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甘松对动物行为绝望模型的影响



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一步的深化研究。
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[责任编辑 聂淑琴]
[收稿日期] 20111128(003)
[基金项目] “重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-381) ;国家科技基础条件平台工作项目(2005DKA21000)
[第一作者] 武姣姣,在读硕士研究生,从事中药药效物质基础与中药新药源的开发利用研究;E-mail:underbigtree@ sina. com
[通讯作者] * 石晋丽,教授,E-mail:shijl@ vip. sina. com
甘松对动物行为绝望模型的影响
武姣姣1,石晋丽1* ,唐民科1,赵保胜1,郭建友2,游杰舒1
(1. 北京中医药大学中药学院,北京 100102;2. 中国科学院心理研究所,北京 100101)
[摘要] 目的:观察甘松 95%乙醇提取物及其不同极性部位对动物行为绝望模型的影响。方法:ICR 小鼠,雌雄兼用,分
为两批,每批均设正常组和 5 个治疗组。第 1 批,治疗组连续 10 d,ig 给予甘松 95%乙醇提取物(14. 7,29. 3,48. 8,146. 5 mg·
kg - 1)和阳性药氢溴酸西酞普兰(10. 0 mg·kg - 1) ;第 2 批,治疗组连续 10d,ig 给予甘松的 4 个极性部位(均为 48. 8 mg·kg - 1)
和阳性药氢溴酸西酞普兰(10. 0 mg·kg - 1)。末次给药后 1h,用小鼠悬尾及强迫游泳实验进行行为学观察。结果:甘松 95%乙
醇提取物(29. 3,48. 8,146. 5 mg·kg - 1)能显著降低小鼠悬尾不动时间及强迫游泳不动时间(P < 0. 05)。在甘松 4 个极性部位
中,乙酸乙酯部位与正丁醇部位均能显著降低小鼠悬尾不动时间及强迫游泳不动时间(P < 0. 05)。结论:甘松 95%乙醇提取
物有一定的抗实验性抑郁的作用,其活性部位可能为乙酸乙酯部位与正丁醇部位。
[关键词] 甘松;抗抑郁;悬尾实验;强迫游泳实验
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)07-0205-03
Effects of Nardostachyos Radix et Rhizoma on the Despair Animal Models
WU Jiao-jiao1,SHI Jin-li1* ,TANG Min-ke1,ZHAO Bao-sheng1,GUO Jian-you2,YOU Jie-shu1
(1. Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China;
2. Institute of Psychology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China)
[Abstract] Objective:To observe the effect of ethanol extract and its four fractions from Nardostachyos
Radix et Rhizoma on the despair animal models of depression. Method:ICR mice were divided into two batches,
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第 18 卷第 7 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 7
Apr.,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.07.067
then every batch divided into control and five treatment groups. In the first batch,treatment groups were received
ethanol extract at dose of 14. 7,29. 3,48. 8,146. 5 mg·kg - 1 and citalopram hydrobromide at 10. 0 mg·kg - 1 for
ten days. In the second batch, treatment groups were received four fractions at dose of 48. 8 mg·kg - 1 and
citalopram hydrobromide at 10. 0 mg·kg - 1 for ten days. 1 h after the last administration, forced swimming test
(FST)and tail suspension test (TST)were conducted for evaluation of behavior. Result:95% ethanol extract
(29. 3,48. 8,146. 5 mg·kg - 1) could significantly reduce the duration of murine immobility (P < 0. 05).
Among four fractions n-butanol fraction and ethyl acetate fraction could significantly reduce the duration of murine
immobility (P < 0. 05) ,and ethyl acetate fraction was better than n-butanol fraction. Conclusion:Nardostachyos
Radix et Rhizoma possesses antidepressant effect,n-butanol fraction and ethyl acetate fraction could be the effective
fractions.
