
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 01． 039
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)01-0091-02
三七叶总皂苷是五加科植物三七 Panax notoginseng (Burk．)
F． H． Chen 叶子的提取物，收载于《中国药典》，为传统中成药七
叶神安片的主要原料，具有益气安神、活血止痛的功效，临床用于
心气不足、心血瘀阻所致的心悸、失眠、胸痛、胸闷等［1］。课题组
通过一系列分离、药理评价，从三七叶总皂苷里面筛选出具有显
著抗抑郁作用的三七叶人参皂苷活性组分 PnGL，而进一步的药
理实验表明，PnGL抗抑郁作用机制与目前常用的化学治疗药物
对比有很大的不同，即可能同时通过影响五羟色胺能系统、去甲
肾上腺素能系统以及多巴胺能系统等 3 种神经递质能系统而发
挥抗抑郁作用，具有多重的作用机制［2，3］。三七叶总皂苷作为安
神补脑药应用于精神科疾病多年，安全可靠，毒副作用少，至今没
有发现不良反应的报道。因而 PnGL 有望开发成安全、有效、多
重起效的抗抑郁新型中药新药的潜力。考虑到五加科人参属植
物除了三七叶总皂苷外，还有三七(根)总皂苷、人参茎叶总皂
苷、人参(根)总皂苷被《中国药典》收载，也含有类似的人参皂苷
类成分，本文采用 HPLC法对 PnGL及上述提取物进行成分分析，
为基于 PnGL开发新型抗抑郁中药新药提供理论和实验依据。
文献报道三七叶主要含原人参二醇型皂苷，几乎不含原人参三醇
型皂苷，含量较高的有人参皂苷 Rb1、Rb3、Rc 以及三七皂苷 Fc
等［4］。其中人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 具备一定中枢神经系统
的药理活性，例如人参皂苷 Rb1 能够改善老年性痴呆模型大鼠的
脑损伤，进而改善其记忆功能［5］;人参皂苷 Rb1、Rb3 对神经元缺
血性损害具有保护作用，能使海马神经元免受致死性缺血损
害［6］;人参皂苷 Rc、Rb2 能减弱吗啡耐受性和依赖性发生，对中
枢神经系统有保护作用［7］。对中枢神经的保护和修复作用，是
抗抑郁药物的作用机制之一。本文选择人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、
Rb3 为检测指标，对 PnGL及三七(根)总皂苷、人参茎叶总皂苷、
人参(根)总皂苷的成分进行对比分析。
1 仪器与试药
PnGL、三七叶总皂苷、三七(根)总皂苷、人参茎叶总皂苷、人
参(根)总皂苷由广东环球制药有限公司收集、提供，人参皂苷
Rb1(批号:110704 － 200318)、人参皂苷 Rb2(批号:111715 －
200802)、人参皂苷 Rb3(批号:111686 － 200501)对照品均购自中
国药品生物制品检定所，人参皂苷 Rc 对照品购自南京泽朗医药
有限公司。SHIMADZU 高效液相色谱仪(LC － 20AB 高效输液
泵、SIL － 20A 自动进样系统、Prominence SPD － M20A PDA 检测
器、CTO － 20A柱温箱) ，Milli － Q plus system超纯水仪(美国 Mil-
lipore，Milford，MA) ，AL204 电子天平(瑞士 MettlerToledo 公司) ，
SB 25 － 12 DTD超声波仪(宁波新芝生物科技公司)。色谱甲醇
购自国药集团化学试剂有限公司，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 通过对不同色谱柱(Inertsil ODS － 3、Venusil XBP
－ C18、Eclipse XDB － C18 － USP L1、Diamonsil C18等)分离效果的
比较，以及不同流动相(乙腈 ∶ 水，乙腈 ∶ 磷酸溶液，甲醇 ∶ 水，
甲醇∶ 磷酸溶液，乙腈∶ 甲醇∶ 水等)的摸索，最后确定色谱条
件如下:色谱柱为 Inertsil ODS － 3(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流
动相为 0． 2%磷酸溶液(A)∶ 甲醇(B)= 33∶ 67，等度洗脱，流速
为 0． 7 ml /min，柱温为 25℃，检测波长为 203 nm，进样量为 10
μl。
2． 2 样品溶液制备 精密称取 PnGL、三七叶总皂苷、三七(根)
总皂苷、人参茎叶总皂苷、人参(根)总皂苷适量，分别置于 10 ml
容量瓶中，加入适量甲醇，超声溶解，放置室温，定容，摇匀，0． 45
μm微孔滤膜过滤，即得。按照“2． 1”项下色谱条件进样测定。
色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)、PnGL(B)、三七叶总皂苷(C)、三七(根)总皂苷
