全 文 ：水提三七叶苷胶囊提高缺氧耐受力实验研究
李平华1 , 耿家玲2 , 陆宇照3 , 陈明丽4
(1.北京军区总医院 , 北京 100700;2.云南省食品与药品检验所 , 云南 昆明 650228;
3.云南白药集团研究院 , 云南 昆明 650200;4.云南红云生物技术有限公司 , 云南 昆明 650200)
　　摘　要:水提三七叶苷能延长小鼠在亚硝酸钠中毒后的
存活时间和延长小鼠在急性脑缺血性缺氧(断头)后张口喘气
时间 ,对小鼠在常压下耐缺氧死亡时间无影响 。
关键词:水提三七叶苷;缺氧耐受力;实验研究
中图分类号:R285.5 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2007)07-0037-02
缺氧耐受是一种应激反应 , 是机体多个系统功能的综合
表现。不同性别 、种系和级别对小鼠在生长 、发育 、代谢 、解
剖 、生理 、生殖等方面都有所不同 ,故机体的氧储备能力 、氧耗
水平 、代谢水平 、敏感器官对缺氧损伤的耐受水平也不同 , 最
终影响缺氧耐受力。
水提三七叶苷是以云南文山地道药材三七(Pnanax
no toginseng)的地上部分茎叶为原料 , 在中医药理论指导下 ,
用王兴文教授“中药水提专有技术”提取 、分离 、精制而得到
的。水提三七叶苷含人参二醇苷 Rb1 、Rb2 、Rb3 、Rc、Rd 、Re ,
还含有人参三醇苷 Rf 、Rg1 、Rg2 、Rh1 、R1 、R2 、R3 、R4 、R6 等 10
多种皂苷成分。水提三七叶苷近年来在国际上引起极大关
注 ,在美国 、日本 、台湾等地区亦称三七叶黄素 , 被誉为“植物
黄金” ,临床上有多种功效和治疗作用。水提三七叶苷胶囊是
以水提三七叶苷制成的纯中药口服制剂 , 与市场同类产品比
较 ,具有微量 、速效 、高效等特点。我们对此药物进行了提高
氧耐受力动物实验研究 ,目的是为临床实验提供科学的依据
和必要的安全性数据 ,现将实验结果报道如下:
1　实验材料
1.1　样品及供试液制备　由云南红云生物工程技术有限公
司提供的三七叶苷胶囊 , 胶囊内容物为淡黄色粉未 , 规格为
330mg/粒 ,样品批号:2003015。 人体推荐用量为每人(成人)
每日2 次 , 每次 1粒 , 按 60kg体重折算成 11mg/kg BW。室温
保存。实验前用蒸馏水配成试验所需浓度的溶液作为供
试液。
1.2　实验动物　选用广西医科大学医学实验动物中心【批准号
为:桂动许字(2000)第 001号】繁殖的清洁级(Ⅱ级)昆明种健康雄
性小鼠132 只,体重为 18～ 22g 。实验动物房合格证号:桂医动字
第23003号。动物室温度:22～ 25℃,相对湿度:55～ 70%。
1.3　剂量选择　设 82.5、165.0、330mg/ kg BW(分别相当于
人体推荐用量的 7.5、15 、30 倍)3 个剂量的实验组 , 同时设一
个阴性对照组(蒸馏水)。每组 11 只动物。采用灌胃法给予
受试物 ,按每 10g 体重 0.2ml的容量灌胃。
1.4　仪器与试剂　250m l磨口瓶 、1ml注射器 、秒表 、剪刀 、钠
石灰 、亚硝酸钠 、凡士林等。
2　实验方法
2.1　检验依据　《保健食品检验与评价技术规范》(2003 年
版)中的提高缺氧耐受力功能检验方法。
2.2　常压耐缺氧实验　各剂量组按 0.2ml/ 10g BW 经口给
受试物 30d。阴性对照组给予等量的蒸馏水 , 每天一次 , 连续
给受试物 30d。于末次灌胃后 1h , 将各组小鼠分别放入盛有
5g 钠石灰的 250ml磨口瓶内(每瓶 1 只),用瓶塞和凡士林密
封瓶口 ,记录小鼠因缺氧而死亡的时间。
2.3　亚硝酸钠中毒存活实验　给受试物方法同 2.2 项。 于
末次灌胃后 1h , 各组小鼠按 240mg/ kg BW 剂量腹腔注射亚
硝酸钠(注射量为 0.1ml/ 10g BW), 注射完毕立即计时 , 记录
小鼠中毒后存活的时间。
2.4　急性脑缺氧实验　给受试物方法同 2.2 项。于末次灌
胃后 1h , 各组动物逐只自颈部快速断头 , 立即计时 , 记录小鼠
自断头至张口喘气停止的时间。
2.5　试验数据用方差分析进行统计处理。但如果试验数据
方差不齐 ,则改进秩和检验统计分析。
2.6　结果判定　常压耐缺氧实验 、亚硝酸钠中毒存活实验 、
急性脑缺氧实验中任二项实验结果阳性 , 可判定该受试物具
有提高缺氧耐受力功能作用。
3　试验数据
3.1　样品对动物的一般情况和体重的影响　见表 1。
