全 文 ：第４４卷　第１０期
２０１６年１０月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４４ Ｎｏ．１０
Ｏｃｔ．２０１６
网络出版时间：２０１６－０９－０７　０９：０２ ＤＯＩ：１０．１３２０７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｎｗａｆｕ．２０１６．１０．０１２
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１６０９０７．０９０２．０２４．ｈｔｍｌ
青杄类伸展蛋白基因ＰｗＥＬＰ１的克隆及表达分析
　［收稿日期］　２０１５－０３－１０
　［基金项目］　国家自然科学基金面上项目（３１２７０６６３）
　［作者简介］　郜银涛（１９８８－），男，河南许昌人，硕士，主要从事植物逆境分子生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｔａｏｇａｏ＠１２６．ｃｏｍ
　［通信作者］　陈坤明（１９７１－），男，甘肃天水人，博士，教授，主要从事植物逆境细胞分子生理机制及调控研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｕｎｍｉｎｇｃｈｅｎ＠１６３．ｃｏｍ
郜银涛１，周燕妮２，罗朝兵２，张凌云２，陈坤明１
（１西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌７１２１００；
２北京林业大学 林学院，森林培育与保护教育部重点实验室，北京１０００８３）
［摘　要］　 【目的】克隆青杄类伸展蛋白（ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＥＬＰｓ）基因ＰｗＥＬＰ１并分析该基因的表达特
性，为研究ＥＬＰ基因家族的功能奠定基础。【方法】以青杄ｃＤＮＡ文库为模板，用ＲＡＣＥ－ＰＣＲ方法克隆青杄类伸展
蛋白编码基因ＰｗＥＬＰ１的ｃＤＮＡ全长，利用ＤＮＡＭＡＮ确定ＰｗＥＬＰ１的编码框及蛋白氨基酸的翻译，运用ｃｌｕｓｔａｌｘ
软件与Ｅｓｐｒｉｐｔ工具进行多序列比对，利用 ＭＥＧＡ　５软件的邻位相连法构建系统树，并对编码蛋白进行生物信息学分
析；利用ＲＴ－ｑＰＣＲ检测ＰｗＥＬＰ１基因在青杄不同组织中表达的特异性、花粉和种子不同萌发时期及幼苗受到不同
逆境处理时的表达差异，分析该基因的组织发育及逆境响应表达特点。【结果】ＰｗＥＬＰ１基因全长８３２ｂｐ，其编码一
个由１５９个氨基酸组成的蛋白，该蛋白的Ｎ端与Ｃ端均有比较保守的结构域；此蛋白二级结构由１个α－螺旋、５个β－
折叠与３个β－转角结构构成，对其三级结构的预测印证了这一结果，同时发现该蛋白中还存在部分无规则卷曲。其分
子质量为１７．０３ｋｕ，理论等电点为５．８１。ＰｗＥＬＰ１在青杄花粉中的表达量较高，且在花粉萌发后期（３０～３６ｈ）以及
种子萌发初期（第２天）表达量高；ＰｗＥＬＰ１的表达不同程度地受低温、高温、茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）、Ｈ２Ｏ２、脱水以及脱
落酸（ＡＢＡ）等非生物逆境胁迫处理的诱导，尤其是 Ｈ２Ｏ２、高温和 ＡＢＡ，处理初期表达量就显著升高。【结论】
ＰｗＥＬＰ１在青杄花粉和种子萌发过程中可能发挥重要功能，并可参与青杄对非生物逆境胁迫的响应过程。
［关键词］　青杄；类伸展蛋白；组织表达；非生物胁迫
［中图分类号］　Ｓ７９１ ［文献标志码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１６）１０－００８３－０８
Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉ
ＧＡＯ　Ｙｉｎｔａｏ１，ＺＨＯＵ　Ｙａｎｎｉ　２，ＬＵＯ　Ｃｈａｏｂｉｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉｎｇｙｕｎ２，ＣＨＥＮ　Ｋｕｎｍｉｎｇ１
（１　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｆｏｒｅｓｔ　Ｓｉｌｖｉ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｎｄ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ＰｗＥＬＰ１ｇｅｎｅ
ｆｒｏｍＰｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＥＬＰｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅ　ｆｕｌ
ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ＲＡＣＥ－ＰＣＲ　ａｓｓａｙｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃＤＮＡ　ｌｉｂｒａｒｙ　ｏｆ　ｇｒｏｗｎ　Ｐｉｃｅａ
ｗｉｌｓｏｎｉｉ．Ｔｈｅ　ＯＲＦ　ｆｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｗｅｒｅ　ｄｏｎｅ　ｂｙ　ＤＮＡＭＡＮ．Ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｄｏｎｅ　ｂｙ　ｃｌｕｓｔａｌｘ　ａｎｄ　Ｅｓｐｒｉｐｔ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ
ｉｎ　ＭＥＧＡ　５．Ｔｈｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｐｏｉｎｔ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｅｒｅ
ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ　ｂｙ　Ｃｏｍｐｕｔｅ　ｐＩ／Ｍｗ　ｔｏｏｌ　ｉｎ　Ｅｘｐａｓｙ．Ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ａｎｄ　ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ　ｂｙ　Ｊｐｒｅｄ　ａｎｄ　ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎ－
ｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄｓ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ａｎｄ　ｓｅｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｅｅｄ－
ｌｉｎｇ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｂｉｏｔｉｃ　ｓｔｒｅｓｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ｑＰＣＲ　ａｓｓａｙｓ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＰｗＥＬＰ１ｅｎｃｏｄｅｄ　ａ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　１５９ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ，ｗｈｉｃｈ　ｈａｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｄｏｍａｉｎ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ａｎｄ　Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ．Ａｓ
ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ｏｎｅα－ｈｅｌｉｘ，ｆｉｖｅβ－ｓｈｅｅｔｓ，ｔｈｒｅｅβ－ｔｕｒｎｓ，ｗｈｉｃｈ
ｗａｓ　ｐｒｏｖｅ　ｂｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ａ　ｆｅｗ　ｃｏｉｌｓ　ｅｘｓｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｓｔｒｕｃ－
ｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｗａｓ　１７．０３ｋｕ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｐｏｉｎｔ　ｗａｓ　５．８１．Ｔｉｓｓｕｅ－
ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ　ｐｏｌｅｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ａｍｏｎｇ　ａｌ　ｔｉｓ－
ｓｕｅｓ　ｏｆ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ．Ｄｕｒｉｎｇ　ｐｏｌｅｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ＰｗＥＬＰ１ｗａｓ　ｈｉｇｈｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｏｆ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｐｒｏｃｅｓｓ（３０－３６ｈ）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｗａｓ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ（２ｄａｙｓ）ｉｎ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒ－
ｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｗａｓ
ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｃｈｉｌｉｎｇ，ｈｅａｔ，ｍｅｔｈｙｌ　ｊａｓｍｏｎａｔｅ，ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ，ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＢＡ）
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｕｎｄｅｒ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ，ｈｅａｔ　ａｎｄ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＰｗＥＬＰ１ｍｉｇｈｔ
ｈａｖｅ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｌｅｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ａ　ｓｅｒｉｏｕｓ　ｏｆ　ａｂｉｏｔｉｃ
ｓｔｒｅｓｓ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ；ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ；ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ａｂｉｏｔｉｃ　ｓｔｒｅｓｓｅｓ
　　类伸展蛋白（ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＥＬＰｓ）是一
类结构和功能与伸展蛋白（ｅｘｔｅｎｓｉｎ）相近的蛋白家
族，是富含羟脯氨酸的糖蛋白，广泛存在于高等植物
的细胞壁中，参与细胞壁松弛、细胞生长、花粉与根
毛的生长发育、生物胁迫响应等一系列生理过程［１］。
目前已经在多种植物中克隆了其基因并验证了相关
功能，例如，对番茄的研究发现，植物凝集素（ｌｅｃｔｉｎ）
中含有比较丰富的类伸展蛋白结构域，这些蛋白可
以参与植物防御生物胁迫的进程［２］；番茄中类伸展
素蛋白ＴＣ１１８１５７与ＴＣ１２７６１９表达量的变化受木
霉菌（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｐｐ．）的触发［３］；有２个类伸展
蛋白基因Ｄｉｆ１０与Ｄｉｆ５４主要在根毛中表达，并参
与其生长的调控［４］，而ＬｅＥｘｔ１基因则同时参与根
毛生长与花粉萌发的调控［５］。又有研究表明，过表
达番茄ＥＬＰ（ＡＪ１３３６００）将增加其对番茄细菌性溃
疡病菌（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ　ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ　ｓｕｂｓｐ．ｍｉｃｈｉ－
ｇａｎｅｎｓｉｓ，Ｃｍｍ）的抗性，反之，该基因沉默的植株对
此病菌将更加敏感［６］。在烟草中的研究结果类似，
将类伸展蛋白（ＴＣ１３３２９）沉默后，植物体对Ｃｍｍ处
理更加敏感［７］。
在其他植物的研究中也有类伸展蛋白的报道。
早在１９９４年，有研究发现了玉米花粉中富含类伸展
蛋白基因Ｐｅｘｌ（ｐｏｌｅｎ　ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　１），该基因参与
花粉管生长的调控［８］。在马铃薯的研究中发现，机
械损伤导致类伸展蛋白基因ＳｔＥｘｔ１的表达上调［９］。
在拟南芥细胞壁中也发现有富含羟脯氨酸的类伸展
蛋白，参与细胞壁的形态建成［１０］。这些结果表明，
类伸展蛋白参与到植物生长发育及逆境响应等多种
生理过程中，同时，这个家族在分子大小、氨基酸组
成及分子功能上存在多样化。大量研究表明，ＥＬＰ
蛋白在翻译后会进行羟基化修饰，脯氨酸羟基化酶
（Ｐｒｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ）在其中起到重要作
用，如在康乃馨中发现的Ｐ４Ｈｓ，能有效羟基化翻译
后的ＥＬＰｓ及ＥＸＴｓ［１１］。
综上可知，近年来关于类伸展蛋白的研究主要
集中在番茄、烟草、马铃薯等作物上，在多年生木本
植物中的研究相对较少。青杄（Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ）是
一种耐寒耐旱的多年生木本针叶植物，广泛分布于
亚热带地区，是我国重要的经济林植物。本研究以
青杄为材料，克隆得到青杄中一个ＥＬＰ编码基因
ＰｗＥＬＰ１，通过 ＲＡＣＥ－ＰＣＲ得到其全长ｃＤＮＡ 序
列，再根据其核酸序列推导出蛋白氨基酸序列，对其
序列进行生物信息学分析。利用ＲＴ－ｑＰＣＲ等技术
鉴定其在不同组织及发育时期的表达量，将对进一
步深入研究ＥＬＰ基因家族的功能，特别是其生殖生
长的机制提供理论基础，也可为筛选优质林木抗性
基因提供依据。
１　材料与方法
１．１　材　料
１．１．１　植物材料　青杄花粉、种子均采集于中科院
植物所。用于组织特异性表达试验的材料为３年生
青杄幼苗的根、茎、针叶、花粉、种子。用于 ＲＴ－
ｑＰＣＲ的试验材料处理后于－８０℃保存。青杄ｃＤ－
ＮＡ文库由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司利用Ｇａｔｅｗａｙ技术构建。
１．１．２　试　剂　青杄ｃＤＮＡ文库载体ｐＤＯＮＲ２２２