(D)、人参(根)总皂苷(E)、人参茎叶总皂苷(F)的 HPLC图
2． 3 标准曲线的制备 精密称取人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 对
照品适量，置于 10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，得对照品储
备液。将对照品储备液逐步稀释，得到系列浓度的对照品溶液。
取对照品溶液，按照“2． 1”项下条件测定，记录各成分的峰面积。
以峰面积 Y和进样量 X(μg)作线性回归，得到线性方程。结果
·19·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 1 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 1 期
见表 1。
表 1 人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的线性方程
成分 线性方程 线性范围 m /μg R2
人参皂苷 Rb1 Y = 291 450X － 14 425 0． 352 ～ 17． 600 0． 999 8
人参皂苷 Rc Y = 297 581X + 12 623 0． 351 ～ 17． 550 0． 999 6
人参皂苷 Rb2 Y = 276 178X + 26251 0． 213 ～ 10． 650 0． 999 6
人参皂苷 Rb3 Y = 308 766X + 71 308 0． 355 ～ 17． 740 0． 999 9
2． 4 最低检测限和定量限 将对照品溶液进行稀释，以信噪比
(S /N)＞ 3 确定最低检测限，以信噪比 ＞ 10 确定最低定量限。结
果人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的最低检测限分别为:0． 053，
0． 053，0． 032，0． 053 μg，最低定量限分别为:0． 176，0． 176，0． 107，
0． 178 μg。
2． 5 精密度实验 取 PnGL、三七叶总皂苷样品溶液，分别连续进
样 5 次，测定各成分的峰面积，计算 RSD 值。结果 PnGL 样品溶
液中人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的 RSD 值分别为 0． 99%，
0． 38%，0． 39%，0． 50%，三七叶总皂苷样品溶液中人参皂苷
Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的 RSD 值分别为 0． 48%，0． 52%，0． 46%，
0． 77%，表明仪器的精密度良好。
2． 6 稳定性实验 取 PnGL、三七叶总皂苷样品溶液，分别在 0，
4，8，12，24，36，48 h内进样，测定各成分的峰面积，计算 RSD 值。
结果 PnGL 样品溶液中人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的 RSD 值分
别为 1． 56%、1． 38%，1． 54%，1． 29%，三七叶总皂苷样品溶液中
人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的 RSD 值分别为 0． 75%，0． 82%，
1． 13%，0． 89%，表明样品溶液在 48 h内稳定性良好。
2． 7 重复性实验 按照“2． 2”样品溶液制备项下操作，平行制备
6 份 PnGL、三七叶总皂苷样品溶液，分别进样，测定各成分的峰
面积，计算 RSD 值。结果 PnGL 样品溶液中人参皂苷 Rb1、Rc、
Rb2、Rb3 的 RSD值分别为 1． 78%，1． 72%，1． 86%，2． 07%，三七
叶总皂苷样品溶液中人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的 RSD 值分别
为 1． 37%，1． 69%，1． 85%，1． 26%，表明该含量测定方法重复性
良好。
2． 8 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批次 PnGL、三
七叶总皂苷适量，根据样品中所含人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的
量的 50%加入各对照品，按照“2． 2”样品溶液制备项下操作，分
别平行制备 6 份样品溶液，进样，测定各成分的峰面积，计算加样
回收率及 RSD值，结果 PnGL样品溶液中人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、
Rb3 的回收率分别为 101． 75%(RSD = 2． 28%) ，101． 51%(RSD