[Key words] Nardostachyos Radix et Rhizoma;antidepressant;tail suspension test;forced swimming test
甘松(Nardostachys jatamansi DC.)为败酱科甘
松属植物,分布于我国西藏、青海、甘肃、四川、云南
等地,药用部位为根及根茎。甘松中主要含有倍半
萜类化合物,其它还有单萜类、黄酮类、挥发油类等,
具有抗心律失常、健脾利胃、活血化瘀、镇静、抗惊
厥、抗焦虑等药理作用。本课题组前期的预实验结
果表明,甘松及其单体甘松新酮的抗抑郁效果明显,
且不增加小鼠的自主活动(1)。为了进一步明确甘
松的抗抑郁作用,并初步筛选出其活性部位,本实验
采用小鼠悬尾和小鼠强迫游泳对甘松 95% 乙醇提
取物的抗抑郁作用进行验证,并对 4 个不同极性部
位进行活性筛选。
1 材料
1. 1 药物 甘松:购自四川省阿坝州若尔盖县,经
北京中医药大学中药学院石晋丽教授鉴定为败酱科
甘松属甘松(Nardostachys jatamansi DC.)的根及根
茎;氢溴酸西肽普兰片:丹麦灵北药厂生产,西安杨
森制药有限公司分装,批号 2202204,分装批号
100121952;羧甲基纤维素钠:天津市光复精细化工
研究所,分析纯试剂。
1. 2 动物 ICR 小鼠,体重 18 ~ 22 g,雌雄各半。
北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物许
可证编号 SCXK(京)2006-0009。在实验前,小鼠适
应环境 3 d,自由饮水进食。
2 方法
2. 1 受试药物的制备方法
2. 1. 1 甘松乙醇提取物受试药物的制备 将甘松
药材粉碎,过 40 目筛,用 95% 的乙醇超声提取 3
次,每次 45 min,合并提取液,减压回收,得到甘松乙
醇提取物浸膏。分别取 293. 0,97. 7,58. 6,29. 3 mg
乙醇提取物浸膏,用 40 mL 的 0. 5% CMC-Na 溶解,
得到 4 个不同剂量组甘松乙醇提取物的混悬溶液。
2. 1. 2 甘松不同极性部位受试药物的制备 取甘
松 95%乙醇提取物浸膏 40 g 加入 400 mL 蒸馏水,
制成混悬溶液,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 1 ∶
1萃取,各 3 次,最后剩余的溶液为水溶性部位。合
并萃取液,回收溶剂,分别得到石油醚部位浸膏、乙
酸乙酯部位浸膏、正丁醇部位浸膏、水溶性部位浸
膏。分别取各部位浸膏 97. 7 mg,用 40 mL 的 0. 5%
CMC-Na 溶解,得到 4 个不同极性部位的混悬溶液。
2. 2 动物分组与给药
2. 2. 1 甘松 95%乙醇提取物不同剂量的药效比较
将 120 只小鼠随机分成 6 组,每组 20 只,雌雄各
半。分别是正常组、甘松 95% 乙醇提取物 14. 7,
29. 3,48. 8,146. 5 mg·kg - 1 4 个剂量组、阳性对照
(氢溴酸西酞普兰 10. 0 mg·kg - 1)组。 ig 给药,给药
容积 20 mL·kg - 1体重,正常组给予等容量 0. 5%
CMC-Na。连续给药 10 d,末次给药 1 h 后,进行行
为学实验。
2. 2. 2 甘松不同极性部位的药效比较 将 120 只
小鼠随机分成 6 组,每组 20 只,雌雄各半。分别是
正常组、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水溶性部位组
(均为 48. 8 mg·kg - 1)、阳性对照(氢溴酸西酞普兰
10. 0 mg·kg - 1)组。 ig 给药,给药容积 20 mL·kg - 1
体重,正常组 ig 等剂量 0. 5% CMC-Na。连续给药 10
d,末次给药 1 h 后,进行行为学实验。
2. 3 小鼠悬尾实验 参照 Steru 方法(2)并稍加改
动,用医用胶带固定住小鼠尾端 2 cm 的部位,将其
倒挂于箱(30 cm × 30 cm × 25 cm)中,头部离箱底约
5 cm,观察 6 min,计算后 4 min 内小鼠悬尾的不动
时间。
2. 4 小鼠强迫游泳实验 参照 Porsolt 方法(3)并稍