购于美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，克隆载体ｐＥＡＳＹ－Ｔ１购
自Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ公司。反转录试剂盒（ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭ
４８ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｋｉｔ）购于美国 Ｆｅｒ－
ｍｅｎｔａｓ 公 司，ＰＣＲ　Ｔａｑ　Ｍｉｘ、ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ
（ＤＬ２０００）、荧光定量ＰＣＲ试剂盒（ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｓｕ－
ｐｅｒＲｅａｌ　Ｐｒｅｍｉｘ）购自天根（北京）生化科技有限公
司，植物 ＲＮＡ提取试剂盒购自北京 Ａｉｄｌａｂ公司。
所用激素购自Ｓｉｇｍａ公司，其他试剂均购于美国
ＡＭＲＥＳＣＯ公司。
１．２　方　法
１．２．１　ＲＡＣＥ－ＰＣＲ获取ＰｗＥＬＰ１的ｃＤＮＡ全长
序列　以青杄ｃＤＮＡ 文库为模板，利用文库载体
ｐＤＯＮＲ２２２接头序列与ＥＳＴ序列的特异保守序列
设计引物，通过５－ＬＰ、５－ＲＰ扩增得到ＰｗＥＬＰ１的
５′端序列，通过３－ＬＰ、３－ＲＰ扩增得到３′端序列，将所
得的 末 端 序 列 与 ＥＳＴ 序 列 进 行 拼 接，得 到
ＰｗＥＬＰ１的ｃＤＮＡ全长序列。本试验所需引物序
列详见表１。
表１　ＰｗＥＬＰ１克隆及组织特异性表达试验所需要的引物
Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ＰｗＥＬＰ１ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ　ｎａｍｅ
序列（５′→３′）
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′→３′）
５－ＬＰ　 ＣＡＧＴＣＴＴＡＡＧＣＴＣＧＧＧＣＣＣＣＡ
５－ＲＰ　 ＡＴＧＴＴＧＣＡＴＧＡＧＧＴＧＧＧＧＣＴＧＣ
３－ＬＰ　 ＧＣＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＣＡＴＧＣＡＡＣＡＴ
３－ＲＰ　 ＣＴＧＣＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣ
ＥＬＰ－ＬＰ　 ＡＴＧＧＣＴＡＡＧＡＴＴＴＣＡＧＣＡＴＴＣＴ
ＥＬＰ－ＲＰ　 ＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＴＣＣＣＣＡＴＡＡＡＴＡ
ＰｗＥＬＰ－ＲＴ－Ａ　 ＧＡＴＡＧＣＣＣＴＴＣＴＴＧＣＣＴＴＧＴＴＧ
ＰｗＥＬＰ－ＲＴ－Ｂ　 ＡＧＣＣＡＣＡＧＴＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＡＴＡ
ＥＦ－１α－Ｌ　 ＡＡＣＴＧＧＡＧＡＡＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧ
ＥＦ－１α－Ｒ　 ＡＡＣＧＡＣＣＣＡＡＴＧＧＡＧＧＡＴＡＣ
１．２．２　ＰｗＥＬＰ１基因及编码蛋白序列的生物信息
学分析　运用 ＮＣＢＩ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．
ｇｏｖ／）与 ＴＡＩＲ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ｏｒｇ／）网
站上的ｂｌａｓｔｎ与ｂｌａｓｔｐ工具，将得到的ＰｗＥＬＰ１
核酸序列及氨基酸序列进行同源检索。利用ＤＮＡ－
ＭＡＮ确定ＰｗＥＬＰ１的编码框及蛋白氨基酸的翻
译。运用ｃｌｕｓｔａｌｘ软件与Ｅｓｐｒｉｐｔ工具进行多序列
比对，同时用 Ｅｓｐｒｉｐｔ对蛋白二级结构进行预测。
系统树构建利用 ＭＥＧＡ　５软件完成，构树方法为邻
位相连法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ）。利用 Ｅｘｐａｓｙ（ｈｔ－
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ）中的 Ｃｏｍｐｕｔｅ　ｐＩ／Ｍｗ 工
具计算蛋白的理论等电点与分子质量。利用Ｊｐｒｅｄ
进行蛋白二级结构预测，利用ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ进行蛋
白三级结构预测。
１．２．３　花粉萌发试验　将保存于－８０℃的青杄花
粉取出，于－２０℃中放置２４ｈ，再于４℃中放２ｈ以
复苏其活力，然后进行萌发试验。所用液体培养基
由１２０ｇ／Ｌ蔗糖、０．１ｇ／Ｌ硼酸、０．３ｇ／Ｌ硝酸钙与５
ｍｍｏｌ／Ｌ柠檬酸－磷酸缓冲液组成（ｐＨ　５．８）。取花
粉在培养基中于２８℃、２００ｒ／ｍｉｎ分别培养０，６，
１２，１８，２４，３０，３６ｈ，处理后保存于－８０℃备测。
１．２．４　种子萌发试验　将青杄种子采集后于４℃
冰箱贮藏１个月以上。萌发试验利用水培法催芽，
将青杄种子放于培养皿中，置于２５℃植物培养箱中
（１６ｈ光照，８ｈ黑暗），保持培养皿底部有适量水
分。每隔２ｄ进行取样（至萌发第１２天止），液氮速
冻后立即于－８０℃保存备测。
１．２．５　幼苗逆境处理试验　先将４℃冷藏１个月
以上的青杄种子放于培养皿中，置于２５℃光照培养
箱中（１６ｈ光照，８ｈ黑暗），保持培养皿底部适量水
分。１周左右可看到胚芽长出，继续培养１周后将
种子播入２０℃温室土壤中育苗，６周之后青杄幼苗
长至正常状态，然后进行各类逆境处理，包括低温（４
℃）、高温 （４２ ℃）、脱 水、Ｈ２Ｏ２ 及 激 素 脱 落 酸
（ＡＢＡ）和茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）处理。其中，低温（４
℃）、脱水、Ｈ２Ｏ２ 及激素茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）均分别
处理０，１，３，６，１２ｈ，高温（４２℃）处理０，０．５，３，６，１２
ｈ，脱落酸（ＡＢＡ）处理０，３，６，１２，１６，２０，２４ｈ，液氮
速冻后于－８０℃保存备用，以置于室温下正常培养
的幼苗为对照。
１．２．６　ＰｗＥＬＰ１基因表达特性的荧光定量ＰＣＲ
分析　利用北京 Ａｉｄｌａｂ公司植物 ＲＮＡ提取试剂
盒，分别提取青杄根、茎、针叶、花粉、种子及萌发不
同时间花粉、种子的总ＲＮＡ，利用Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司
的反转录试剂盒（ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭ　Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｋｉｔ）合成ＰｗＥＬＰ１的第一链ｃＤＮＡ。以
青杄ＥＦ－１α［１２］为内参基因，利用天根公司的荧光定
量ＰＣＲ试剂盒（ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＳｕｐｅｒＲｅａｌ　Ｐｒｅｍｉｘ）在
ＡＢＩ　ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ实时荧光定量ＰＣＲ仪进行 ＲＴ－
ｑＰＣＲ试验，分析ＰｗＥＬＰ１的组织特异性表达及在
不同激素和逆境等条件下的响应模式。其中，组织
特异性表达试验均为未经任何处理的材料；花粉和
种子不同萌发时期的基因表达试验中，所用为萌发
培养不同时间的材料；幼苗逆境响应的基因表达试
验中，采用各逆境条件下处理相应时间的材料。
ＲＴ－ｑＰＣＲ试验结果均为３次试验的平均值。
２　结果与分析
２．１　ＰｗＥＬＰ１的克隆
ＰｗＥＬＰ１的全长ｃＤＮＡ序列为８３２ｂｐ，在１０１