表 1　各组动物实验前后的体重比较(-x ±s)
剂量组
(mg/ kg BW)
实验 1组 实验 2组 实验 3组
动物数 开始体重 结束体重动物数 开始体重 结束体重 动物数 开始体重 结束体重
(只) (g) (g) (只) (g) (g) (只) (g) (g)
330.0 11 20.5±0.9 33.9±1.9 11 20.0±1.3 33.0±2.8 11 20.4±1.2 34.0±2.4
165.0 11 20.6±1.2 32.8±1.9 11 19.7±1.0 32.2±2.5 11 19.7±1.1 33.5±2.7
82.5 11 19.9±1.3 32.8±2.0 11 19.9±1.4 32.1±3.0 11 19.8±1.0 32.4±1.6
阴性对照组 11 19.1±0.7 31.9±1.3 11 19.5±1.1 32.6±1.5 11 19.9±1.3 35.0±2.6
　　各剂量组与阴性对照组比较 ,差异均无显著性意义(P>0.05)。
3.2　样品对小鼠的缺氧而死亡时间的影响　见表 2。
表 2　受试物对小鼠在常压下因缺氧而死亡时间的影响(-x ±s)
剂量组(mg/ kg BW) 动物数(只) 因缺氧死亡时间(分) P值
330.0 11 35.3±5.28 >0.05
165.0 11 37.7±7.68 >0.05
82.5 11 34.7±8.34 >0.05
阴性对照 11 37.9±7.53 —
　　各剂量组与阴性对照组比较 ,差异均无显著性意义(P>0.05)。
3.3　样品对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响　见表 3。
表 3　受试物对小鼠在亚硝酸钠中毒后存活时间的影响(-x ±s)
剂量组(mg/ kg BW) 动物数(只) 中毒后存活时间(分) P值
330.0 11 16.0±1.40 <0.01
165.0 11 17.1±0.77 <0.01
82.5 11 16.2±1.70 <0.01
阴性对照 11 13.4±2.20 —
　　样品各剂量组小鼠与阴性对照组的差异均具有极显著性
意义(P<0.01)。
372007 年第 28 卷第 7 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志
　　　　
3.4　样品对小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间的影响　见
表 4。
表 4　受试物对小鼠急性脑缺血喘气时间的影响(-x ±s)
剂量组(mg/ kg BW) 动物数(只) 张口喘气时间(分) P值
330.0 11 23.2±2.89 <0.05
165.0 11 23.1±2.07 <0.05
82.5 11 23.0±2.10 <0.01
阴性对照 11 20.5±2.25 —
　　样品各剂量组小鼠与阴性对照组的差异均具有显著性意
义(P<0.05和 P<0.01)。
4　小结
分别以 82.5、165.0、330.0mg/ kg BW 剂量(分别当于人
体推荐用量的 75 、15、30 倍)的水提三七叶苷胶囊连续给小鼠
灌胃 30 天 , 结果:
给受试物后 ,各组动物的饮食和活动正常。样品各剂量组小
鼠在试验结束时体重与阴性对照组比较后的差异均无显著性意
义(P>0.05),表明该样品对小鼠体重增长无影响作用。
样品各剂量组小鼠因缺氧而死亡时间与阴性对照组比
较 ,差异均无显著性意义(P >0.05), 表明该样品没有延长小
鼠因缺氧而死亡时间的作用。
样品各剂量组小鼠中毒后存活时间均大于阴性对照组 ,
且与阴性对照组的差异均具有极显著性意义(P<0.01),表明
该样品具有延长小鼠在亚硝酸钠中毒后存活时间的作用。
样品各剂量组小鼠断头后至张口喘气停止时间均比阴性
对照组延长 , 且与阴性对照组的差异均具有显著性意义
(P<0.05和 P<0.01), 表明该样品具有延长小鼠在急性脑缺
血性缺氧(断头)后张口喘气时间的作用。
由此可见 ,该样品具有提高缺氧耐受力功能作用。
(收稿日期:2007-05-12。)
HPLC法测定复方丹参片中三七含量的探讨
肖践丽 , 熊　梅
(云南省文山州食品药品检验所 , 云南 文山 663000)
　　摘　要:目的:建立复方丹参片中三七皂苷 R1 、人参皂苷
Rg1 、Rb1 含量测定的 HPLC 法。方法:采用 Venusil-XBP-C18
色谱柱(250×4.6mm , 5μm),以乙腈(A)和水(B)为流动相梯