= 1． 99%) ，98． 67%(RSD = 1． 64%) ，99． 09%(RSD = 2． 45%) ，
三七叶总皂苷样品溶液中的人参皂苷 Rb1、Rc、Rb2、Rb3 的回收
率分别为 99． 33% (RSD = 2． 53%) ，98． 74% (RSD = 2． 18%) ，
101． 48%(RSD = 1． 57%) ，99． 86%(RSD = 2． 24%) ，回收率均在
98% ～102%之间，表明该含量测定方法对于 4 种成分的准确度
较高。
2． 9 样品测定 按照“2． 2”项样品溶液制备项下操作，制备样品
溶液，测定不同来源人参皂苷提取物中人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、
Rb3 的含量。结果见表 2。
表 2 不同来源人参皂苷提取物中人参皂苷
Rb1、Rb2、Rc、Rb3 的含量测定结果 %
样品 来源 Rb1 Rc Rb2 Rb3 合计
PnGL 广东环球制药有限公司 3． 73 9． 32 3． 15 17． 66 33． 86
三七叶总皂苷 云南植物药业 2． 54 5． 50 2． 07 12． 80 22． 91
三七叶总皂苷 云南玉溪药业 2． 61 6． 65 2． 04 12． 09 23． 39
三七(根)总皂苷 昆明兴中制药(针用) 30． 45 － － － 30． 45
三七(根)总皂苷 昆明兴中制药(片用) 30． 02 － － － 30． 02
人参(根)总皂苷 云南植物药业 28． 75 2． 39 － － 31． 14
人参茎叶总皂苷 盘锦华成制药 2． 1 2． 74 3． 62 － 8． 46
人参茎叶总皂苷 云南植物药业 1． 79 2． 73 4． 08 － 8． 60
3 讨论
人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rb3 化学性质较为接近，给高效液相
色谱分离带来困难。课题组对不同流动相体系及不同色谱柱的
分离效果进行比较，最后确定采用 Inertsil ODS － 3 色谱柱，0． 2%
磷酸溶液(33)－甲醇(67)等度洗脱，人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rb3
能够较好的分离，分离度 1． 5 以上。
PnGL中人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rb3 的含量达到 30%以上，
其中人参皂苷 Rb3、Rc 为主要成分，含量分别为 17． 66%、
9． 32%。三七叶总皂苷中所含的四种成分的含量明显要低于
PnGL。而三七(根)总皂苷、人参茎叶总皂苷、人参(根)总皂苷
均不含人参皂苷 Rb3，人参皂苷 Rc 的含量最高不超过 3%，其中
三七(根)总皂苷与人参(根)总皂苷以人参皂苷 Rb1 为主要成
分，含量约为 30%。成分上的分析、比较，提示人参皂苷 Rb3、Rc
可能是 PnGL发挥抗抑郁作用的主要药效成分之一，PnGL 抗抑
郁作用物质基础方面的研究有待进一步完善。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典［S］．北京:中国医药科技出版社，2010．
［2］ 向飞军，项 辉，朱颖虹，等．三七叶皂苷的抗抑郁医药用途［P］． 中
国专利:101548998，2009 － 10 － 07．
［3］ Hui Xiang，Yingxue Liu，Baibing Zhang，et al． The antidepressant effects
and mechanism of action of total saponins from the caudexes and leaves
of Panax notoginseng in animal models of depression［J］． Phytomedi-
cine，2011，18(8 － 9) :731．
［4］ 周家明，崔秀明，曾鸿超，等．三七茎叶的综合开发利用［J］．现代中
药研究与实践，2009，23(3) :32．
［5］ 方 欣，杨吉平，赖 红．人参皂甙 Rb1对老年性痴呆模型大鼠顶
叶皮质 β －分泌酶及早老蛋白 － 1 表达的影响［J］．解剖学杂志，
2008，31(6) :812．
［6］ 李爱红，柯开富，包仕尧，等．人参皂甙 Rb1、Rb3、Rg1 对培养小鼠皮
层细胞缺血损伤的保护作用及浓度 －效应关系［J］．脑与神经疾病
杂志，2003，11(2) :72．
［7］ 孙光芝，王继彦，刘 志，等．人参皂苷 Rb2 的药理学研究概况［J］．
吉林农业大学学报，2005，27(3) :299．
·29·
时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 1