５８第１０期 郜银涛，等：青杄类伸展蛋白基因ＰｗＥＬＰ１的克隆及表达分析
ｂｐ处发现起始密码子ＡＴＧ，在５７８ｂｐ处发现终止
密码子ＴＧＡ，在８１２ｂｐ处发现Ｐｏｌｙ（Ａ）２１尾巴，编
码区序列共４８０ｂｐ，编码１５９个氨基酸（图１）。经
过Ｃｏｍｐｕｔｅ　ｐＩ／Ｍｗ工具分析得出，编码蛋白理论
等电点为５．８１，分子质量为１７．０３ｋｕ。根据编码区
序列设计引物ＥＬＰ－ＬＰ与ＥＬＰ－ＲＰ，ＰＣＲ后经过纯
化回收，连接到ｐＥＡＳＹ－Ｔ１载体上，得到ＰｗＥＬＰ１
的单克隆。
图１　ＰｗＥＬＰ１的ｃＤＮＡ核酸序列及推导的氨基酸序列
Ｆｉｇ．１　Ｆｕｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１
２．２　ＰｗＥＬＰ１同源蛋白序列比对、二级结构预测及
系统树构建
经过同源检索，得到了不同物种中的ＥＬＰ１同
源基因（表２）。利用ｃｌｕｓｔａｌｘ工具对同源蛋白的氨
基酸序列进行多序列比对，结果（图２）显示，不同物
种类伸展蛋白序列的相似程度在５０％以上，蛋白的
Ｎ端与Ｃ端均有比较保守的结构域，Ｎ端存在较为
保守的ＣＤＮＣＮＡＧ氨基酸序列；利用Ｅｓｐｒｉｐｔ工具
进行多序列比对后的蛋白二级结构预测结果，与用
Ｊｐｒｅｄ预测的蛋白二级结构结果相符，即ＰｗＥＬＰ１
蛋白二级结构由１个α－螺旋、５个β－折叠与３个β－
转角结构构成。
根据ＰｗＥＬＰ１的同源蛋白序列及其多序列比
对结果，利用 ＭＥＧＡ　５软件构建系统发育树，结果
（图３）表明，北美云杉的ＰｓＥＬＰ蛋白与ＰｗＥＬＰ１蛋
白高度同源，被归为同一簇。
表２　ＰｗＥＬＰ１同源基因相关信息
Ｔａｂｌｅ　２　Ｈｏｍｏｌｏｇｉｃａｌ　ｇｅｎｅｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
序列号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
基因名称
Ｇｅｎｅ　ｎａｍｅ
Ｅ值
Ｅｖａｌｕｅ
北美云杉Ｐｉｃｅａ　ｓｉｔｃｈｅｎｓｉｓ　 ＨＭ２０１１４２ ＰｓＥＬＰ　 ８×ｅ－９８
风信子Ｈｙａｃｉｎｔｈｕｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　 ＡＹ３８９６１６ ＨｏＥＬＰ　 ３×ｅ－２１
玉米Ｚｅａ　ｍａｙｓ ＥＵ９５２７５５ ＺｍＰＳＰＣ１３　 ２×ｅ－２０
华东葡萄Ｖｉｔｉｓ　ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ　 ＤＱ３３６２８７ ＶｐＰＳＰ　 ２×ｅ－２０
拟南芥Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ　 ＡＴ４Ｇ０８６８５ ＡｔＳＡＨ７　 １×ｅ－１６
蓖麻Ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ　 ＸＭ＿００２５１３８３９ ＲｃＰＳＰＣ１３　 ４×ｅ－２０
６８ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
图２　ＰｗＥＬＰ１同源蛋白序列比对及其二级结构预测
α．α－螺旋；β．β－折叠；ＴＴ．β－转角；Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ代表同源序列；ａｃｃ．Ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ；各序列代表物种与表２同
Ｆｉｇ．２　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１
α．α－ｈｅｌｉｘ；β．β－ｓｈｅｅｔ；ＴＴ．β－ｔｕｒｎ；Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ａｃｃ．Ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ；
Ｔｈｅ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｃａｌ　ｗｉｔｈ　Ｔａｂｌｅ　２
图３　ＰｗＥＬＰ１蛋白序列的系统发育树
Ｆｉｇ．３　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
２．３　ＰｗＥＬＰ１蛋白的三级结构预测
利用ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ工具进行ＰｗＥＬＰ１蛋白的三
级结构预测，结果显示，青杄ＰｗＥＬＰ１蛋白在空间
上由数量不同的α－螺旋、β－折叠和β－转角构成，还存
在部分无规则卷曲结构（图４），印证了二级结构的
预测结果。
２．４　ＰｗＥＬＰ１基因的表达分析
２．４．１　青杄各组织ＲＮＡ的提取　利用ＲＮＡ提取
试剂盒，提取青杄根、茎、针叶、花粉和种子的ＲＮＡ，
琼脂糖凝胶电泳结果显示，青杄各组织总 ＲＮＡ的
１８Ｓ与２８Ｓ条带清晰，表达量比较稳定，可以进行后
续的ＲＴ－ｑＰＣＲ试验（图５）。
７８第１０期 郜银涛，等：青杄类伸展蛋白基因ＰｗＥＬＰ１的克隆及表达分析
图４　ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ预测的ＰｗＥＬＰ１三级结构
Ｆｉｇ．４　Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ
ＰｗＥＬＰ１ｂｙ　ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ
图５　青杄各组织总ＲＮＡ的提取
Ａ．各组织ＲＮＡ；Ｂ．萌发不同时间的花粉ＲＮＡ；
Ｃ．萌发不同时间的种子ＲＮＡ
Ｆｉｇ．５　Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ
Ａ．Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅｓ；Ｂ．Ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｅｎ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄｓ
ｏｆ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｃ．Ｔｏｔａｌ　ｓｅｅｄｓ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄｓ　ｏｆ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
２．４．２　ＰｗＥＬＰ１的组织特异性表达　由图６可
见，青杄ＰｗＥＬＰ１在花粉中的表达量最高，在其他
组织中的表达量相对较低。
２．４．３　在不同发育时期花粉中的表达　由图７可
见，青杄ＰｗＥＬＰ１在花粉萌发的０～２４ｈ表达量较
低且稳定，在发育后期（３０～３６ｈ）表达量逐步增加。
图６　ＰｗＥＬＰ１在青杄不同组织中的相对表达量
Ｆｉｇ．６　Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｏｒｇａｎｓ　ｏｆ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ
图７　ＰｗＥＬＰ１在不同发育时期青杄花粉中的相对表达量
Ｆｉｇ．７　Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｐｏｌｅｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ
２．４．４　在萌发不同时期种子中的表达　ＰｗＥＬＰ１
在萌发不同时期青杄种子中的相对表达量见图８。
图８　ＰｗＥＬＰ１在萌发不同时期青杄种子中的相对表达量
Ｆｉｇ．８　Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓ
ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ
　　由图８可见，青杄ＰｗＥＬＰ１在种子萌发早期
（吸胀期，第２天）表达量较高，在分化生长及营养生
长阶段（４～１２ｄ）表达量有所下降，并且维持相对稳
定的水平。
２．４．５　在不同逆境处理下幼苗中的表达　由图９
可见，在低温（４℃）、高温（４２℃）、脱落酸（ＡＢＡ）、
茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）、Ｈ２Ｏ２、脱水这几种逆境处理
下，ＰｗＥＬＰ１表达量均表现出较为明显的起伏差
异。其中，在低温（４ ℃）、茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）、
Ｈ２Ｏ２、脱水处理下，ＰｗＥＬＰ１表达量呈现出先上升
后下降的趋势，在３ｈ左右达到最高值（图９－Ａ－
Ｄ）；在高温（４２℃）处理下，ＰｗＥＬＰ１表达量在０～３
ｈ表现出明显的上升趋势，后期则急剧下降（图９－
８８ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
Ｅ）；脱落酸（ＡＢＡ）处理下，ＰｗＥＬＰ１表达量呈现出
先上升后下降之后再微弱上升的趋势，最高值出现
在６ｈ前后（图９－Ｆ）。
图９　ＰｗＥＬＰ１在不同逆境处理下青杄幼苗中的相对表达量
Ａ．低温（４℃）；Ｂ．茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）；Ｃ．Ｈ２Ｏ２；Ｄ．脱水；Ｅ．高温（４２℃）；Ｆ．脱落酸（ＡＢＡ）
Ｆｉｇ．９　Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ＰｗＥＬＰ１ｉｎ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｕｎｄｅｒ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
Ａ．Ｃｈｉｌｉｎｇ（４℃）；Ｂ．Ｍｅｔｈｙｌ　ｊａｓｍｏｎａｔｅ（ＭｅＪＡ）；Ｃ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ（Ｈ２Ｏ２）；Ｄ．Ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ；Ｅ．Ｈｅａｔ（４２℃）；Ｆ．Ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＢＡ）
３　讨　论
类伸展蛋白在植物的多种生理进程中发挥重要
作用，如花粉生长发育、生物胁迫响应等。本研究以
青杄ｃＤＮＡ文库为模板，以ＥＬＰ基因的ＥＳＴ序列
设计引物，通过ＲＡＣＥ－ＰＣＲ得到了ＰｗＥＬＰ１的末
端序列，经过序列拼接得到了ＰｗＥＬＰ１的全长ｃＤ－
ＮＡ序列，通过生物信息学检索可以发现，不同植物
ＥＬＰ蛋白的氨基酸构成具有多样性，通过系统发育
树和多序列比对可以看出，北美云杉中的ＰｓＥＬＰ
（ＨＭ２０１１４２）与ＰｗＥＬＰ１高度同源，由于北美云杉
与青杄同属松科植物，两者在形态学上具有很高的
相似性，因此推测两物种在进化上有相同的祖先。
细胞壁作为植物细胞的保护层，主要起到支撑
细胞和抵抗病原体的作用［１３］，在细胞壁中存在大量
的功能蛋白，如抵抗病原体的植物防卫素（ｐｌａｎｔ　ｄｅ－
ｆｅｎｓｉｎ）［１４］、参与植物果实生长的木糖酶类［１５］，以及
在细胞壁形态建成及生物胁迫等生理过程中起到重
要作用的阿拉伯半乳糖蛋白等［１６］。从已有的研究
来看，类伸展蛋白家族的种类和数量还不确定，且主
要存在于植物的细胞壁中，预测不同的ＥＬＰ蛋白可
能参与不同的生理功能。值得注意的是，在人类精
细胞蛋白组中也发现了拥有ＥＬＰ结构域的蛋白，其
主要定位在精细胞表面，通过与ＣＡＢＹＲ互作参与
９８第１０期 郜银涛，等：青杄类伸展蛋白基因ＰｗＥＬＰ１的克隆及表达分析
信号的转导［１７］。类伸展蛋白功能的多样性也预示
着ＰｗＥＬＰ１蛋白可能具有多重生理功能。ＧＯＲ工
具预测此蛋白包含１８．２４％的α－螺旋，５５．３５％的无
规则卷曲结构［１８］。ＰｒｏｔＰａｒａｍ 工具计算该蛋白的
不稳定指数为４８．９６，说明此蛋白不稳定，预测蛋白
会进一步被修饰，如糖基化、脯氨酸羟基化等［１９］，因
此该蛋白很可能在不同生理条件下发生不同程度的
修饰等，进而在多种生理活动中发挥功能。
本试验中，ＰｗＥＬＰ１在成年青杄花粉中表达量
最高，说明ＰｗＥＬＰ１在花粉生长及发育过程中可能
起到重要作用，进而说明其在青杄的生殖发育过程
中发挥一定作用。为了验证不同时期青杄花粉萌发
时ＰｗＥＬＰ１的表达量变化，利用ＲＴ－ｑＰＣＲ检测了
花粉萌发不同时期的ＰｗＥＬＰ１表达量，结果发现，
在花粉管生长的末期（３０～３６ｈ）ＰｗＥＬＰ１表达量
达到最大值，此时，花粉管的生长已经趋于停止，预
测ＰｗＥＬＰ１可能参与此生理过程。
本研究发现，ＰｗＥＬＰ１表达量在种子吸胀期上
升，在这段时期，种子吸收大量水分后，细胞将急剧
膨胀增大。有研究表明，伸展蛋白（ｅｘｔｅｎｓｉｎ）具有限
制细胞生长的作用［２０］，推测ＰｗＥＬＰ１蛋白也有类似
的功能，而细胞进入分化、增殖阶段后，其表达量则
保持相对稳定。
本研究发现，在低温（４℃）、茉莉酸甲酯（Ｍｅ－
ＪＡ）、Ｈ２Ｏ２、脱水处理下，ＰｗＥＬＰ１表达量呈现出先
上升后下降的趋势，在３ｈ左右达到最高值；在高温
（４２℃）处理下，ＰｗＥＬＰ１的表达量在０～３ｈ表现
出明 显 的 上 升 趋 势，后 期 则 急 剧 下 降，表 明
ＰｗＥＬＰ１基因参与了高温胁迫的响应过程，处理后
期下降则很可能是因为植物组织细胞受到高温胁迫
而使细胞受到伤害所致；在脱落酸（ＡＢＡ）处理下，
ＰｗＥＬＰ１表达量呈现出先上升后下降之后再微弱
上升的趋势，最高值出现在６ｈ左右，前期表达趋势
与其他逆境条件一致，说明ＰｗＥＬＰ１基因可能参与
ＡＢＡ响应过程。在上述激素和非生物胁迫处理下，
ＰｗＥＬＰ１表达量均在处理早期出现了表达量上调
的现象，推测ＰｗＥＬＰ１能够在这些激素处理和非生
物胁迫早期发挥作用。最近有研究证实，对甘蓝型
油菜的保卫细胞原生质体进行脱落酸（ＡＢＡ）和茉
莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）处理后，分别鉴定出了６５和１１８
个可能对这两种激素处理有响应的氧化还原敏感型
蛋白，其中就各包含１种类伸展蛋白［２１］。在本试验
中，ＰｗＥＬＰ１对多种激素和非生物胁迫处理都出现
了不同的响应，显示其在植物的生长发育和胁迫响
应过程中发挥多种功能，尤其是ＰｗＥＬＰ１在种子和
花粉萌发过程以及激素早期响应过程中的功能值得
深入研究。
４　结　论
从青杄ｃＤＮＡ文库中克隆了类伸展蛋白基因
ＰｗＥＬＰ１的ｃＤＮＡ全长，编码区序列长４８０ｂｐ，编
码１５９个氨基酸；编码蛋白理论等电点为５．８１，分
子质量为１７．０３ｋｕ，在空间结构上由数量不同的α－
螺旋、β－折叠和β－转角构成，还存在部分无规则卷曲
结构。ＰｗＥＬＰ１在青杄种子和花粉萌发等多种生
理过程中发挥作用，同时可能参与了青杄对低温、高
温、茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）、Ｈ２Ｏ２、脱水以及脱落酸
（ＡＢＡ）等非生物逆境胁迫的响应过程。
［参考文献］
［１］　Ｓｈｏｗａｌｔｅｒ　Ａ　Ｍ，Ｋｅｐｐｌｅｒ　Ｂ，Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔ－
ｉｃｓ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ
ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ－ｒｉｃｈ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，１５３
（２）：４８５－５１３．