度洗脱 , 流动相梯度:0min(20%A)※12min(20%A)※60min
(36%A)。流速:1.0ml.min-1 , 柱温:30℃, 检测波长:203nm。
结果:三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg 1 、Rb1 线性范围分别为 0.99
～ 4.95μg 、3.14～ 15.7μg、2.27 ～ 11.35μg。 该方法加样回收
率:三七皂苷 R1 99.8%、人参皂苷 Rg1 为 99.5%、人参皂苷
Rb1 为 99.8%, RSD 分别为 0.87%、0.62%、0.90%。结论:
本法操作简便 、结果准确 、灵敏度高 , 重复性好 , 能有效的控制
复方丹参片的质量。
关键词:复方丹参片;HPLC;三七皂苷 R1;人参皂苷
Rg1 ;人参皂苷 Rb1 ;含量测定
中图分类号:R927.2 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2007)07-0038-02
复方丹参片由丹参 、三七 、冰片组成 , 具有活血化瘀 、理气
止痛的功效。用于气滞血瘀所致的胸痹。《中国药典》规定测
定丹参中丹参酮Ⅱ A 和丹酚酸 B 的含量[ 1] , 未对三七进行质
量控制。笔者认为 , 三七在复方丹参片中是主要成分 , 为了有
效控制其产品质量 , 应对其进行质量控制。本文采用高效液
相色谱法测定三七中三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、人参皂苷
Rb1 的含量 , 结果表明 , 本法简便 、迅速 、结果准确 , 现报道
如下。
1　仪器试剂与材料
1.1　仪器　高效液相色谱仪(日本岛津), LC-10ATVP 泵 ,
S PD-10PVP 紫外-可见检测器 , C TO-10ASVP 柱温箱 , SCL-
10AVP 系统控制器 , CLASS-VPLC 工作站。
1.2　试剂　对照品:三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg 1 、人参皂苷
Rb1 分别由中国药品生物制品检定所提供(批号分别为:
110745-200312　110703-200322　110704-200318)。
乙腈 、甲醇为色谱纯;水为超纯水。 复方丹参片(批号
20060204 、20060401 、20060202)规格每片含丹参酮Ⅱ A 不得少
于 0.2mg , 平均片重分别为 0.3129g , 0.3064g , 0.3029g , 由云
南白药集团文山七花有限责任公司提供。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适应性试验　色谱柱:Venusil-XBP-C18
(250×4.6mm , 5μm);以乙腈为流动相 A ,以水为流动相 B ,
按表 1 进行梯度洗脱[ 1] ;流速:1.0ml.min-1 , 柱温:30℃, 检测
波长:203nm。在此条件下 , 组分在 60min 内出完 , 在记录的色
谱中 ,按保留时间先后的出峰顺序为:三七皂苷 R1 、人参皂苷
Rg 1 、人参皂苷 Rb1 , 供试品溶液保留时间与对照品溶液保留
时间一致 , 理论塔板数按三七皂苷 R1 的峰计算应不低于
4000 ,分离度大于 2.0。空白溶液无干扰。见表 1 及图 1。
表 1　梯度洗脱
时间(分钟) 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0-12 20 80
12-60 20※36 80※64
2.2　对照品溶液的制备　精密称取三七皂苷 R1 、人参皂苷
Rg 1 、人参皂苷 Rb1 对照品适量 , 加甲醇溶解配制成三七皂苷
R1 为 0.198mg.ml-1 、人参皂苷 Rg 1 为 0.628mg.ml-1 、人参皂
苷 Rb1 0.454mg.ml-1的混合溶液 , 作为对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　取复方丹参片 20 片 , 精密称定 , 研
细 ,取约 1.5g ,精密称定 , 置具塞三角烧瓶中 , 精密加入甲醇
50ml , 称定重量 ,放置过夜 ,置 80℃水浴上加热回流 2h , 放冷 ,
38 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2007 年第 28 卷第 7 期