加改动,将单只小鼠放入水深 10 cm 的烧杯(20
cm × 14 cm)中,水温(24 ± 2)℃,观察 6 min,计算
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 7
Apr.,2012
后 4 min 内小鼠强迫游泳的不动时间。
2. 5 统计学方法 采用 SPSS 17. 0 软件对数据进
行统计分析,结果以 珋x ± s 表示,采用单因素方差分
析。P < 0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 甘松 95% 乙醇提取物的抗抑郁作用 甘松
95%乙醇提取物能显著降低小鼠的悬尾不动时间和
强迫游泳不动时间,并且在给药剂量 29. 3,48. 8
mg·kg - 1时效果最好。见表 1。
表 1 甘松 95%乙醇提取物对小鼠悬尾和
强迫游泳不动时间的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/mg·kg - 1
悬尾不动
时间 / s
强迫游泳不动
时间 / s
正常 - 91. 1 ± 37. 3 140. 0 ± 40. 0
氢溴酸西酞普兰 10. 0 40. 6 ± 19. 61) 94. 0 ± 31. 61)
甘松醇提物 146. 5 36. 5 ± 27. 51) 95. 9 ± 35. 21)
48. 8 33. 0 ± 20. 51) 79. 3 ± 20. 11)
29. 3 35. 2 ± 13. 61) 75. 0 ± 23. 61)
14. 7 58. 5 ± 14. 7 115. 6 ± 32. 0
注:与正常组比较1)P < 0. 05(表 2 同)。
3. 2 甘松不同极性部位抗抑郁活性的筛选 甘松
乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能显著降低小鼠的悬
尾不动时间和强迫游泳不动时间。见表 2。
表 2 甘松 4 个极性部位对小鼠悬尾和强迫游泳
不动时间的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ mg·kg - 1
悬尾不动
时间 / s
强迫游泳不动
时间 / s
正常 - 84. 2 ± 33. 7 118. 8 ± 35. 2
氢溴酸西酞普兰 10. 0 44. 4 ± 27. 71) 78. 1 ± 30. 01)
甘松石油醚部位 48. 8 73. 1 ± 32. 5 105. 5 ± 30. 1
甘松乙酸乙酯部位 48. 8 36. 7 ± 30. 01) 57. 5 ± 28. 71)
甘松正丁醇部位 48. 8 42. 2 ± 33. 21) 63. 2 ± 40. 41)
甘松水溶性部位 48. 8 80. 6 ± 22. 5 114. 9 ± 32. 8
4 讨论
行为绝望动物模型主要是指大鼠强迫游泳模
型、小鼠强迫游泳模型及小鼠悬尾模型。这一类动
物模型具有简单、快速、敏感等特点,常用于抗抑郁
药物的初筛[4-5]。
本实验采用小鼠强迫游泳模型和小鼠悬尾模型
这两个经典模型考察了不同剂量的甘松 95% 乙醇
提取物及其不同极性部位对小鼠行为绝望模型的影
响。实验结果表明,甘松 95%乙醇提取物在给药剂
量 29. 3,48. 8 mg·kg - 1时效果最好,在此剂量下,可
以显著降低小鼠悬尾不动时间和游泳不动时间。甘
松 4 个不同极性部位中,乙酸乙酯部位和正丁醇部
位效果较好,能显著降低小鼠悬尾不动时间和游泳
不动时间。
甘松中的化学成分主要为倍半萜类化合物,极
性较小,主要存在于石油醚部位及乙酸乙酯部
位(6),且该类成分具有较强的药理活性,有人从甘
松的同科植物宽叶缬草中分出 5 个愈创木烷型倍半
萜,其中 3 个具有抗抑郁活性(7),因而笔者推测乙酸
乙酯部位中抗抑郁的活性成分主要为倍半萜类。这
种推测的证实尚有待于对甘松抗抑郁的物质基础进
行更深入的研究。
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[责任编辑 聂淑琴]
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武姣姣,等:甘松对动物行为绝望模型的影响