［２］　Ｏｇｕｒｉ　Ｓ，Ａｍａｎｏ　Ｋ，Ｎａｋａｓｈｉｔａ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｌｅｃｔｉｎ　ｆｒｏｍ　ｔｏｍａｔｏ　ｆｒｕｉｔ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００８，７２（１０）：２６４０－２６５０．
［３］　Ａｌｆａｎｏ　Ｇ，Ｉｖｅｙ　Ｍ　Ｌ，Ｃａｋｉｒ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ　ｂｙ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｍａｔｕｍ３８２［Ｊ］．Ｐｈｙ－
ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００７，９７（４）：４２９－４３７．
［４］　Ｂｕｃｈｅｒ　Ｍ，Ｓｃｈｒｏｅｅｒ　Ｂ，Ｗｉｌｍｉｔｚｅｒ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｒｅ　ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ
ｒｏｏｔ　ｈａｉｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，１９９７，３５（４）：４９７－５０８．
［５］　Ｂｕｃｈｅｒ　Ｍ，Ｂｒｕｎｎｅｒ　Ｓ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ
ａｎ　ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｔｉｐ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ
ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００２，１２８（３）：９１１－９２３．
［６］　Ｂａｌａｊｉ　Ｖ，Ｓｍａｒｔ　Ｃ　Ｄ．Ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｓｎａｋｉｎ－２ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｓｉｎ－
ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ　ａｎｄ　ｅｎｈａｎｃｅｓ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｔｏ　Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ　ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ　ｓｕｂｓｐ．ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ　ｉｎ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｔｏｍａｔｏ （Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
Ｒｅｓ，２０１２，２１（１）：２３－３７．
［７］　Ｂａｌａｊｉ　Ｖ，Ｓｅｓｓａ　Ｇ，Ｓｍａｒｔ　Ｃ　Ｄ．Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｈｏｓｔ　ｂａｓａｌ　ｄｅｆｅｎｓｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ　ｔｏ　Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ　ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ　ｓｕｂｓｐ．
ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１１，１０１（３）：３４９－３５７．
［８］　Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ　Ａ　Ｌ，Ｂｒｏａｄｗａｔｅｒ　Ａ　Ｈ，Ｌｏｗｒｅｙ　Ｋ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｅｘｌ，ａ
ｐｏｌｅｎ－ｓｐｅｃｆｉｃ　ｇｅｎｅ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｅｘｔｅｎｓｉｎ－ｌｉｋｅ　ｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，１９９４，９２：３０８６－３０９０．
［９］　Ｎｅｕｂａｕｅｒ　Ｊ　Ｄ，Ｌｕｌａｉ　Ｅ　Ｃ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　Ａ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｗｏｕｎｄｉｎｇ　ｃｏｏｒ－
ｄｉｎａｔｅｌｙ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｅｌ　ｗａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｎｄ　ｐｅｃｔｉｎ　ｍｅｔｈｙｌ
ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｕｂｅｒ　ｃｌｏｓｉｎｇ　ｌａｙｅｒ　ａｎｄ　ｗｏｕｎｄ　ｐｅｒｉ－
ｄｅｒｍ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１２，１６９（６）：５８６－５９５．
（下转第９９页）
０９ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
３１７２－３１８１．
［２０］　康丽娜，吴福忠，杨万勤，等．铅胁迫对欧美杂交杨幼苗碳，氮
和磷积累与分配的影响 ［Ｊ］．植物生态学报，２０１２，３６（６）：
５７８－５８６．
Ｋａｎｇ　Ｌ　Ｎ，Ｗｕ　Ｆ　Ｚ，Ｙａｎｇ　Ｗ　Ｑ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｐｂ　ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ
Ｃ，Ｎ　ａｎｄ　Ｐ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｌｏｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｄｅｌｔｏｉｄｓ×
Ｐ．ｎｉｇｒａ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，
２０１２，３６（６）：５７８－５８６．
［２１］　Ｃａｏ　Ｘ，Ｍａ　Ｌ　Ｑ，Ｔｕ　Ｃ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ａｒｓｅｎｉｃ　ｉｎ
ｔｈｅ　ａｒｓｅｎｉｃ－ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｂｒａｋｅ　ｆｅｒｎ　Ｐｔｅｒｉｓ　ｖｉｔｔａ－
ｔａ　Ｌ．［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｐｏｌｕｔ，２００４，１２８（３）：３１７－３２５．
［２２］　Ｌｉ　Ｓ，Ｙｕ　Ｊ，Ｚｈｕ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｃａｄｍｉｕｍ　ｉｍｐａｉｒｓ　ｉｏｎ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ　ｂｙ
ａｌｔｅｒｉｎｇ　Ｋ＋ａｎｄ　Ｃａ２＋ｃｈａｎｎｅｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｒｉｃｅ　ｒｏｏｔ　ｈａｉｒ　ｃｅｌｓ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ，２０１２，３５（１１）：１９９８－２０１３．
［２３］　唐罗忠，刘志龙，虞木奎，等．两种立地条件下麻栎人工林地上
部分养分的积累和分配 ［Ｊ］．植物生态学报，２０１０，３４（６）：
６６１－６７０．
Ｔａｎｇ　Ｌ　Ｚ，Ｌｉｕ　Ｚ　Ｌ，Ｙｕ　Ｍ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ａｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄ　ｐａｒｔｓ　ｉｎ　Ｑｕｅｒｃｕｓ　ａｃｕｔｉｓｓｉｍａ　ｐｌａｎｔａ－
ｔｉｏｎｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｗｏ　ｓｉｔｅｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ａｎｈｕｉ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２０１０，３４（６）：６６１－６７０．
［２４］　冯　丽，张景光，张志山，等．腾格里沙漠人工固沙植被中油蒿
的生长及生物量分配动态 ［Ｊ］．植物生态学报，２００９，３３（６）：
１１３２－１１３９．
Ｆｅｎｇ　Ｌ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｚ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｂｉｏｍａｓｓ　ａｌ－
ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｌａ　ｏｒｄｏｓｉｃａ　ｉｎ　ｓａｎｄ－ｆｉｘｉｎｇ　ｖｅｇｅ－
ｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｅｎｇｇｅｒ　ｄｅｓｅｒｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｐｌａｎｔ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００９，３３（６）：１１３２－１１３９．
［２５］　Ｌｉｎｄ　Ｅ　Ｍ，Ｂｏｒｅｒ　Ｅ，Ｓｅａｂｌｏｏｍ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｌｉｆｅ－ｈｉｓｔｏｒｙ　ｃｏｎｓｔｒａｉｎｔｓ
ｉｎ　ｇｒａｓｓｌａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ：ａｇｒｏｗｔｈ－ｄｅｆｅｎｃｅ　ｔｒａｄｅ－ｏｆｆ　ｉｓ　ｔｈｅ
ｎｏｒｍ［Ｊ］．Ｅｃｏｌ　Ｌｅｔｔ，２０１３，１６（４）：５１３－５２１．
［２６］　任海彦，郑淑霞，白永飞．放牧对内蒙古锡林河流域草地群落
植物茎叶生物量资源分配的影响 ［Ｊ］．植物生态学报，２００９，
３３（６）：１０６５－１０７４．
Ｒｅｎ　Ｈ　Ｙ，Ｚｈｅｎｇ　Ｓ　Ｘ，Ｂａｉ　Ｙ　Ｆ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇｒａｚｉｎｇ　ｏｎ　ｆｏｌｉａｇｅ　ｂｉ－
ｏｍａｓｓ　ａｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｒａｓｓｌａｎｄ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｘｉｌｉｎ　ｒｉｖｅｒ　ｂａ－
ｓｉｎ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，
２００９，３３（６）：１０６５－１０７４．
［２７］　肖　遥，陶　冶，张元明．古尔班通古特沙漠４种荒漠草本植
物不同生长期的生物量分配与叶片化学计量特征 ［Ｊ］．植物
生态学报，２０１４，３８（９）：９２９－９４０．
Ｘｉａｏ　Ｙ，Ｔａｏ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ　Ｍ．Ｂｉｏｍａｓｓ　ａｌｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｓｔｏｉ－
ｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｄｅｓｅｒｔ　ｈｅｒｂａｃｅｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ
ｄｕｒｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｐｅｒｉｏｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｇｕｒｂａｎｔüｎｇｇüｔ　ｄｅｓｅｒｔ，
Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２０１４，３８（９）：
９２９－９４０．
［２８］　Ｚｈａｎｇ　Ｌ，Ｂａｉ　Ｙ，Ｈａｎ　Ｘ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎ∶Ｐ　ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙ　ｔｏ
ｅｃｏｌｏｇｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔ　Ｓｉｎ，２００３，４５（９）：１００９－１０１８．
［２９］　Ｋｌａｕｓｍｅｉｅｒ　Ｃ　Ａ，Ｌｉｔｃｈｍａｎ　Ｅ，Ｄａｕｆｒｅｓｎｅ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｐｔｉｍａｌ　ｎｉ－
ｔｒｏｇｅｎ－ｔｏ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ　ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ ［Ｊ］．
Ｎａｔｕｒｅ，２００４，４２９（６９８８）：１７１－１７４．
［３０］　李　宁，徐武兵，赖江山，等．亚热带常绿阔叶林８个常见树种
粗根生物量 ［Ｊ］．科学通报，２０１３，５８（４）：３２９－３３５．
Ｌｉ　Ｎ，Ｘｕ　Ｗ　Ｂ，Ｌａｉ　Ｊ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃｏａｒｓｅ　ｒｏｏｔ　ｂｉｏｍａｓｓ　ｏｆ　ｅｉｇｈｔ
ｃｏｍｍｏｎ　ｔｒｅｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ　ｅｖｅｒｇｒｅｅｎ　ｆｏｒｅｓｔ［Ｊ］．Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｂｕｌｅｔｉｎ，２０１３，５８（４）：

３２９－３３５．
（上接第９０页）
［１０］　Ｈｉｊａｚｉ　Ｍ，Ｄｕｒａｎｄ　Ｊ，Ｐｉｃｈｅｒｅａｕｘ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｈｅ　ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　３１ （ＡＧＰ３１）ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｔｈａｌｉａｎａ：ｎｅｗ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｈｙｐ－Ｏ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｐｒｏｒｉｃｈ　ｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２０１２，２８７（１２）：９６２３－９６３２．
［１１］　Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ　Ｍ，Ｓａｌｔｅｒ　Ｊ　Ｓ，Ｄｏｒｏｓｚ　Ｊ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＥＸＴｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ
ｐｌａｎｔ　ｃｅｌ　ｗａｌｓ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２０１２，３：９３．
［１２］　Ｙｕ　Ｙ　Ｌ，Ｌｉ　Ｙ　Ｚ，Ｈｕａｎｇ　Ｇ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．ＰｗＨＡＰ５，ａ　ＣＣＡＡＴ－ｂｉｎｄ－
ｉｎｇ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ，ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ＰｗＦＫＢＰ１２ａｎｄ　ｐｌａｙｓ　ａ
ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｐｉｃｅａ　ｗｉｌｓｏｎｉｉ［Ｊ］．Ｊ
Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２０１１，６２（１４）：４８０５－４８１７．
［１３］　Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ　Ｗ．Ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ　ｃｅｌ　ｗａｌ：ａ　ｄｙｎａｍｉｃ　ｂａｒｒｉｅｒ　ａｇａｉｎｓｔ
ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｉｎｖａｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２０１２，３：８５．
［１４］　Ｔｈｅｖｉｓｓｅｎ　Ｋ，ｄｅ　Ｍｅｌｏ　Ｔａｖａｒｅｓ　Ｐ，Ｘｕ　Ｄ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ
ｄｅｆｅｎｓｉｎ　ＲｓＡＦＰ２ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｅｌ　ｗａｌ　ｓｔｒｅｓｓ，ｓｅｐｔｉｎ　ｍｉｓｌｏｃａｌｉｚａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｒａｍｉｄｅｓ　ｉｎ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ［Ｊ］．
Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１２，８４（１）：１６６－１８０．
［１５］　Ｓａｍｐｅｄｒｏ　Ｊ，Ｇｉａｎｚｏ　Ｃ，Ｉｇｌｅｓｉａｓ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．ＡｔＢＧＡＬ１０ｉｓ　ｔｈｅ
ｍａｉｎ　ｘｙｌｏｇｌｕｃａｎβ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｂ－
ｓｅｎｃｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ｕｎｕｓｕａｌ　ｘｙｌｏｇｌｕｃａｎ　ｓｕｂｕｎｉｔｓ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｄｅ－
ｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１２，１５８（３）：１１４６－１１５７．
［１６］　Ｚｈａｎｇ　Ｙ　Ｚ，Ｙａｎｇ　Ｊ，Ｓｈｏｗａｌｔｅｒ　Ａ　Ｍ．ＡｔＡＧＰ１８ｉｓ　ｌｏｃａｌｉｚｅｄ　ａｔ
ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｅ－
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，２０１１，２３３（４）：６７５－６８３．
［１７］　Ｎａａｂｙ－Ｈａｎｓｅｎ　Ｓ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｈｕｍａｎ　ｓｐｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｏｍｅ［Ｊ］．Ｄａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，２０１２，５９（４）：Ｂ４４１４．
［１８］　Ｇａｒｎｉｅｒ　Ｊ，Ｇｉｂｒａｔ　Ｊ　Ｆ，Ｒｏｂｓｏｎ　Ｂ．ＧＯＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｆｒｏｍ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．
Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ，１９９６，２６６：５４０－５５３．
［１９］　Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ　Ｅ，Ｇａｔｔｉｋｅｒ　Ａ，Ｈｏｏｇｌａｎｄ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．ＥｘＰＡＳｙ：ｔｈｅ　ｐｒｏ－
ｔｅｏｍｉｃｓ　ｓｅｒｖｅｒ　ｆｏｒ　ｉｎ－ｄｅｐｔｈ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ
［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ，２００３，３１（１３）：３７８４－３７８８．
［２０］　Ｋｉｅｌｉｓｚｅｗｓｋｉ　Ｍ　Ｊ，Ｌａｍｐｏｒｔ　Ｄ　Ｔ．Ｅｘｔｅｎｓｉｎ：ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ　ｍｏｔｉｆｓ，
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｓｉｔｅｓ，ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　ｃｏｄｅｓ，ａｎｄ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ　Ｊ，１９９４，５（２）：１５７－１７２．
［２１］　Ｚｈｕ　Ｍ　Ｍ，Ｚｈｕ　Ｎ，Ｓｏｎｇ　Ｗ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｉｏｌ－ｂａｓｅｄ　ｒｅｄｏｘ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｉｎ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｊａｓｍｏｎａｔｅ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎ　Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｎａｐｕｓ　ｇｕａｒｄ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｊ，２０１４，７８（３）：４９１－５１５．
９９第１０期 陈良华，等：Ｃｄ污染下香樟和油樟幼苗Ｎ、Ｐ、Ｋ的积累与分配特征